Исследование сибирская язва в ветеринарной лаборатории

У животных диагностика сибирской язвы осуществляется на основании учета эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований.

Из эпизоотологических особенностей болезни учитывают восприимчивость различных видов животных и людей, летнюю сезонность, стационарность и неблагополучие местности по сибирской язве в прошлом.

Клинический метод диагностики при сибирской язве не эффективен. Как правило, при этой болезни ветеринарные специалисты имеют дело с трупом. Это объясняется исключительно коротким инкубационным периодом и острым течением болезни, при которых ее клинические признаки не успевают развиться. Строго специфических клинических признаков у животных, характерных для сибирской язвы, нет.

Использование патологоанатомического метода для диагностики ограничено из-за запрещения вскрытия трупов при этом заболевании.

С учетом вышеизложенного ведущим при СЯ является лабораторный метод диагностики.

При подозрении на сибирскую язвы вскрытие трупа категорически запрещается! Для исследования в лабораторию от всех видов животных, кроме свиней, посылают ухо, отрезанное с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно его туго перевязывают у основания шпагатом в двух местах и отрезают между повязками. Место отреза уха на трупе прижигают.

Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают и на исследование отправляют часть селезенки.

От свиней брать ухо для бактериологического исследования -- грубая профессиональная ошибка. У свиней болезнь протекает в виде ангины, поэтому для исследования в лабораторию направляют участки отечной соединительной ткани и заглоточные или подчелюстные лимфатические узлы.

В лаборатории проводят микроскопическое, бактериологическое и биологическое исследования, при необходимости ставят реакцию преципитации.

Если ухо животного доставлено обескровленным, его обязательно исследуют и по реакции преципитации, а если доставлен загнивший патологический материал -- его исследуют только по этой реакции.

Предварительный диагноз на сибирскую язву по результатам макроскопического исследования выдается в день поступления патологического материала в лабораторию, а бактериологическое и биологическое исследования проводятся в течение соответственно трех и десяти суток. Следовательно, окончательная лабораторная диагностика сибирской язвы осуществляется в период до 10 суток. Вместе с тем предварительный диагноз на основании микроскопического исследования имеет важное значение для начала организации мероприятий по ликвидации сибирской язвы, а при положительных результатах исследования кожевенного сырья в реакции преципитации они должны проводиться в полном объеме, не дожидаясь результатов биологического исследования.

Диагноз считается установленным окончательно в одном из следующих случаев:

¦ гибели хотя бы одного лабораторного животного из двух (кролики), зараженных суспензией из исходного патологического материала, с последующим выделением из его органов культуры Вас. anthracis даже при отсутствии роста культуры возбудителя из патологического материала;

¦ получения положительной реакции преципитации при исследовании загнившего исходного патологического материала;

¦ получения положительной реакции преципитации при наличии характерной клинической картины и патологических изменений у свиней, даже при отсутствии культуры возбудителя в высевах из исходного патологического материала и отрицательном результате биопробы.

Из новых методов определенное диагностическое значение при заболевании сибирской язвой имеет аллергический. Этот метод (антраксин-кожный тест, АКТ) применяется для ранней и ретроспективной диагностики, а также для оценки напряженности иммунитета при СЯ у людей.

Разработана реакция непрямой гемагглютинации (РИГА), проводятся исследования по определению эффективности диагностики СЯ с использованием молекулярной гибридизации, геномной дактилоскопии, полиме- разной цепной реакции (ПЦР) и др.

У крупного рогатого скота сибирскую язву необходимо дифференцировать от эмфизематозного карбункула, злокачественного отека, пастереллеза и тимпании; у овец -- от брадзота, энтеротоксемии, пастереллеза, эмфизематозного карбункула, злокачественного отека, лейкоза, пироплазмоза, отравлений, тимпании, солнечного удара; у свиней -- от пастереллеза, злокачественного отека и фарингита.

В лабораторию направляют ухо, отрезанное со стороны, на которой лежит труп животного, или мазок крови из надреза уха. Ухо туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между перевязками. Место отреза на трупе прижигают. От трупов свиней направляют участки отечной ткани, заглоточные, подчелюстные и другие патологически измененные лимфоузлы. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа (кроме трупов свиней), на исследование направляют часть селезенки. Взятый патологический материал помещают в чистые пробирки или банки, а высушенные мазки - в чашки Петри, которые обертывают плотной бумагой. Мазки не фиксируют. Посуду с патологическим материалом упаковывают во влагонепроницаемую тару, опечатывают и отправляют в лабораторию с нарочным.

Сибирская язва: оздоровительные и профилактические мероприятия.

Очень важно полностью исключить доступ животных на учтенные инфицированные участки - места падежа животных от сибирской язвы и места захоронения трупов. Такие места необходимо огораживать, защищать посадкой колючих кустарников. Бактериологические исследования проб почвы позволяют контролировать эффективность ее санации. В известных неблагополучных по си-бирской язве пунктах и на угрожаемой территории обязателен контроль выполнения ветеринарно-санитарных требований при. проведении гидромелиоративных, строительных и других работ, связанных с выемкой и перемещением грунта. Потенциальная опасность заражения скота особенно велика при проведении таких работ вблизи животноводческих ферм и на пастбищах.

На всех территориях, где сохраняется опасность заражения, ежегодно проводят плановую профилактическую вакцинацию всех восприимчивых животных. Прививки рекомендуется проводить в период оптимального физиологического состояния поголовья. Так, весной вакцинацию начинают при восстановлении нормальной иимунореактивности животных, переведенных на пастбищное содержание. Затем, в течение всего пастбищного периода, необходимо ежемесячно проводить допрививку и ревакцинацию подрастающего молодняка. Осеннюю вакцинацию проводят до наступления холодов. Обязательно вакцинируют весь скот, поступивший из других хозяйств и закупленный у населения.

В случае вспышки сибирской язвы немедленно карантинируют соответствующий населенный пункт или хозяйство, ферму, участок пастбища, предприятие, перерабатывающее животное сырье. Запрещают ввод, вывод и перегруппировки животных, их убой на мясо, заготовку и вывоз продукции животноводства. Проводят клинический осмотр всего имеющегося поголовья, больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют и немедленно начинают лечить. Всех подозреваемых в заражении клинически здоровых животных незамедлительно вакцинируют. Вылеченных животных иммунизируют через 14 дней после выздоровления.

Молоко от больных и подозрительных по заболеванию коров обеззараживают и уничтожают. Молоко от подозреваемых в заражении (клинически здоровых) коров допускают в пищу людям только после кипячения.

Трупы павших от сибирской язвы животных сжигают, их захоронение категорически запрещено. Места, где находились больные животные или лежали трупы, тщательно дезинфицируют, используя раствор хлорной извести, содержащий 5 % активного хлора, 4 %-ный раствор формальдегида, горячий (80 С) 10 %-ный раствор гидроокиси натрия, 10 %-ный раствор однохлористого йода. Для санации почвы используют сухую хлорную известь, газы бро-мистый метил или ОКЭБМ. Инфицированный навоз сжигают.

Карантин с неблагополучного пункта снимают через 15 дней с момента последнего случая падежа от сибирской язвы или выздоровления последнего больного животного.

При выявлении случаев сибирской язвы на мясокомбинатах или бойнях убой животных прекращают и проводят мероприятия, гарантирующие обеззараживание всех инфицированных объектов.

Все заготавливаемое кожевенное и меховое сырье небоенского происхождения должно быть исследовано (реакция преципитации) в ветеринарных лабораториях. При обнаружении инфицированного сырья на предприятиях по его заготовке и переработке работу этих предприятий немедленно останавливают и проводят дезинфекцию сырья и помещений.

Сибирская язва - особо опасная инфекционная болезнь животных и человека. Болезнь у животных протекает сверхостро, остро и подостро, а у свиней бессимптомно, в основном в локальной ангинозной форме. Болезнь у человека чаще всего проявляется как инфекция кожных покровов и лишь изредка осложняется сибиреязвенным сепсисом: вместе с тем может развиться и первичная генерализованная инфекция, проявляющаяся в легочной или кишечной форме.

Источник возбудителя инфекции - больное животное. Экскреты заболевших животных (кал, моча, кровянистые истечения из естественных отверстий) содержат бациллы, которые на воздухе превращаются в споры. Контаминированные сибиреязвенными спорами участки почвы и другие объекты внешней среды длительное время являются резервуарами и факторами передачи возбудителя инфекции.
Основной путь заражения животных - алиментарный - через корма и воду. Возможны также трансмиссивный и аспирационный пути заражения.
Заражение человека происходит при уходе за больными животными, в процессе их убоя, снятия шкур, разделки туш, кулинарной обработки мяса, уборки и уничтожения трупов, при хранении, транспортировке, первичной переработке и реализации контаминированного животного сырья. Возможно заражение человека при контакте с контаминированной почвой, а также аспирационным и трансмиссивным путями.

Порядок отбора проб для исключения сибирской язвы
При подозрении на сибирскую язву трупы животных не вскрывают. В лабораторию направляют ухо павшего животного со стороны, на которой лежит труп, предварительно перевязанное у основания шпагатом или другим материалом в двух местах и отрезанное между перевязками. Место разреза прижигают раскаленным металлическим предметом.
Если подозрение на сибирскую язву возникло в процессе вскрытия трупа или разделки туши, работу немедленно прекращают и направляют для исследования часть селезенки и пораженные лимфоузлы.
От трупов свиней для исследования берут участки отечной ткани, заглоточные или подчелюстные лимфоузлы.
Трупы мелких животных направляют в лабораторию целиком.
До получения результатов лабораторного исследования трупы, мясо или туши со всеми внутренними органами и шкурой оставляют на месте в условиях строгой изоляции.
Сроки исследования в ветеринарной лаборатории:
микроскопического - в день поступления материала,
бактериологического - до 3-х суток,
биологического - до 10 суток.
При получении положительных результатов микроскопического исследования биоматериала на сибирскую язву ветеринарная лаборатория немедленно дает предварительный ответ главному государственному ветеринарному инспектору АО (города) и владельцу животного.
Трупы животных, павших от сибирской язвы, а также все продукты убоя, полученные в случаях убоя больных сибирской язвой животных, сжигают; захоронение (зарывание) категорически запрещается.

Дезинфекция
Навоз, подстилку и остатки корма, загрязненные выделениями больных животных, сжигают. Навозную жижу в жижесборнике смешивают с сухой хлорной известью, содержащей не менее 25% активного хлора, из расчета 1 кг извести на каждые 20 л навозной жижи.
Для дезинфекции загрязненных возбудителем поверхностей применяют одно из следующих дезинфицирующих средств: 10%-ный горячий раствор едкого натра, 4%-ный раствор формальдегида, растворы хлорной извести, двутретиосновной соли гипохлорита кальция, нейтрального гипохлорита кальция, ДП-2, тексанита с содержанием 5% активного хлора, 10%- ный однохлористый йод (только для деревянных поверхностей), 7%-ный раствор перекиси водорода с добавлением 0,2% молочной кислоты и 0,2% ОП-7 или ОП-10, 2%-ный раствор глутарового альдегида.
Дезинфекцию указанными средствами (кроме однохлористого йода, перекиси водорода и глутарового альдегида) проводят трехкратно с интервалом в 1 ч. из расчета 1 л раствора на 1 кв. м в типовых помещениях и 2 л раствора на 1 кв. м в помещениях, приспособленных для содержания животных.
При применении однохлористого йода поверхность обрабатывают двукратно с интервалом 15-30 минут при норме расхода 1 л на 1 кв. м площади, а при использовании перекиси водорода и глутарового альдегида - двукратно, с интервалом в 1 ч. исходя из того же расчета.
После последнего нанесения раствора дезинфектанта помещение закрывают на 3 часа и затем проветривают. Кормушки и поилки обмывают водой.
Для дезинфекции поверхностей при низкой (минусовой) температуре применяют растворы хлорной извести, двутретиосновной соли гипохлорита кальция с содержанием 8% активного хлора, препарата ДП-2 и нейтрального гипохлорита кальция с содержанием 5% активного хлора. Указанные растворы готовят непосредственно перед применением на теплом (40-50 град. С) 15%-ном (при наружной температуре от 0 до минус 15 град. С) или 20%-ном (при температуре до минус 20 град. С) растворе поваренной соли.
Растворы наносят трехкратно с интервалом 1 ч при норме расхода 0,5-1 л на 1 кв. м. Для обеззараживания деревянных поверхностей применяют также 10%-ный раствор однохлористого йода - трехкратно с интервалом 15-25 минут по 0,3-0,4 л на 1 кв. м после предварительного увлажнения поверхностей 20%-ным раствором поваренной соли из расчета 0,5 л на 1 кв. м. Экспозиция во всех случаях - 12 часов после последнего нанесения дезраствора. По окончании экспозиции кормушки и поилки обмывают водой, помещение проветривают.
Почву на месте падежа, вынужденного убоя больного животного или вскрытия трупа животного, павшего от сибирской язвы, орошают раствором хлорной извести, содержащим 5% активного хлора, из расчета 10 л на 1 кв. м. После этого почву перекапывают на глубину 20-25 см, перемешивают с сухой хлорной известью, содержащей не менее 25-28% активного хлора, из расчета на 3 части почвы одну часть хлорной извести. После этого почву увлажняют водой.
Обеззараживание почвенных очагов сибирской язвы проводят бромистым метилом в соответствии с действующими инструкциями. После обеззараживания почвенный очаг считается ликвидированным и соответствующие ограничения снимаются.
Транспортные средства, использованные для перевозки больных сибирской язвой животных, продуктов их убоя или контаминированного сырья животного происхождения, обеззараживают в соответствии с действующей инструкцией "Проведение ветеринарной дезинфекции объектов животноводства".
Спецодежду, щетки, скребницы, ведра и другой мелкий инвентарь обеззараживают путем погружения на 4 часа в 1%-ный активированный раствор хлорамина, 4%-ный раствор формальдегида или кипятят в 2%-ном растворе кальцинированной соды не менее 90 мин.
Меховые изделия, кожаную, резиновую обувь и другие портящиеся при указанном выше методе дезинфекции вещи обеззараживают парами формальдегида в пароформалиновых камерах при расходе 250 мл формалина на 1 куб. м объема камеры, температуре 58-59 град. С и экспозиции 3 ч. Ценные меха обрабатывают в специальных герметических камерах бромистым метилом (в соответствии с инструкцией).

Бактериологическая диагностика сибирской язвы осуществляется микроскопическим исследованием, получением культур, заражением опытных животных и реакцией преципитации по Асколи.

Материалом для исследования обыкновенно елужит ухо или толстые мазки крови периферических сосудов трупа животного и, если произведено вскрытие, — кусочек селезенки.

У свиней исследуются лимфатические узлы области поражения (ретрофарингеальные, мезентериальные), селезенка и особенно инфаркты в ней.

При микроскопическом исследовании свежего материала для сибиреязвенных бацилл характерно:
1) расположение в виде коротких, иногда и длинных цепочек с вдавленными внутрь или резко обрубленными обращенными друг к другу концами у отдельных палочек;
2) положительная окраска по Граму и
3) наличие капсулы.

Для более ясной видимости капсулы мазки окрашивают по методу Романовского — Гимза, Ольта, Ребигера и др. Хорошие результаты получаются и при окраске фуксином Циля или синькой Леффлера в течение 2—3 мин. с последующим легким и быстрым смыванием краски водой, б последнем случае палочки окрашиваются в синий цвет, капсула — в розовокрасный.

Наличие перечисленных морфологических признаков при микроскопическом исследовании материала от трупа позволяет лаборатории предварительно диагносцировать сибирскую язву для немед ленного принятия соответствующих мер на месте согласно существующей инструкции.

Микроскопическое исследование разложившегося материала не дает ясной картины: наряду с характерными бациллами сибирской язвы видны как бы изъеденные, с закругленными концами палочки, без капсулы или только с обрывками ее.

Одновременно с микроскопическим исследованием производится посев патологического материала на агар в чашках Петри. Высевы из материала с признаками разложения производят после предварительного прогревания приготовленной в физиологическом растворе эмульсии в течение 30 мин. при 70°. Выросшие через 18—24 часа изолированно расположенные колонии изучают микроскопически при малом увеличении и из характерных для Вас. anthracis колоний (завитки волос) приготавливаются мазки и окрашиваются по Граму. Из этих же колоний производят отвивки на косой агар и бульон для получения чистых культур и, если представляется необходимым, приготавливают эмульсию в физиологическом растворе для последующего заражения лабораторных животных.

Для окончательного подтверждения диагноза производят подкожное введение мышам или морским свинкам материала (кровь, часть сосуда уха с кровью или частицами подкожной ткани, часть колонии), эмульгированного в физиологическом растворе. Привитые животные при наличии в материале Вас, anthracis Обычно погибают через 1—3 дня.

При вскрытии у лабораторных животных обнаруживают студенистый инфильтрат в ткани на месте прививки и увеличение селезенки. Обнаружение у павших животных типичных бацилл с капсулами и получение чистых культур из крови сердца, пульпы селезенки и инфильтрата окончательно подтверждают диагноз.

При получении отрицательных или неясных результатов выделения культуры и заражения опытных животных, особенно при исследовании сильно разложившегося материала, необходимо, для выяснения диагноза, проводить реакцию преципитации по Асколи.

С этой целью 1,0—2,0 измельченного материала заливают в пробирке или колбочке 10 мл физиологического раствора и прогревают в водяной бане 10—15 мин. при 100°. Полученный экстракт фильтруют до полной прозрачности и осторожно наслаивают на иммунную преципитирующую противосибиреязвенную сыворотку, налитую в маленькую уленгутовскую пробирку. Появление сразу же или не позднее 15 мин. мутного беловатого кольца на границе двух жидкостей при отсутствии подобной реакции в контроле свидетельствует о наличии сибиреязвенной инфекции.

При бактериологической диагностике возбудителя сибирской язвы необходима диференциация его от антраксоподобных непатогенных бацилл.
В отличие от антраксоподобных бацилл характерным для Вас. anthracis является отсутствие гемолиза при росте на кровяном агаре (15—25%)

Впервые описана Полендером в 1849 г.; К. Давином в 1850 г.; Ф. А. Браулем в 1854 г. Учение создано Р. Кохом в 1876 г.; Л. Пастером в 1881 г.; Л. С. Ценковским в 1883 г.
Возбудитель: Bacillus anthracis (рис. 1). Неподвижная, Г+, образует споры во внешней среде, капсулы в организме, аэробная палочка.
Вегетативные формы погибают при температуре 55°С в течение 40 мин, при кипячении — мгновенно; прямой солнечный свет убивает за несколько часов. Споры возбудителя очень устойчивы во внешней среде (особенно в почве), где сохраняются десятилетиями. Споры погибают при кипячении через 45—60 мин, в автоклаве при температуре 120°С через 10 мин; 1%ный раствор формальдегида или 10%ный раствор едкого натра убивает их только через 2 ч; 10%ный раствор хлорной извести — в течение нескольких минут.

Эпизоотология. Течение и симптомы. Наиболее восприимчивы — крупный рогатый скот, овцы, козы, лошади, олени, верблюды, буйволы; менее восприимчивы свиньи, нутрии.
Маловосприимчивы: собаки, кошки и дикие плотоядные. Источник: больные животные. Выделяют возбудителя с калом, мочой, слюной. Факторы передачи: объекты внешней среды, обсемененные бациллами.
Инкубационный период: 1—3 суток. Две основные формы: септическая и карбункулезная. По локализации — кожная, кишечная, легочная и тонзиллярная (ангинозная) формы.
Молниеносное течение: у овец и крупного рогатого скота — повышается температура. Болезнь длится от нескольких минут до нескольких часов.
Острое течение: у крупного рогатого скота и лошадей температура повышается до 42°С.14
Синюшностъ слизистых оболочек, угнетение, отказ от корма. У крупного рогатого скота — тимпания, у лошадей — колики, у беременных — аборты. Животные погибают на 2—3й день болезни.
Подострое течение: длится 6—8 суток.
Хроническое течение: истощение, инфильтраты под нижней челюстью, поражение подчелюстных и заглоточных лимфоузлов. Продолжительность болезни 2—3 мес.
Сибирская язва человека (синий злокачественный карбункул): человек заражается при уходе за больными животными и при обработке сырых животноводческих продуктов и сырья.
Инкубационный период: 2—3 сут. Различают кожную и висцеральную (кишечную, легочную, септическую) формы. При кожной форме — карбункулы, лихорадка, общая интоксикация. При кишечной — кровавая рвота, понос, боли в животе. При легочной —лихорадка, поражение дыхательных путей, сердечная слабость. При септической — тяжелое состояние с геморрагическими явлениями. Болезнь чаще заканчивается летально.

Диагноз ставят комплексно: клиническая картина, аллергическая проба, бактериоскопия, реакция иммунофлюоресценции и дермопреципитации по Асколи.
Патолого-анатомические изменения. При септической форме труп вздут, окоченение отсутствует или слабо выражено, из естественных отверстий кровянистые истечения, на коже — тестоватые припухлости, кровь темная, не свернувшаяся (лаковая). Лимфоузлы и селезенка увеличены, кровоизлияния в легких, эндокарде. Все паренхиматозные органы полнокровны. У свиней — студенистогеморрагические инфильтраты в области гортани, трахеи, на языке, поражение миндалин и регионарных лимфатических узлов. У нутрий при септической форме патолого-анатомические изменения те же, а при атипичной форме — патолого-анатомические изменения не характерны — тушки плохо обескровлены, в лимфоузлах инфильтраты и кровоизлияния.

Диагностика. Если во время вскрытия или убоя возникает подозрение на сибирскую язву, то вскрытие прекращают и отправляют в ветеринарную бактериологическую лабораторию ухо животного, со стороны, на которой лежало животное, перевязывая двойной лигатурой, место разреза прижигают; также направляют селезенку и мазки крови, все герметично упаковывают.
Хорошо культивируется при температуре 35—37°С.
В МПБ — образуются хлопья, на МПА — колонии R, S и переходные формы
На М ПА с пенициллином наблюдается распад бацилл в виде ожерелья (жемчужное ожерелье).
Биопробу ставят на белых мышах, морских свинках и кроликах.
Дифференциальная диагностика. Сибирскую язву отличают от пироплазмоза, эмкара у крупного рогатого скота; у свиней — от рожи и чумы. При пироплазмозе селезенка увеличена, красного цвета, пульпа не стекает с поверхности, отмечается желтушность ткани, студенистые инфильтраты.
Эмкар: крепитирующие отеки, пропитанные пузырьками газа, с запахом прогорклого мяса, селезенка не увеличена, имеются очаговые некрозы. При роже селезенка увеличена, но пульпа не размягчена. При чуме свиней поражен весь кишечник, особенно толстый. Пастереллез у крупного рогатого скота — воспалительные отеки в области головы, при сибирской язве у карбункулов нет определенной локализации. При пастереллезе серозно-фибринозная плевро-пневмония, селезенка не увеличена, плотной консистенции. Диагноз ставят по результатам бактериологических и клинических исследований (микроскопия мазков из патологического материала). Посев на питательные среды (МПБ и МПА). РП по Асколи, метод люминисцирующих антител, феномен жемчужного ожерелья.
Профилактика и лечение. Применяют гипериммунную противоязвенную сыворотку, углобулин, антибиотики, местно — противовоспалительную терапию. При возникновении сибирской язвы больных и подозрительных изолируют и лечат, проводят вакцинации остальных животных; трупы сжигают, накладывают карантин на 15 суток.

Ветеринарно-санитарная экспертиза. Убой животных запрещен. Вскрытие трупов животных, подозрительных по заболеванию сибирской язвой, а также павших, категорически воспрещается. При подозрении на сибирскую язву во время убоя, убой прекращается.
С подозрительной туши берут селезенку, измененные части ткани и пораженные лимфатические узлы и направляют в лабораторию для бактериоскопического и бактериологического исследований. До получения результатов исследований тушу и все органы изолируют в обособленное место. При установлении бактериоскопическим исследованием сибирской язвы тушу с органами и шкурой, не ожидая результатов бактериологического исследования, направляют для уничтожения (сжиганием) при соблюдении установленных ветеринарно-санитарных правил.
Все обезличенные продукты (вымя, кровь и другие), полученные от Убоя других животных, смешанные с продуктами убоя от сибиреязвенного животного, сжигают. Шкуры от здоровых животных, контактировавшие со шкурой от животного, больного сибирской язвой, подлежат Дезинфекции в порядке, предусмотренном действующей Инструкцией по дезинфекции сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и обработке.
Примечание. Во всех случаях, когда в Правилах указывается на необходимость дезинфекции шкур, они подлежат дезинфекции согласно упомянутой Инструкции.
После удаления сибиреязвенной тушки и других продуктов убоя в убойном цехе немедленно проводят дезинфекцию согласно Инструкции о мероприятиях против сибирской язвы. Рабочим проводится экстренная профилактика сибирской язвы в соответствии с Инструкцией и методическими указаниями по лабораторной и клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей.
Другие туши и продукты убоя, подозреваемые в обсеменении бациллами сибирской язвы по ходу технологического процесса, немедленно подвергают обеззараживанию проваркой, но не позднее 6 часов с момента убоя, в открытых котлах в течение 3 ч с начала закипания, а в закрытых котлах при давлении пара 0,5 МПа в течение 2,5 ч. При невозможности провести обеззараживание в указанный срок эти туши должны быть изолированы в помещение при температуре не выше плюс 10°С, а затем направлены на обеззараживание, как указано выше, но не позже 48 ч с момента убоя. Если это невыполнимо, то туши и продукты убоя, подлежащие обеззараживанию, должны быть направлены на утилизацию или сжигание.
Туши и продукты убоя, обсеменение которых бациллами сибирской язвы по ходу технологического процесса исключается, выпускают без ограничения.
При отрицательном результате бактериоскопического исследования тушу, подозреваемую в заражении сибирской язвой, оставляют в изоляции до получения заключения о результатах бактериологического исследования; необходимость проведения других мероприятий в цехе (дезинфекция и т. д.) определяется ветеринарным врачом.

Помещение обрабатывают сначала горячим 10% раствором едкого натра, второй раз, через час, кальцием гипохлорида, содержащим 5% активного хлора, через час дезинфекцию повторяют тем же раствором, помещение проветривают, все оборудование, полы, стены моют горячей водой, кожи, валики, мускаты кипятят 30 мин в 5% растворе едкого натра. Во время карантина ввоз и вывоз животных, животного сырья, молока, убой животных на мясо запрещен.

Исследование на сибирскую язву включает микроскопию мазков из исходного материала, высевы на питательные среды, постановку тестов идентификации, метод флюоресцирующих антител, ПЦР (полимеразно-цепную реакцию), постановку биопробы и, при необходимости, реакции преципитации. У человека, кроме того, необходима постановка клинической кожно-аллергической пробы с сибиреязвенным аллергеном антраксином.

а) Взятие материала от животных. Для бактериологического исследования в лабораторию направляют ухо или мазок крови, полученный из надреза уха. Ухо отрезают с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно его туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между лигатурами. Место отреза уха на трупе прижигают. Отрезанное ухо заворачивают в пергаментную бумагу, смоченную в дезинфицирующем растворе. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного, вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки, от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани, заглоточные, подчелюстные, а также другие лимфатические узлы.

б) Взятие материала от человека. Для бактериологического исследования забор материала у больных должен производиться по возможности до начала лечения. При кожной форме заболевания необходимо осторожно обработать спиртом кожу вокруг пораженного места и поверхность карбункула. Затем содержимое везикулы отсасывают стерильным шприцем, отделяемое язвы снимают с поверхности стерильным тампоном, смоченным физиологическим раствором, фрагменты отторгнутого струпа снимают влажным тампоном или пинцетом. При всех формах заболевания берут кровь в объеме 1-2 мл из вены. 1-2 капли крови непосредственно у постели больного засевают на питательные среды (агар и бульон Хоттингера, pH 7,2-7,5). При висцеральных формах сибирской язвы и менингите отбирают спинномозговую жидкость в количестве 0,5 мл в стерильную пробирку.

При подозрении на ингаляционное заражение исследуют также мазки из полости носа. Их берут сухими стерильными ватными тампонами на зондах. Тампон вводят легким движением по наружной стенке полости носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем его слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с физиологическим раствором. Погрузив рабочую часть зонда в физраствор, вращают зонд в течение 10-15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки, и, отжав избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.

Для исследования методом ПЦР забор крови проводят натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 5 мл или в стеклянную пробирку без антикоагулянта. При заборе в шприц кровь из него аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую стеклянную пробирку. Содержимое везикул, карбункулов в объеме 0,1-0,3 мл и фрагменты струпов массой 10,0-100,0 мг помещают в микропробирки с закручивающимися крышками или пробирки объемом 1,5 мл с защелкой, содержащие 0,1-0,2 мл транспортной среды. Спинномозговую жидкость после пункции одноразовой пункционной иглой отбирают в количестве 0,5 мл в стерильную пробирку типа Эппендорф с завинчивающейся крышкой или пробирку объемом 1,5 мл с защелкой.

Транспортирование материала для исследования методом ПЦР осуществляют в специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом при температуре 2-8°С в течение 6 ч (кровь — в течение 1 сут., плазму и сыворотку — в течение 3 сут.), в замороженном виде — в течение 1 сут. Недопустимо замораживание образцов цельной крови.

в) Взятие материала из сырья животного происхождения и из объектов внешней среды проводится в тех случаях, когда необходимо установить источник инфекции или фактор передачи для выявления обсемененности спорами возбудителя сибирской язвы отдельных объектов, а также в целях обнаружения микроба в местах старых скотомогильников при проведении строительных, мелиоративных, гидротехнических и других работ, связанных с выемкой и перемещением грунта.

г) Отбор проб шерсти. Для исследования шерсть отбирают из разных мест не менее 5 образцов массой около 2 г каждый (лучше брать пучки загрязненной шерсти). Если шерсть упакована в кипы, берут не менее 10 образцов из разных мест каждой кипы, а также скопившуюся внутри обшивки пыль. Образцы от одной кипы объединяют и упаковывают вместе.

д) Отбор проб кожи. Берут кусочки кожи размером 3x3 см с периферических участков шкурок. При наличии на внутренней стороне шкурки кровоподтеков или инфильтратов пробы берут и в этих местах.

е) Отбор проб почвы. Пробы почвы с мест вероятного обсеменения спорами возбудителя (мест вынужденного убоя скота, стоянок и водопоя животных) берут на глубине до 15 см, на территории скотомогильников — на глубине до 2 м при помощи почвенных буров.

ж) Смывы с объектов внешней среды. Смывы делают с мест наиболее вероятного обсеменения спорами возбудителя при помощи стерильного тампона, смоченного стерильной водой. Площадь смыва одним тампоном — около 100 см 2 . Тампоны затем помещают в пробирки, заливают стерильной водой (5 мл) и закрывают пробкой.

Отбор проб для исследования методом ПЦР осуществляется аналогично.

В сопроводительном документе к пробам указывают причину проведения исследования, какой материал и в каком количестве направляют, место и дату отбора материала; для проб шерсти и кормов дополнительно указывают происхождение, объем партии, вид упаковки и количество упаковочных единиц. К сопроводительному документу прилагают опись проб и место каждой пробы.

и) Подготовка проб к бактериологическому исследованию. Кусочки органов и тканей от трупов помещают в ступку, измельчают ножницами или пестиком, затем заливают 1-5 мл физиологического раствора, суспензию через марлевый тампон набирают в шприц или пастеровскую пипетку и переносят в пробирку или колбочку.

Воду с илистыми частицами фильтруют через 2 слоя марли, чистую воду исследуют без предварительной подготовки. С целью концентрирования микробов пробы воды можно профильтровать через мембранные фильтры (№3). Осадок с каждого фильтра соскабливают скальпелем, затем смывают 1-2 мл физиологического раствора и эту взвесь используют для исследования.

Тампоны, которыми делают смывы с объектов внешней среды, отжимают о стенки пробирки и удаляют, а оставшуюся жидкость подвергают исследованию.

Пробы почвы освобождают от корней, камешков и тщательно перемешивают. От каждой пробы берут 90-100 г почвы, помещают в колбу, заливают физиологическим раствором или дистиллированной водой из расчета получения 15-20 мл суспензии. Колбу закрывают, тщательно встряхивают в течение 25 мин, дают отстояться 1-2 мин и надосадочную жидкость переносят в пробирку для дальнейшего исследования. Пробы пищевых продуктов или кормов готовят аналогично.

Для проб из шкур кусочки массой 1 г помещают в фарфоровую ступку и заливают 1-2 мл физиологического раствора. Кусочки измельчают ножницами и оставляют при 20°С на 2-3 ч для размягчения материала. После этого пробы хорошо растирают пестиком в той же жидкости до получения волокнистой мезги, затем мезгу удаляют, предварительно отжав ее пестиком на внутренней боковой поверхности ступки.

От каждой пробы шерсти отбирают наиболее загрязненные части, измельчают ножницами, вместе с пылью помещают в колбу и заливают физиологическим раствором. Колбу закрывают, тщательно встряхивают в течение 10 мин, от грубых частиц можно освободиться путем фильтрации через 2-3 слоя марли.

Для избавления от посторонней микрофлоры пробы из объектов внешней среды, шерсти и кожи, пищевых продуктов подвергаются термической обработке на водяной бане при 80°С в течение 20 мин. Пробы от больного человека и животного из патологического материала, мяса животных и пр., где возбудитель сибирской язвы находится в вегетативной форме, не прогревают.

к) Предварительная обработка проб для исследования при помощи ПЦР. Для получения сыворотки пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 мин до полного образования сгустка. После этого сгусток обводят пастеровской пипеткой и оставляют при комнатной температуре до образования сыворотки. Затем сыворотку в объеме 1 мл переносят отдельными наконечниками с аэрозольным барьером или пастеровскими пипетками в стерильные пробирки объемом 1,5 мл. Сыворотка, содержимое везикул, отделяемое язв, фрагменты отторгнутого струпа, мазки из полости носа и спинномозговая жидкость не требуют предварительной обработки. Воду, смывы с объектов внешней среды, пробы почвы, пищевых продуктов или кормов, шкур, шерсти предварительно обрабатывают так же, как для бактериологического исследования, отбирая для исследования методом ПЦР 0,1-0,2 мл водной фазы образцов.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 20.12.2019