Кровь на антитела чума
Антитела как показатель состояния иммунной системы
В организме человека присутствует пять классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgG, IgE, IgM. Они отличаются по массе, по составу, и, что самое главное, по свойствам.
IgE и IgD содержатся в сыворотке крови в малом количестве и не имеют диагностической ценности. Наиболее значимыми для анализа состояния иммунной системы и постановки диагноза являются IgM, IgA и IgG.
IgM — первый иммуноглобулин, который начинает вырабатывать организм в ответ на инфекцию. Он обладает высокой активностью, стимулирует различные звенья иммунитета. Составляет 10% от всех фракций иммуноглобулинов.
Примерно через пять суток после попадания антигена в организм начинает вырабатываться IgG (70–75% от всех иммуноглобулинов). Он обеспечивает основной иммунный ответ. Более половины всех выделяемых во время болезни иммуноглобулинов относятся именно к этому классу.
IgA в основном локализуется в слизистых оболочках дыхательных путей, желудка, кишечника и мочеполовой системы. То есть там, где болезнетворные микроорганизмы чаще всего проникают в наш организм. Этот класс иммуноглобулинов как бы связывает чужеродные вещества и не дает им прикрепиться к поверхности слизистых оболочек. Доля IgA 15–20% от всего числа присутствующих в организме иммуноглобулинов.
Концентрация антител к определенной инфекции помогает поставить диагноз, определить уровень иммунитета после вакцинации, выявить скрытые заболевания. Чаще всего анализы на антитела назначают при подозрении на такие заболевания (или для контроля их лечения), как:
- корь;
- гепатит;
- ветрянка (ветряная оспа);
- краснуха;
- гельминтоз;
- хеликобактер пилори;
- лямблиоз;
- вирус Эпштейна — Барр;
- полиомиелит;
- герпес.
Анализ на иммуноглобулины определенного класса могут также назначить также при:
- сепсисе;
- ревматоидном артрите;
- циррозе печени;
- онкологии;
- хронических гнойных отитах, менингитах, пневмониях, синуситах;
- нарушении работы иммунной системы;
- миеломной болезни;
- ВИЧ-инфекции.
При выявлении причин бесплодия могут назначить анализ на антитела к ХГЧ или на антиспермальные антитела. При беременности проводится исследование на антитела к резус-фактору.
Анализы на антитела к вирусам и другим инфекционным агентам проводятся исключительно по назначению врача.
Кровь на анализы на антитела сдается натощак. Забор биоматериала осуществляется из вены. Перед проведением исследования пациенту желательно избегать эмоциональных перегрузок, не заниматься тяжелой физической работой, не посещать спортзал и не принимать алкоголь.
Метод ИФА чувствителен даже к небольшому количеству иммуноглобулинов и обладает высокой специфичностью. Это значит, что результаты исследования будут достоверными и точными.
Обычно исследование занимает 1–2 рабочих дня. Некоторые лаборатории готовы выдать срочный результат уже через 2–3 часа, но стоимость будет примерно вдвое выше.
Правильно интерпретировать результаты анализа на иммуноглобулины может только врач. Он учитывает не только показатели в бланке исследования, но и состояние пациента, симптомы заболевания или их отсутствие, данные других исследований.
Каждая лаборатория использует свои тест-системы, потому результаты анализов, проведенных в разных диагностических центрах, могут отличаться. Указанные в статье границы являются ориентировочными.
Нормы общего IgA для детей:
- до 3 месяцев — от 0,01 до 0,34 г/л;
- от 3 месяцев до 1 года – от 0,08 до 0,91 г/л;
- от 1 года до 12 лет:
- девочки: от 0,21 до 2,82 г/л;
- мальчики: от 0,21 до 2,91 г/л;
- 12–60 лет — от 0,65 до 4,21 г/л;
- После 60 лет — от 0,69 до 5,17 г/л.
- 12–60 лет — от 0,63 до 4,84 г/л;
- после 60 лет — от 1,01 до 6,45 г/л.
Иммуноглобулин класса А повышается при хронических инфекциях, при муковисцидозе, при поражении печени. Также антитела этого типа могут активно вырабатываться при аутоиммунных болезнях. Снижение титра антител происходит при атопическом дерматите, некоторых заболеваниях крови и лимфатической системы. А также при нарушении синтеза белковых молекул и приеме некоторых лекарств.
Содержание IgM в сыворотке крови у новорожденных должно быть в пределах 0,06-0,21 г/л.
- старше 3 месяцев и до 1 года:
- девочки: от 0,17 до 1,50 г/л;
- мальчики: от 0,17 до 1,43 г/л;
- от 1 года до 12 лет:
- девочки: от 0,47 до 2,40 г/л;
- мальчики: от 0,41 до 1,83 г/л;
Для женщин: от 0,33 до 2,93 г/л.
Для мужчин: от 0,22 до 2,40 г/л.
IgM повышается при остром воспалении, пневмонии, синуситах, бронхите, болезнях кишечника и желудка. Выход концентрации за верхнюю границу нормы может говорить о поражении печени, паразитарных заболеваниях, а также о миеломной болезни. Понижение уровня IgM наблюдается при нарушениях синтеза белка или поражениях иммунной системы. Это может происходить после удаления селезенки, при большой потере белка, при лечении цитостатиками и другими препаратами, которые подавляют иммунитет, при лимфоме, а также при некоторых врожденных состояниях.
В отличие от предыдущих иммуноглобулинов, уровень IgG отличается у мужчин и женщин с самого рождения.
У представительниц женского пола его нормы составляют:
- до 1 месяца — от 3,91 до 17,37 г/л;
- от 1 месяца до 1 года — от 2,03 до 9,34 г/л;
- в 1–2 года — от 4,83 до 12,26 г/л;
- старше 2 лет — от 5,52 до 16,31 г/л.
У сильной половины человечества:
- до 1 месяца — от 3,97 до 17,65 г/л;
- от 1 месяца до 1 года — от 2,05 до 9,48 г/л;
- 1–2 года — от 4,75 до 12,10 г/л;
- старше 2 лет — от 5,40 до 16,31 г/л.
IgG может повыситься при хронических инфекциях, при аутоиммунных заболеваниях, при паразитарных заболеваниях, саркоидозе, муковисцидозе, при поражении печени, миеломе и гранулематозе.
Понижение уровня IgG может наблюдаться при онкологии кроветворной и лимфатической системы, при мышечной дистрофии и некоторых других заболеваниях.
При ВИЧ-инфекции уровень IgG может быть как крайне высоким, так и крайне низким, в зависимости от стадии заболевания и состояния иммунной системы.
С антителами к резус-фактору все немного проще. В норме их не должно быть. Если антитела обнаружены, значит, произошла иммунизация во время предыдущей беременности или при переливании донорской крови.
Аутоантитела в норме также должны отсутствовать. Их наличие говорит о развитии аутоиммунных заболеваний.
Существует огромное количество видов исследований на обнаружение антител. Например, комплексный анализ на TORCH-инфекции (токсоплазма, краснуха, цитомегаловирус, герпес), который необходимо сдавать при планировании беременности, будет стоить 2000–3000 рублей. Анализ на антитела к резус-фактору обойдется примерно в 450–600 рублей.
Анализ на антитела к определенным инфекциям стоит от 350 до 550 рублей. При этом стоит учитывать, что определение, например, IgG и IgM — это два разных исследования, каждое из которых нужно будет оплачивать отдельно.
Определение антиядерных (антинуклеарных) антител обойдется примерно в 500–750 рублей, антиспермальных — 700–1250 рублей, анализ на антитела к тиреоглобулину и тиреопероксидазе стоит примерно 400–550 рублей.
Нужно также заложить в расходы около 120–180 рублей за взятие крови.
Анализ крови для определения уровня иммуноглобулинов проводят многие лаборатории. Но как выбрать ту, где его проведут одновременно быстро, качественно и недорого?
Выбирая лабораторию, обратите внимание на перечень анализов. Чем больше этот список, тем более широкими возможностями для диагностики обладает лаборатория.
Еще один фактор — время, через которое вам обещают результат. Большинство лабораторий отводят на это исследование 2–3 дня, некоторые предоставляют услуги срочного анализа — 1 день.
При заборе крови обратите внимание на процедурный кабинет, его оснащение, используемые расходные материалы. Все должно быть стерильным: обычно прямо при вас медсестра протирает стол, подушечку и т.д. дезинфицирующим средством. Это гарантия вашей безопасности.
Еще один фактор — удобство. Не стоит ехать через весь город, чтобы сдать анализ на антитела на 20–30 рублей дешевле. За время дороги вы можете испытать физические или эмоциональные перегрузки, из-за которых результаты будут искажены.
Итак, выбирайте лабораторию или медицинский центр с современным медицинским оснащением, широким перечнем анализов, находящийся недалеко от вашего дома либо по пути на работу или учебу. Если эта лаборатория работает много лет и успела набрать определенный авторитет среди врачей и пациентов — это дополнительный плюс.
Анализ крови на выявление антител — высокоточный и информативный метод исследования. Его используют как для уточнения диагноза при определенных инфекциях, так и для определения общего состояния иммунной системы или выявления некоторых соматических заболеваний. Но интерпретировать результаты анализа должен врач с учетом всех клинических данных, возраста, пола и состояния пациента.
Подготовка к анализу на антитела не отличается сложностью, но все же некоторые правила соблюдать стоит: во-первых, исключите физические нагрузки, в том числе и физиотерапию, за пару дней до исследования, во-вторых, воздержитесь от жирной, соленой и острой пищи, алкоголя и кофе. Если вы принимаете какие-либо препараты или недавно перенесли какое-либо заболевание — сообщите об этом врачу.
Чума – это высокозаразное заболевание, которое проявляется в виде острой пневмонии или в виде поражения лимфатических узлов, сопровождающегося лихорадкой.
Возбудитель заболевания – чумная палочка.
Первично чума поражает грызунов (крыс, мышей, барсуков, белок и др.). Заражение человека происходит через укусы блох, инфицированных от больных грызунов. От человека к человеку заболевание передается чаще всего при вспышках легочной чумы воздушно-капельным путем.
На протяжении нескольких тысячелетий люди страдали от эпидемий чумы, уносящих огромное количество жизней. На данный момент она встречается очень редко, в основном в развивающихся странах.
Лечение состоит в приеме антибиотиков. Без лечения высок риск смерти больного.
Симптомы чумы зависят от ее формы.
Бубонная чума проявляется обычно спустя 2-5 дней после заражения:
- резким повышением температуры до 40-41 °C, ознобом и головной болью;
- бубонами – болезненными, увеличенными лимфатическими узлами в паховой, подмышечной области, в области шеи, которые окружены зоной отека; примерно на второй неделе заболевания они могут нагноиться;
- мышечными болями, сильным истощением, слабостью, болями в животе, диареей.
Септическая чума возникает при заражении крови чумной палочкой. Общие симптомы сходны с проявлениями бубонной чумы, однако сами бубоны отсутствуют.
При легочной чуме через 2-3 дня после заражения появляются быстро прогрессирующие симптомы:
- высокая температура тела, слабость, головная боль;
- кашель с кровавой или гнойной мокротой;
- боль в груди, затруднение дыхания;
- тошнота и рвота.
Общая информация о заболевании
Чума – это высокозаразное заболевание, которое проявляется поражением легких или лимфатических узлов и сопровождается лихорадкой.
Возбудитель заболевания – чумная палочка.
Люди страдали от эпидемий чумы на протяжении нескольких тысячелетий, раньше погибало до 100 % жителей зараженных мест. На данный момент она встречается редко, как правило, в развивающихся странах.
Изначально чума поражает грызунов (крыс, мышей, кроликов, бурундуков, барсуков, белок, землероек и др.). Человек инфицируется через укусы блох, хозяином которых до этого было зараженное чумой животное.
Кроме того, заразиться можно от укусов и царапин кошек, при разделке тушек животных, воздушно-капельным путем от человека при эпидемиях легочной чумы, от животного путем вдыхания зараженной воздушной взвеси.
Попав с укусом блох в организм, бактерии мигрируют в близлежащие лимфатические узлы и размножаются внутри клеток. Так пораженные лимфоузлы превращаются в бубоны. Затем происходит разрушение структуры и отмирание тканей лимфатических узлов. Без лечения инфекция может распространиться на другие органы.
Выделяются три наиболее распространенных формы чумы.
- Бубонная чума – наиболее распространенная форма. Поражаются лимфатические узлы, чаще всего один. При адекватном лечении смертность от бубонной чумы составляет около 20 %. Больной не заразен для окружающих.
- Септическая чума – менее распространенная форма. Происходит заражение крови больного. Бубоны не образуются. При полноценном лечении летальность среди больных составляет примерно 25 %.
- Легочная чума является редкой формой заболевания, при которой поражаются легкие. При оказании больным медицинской помощи смертность от легочной чумы достигает 50 %.
Чума может приводить к следующим осложнениям:
- менингиту – воспалению оболочек головного и спинного мозга;
- гангрене (сгустки крови в кровеносных сосудах пальцев, образующиеся при чуме, могут нарушить приток крови к ним и привести к отмиранию конечностей);
- септическому шоку – состоянию, угрожающему жизни и характеризующемуся крайне низким кровяным давлением;
- смерти (без лечения смертность от чумы составляет примерно 60 %).
Кто в группе риска?
Риск заболеть чумой достаточно низок. В группу риска входят:
- лица, контактировавшие с больным животным или человеком;
- те, кого часто кусают блохи;
- проживающие в местности, где наблюдались вспышки чумы;
- люди, чья пища может быть доступна грызунам;
- жители местности с плохими санитарными условиями и высокой численностью крыс;
- контактирующие с чумной палочкой по роду занятий (ученые, доктора, ветеринары).
При подозрении на чуму незамедлительно проводится взятие материала из пораженных органов и крови, выполняется рентгенография грудной клетки. Лечение начинается до получения результатов исследований.
- Исследование под микроскопом мазков из мокроты, крови, пораженных лимфоузлов. С помощью специального окрашивания мазка визуально выявляют бактерии, вызывающие чуму (иерсиния пестис). Для подтверждения диагноза достаточно обнаружить хотя бы одного возбудителя.
- Посев крови, мокроты, жидкости из легких, из лимфоузлов на чуму. Исследование предполагает помещение отделяемого в питательную среду, где бактерии начинают размножаться и становятся доступными визуальной оценке. Рост чумной палочки в питательной среде происходит медленно.
- Исследование мазка методом иммунофлюоресценции. В ходе данного исследования в полученный материал добавляются меченые антитела (молекулы, специфически связывающиеся с чумной палочкой). Под воздействием ультрафиолетового излучения комплекс из бактерий, "скленных" с антителами, дает характерное зеленоватое свечение, что говорит о присутствии чумной палочки во взятом материале. Метод используется для экспресс-диагностики чумы, обладая относительно высокой специфичностью.
- Определение антител к возбудителю чумы. При заражении организма чумой иммунная системы больного начинает вырабатывать специфические молекулы для борьбы с инфекцией. Количество (титр) антител значительно повышается в течение 2-3 недель после инфицирования и снижается в течение нескольких месяцев или лет.
- Определение ДНК чумной палочки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод основан на выявлении генетического материала чумной палочки в исследуемом материале.
- Выявление генетического материала чумной палочки в исследуемом материале.
В целях оценки общего состояния больного и состояния жизненно важных органов выполняются следующие анализы.
- Общий анализ крови. Для чумы характерно значительное повышение уровня лейкоцитов. Уровень тромбоцитов бывает снижен.
- Аланинаминотрансфераза (АЛТ) и аспартатаминотрансфераза (АСТ). Уровень этих печеночных ферментов может повышаться у значительного количества пациентов с чумой, что отражает вовлечение в патологический процесс печени
Другие методы исследования
- Рентгенография органов грудной клетки. При чуме на рентгене могут обнаруживаться затемнения в обоих легких.
При подозрении на чуму проводится безотлагательное лечение. Пациенты с бубонной формой подвергаются стандартной изоляции. Легочная чума требует помещения больного в специальный изолятор с фильтрацией воздуха. Лечебные и диагностические мероприятия проводятся врачами в специальных противочумных костюмах.
Применяются высокие дозы антибиотиков. Также проводится симптоматическое лечение. Больной изолируется, проводится лекарственная терапия мощными антибиотиками (стрептомицином, гентамицином, доксициклином и др.).
- Существует противочумная вакцина. Однако она недостаточно испытана и не защищает от легочной чумы.
- При нахождении в природных очагах чумы необходимо принимать антибиотики для профилактики заболевания.
- Рядом с местами нахождения людей важно удалять все потенциальные места гнездования грызунов: свалки, мусор, дрова и др. Корм для домашних животных целесообразно оставлять вне зоны доступа грызунов.
- Необходимо регулярно проверять домашних животных на наличие блох.
Рекомендуемые анализы
Дополнительная информация
- Dan L. Longo, Dennis L. Kasper, J. Larry Jameson, Anthony S. Fauci, Harrison's principles of internal medicine (18th ed.). New York: McGraw-Hill Medical Publishing Division, 2011.
Чума – это высокозаразное заболевание, которое проявляется в виде острой пневмонии или в виде поражения лимфатических узлов, сопровождающегося лихорадкой.
Возбудитель заболевания – чумная палочка.
Первично чума поражает грызунов (крыс, мышей, барсуков, белок и др.). Заражение человека происходит через укусы блох, инфицированных от больных грызунов. От человека к человеку заболевание передается чаще всего при вспышках легочной чумы воздушно-капельным путем.
На протяжении нескольких тысячелетий люди страдали от эпидемий чумы, уносящих огромное количество жизней. На данный момент она встречается очень редко, в основном в развивающихся странах.
Лечениесостоит в приеме антибиотиков. Без лечения высок риск смерти больного.
Симптомычумы зависят от ее формы.
Бубонная чума проявляется обычно спустя 2-5 дней после заражения:
- резким повышением температуры до 40-41 °C, ознобом и головной болью;
- бубонами – болезненными, увеличенными лимфатическими узлами в паховой, подмышечной области, в области шеи, которые окружены зоной отека; примерно на второй неделе заболевания они могут нагноиться;
- мышечными болями, сильным истощением, слабостью, болями в животе, диареей.
Септическая чума возникает при заражении крови чумной палочкой. Общие симптомы сходны с проявлениями бубонной чумы, однако сами бубоны отсутствуют.
При легочной чуме через 2-3 дня после заражения появляются быстро прогрессирующие симптомы:
- высокая температура тела, слабость, головная боль;
- кашель с кровавой или гнойной мокротой;
- боль в груди, затруднение дыхания;
- тошнота и рвота.
Общая информация о заболевании
Чума – это высокозаразное заболевание, которое проявляется поражением легких или лимфатических узлов и сопровождается лихорадкой.
Возбудитель заболевания – чумная палочка.
Люди страдали от эпидемий чумы на протяжении нескольких тысячелетий, раньше погибало до 100 % жителей зараженных мест. На данный момент она встречается редко, как правило, в развивающихся странах.
Изначально чума поражает грызунов (крыс, мышей, кроликов, бурундуков, барсуков, белок, землероек и др.). Человек инфицируется через укусы блох, хозяином которых до этого было зараженное чумой животное.
Кроме того, заразиться можно от укусов и царапин кошек, при разделке тушек животных, воздушно-капельным путем от человека при эпидемиях легочной чумы, от животного путем вдыхания зараженной воздушной взвеси.
Попав с укусом блох в организм, бактерии мигрируют в близлежащие лимфатические узлы и размножаются внутри клеток. Так пораженные лимфоузлы превращаются в бубоны. Затем происходит разрушение структуры и отмирание тканей лимфатических узлов. Без лечения инфекция может распространиться на другие органы.
Выделяются три наиболее распространенных формы чумы.
- Бубонная чума – наиболее распространенная форма. Поражаются лимфатические узлы, чаще всего один. При адекватном лечении смертность от бубонной чумы составляет около 20 %. Больной не заразен для окружающих.
- Септическая чума – менее распространенная форма. Происходит заражение крови больного. Бубоны не образуются. При полноценном лечении летальность среди больных составляет примерно 25 %.
- Легочная чума является редкой формой заболевания, при которой поражаются легкие. При оказании больным медицинской помощи смертность от легочной чумы достигает 50 %.
Чума может приводить к следующим осложнениям:
- менингиту – воспалению оболочек головного и спинного мозга;
- гангрене (сгустки крови в кровеносных сосудах пальцев, образующиеся при чуме, могут нарушить приток крови к ним и привести к отмиранию конечностей);
- септическому шоку – состоянию, угрожающему жизни и характеризующемуся крайне низким кровяным давлением;
- смерти (при отсутствии лечения смертность от чумы составляет примерно 60 %).
Кто в группе риска?
Риск заболеть чумой достаточно низок. В группу риска входят:
- лица, контактировавшие с больным животным или человеком;
- те, кого часто кусают блохи;
- проживающие в местности, где наблюдались вспышки чумы;
- люди, чья пища может быть доступна грызунам;
- жители местности с плохими санитарными условиями и высокой численностью крыс;
- контактирующие с чумной палочкой по роду занятий (ученые, доктора, ветеринары).
При подозрении на чуму незамедлительно проводится взятие материала из пораженных органов и крови, выполняется рентгенография грудной клетки. Лечениеначинается до получения результатов исследований.
В целях оценки общего состояния больного и состояния жизненно важных органов выполняются следующие анализы.
Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed
Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Сагдиев Д. И., Стрельцова Д. А., Равилов Р. Х., Горлик А. О., Герасимов В. В.
У взрослых собак при вакцинации против чумы плотоядных динамика специфических антител зависит от исходного иммунного статуса в отношении указанной инфекции
Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Сагдиев Д. И., Стрельцова Д. А., Равилов Р. Х., Горлик А. О., Герасимов В. В.
SERUM CONVERSION OF ANTIBODIES AGAINST THE FEBRIS CATARRHALIS ET NERVOSA CANUM AT IMMUNIZATION OF ADULT DOGS
At adult dogs at vaccination against a Febris catarrhalis et nervosa canum dynamics of specific antibodies depends on the background immune status concerning the specified infection
ДИНАМИКА СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ У ВАКЦИНИРОВАННЫХ ВЗРОСЛЫХ СОБАК
Сагдиев Д.И.*, Стрельцова Д.А*., Равилов Р.Х.*, Горлик А.О.**,
Казанская государственная академия ветеринарной медицины* Зональный центр кинологической службы МВД РТ* * Республиканский центр профилактики и борьбы со СПИД и ИБ
Ключевые слова: чума плотоядных, антитела, ифа, тест-система,
Key words: plague of carnivores, antibodies, elisa, test system, a dog.
Проблема быстрой и точной диагностики заболеваний мелких домашних животных является весьма актуальной. Значительный полиморфизм клинических проявлений при чуме плотоядных и преобладание в последнее время абортивных, стертых и латентных форм этой инфекции над клинически выраженными исключают возможность постановки диагноза только на основании клинической картины, в связи с этим возрастает роль лабораторных исследований, включающих и иммунологические методы.
В настоящее время наиболее перспективным методом выявления специфических антител является иммуноферментный анализ. Метод отличается высокой специфичностью, превышающую в несколько раз рутинные методы диагностики инфекционных болезней. Антитела в ИФА определяются в первые 2-3 дня и отслеживаются в организме на протяжении 10-12 месяцев после взаимодействия с антигеном. К преимуществам ИФА относят также: экспрессность, возможность
исследовать антикомплементарные сыворотки, воспроизводимость, простота постановки реакции и учета ее результатов, стабильность регентов при хранении, автоматизация некоторых операций и т.д. Эти преференции позволяют с успехом использовать этот тест и в ветеринарной практике. Применение иммуноферментного метода ветеринарными специалистами во многом сдерживается отсутствием в достаточном количестве необходимых диагностических наборов.
Исходя из вышеизложенного перед нами стояла задача разработать иммуноферментную тест-систему для индикации антител против вируса чумы плотоядных в сыворотках крови собак и использовать ее для изучения динамики специфических антител против чумы плотоядных у вакцинированных взрослых собак.
При конструировании наборов для диагностики инфекционных заболеваний в ИФА главным моментом является подготовка антигена. Он должен хорошо адсорбироваться на твердой фазе (полистирол и др.), с высокой чувствительностью выявлять антитела и не вызывать ложноположительных реакций. Для этого в первую очередь необходимо максимально очистить микроорганизмы от питательной среды (бактерии) или клеточного дебриса (вирусы). В ИФА чаще всего используют антигены, полученные путем лизиса микроорганизмов. Для разрушения микробных клеток используют обработку детергентами, ультразвук, автоклавирование и др.
В своей работе мы использовали антигены, изготовленные путем лизиса культур вируса чумы плотоядных (штамм ЭПМ).
Материалы и методы исследований. ИФА выполняли по непрямому методу, на микротитрационных планшетах из полистирола отечественных, изготовленных на ПО ВНИИ медицинской техники (г. Москва). В качестве конъюгата использовали белок А, меченный пероксидазой хрена. В модельных опытах антиген на планшеты наносили в различных концентрациях от 5 до 15 мг/мл. Исследуемые сыворотки разводили в соотношении 1:100.
Результаты учитывали визуально по интенсивности окрашивания и инструментально на фотометрах фирмы ТйеЛег модификации МиШБкап при длине световой волны 492 нм, измеряя оптическую плотность (ОП) цветной реакции ферментзависимой метки с субстратом. Для каждой пробы определяли коэффициент специфичности, т.е. отношение ОП в лунках с исследуемой сывороткой к ОП в лунках с отрицательным контролем. Результаты подлежали оценке и анализу, если в контроле конъюгата среднее значение ОП составлял не более 0,100, а в отрицательном контроле - не превышала 0,150 оптической единицы (о.е.). Пробу считали положительной, если ОП в лунках с исследуемой сывороткой не менее чем в 2 раза превышало ОП отрицательного контроля (ОП критическая). ОП положительного контроля при этом должно быть не ниже 0,8 о.е.
Позитивные сыворотки получали путем иммунизации собак и кошек возбудителем хламидиоза. Негативные сыворотки подбирали из числа проб полученных от неиммунных животных.
При изготовлении антигена культуру вируса обрабатывали сначала 1%-ным раствором дезоксихолата натрия в течение 30-40 минут, а затем ультразвуком в течение 30 секунд. Полученный лизат центрифугировали на градиенте сахарозы от 5 до 55% (с шагом 5%) в течение 6 часов при 100000§. Антигенные фракции, полученные после центрифугирования, испытывали в ИФА с положительными и отрицательными контрольными сыворотками. Анализ полученных результатов свидетельствовал, что наибольшую активность имела антигенная фракция, извлеченная из 20%-
ной ступени сахарозного градиента. Коэффициент ее специфичности при концентрации белка 6 мг/мл составила 9,8.
Изучение сероконверсии противочумных антител проводилось в Зональном центре кинологической службы МВД Республики Татарстан. Для испытания разработанной тест-системы мы провели исследование 23 сывороток крови, полученных от взрослых собак, иммунизированных противочумной вакциной (Мультикан 8, НАРВАК). Кровь для исследований брали до иммунизации и затем каждую неделю, т.е. через 1, 2 и 3 недели после введения вакцины.
Результаты исследований. В результате исследований установлено, что у животных отмечалась разнообразная реакция на введение вакцины, которая зависела, в том числе и от начального (до иммунизации) уровня антител. По этому показателю мы разделили собак на четыре группы: в первую вошли собаки, которые имели до иммунизации уровень специфических антител ниже или равный ОП критической, во вторую - превышающую ОП критическую не более, чем в 2 раза, в третью -превышающую ОП критическую не более, чем в 3 раза, в четвертую -превышающую ОП критическую более, чем в 3 раза.
Результаты сероконверсии противочумных антител в сыворотках крови собак указанных групп были получены данные, которые представлены на рисунках 1, 3, 5 и 7. Динамика средних значений уровня специфических антител в сыворотках крови по каждой группе иммунизированных собак представлена на рисунках 2, 4, 6 и 8.
1. Выявление специфических антител против чумы плотоядных в сыворотках крови вакцинированных собак первой группы.
2. Выявление специфических антител против чумы плотоядных в сыворотках крови вакцинированных собак второй группы.
Читайте также: