Биохимические тесты для идентификации стрептококков

Пластиковые стрипы с лунками, которые содержат лиофилизированные биохимические субстраты и индикаторы. Интерпретирует 15 биохимических реакций. Каждый стрип (тест) поставляется в индивидуальной упаковке из фольги. Позволяет определять точный вид микроорганизма, используя 1 колонию чистой культуры стрептококков и энтерококков.

Тест для видовой идентификации грамотрицательных палочек (дополнительно нужно: минеральное масло; MID-61c; MID-61d; MID-61e; MID-61f; стерильный физиологический раствор (0,85% NaCl))

Пластиковые стрипы с лунками, которые содержат лиофилизированные биохимические субстраты и индикаторы. Интерпретирует 12 биохимических реакций. Позволяет определять точный вид микроорганизма, используя 1 колонию чистой культуры.

Тест для видовой идентификации грамотрицательных оксодазположительных палочек (дополнительно нужно: MID-61a; MID-61b)

Пластиковые стрипы с лунками, которые содержат лиофилизированные биохимические субстраты и индикаторы. Интерпретирует 12 биохимических реакций. Используется исключительно как дополнительная панель к тест-системе MID-64 для определения грамотрицательных оксидазотрицательных палочек.

Тест для видовой идентификации бацилл (дополнительно нужно: минеральное масло, MID-61c; MID-61d; MID-61a; MID-61b; MID-61f)

Двойные пластиковые стрипы с лунками, которые содержат лиофилизированные биохимические субстраты и индикаторы. Интерпретирует 23 биохимических реакции и содержит контроль сбраживания углеводов. Каждый стрип (тест) поставляется в индивидуальной упаковке из фольги.

Тест для видовой идентификации листерий

Пластиковые стрипы с лунками, которые содержат лиофилизированные биохимические субстраты и индикаторы. Интерпретирует 12 биохимических реакций. Каждый стрип (тест) поставляется в индивидуальной упаковке из фольги. Позволяет определять точный вид микроорганизма, используя 1 колонию чистой культуры листерий. Не нужно добавлять никаких дополнительных реагентов после инкубации.

Тест для видовой идентификации стафилококков (дополнительно нужно: минеральное масло, MID61а, MID61b, MID61k)

Тест-система предназначена для видовой идентификации стафилококков на основе биохимических реакций. Позволяет определять точный вид микроорганизма, используя 1 колонию чистой культуры стафилококков. Пластиковые стрипы с лунками содержат лиофилизированные биохимические субстраты и индикаторы, обеспечивающие интерпретацию 15 биохимических реакций. Каждый стрип поставляется в индивидуальной упаковке из фольги.

Реагент Нитрат А

Применяется для получения окрашенных продуктов реакции в тестах для биохимической идентификации. Используется совместно с Нитрат-реагентом В.

Реагент Нитрат В

Применяется для получения окрашенных продуктов реакции в тестах для биохимической идентификации. Используется совместно с Нитрат-реагентом А.

Реагент Фогеса-Проскауэра I

Применяется для получения окрашенных продуктов реакции в тестах для биохимической идентификации. Используется совместно с Реагентом Фогеса-Проскауэра II.

Реагент Фогеса-Проскауэра II

Применяется для получения окрашенных продуктов реакции в тестах для биохимической идентификации. Используется совместно с Реагентом Фогеса-Проскауэра I.

Реагент TDA

Применяется для получения окрашенных продуктов реакции в тестах для биохимической идентификации.

Реагент Ковача на индол

Применяется для получения окрашенных продуктов реакции в тестах для биохимической идентификации.

Оксидазные полоски

Для определения у микроорганизмов оксидазной активности.

Минеральное масло

Для создания анаэробных условий при культивировании и идентификации микроорганизмов.

Реагент PYR

Для постановки теста ПИР (на пирролидонил- ариламидазу). Применяется для получения окрашенных продуктов реакции в тестах для биохимической идентификации.

Реагент Нингидрин

Для постановки теста на гидролиз гиппурата. Применяется для получения окрашенных продуктов реакции в тесте для биохимической идентификации стрептококков.

Тест на выявление общего микробного загрязнения

Тест представляет собой предварительно смоченный двусторонний тампон в индивидуальной упаковке. Предназначен для контроля чистоты рабочих поверхностей, в том числе, после мойки и дезинфекции. Реагент, которым пропитан тампон, вступает в реакцию с белковыми молекулами (остатками пищевых продуктов и микроорганизмов), в результате чего происходит цветовая реакция.

Тест Пат-Чек для выявления колиформных бактерий (дополнительно нужно: PCS-100)

Система состоит из предварительно смоченного тампона в пластиковой пробирке для взятия смыва и жидкой питательной среды с ростовыми добавками и индикаторной системой в завинчивающейся пробирке для детекции микроорганизмов. Состав реагента, которым пропитан тампон, так же обеспечивает нейтрализацию остатков дезинфицирующих средств на поверхностях. Общее назначение набора – выявление колиформных бактерий методом смывов.

Тест Пат-Чек для выявления сальмонелл

Тест Пат-Чек для выявления листерий

Целью первичной идентификации является установление принадлежности выделенной культуры к семейству Streptococcaceae и роду Streptococcus. Для установления принадлежности культур к семейству Streptococcaceae используют тест на каталазу.

В отличие от родственного семейства микрококков представители семейства стрептококков не имеют фермента каталазы, и не способны расщеплять перекись водорода с образованием воды и газообразного кислорода.

Установление принадлежности культур к роду Streptococcus

На этом этапе исследования применяют методы, позволяющие идентифицировать стрептококки. К их числу относятся бактериоскопический, культуральный и биохимический методы.

Бактериоскопический метод

В мазках, окрашенных по Граму, стрептококки располагаются цепочками, или по четыре. Размеры микробных клеток стрептококков 0,6-1, мкм. Грамположительные кокки.

Культуральный метод

По виду гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на 3 группы: гемолитические стрептококки, обусловливающие лизис эритроцитов с образованием вокруг колоний прозрачной зоны. При этом колонии могут быть мукоидные, шероховатые, гладкие. Зеленящие стрептококки образующие на кровяном агаре альфа-реакцию в виде полупрозрачной, зеленоватого оттенка зоны, обусловленной превращением гемоглобина в мет-гемоглобин. Негемолитические стрептококки, не реагирующие с эритроцитами и в процессе своего роста не вызывающие изменений кровяного агара.

Видовая идентификация стрептококков

Культуры гемолитических и зеленящих стрептококков, клетки которых при микроскопическом исследовании представляют собой грамположительные полиморфные кокки, располагающиеся парами, короткими цепочками или небольшими скоплениями необходимо дифференцировать с энтерококками.

Для этого суточную бульонную культуру высевают на желчно-солевой агар и в молоко с 0,1% метиленового синего. На ЖЩА растут только энтерококки в виде круглых, блестящих колоний с ровным краем, синеватого цвета. В пробирках с молоком энтерококк редуцирует метиленовый синий, вследствие чего среда обесцвечивается и из голубой становится кремового цвета через 16-20 часов инкубации в термостате.

Способность микробных клеток к росту на ЖЩА. и редуцированию 0,1% метиленового синего в молоке указывает на принадлежность исследуемой культуры к группе энтерококков.

Дифференциация энтерококков внутри группы

Внутри группы энтерококки делятся по ферментативным, редуцирующим и гемолитическим свойствам на ряд видов и подвидов. Дифференциация культур энтерококка внутри групп ведется по следующей схеме:

Виды и подвиды	Резистен-тность к теллуриту каллия	Энтерококковая дифференциально-диагностическая среда	Подви-жность в 0,2% агаре
редукция ТТХ	гемолиз	протеолиз
1. S. faecalis 2. S. faecalis subsp. zymogenes 3. S. faecalis liquefaciens 4. S. faecium 5. Подвижные энтерококки	+ + + – +	+ + + – +	– + – ± ±	– ± + – –	– – – – +

Вопросы для обсуждения

1. Морфология, тинкториальные и культуральные cвойства стрептококков.

2. Токсины и ферменты стрептококков.

3. Классификация стрептококков по гемолитическому признаку и антигенной структуре.

4. Заболевания, вызываемые патогенными стрептококками.

5. Лабораторная диагностика.

6. Препараты, используемые для лечения и профилактики стрептококковых инфекций.

Самостоятельная работа студентов

1. Познакомится со схемой исследования при кокковых заболеваниях.

2. Микробиологический диагноз стрептококковых заболеваний:

а. изучить демонстрационный препарат из чистой культуры стрептококка; зарисовать;

б. изучить рост стрептококка на кровяном МПА и на МПБ;

в. сделать посев гноя на чашку с кровяным МПА;

г. изучить демонстрационный посев гноя на кровяном агаре;

д. приготовить мазок из гноя, окрасить его по Граму, зарисовать;

е. определить чувствительность к антибиотикам по демонстрационным посевам.

Схема лабораторного исследования при ангине и скарлатине

Материал для исследования: мазок из зева.

День исследования	Ход исследования	Результат
1 день 2 день	1. Бактериоскопия мазка из зева, окраска по Граму 2. Посев мазка из зева на кровяной агар 1. Микроскопия мазка из колонии	В поле зрения грамположительные цепочки стрептококков Нa агаре мелкие точечные колонии в виде капелек росы с зоной гемолиза Цепочки стрептококка

Заключение: В мазке обнаружен Streptococcus pyogenes.

Пневмококки

Раздел	Вопросы для изучения
Биология возбудителя	I. Таксономия Пневмококки относятся к семейству Streptococcaceae, роду Streptococcus
2. Основные биологические свойства: Морфологические – кокки, напоминающие пламя свечи: один конец клетки заострен, другой уплощен, располагаются парами, иногда в виде коротких цепочек. Спор не образуют. В организме человека и животных, а также на средах, содержащих кровь или сыворотку образуют капсулу. Тинкториальные – грамположительные кокки, но в молодых и старых культурах нередко грамотрицательны. Культуральные: факультативные анаэробы, температурный оптимум – 37°С., оптимальная рН = 7,2-7,6. Для культивирования используют кровяной агар, где колонии мелкие, круглые, окруженные зоной гемолиза (альфа-гемолиз), рост на сахарном бульоне не сопровождается помутнением и выпадением небольшого осадка. Биохимические свойства. Ферментация углеводов: глюкозы, сахарозы с образованием кислоты, без газа. Факторы патогенности: 1. Амилаза – активизирующуюся под влияющем желчных кислот, разрывающая связь между аланином и муравьиновой кислотой пептидогликана. 2. Капсула – главный фактор патогенности бескапсульные пневмококки утрачивают вирулентность. Антигенные свойства: кроме соматического 0-антигена, пневмококки имеют капсульный полисахаридный антиген, по которого разделяют на 83 сероварианта, 56 из них разбиты на 19 групп, 27 представлены самостоятельно.
Эпидемио-логия	Источником пневмококковой инфекции является больной человек или реконвалесцент. Заражение происходит воздушно-капельным или воздушно-пылевым путем.
Патогенез	Пневмококки являются основным возбудителем острых и хронических воспалительных заболеваний легких. Кроме того, они вызывают ползучую язву роговицы, отиты, эндокардит, перитониты, менингиты, септицемии и другие гнойно-воспалительные процессы.
Постинфек-ционный иммунитет	Типоспецифический, обусловлен появлением антител, против типового капсульного полисахарида.

Для специфической профилактики пневмококковых пневмоний у пожилых и ослабленных людей, а также лиц с иммунодепрессией можно использовать химическую пневмококковую вакцину, содержащую типоспецифические полисахариды нескольких типов пневмококков. В последнее время для специфической профилактики различных, в том числе и стрептококковой этиологии, поражений верхних дыхательных путей очень часто рекомендуется вакцина IR S19.

Введение

HiMedia предлагает ряд наборов для биохимической идентификации микроорганизмов (от KB001 до KB012) и наборов для биохимической идентификации на основе теста на подвижность (от KBM01 до KBM003). Каждый тест для биохимической идентификации стандартизован по цвету. Тесты основаны на общепринятых принципах изменения рН и утилизации субстрата. В процессе инкубирования проявляется метаболитическая активность микроорганизмов, которая влечет изменение цвета среды видимые сразу или после добавления соответствующих реагентов.

В состав каждого набора входит:

Панели с наборами тестов для биохимической идентификации
Инструкция по использованию
Таблицы для записи результатов и их интерпретации
Компьютерная программа для идентификации микроорганизмов
Набор реактивов, если они необходимы
Петли бактериологические одноразовые
Капельницы одноразовые калиброванные
Пробирки со средой для подращивание микроорганизмов
Пробирки со средой для приготовления суспензии микроорганизмов

Кат. №

Наименование

HiIMViC Набор для биохимической идентификации энтеробактерий (12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiIMViC Набор для биохимической идентификации энтеробактерий (12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiAssorted Набор для биохимической идентификации грамотрицательных бактерий (12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiAssorted Набор для биохимической идентификации грамотрицательных бактерий (12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

Hi25 Набор для биохимической идентификации энтеробактерий (25 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

Hi25 Набор для биохимической идентификации энтеробактерий (25 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiStaph Набор для биохимической идентификации стафилококков (12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiStaph Набор для биохимической идентификации стафилококков (12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiStrep Набор для идентификации стрептококков, (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiStrep Набор для идентификации стрептококков, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCandida Набор для идентификации грибов рода Candida, (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCandida Набор для идентификации грибов рода Candida, (1уп. х 20наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiVibrio Набор для идентификации вибрионов (Vibrio spp.), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiVibrio Набор для идентификации вибрионов (Vibrio spp.), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiNeisseria Набор для идентификации нейссерий, (1уп. х 10наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiNeisseria Набор для идентификации нейссерий, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов (36 тестов: Часть А + Часть В + Часть С), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов (36 тестов: Часть А + Часть В + Часть С), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть А - 12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть А – 12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть B – 12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть B – 12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть C – 12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть C – 12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiE. coli Набор для идентификации кишечных палочек, (12 тестов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (1уп. х 10 наборов) (ФСЗ 2008/01440)

HiE. coli Набор для идентификации кишечных палочек, (12 тестов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (1уп. х 20 наборов) (ФСЗ 2008/01440)

HiSalmonella Набор для идентификации Salmonella spp., (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiSalmonella Набор для идентификации Salmonella spp., (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiListeria Набор для идентификации Listeria spp., (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiListeria Набор для идентификации Listeria spp., (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов, (Набор для идентификации Bacillus spp.), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов, (Набор для идентификации Bacillus spp.), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов (Набор для идентификации Acinetobacter spp.) (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов (Набор для идентификации Acinetobacter spp.) (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации E.coli, (1уп .х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации E.coli, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации Salmonella, (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации Salmonella, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации Listeria, (1уп. х 10 наборов) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации Listeria, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

Приготовление инокулома

Для идентификации можно использовать только чистую культуру микроорганизмов.
Выделять микроорганизмы можно на таких средах, как Питательный агар (M001) или других подходящих дифференциальных средах.
Отобрать единичную колонию и суспендировать её в 5 мл Бульона с сердечно-мозговой вытяжкой (M210). Инкубировать 4-6 часов при 35-37 0 С до получения необходимой мутности. Некоторые прихотливые микроорганизмы могут требовать более длительной инкубации, и в этом случае подращивание следует продолжать до достижения необходимой мутности.
Если можно отобрать 1 – 3 хорошо изолированные колонии, суспендируйте их в 2 –3 мл стерильной среды для приготовления суспензии, доводя мутность суспензии до необходимой.
Дальнейшие манипуляции проводите в соответствие с инструкцией к каждому конкретному набору.
Сравнивая полученные результаты с таблицей для интерпретации, внесите их в таблицу для записей.

Примечание:

Ошибочный, ложноотрицательный результат, может получаться при оптической плотности (мутности) инокулома менее чем 0,1.
Наиболее четкие результаты получаются при использовании обогащенной культуры по сравнению приготовленной суспензией.

Внесение инокулума культуры

Открыть крышку панели с тестами, соблюдая правила антисептики. Снять защитную пленку. Внести в каждую ячейку панели по 50 мкл инокулома (2 капли из пипетки PW1201) на поверхность среды;
ВНИМАНИЕ!

При использовании панелей для биохимической идентификации серии KBM ячейка № 1 засевается уколом бактериологической иглой, все другие ячейки (кроме ячейки № 2) засевать уколом калиброванной на 10 мкл петлёй.

Инкубация:

KBM001, KBM002 и все панели от KB001 до KB012 инкубировать при 35 ± 2 0 С в течение 18 –24 часов; KB006 инкубировать при комнатной температуре (22 – 25 0 С) в течение 48-72 часов и KBM003 инкубировать при комнатной температуре (22 – 25 0 С) в течение 24-48 часов.

Реактивы:

Каждый набор комплектуется необходимыми реактивами для выявления биохимических реакций исследуемых микроорганизмов.

Меры предосторожности

Все образцы клинического материала и микробные культуры рассматриваются как потенциально патогенные.

Соблюдение условий асептики должно распространятся на все время работы с набором.
Е допускать контакта реактивов с кожей, глазами и одеждой.

Утилизация использованного материала
После использования наборы и инструменты для выделения и инокулирования (капельницы, пипетки, петли и т.д.) должны быть дезинфицированы в соответствующих дезинфектантах а затем обеззаражены автоклавированием.

Принцип включения биохимических тестов

Этот тест обнаруживает способность микроорганизма продуцировать достаточное количество фермента фосфатазы. Продукция фосфотазы определяется высвобождением фенолфталеина. Фенолфталеин реагирует со щелочью (40% NaOH), что приводит к появлению яркой розовой окраски. Тест на щелочную фосфатазу.

Тест декарбоксилирования аминокислот (лизин, орнитин, аргинин)

Среда для этого теста содержит бромкрезоловый пурпурный, как индикатор рН. При утилизации карбогидрата, присутствующего в среде, рН снижается, в соответствии с продукцией кислоты, что приводит к изменению окраски среды на желтую. Продукция кислоты стимулирует фермент декарбоксилазу. Появление аминов в результате декарбоксилирования повышает рН среды, что изменяет цвет с оливкового зеленого или светло-пурпурного до пурпурного или темно-пурпурного. На негативную реакцию указывает появление желтой окраски среды.

В случае декарбоксилирования орнитина и лизина инкубацию можно увеличить до 48 часов.

Утилизация карбогидратов

Карбогидраты добавляют в основу среды, которая в качестве индикатора содержит феноловый красный. При ферментации карбогидрата выделяется кислота, что приводит к снижению рН среды и изменению окраски на желтую. Негативная реакция проявляется или не изменением окраски, или изменением на оранжево-красную / розовую.

Некоторые микроорганизмы при ферментации карбргидратов проявляют замедленную реакцию. В этом случае результат фиксируют как (±) и продолжают икубировать до 48 часов. Формирование оранжевой окраски после 48 часов инкубации интерпретируют как отрицательный результат.

Каталаза

Организмы, продуцирующие каталазу, имеют способность разлагать перекись водорода с образованием кислорода. Это проявляется в виде образования пузырьков на поверхности среды при добавлении капли 3% раствора перекиси водорода в ростовую среду.

Цитратный тест

Среда содержит натрия цитрат, как единственный источник углерода, индикатор бромтимоловый синий и неорганическую аммонийную соль. Микроорганизмы, способные утилизировать цитрат, как единственный источник углерода, также утилизируют аммонийную соль, как единственный источник азота. Аммонийная соль расщепляется до NH3, что приводит к защелачиванию среды и изменению окраски с зеленой на синюю.

Тест гидролиза эскулина

Эскулин – глюкозид, который гидролизуется определенными бактериями с образованием глюкозы и эскулетина. Эскулетин, взаимодействуя с присутствующими в среде ионами железа, образует комплекс черного цвета.

Глюкуронидаза

Фермент глюкуронидаза расщепляет субстрат х-глюкуронид, добавленный в питательную среду. Микроорганизмы абсорбируют субстрат, а внутриклеточная глюкуронидаза разрывает связи между хромофором и глюкуронидом. Хромофор придает синевато-зеленую окраску выросшей колонии или окрашивает всю среду.

Тест продукции сероводорода (H₂S)

Все виды энтеробактерий способны продуцировать различные количества H₂S. Микроорганизмы способны с помощью энзимов высвобождать серу из серосодержащих аминокислот или неорганических соединений серы. Сероводород реагирует с ионами железа или с ацетатом свинца, образуя сульфид железа или сульфид свинца, которые дают нерастворимый преципитат. Почернение среды свидетельствует о позитивной реакции.

Тест продукции индола

Этот тест демонстрирует способность определенных бактерий разлагать аминокислоту триптофан до индола, который аккумулируется в среде. При добавлении реактива Ковача (R008) в ростовую среду, появление красно-розовой окраски в течение 10 секунд указывает на положительный результат.

Малонатный тест

В среде для малонатного теста в качестве индикатора используется бромтимоловый синий. Натрия малонат и аммония сульфат являются единственными источниками углерода и азота соответственно.

Тест с метиловым красным

Тест с метиловым красным основан на регистрации изменения рН среды при утилизации микроорганизмами глюкозы. При добавлении одной капли индикатора метилового красного (I007) в конце периода инкубации если окраска становится ярко красной, то констатируется положительная реакция, если желтая или желто-оранжевая – реакция негативная.

Определение родовой, видовой и таловой принадлежности микроорганизмов на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и антигенных свойств — наиболее ответственная часть микробиологического исследования.

Большое количество патогенов, принимающих участие в возникновении инфекционного процесса, обусловливает применение различных тестов по определению ферментативных свойств путем постановки большого количества биохимических реакций, что позволяет в комплексе с другими данными определить вид микроорганизма. Этот наиболее трудоемкий процесс выполняется в несколько этапов, требует большого количества дифференциально-диагностических сред, реактивов, посуды, что значительно удорожает стоимость анализа и удлиняет сроки его проведения. Результаты удается получить через 4…7 сут. Поэтому для идентификации микроорганизмов наиболее перспективны микрообъемные коммерческие тест-системы (МТС). Они избавляют практических бактериологов от трудоемких и дорогостоящих процедур и позволяют получать стандартные, сопоставимые, воспроизводимые данные, экономят реактивы, ускоряют выдачу результата анализа.

Коммерческие тест-системы для биохимической идентификации микроорганизмов различных групп представляют собой готовые к использованию полистироловые планшеты и панели с сухими дифференцирующими средами или субстратами, которые выпускаются разными производителями.

Коммерческие тест-системы на основе полистироловых планшетов. В Российской Федерации наибольшее распространение получили следующие тест-системы.

4. Системы на основе стандартных 96-луночных микротитровальных планшетов для идентификации энтеробактерий (ММТ-Е1 и ММТ-Е2) (Ставропольская государственная медицинская академия).

5. Наборы для ускоренной (в течение 5 ч) идентификации энтеробактерий РапидЭнтеро 200 и РапидЭнтеро 750 (НИИЭМ им. Пастера, г. Санкт-Петербург).

Диагностические полоски и диски для биохимической идентификации микроорганизмов. Системы индикаторные бумажные (СИБ) представляют собой полоски или диски из хроматографической бумаги, пропитанные соответствующим субстратом и индикатором и покрытые для стабилизации водным раствором поливинилового спирта.

1. Диски с бацитрацином (10 ЕД). Применяют для селективной изоляции Haemophilus spp. при первичном культивировании. Тест основан на устойчивости Haemophilus spp. к высоким концентрациям бацитрацина по сравнению с сопутствующей флорой и саттелитного роста микроорганизмов этого рода в зоне диффузии экзогенных факторов роста из культуры S. aureus.

2. Диски с бацитрацином S. Предназначены для предварительной индикации β-гемолитических стрептококков группы А (S. pyogenes). Тест основан на высокой чувствительности S. pyogenes к незначительным концентрациям бацитрацина (0,04 ЕД), обеспечивающей образование зон задержки роста вокруг диска. Другие β-гемолитические стрептококки резистентны к таким дозам или образуют незначительные зоны ингибиции роста.

3. Диски с оптохином. Предназначены для рутинной первичной индикации S. pneumoniae и дифференциации их от других зеленящих стрептококков. Принцип теста основан на избирательной чувствительности пневмококков к оптохину и резистентности к нему других зеленящих стрептококков.

Общие правила работы с МТС. Методика проведения микробиологических исследований с использованием МТС должна полностью соответствовать прилагаемой инструкции. Общая схема работы с тест-системами состоит из следующих этапов.

1. Выделение культуры. Для работы с МТС используют только чистые культуры. При их выделении особое внимание следует уделять качеству питательных сред. От этого зависит видовой состав изолированных микроорганизмов, их количество в исследуемом материале и успех идентификации. По результатам первичного посева и микроскопии проводят дифференциацию культур на грамположительные и грамотрицательные кокки и палочки.

2. Приготовление бактериальной суспензии. Суспензию готовят в рекомендованной суспензионной среде из чистой 18…24-часовой культуры определенной степени мутности согласно инструкции. Использование слишком густой или жидкой суспензии может привести к ложным результатам. Параллельно делают контрольный высев взвеси культуры на кровяной агар для проверки ее чистоты, ростовых свойств и (или) для постановки дополнительных тестов.

3. Инокуляция. Суспензию тщательно встряхивают; необходимый объем вносят в каждую лунку соответствующего ряда. После этого в определенные лунки для создания анаэробных условий добавляют по 2 капли стерильного вазелинового или парафинового масла.

4. Инкубация. Планшеты в полиэтиленовых пакетах или закрытые крышками инкубируют при 30…37 °С в течение 4…48 ч.

5. Оценка результатов. По окончании выращивания проверяют чистоту культуры по контрольному посеву. При отсутствии роста увеличивают время инкубации. Затем добавляют в определенные лунки необходимые реактивы, позволяющие визуализировать или усилить цветные реакции. Учет проводят визуально с помощью специальных таблиц, цветовых шкал и (или) цветных реакций контрольных штаммов и заносят их в бланки.

6. Идентификация. Проводят с помощью таблиц биохимической активности, индексов профилей, книг-кодов или компьютерных программ.

При окончательной идентификации учитывают дополнительную информацию (микроскопия, характер колоний, наличие гемолиза, пигментообразование, подвижность и т. д.).

При работе с тест-системами следует придерживаться следующих рекомендаций.

1. Строго соблюдать правила работы с инфицированным материалом.

2. После употребления МТС необходимо обезвреживать автоклавированием при (120+2) °С в течение 1 ч.

3. Строго соблюдать условия и сроки хранения в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к тест-системам.

4. Если культуру не удается идентифицировать, следует проверить ее чистоту и повторить исследование.

5. При отсутствии роста на контрольной чашке необходимо увеличить время инкубации.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Читайте также: