Латекс-агглютинация при менингококковой инфекции
Латексная агглютинация
Наборы для идентификации и дифференциации микроорганизмов из клинического материала или из чистой культуры методом латексной агглютинации.
Выпускаются в двух форматах:
1) Жидкие
Латексный реагент представлен в жидкой форме, хранение при + 2-8° С 1 год
Латексный реагент нанесен на реакционную карточку и лиофилизирован, хранение при + 2-25° С до 2 лет
Артикул
Название (русское/английское)
Фасовка
Описание
Бактериальный менингит
Набор Wellcogen на менингококковые инфекции/Wellcogen Bacterial Antigen Kit
Быстрый тест для прямого определения антигенов в жидкостях тела методом латексной агглютинации (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды):
- Streptococcus гр. B
- H. influenzae тип b
- N. meningitidis групп A, C, Y, W135
- N. meningitides гр. B/E.coli K1.
- Время реакции – 3 минуты
- Чувствительность – 97% *
- Специфичность – более 98%
- В состав набора входят все необходимые компоненты
*для Н. influenzae тип b
Набор Wellcogen для определения H. influenzae b/Wellcogen Haemophilus influenzae b Test Kit
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Набор Wellcogen для определения N. meningitidis A, C, Y, W 135/Wellcogen Neisseria meningitidis A, C, Y, W135 Test Kit
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Набор Wellcogen для определения N. meningitidis B/E. coli K1/Wellcogen Neisseria meningitidis B/E. coli K1
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Набор Wellcogen для определения стрептококков группы B/Wellcogen Strep B Rapid Latex Agglutination Test
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Набор Wellcogen для определения Streptococcus pneumoniaе/Wellcogen Streptococcus pneumoniae Test Kit
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Streptococcus
Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, D, F и G /PathoDxtra Strep Grouping Kit
Быстрый тест для дифференциации групп стрептококков A, B, C, D, F и G по Лансфильду с первичных чашек с культурой.
- Мгновенная экстракция без инкубации для восстановления
- Работа напрямую с колониями, без разведения в пробирках
- Сокращение времени проявления результатов
- Не требует дополнительных реагентов
- Идентификация всех клинически значимых стрептококков, включая группу D
- Возможность дополнить набор наиболее расходуемыми реагентами
Набор для диагностики стрептококков групп A/PathoDxtra Strep Group A Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп B/PathoDxtra Strep Group B Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп C/PathoDxtra Strep Group C Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп D/PathoDxtra Strep Group D Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп F/PathoDxtra Strep Group F Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп G/PathoDxtra Strep Group G Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор Streptex для диагностики групп стрептококков A, B, C, D, F и G (ферментная экстракция)/Streptex
Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, D, F, G по Лансфильду с использованием ферментной экстракции
Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Rapid
Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду с использованием кислотной экстракции
Набор для быстрой диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Acid Extraction Kit
Набор для быстрой кислотной экстракции для использования с Streptex Rapid Latex Agglutination Test для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду
Набор DrySpot для диагностики Streptococcus pneumonia/Pneumo
Сухой латексный тест для подтверждения Streptococcus pneumoniae в культурах на чашках или положительных культурах крови.
Staphylococcus и MRSA (метициллин-резистентный стафилококк)
Набор DrySpot для идентификации Staphylococcus aureus (MRSA)/Dryspot Staphytect Plus
Сухой латексный тест для идентификации S. aureus после первичного посева
Плазма кроличья для выявления коагулазы (лиофилизированная)/Coagulase Plasma (lyphohilized)
Реагент для выявления фермента коагулазы у стафилококков
Наиболее простым методом, не требующим сложного оборудования и дорогостоящих реактивов, является метод латекс-агглютинации, позволяющий в течение 15 мин дать заключение об отсутствии или наличии в СМЖ больного специфических антигенов. Реакцию проводят при наличии признаков гнойного воспаления в ликворе и/или при бактериоскопическом обнаружении в нем возбудителей. Предварительно СМЖ необходимо прогреть в течение 5 мин при 100 °С и отцентрифугировать при 1500 - 2000 об./мин. Для проведения реакции используют прозрачную надосадочную жидкость. Одну каплю каждого латексного реактива (предварительно реактивы рекомендуется тщательно встряхнуть) наносят на специальные бумажные карты, приложенные к набору. Затем добавляют 30 мкл СМЖ (надосадочная фракция) к каждой капле латексного реактива. Перемешивают чистым аппликатором. Осторожно покачивают бумажную карту. Агглютинация в течение 2 мин с одним из латекс-диагностических препаратов свидетельствует о присутствии в испытуемом образце специфического антигена. Для выполнения реакции используют наборы латекс-диагностических препаратов, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке.
Встречный иммуно-электрофорез (ВИЭФ экспресс-метод)
Реакция позволяет с помощью специфических антисывороток выявлять полисахаридный антиген возбудителя в СМЖ и сыворотке крови больного уже в первый день исследования материала. Для проведения реакции необходимы: проба СМЖ (осадок, если ликвор мутный) и/или сыворотка крови, преципитирующие антисыворотки, веронал-мединаловый буфер, 1 %-й агар на веронал-мединаловом буфере, любой аппарат для иммуноэлектрофореза, стеклянные пластины размером 9?12 см, трафареты, пробойники для агара, отсасывающие агар устройства, пастеровские пипетки или дозаторы с наконечниками, фильтровальная бумага, предметный столик или другой объект с идеально ровной поверхностью.
В аппарат для иммуноэлектрофореза заливают веронал-мединаловый буфер, содержащий в 1 л дистиллированной воды 21,9 г мединала и 3,35 г веронала (веронал предварительно нагревают на водяной бане в небольшом количестве дистиллированной воды до полного растворения). Измеряют рН и доводят его до уровня 8,6. Далее на веронал-мединаловом буфере (предварительно развести дистиллированной водой в 4 раза) готовят 1 %-й агар. На 100 мл буфера добавляют 1 г агара, нагревают на водяной бане до полного растворения и в горячем, но несколько охлажденном виде (60 - 70 °С) в количестве 20 мл наносят на стеклянные пластины размером 9?12 см. Пластину предварительно помещают на ровную горизонтальную поверхность. После застывания агара специальным пробойником или металлической трубкой с диаметром 3 мм высекают два параллельных ряда отверстий по длине стекла на расстоянии 3 мм друг от друга.
Специфические антисыворотки вносят в лунки агара со стороны анода (+), а испытуемую пробу СМЖ и/или сыворотку крови - со стороны катода (-). В отдельные лунки помещают положительный контроль. В качестве положительного контроля используют антигенный препарат (полисахарид) и гомологичную антисыворотку. Подготовленную пластину помещают в аппарат для иммуноэлектрофореза, соединяют стекло и буфер с помощью фильтровальной бумаги и включают аппарат в сеть. Время экспозиции 20 - 30 мин при силе тока 12 ма. Результат учитывают через 10 мин после выключения аппарата. Реакцию считают положительной, если между лунками проявляются четкие линии преципитации, которые хорошо видны в проходящем свете. Рекомендуется проведение повторного и окончательного учета результатов реакции через 24 ч, при этом стекла хранят во влажной камере или в эксикаторе с влажной атмосферой.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
Исследование сыворотки больного в реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации является вспомогательным методом диагностики менингококковой инфекции и позволяет существенно увеличить процент лабораторного подтверждения генерализованных форм менингококковой инфекции. Для получения достоверного результата обязательным условием является исследование сывороток крови больного в динамике, т.е. взятых в разные сроки заболевания (на 1-й и 10 - 12-й дни болезни).
Одной из модификаций микрометода является постановка РНГА в полистироловых пластинах с объемом лунок не менее 300 мкл с использованием автоматических дозаторов на 50 и 100 мкл.
Необходимые реагенты: диагностикумы эритроцитарные менингококковые полисахаридные серогрупп А и С; исследуемая сыворотка, разведенная 1:5; забуференный физиологический раствор (ЗФР).
Приготовление ЗФР: в 0,5 л дистиллированной воды растворяют NaCl - 8,65 г, Na2HPO4 ? 12Н2O - 1,92 г, КН2РO4 - 0,44 г. Объем раствора доводят до 1 л дистиллированной водой и проверяют рН раствора, который должен быть равен 7,2.
Ход исследования: два ряда полистироловой пластины (для выявления антител к менингококкам серогрупп А и С) заполняют по 100 мкл ЗФР, затем проводят двукратное титрование исследуемой сыворотки с разведения 1:5. В каждый ряд добавляют по 50 мкл соответствующего диагностикума. Пластину встряхивают и помещают в термостат на 2,0 - 2,5 ч при 37 °С, после чего учитывают результаты. Обязательными контролями служит отсутствие спонтанной агглютинации диагностикума и исследуемой сыворотки. Для этого к 100 мкл диагностикума добавляют 50 мкл ЗФР, а к 100 мкл сыворотки - 50 мкл 1 %-х эритроцитов барана. Учет результатов РНГА проводят по четырехкрестной системе. Четырехкратное и более нарастание титра специфических антител в процессе болезни служит подтверждением диагноза.
Реакция агглютинации латекса (РАЛ), или реакция латекс-агглютинации, разработана давно, однако она не нашла достаточно широкого применения в медицине и в ветеринарии.
Тем не менее усиливающаяся тенденция использовать в качестве носителей антигенов и антител инертные синтетические материалы привела к оживлению интереса к РАЛ и широкому изучению возможностей ее применения.
Принцип метода. Механизм РАЛ аналогичен РИГА, в которой используют сенсибилизированные антигенами или антителами эритроциты человека или животных. Для постановки РАЛ применяют сенсибилизированные частицы полистирольного латекса, которые в присутствии гомологичного реагента склеиваются. Обычно эта реакция проходит очень быстро (3…8 мин), что позволяет применить ее в качестве экспресс-метода для выявления антигенов и антител.
Преимущества РАЛ в том, что частицы латекса в отличие от эритроцитов не имеют перекрестно реагирующих антигенов, поэтому она специфичнее РИГА.
Материалы и реагенты. 1. Суспензия латекса. Для приготовления диагностикумов обычно используют частицы латекса диаметром 0,81…1 мкм. При применении более крупных частиц диаметром 0,22…0,3 мкм затруднен учет реакции и технологический процесс получения диагностикумов резко усложняется, а частиц более 1 мкм хотя не влияет на активность латексных диагностикумов, но существенно увеличивает частоту неспецифических реакций.
Для постановки РАЛ лучше использовать очищенные латексы с гомогенными частицами правильной сферической формы. Густота суспензии латекса обычно составляет 1 %, но может достичь в отдельных случаях 1,3…1,4 %.
3. Антитела. Для сенсибилизации частиц латекса пригодны гипериммунные сыворотки, полученные при иммунизации лабораторных животных (кроликов, крыс, мышей и др.). Повышению специфичности РАЛ и уменьшению числа ложноположительных и перекрестных реакций способствует применение очищенных иммуноглобулиновых фракций.
Методика исследования. Основные этапы постановки РАЛ. В настоящее время РАЛ обычно ставят на стеклянных или полистироловых пластинках, используя коммерческие диагностикумы или препараты. Реже применяют пластинки с лунками для постановки РИГА или пробирочный вариант реакции. Манипуляции выполняют в определенной последовательности.
1. Делают ряд серийных разведений исследуемого материала. Сыворотки крови необходимо предварительно прогреть в течение 30 мин при 56 °С или 20 мин при 60 °С. При постановке РАЛ на пластинках для РИГА при разведении материала используют петли микротитратора. На плоские ровные пластины наносят по одной капле соответствующих разведений.
2. Добавляют к каждому разведению равный объем суспензии сенсибилизированного латекса. Смешивают 1 каплю исследуемого материала и диагностикум, в лунки вносят по 15, 25 или 50 мкл ингредиентов реакции.
При постановке РАЛ в пробирочном варианте используют 0,25 мл исследуемого материала и 0,05 мл (или 0,1 мл) диагностикума.
3. Помещают пластинки на вращающийся столик или в шуттель-аппарат на 3…5 мин, после чего производят регистрацию результатов реакции.
Учет результатов. Независимо от вида диагностикума и количества антител (антигена) в исследуемом материале результаты РАЛ могут быть учтены уже через несколько минут после смешивания реагентов. При наличии в исследуемом образце искомого микроорганизма склеивающиеся частицы латекса образуют агглютинат, хорошо видимый невооруженным глазом. Можно использовать лупы с небольшим увеличением. При отрицательных результатах реакции суспензия латекса остается гомогенно-мутной, без глыбок агглютината и участков просветления. При малой или низкой активности диагностикума, а также невысокой концентрации антигена пластинки лучше инкубировать при 37 °С, что несколько ускоряет образование агглютината.
Результат реакции оценивают по трехбалльной системе:
Ставят несколько контролей: 1) исходное разведение исследуемого материала + суспензия несенсибилизированного латекса (отрицательный контроль); 2) нормальная сыворотка, не содержащая антител + суспензия сенсибилизированного латекса (проверка специфичности диагностикума); 3) гомологичная иммунная сыворотка + суспензия сенсибилизированного латекса (проверка активности диагностикума).
При постановке РАЛ с антительными латексными диагностикумами в контрольных положительной и отрицательных реакциях используют соответствующий антигенсодержащий материал.
Техника приготовления диагностикумов. Сенсибилизация латекса антигенами. Для приготовления антигенного латексного диагностикума желательно иметь в распоряжении растворимые антигены. В этом случае хорошие результаты получают при использовании буферных растворов (например, глицинового или боратного с pH 8,2). В таком буфере готовят раствор антигена в концентрации 2,5…5,0 мг/мл к 1 объему суспензии латекса. Если раствор антигена приготовлен на изотоническом растворе натрия хлорида, то буфер добавляют к смеси латекс — антиген.
Сенсибилизацию проводят в течение 2 ч при 37 °С в термостате или (лучше) на водяной бане. По истечении этого времени сенсибилизированный латекс осаждают центрифугированием в течение 5…10 мин при частоте оборотов 2000…2500 мин -1 и ресуспензируют в этом же буферном растворе до получения 1%-й суспензии.
Сенсибилизация латекса антителами. Суспензию латекса смешивают с равным объемом иммунной сыворотки или очищенной гамма-глобулиновой фракции в соответствующем буферном растворе. Смесь инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре или при 37 °С, центрифугируют в течение 30 мин при частоте оборотов 3…5000 мин -1 и дважды промывают осадок 0,01 М трис-солянокислым буфером с добавлением 200 мг/л поливинилпирролидона. Сенсибилизированный латекс ресуспензируют в этом же буферном растворе с поливинилпирролидоном и 0,05 % азида натрия и хранят в холодильнике при 2…4 °С.
При выборе оптимальной дозировки антител для сенсибилизации латекса следует учитывать, что одна его частица диаметром 0,8 мкм может адсорбировать на своей поверхности до 7,5 ∙ 10 4 молекул гамма-глобулина.
Необходимо отметить, что во многом требуется предварительно эмпирическим путем подбирать оптимальные условия для получения высококачественного латексного диагностикума. Режим сенсибилизации зависит от сорта и размера частиц латекса, pH и вида буферных растворов и ряда других факторов.
Для уменьшения частоты ложноположительных результатов рекомендуется к готовой суспензии сенсибилизированных частиц латекса добавлять нормальную сыворотку того вида животного, который был использован для приготовления гипериммунной сыворотки.
Получение латексных диагностикумов с помощью белка А стафилококка. Применение для изготовления диагностикумов на основе частиц латекса, покрытых белком А стафилококка, позволяет использовать для сенсибилизации латекса любые иммунные сыворотки без какой-либо их предварительной обработки.
Раствор белка А (1 мг/мл) готовят на дистиллированной воде с добавлением 0,05 % азида натрия. Перед применением его разводят в 200 раз 0,1 М глициновым буфером (pH 8,2), содержащим 1 % хлорида натрия. Стандартную коммерческую суспензию латекса разводят в 15 раз изотоническим раствором хлорида натрия, смешивают с равным объемом разведенного раствора белка А, инкубируют при постоянном перемешивании в течение 2…4 ч при 20 °С, а затем 16…18 ч при 4 °С. Частицы латекса, покрытые белком А, осаждают центрифугированием при частоте вращения 6000 мин -1 в течение 30 мин и дважды промывают половинным объемом глицинового буфера с добавлением 0,02 % поливинилпирролидона. Полученную суспензию после добавления 0,05 % азида натрия можно хранить при 4 °С в течение 4 мес.
Иммунную сыворотку разводят до титра глициновым буфером и смешивают с равным объемом суспензии латекса, покрытого белком А. Инкубацию и промывку сенсибилизированного антителами латекса проводят по методике, описанной выше.
Эту же методику можно использовать и для сенсибилизации латекса гамма-глобулиновыми фракциями, выделенными из иммунных сывороток посредством их насыщения сульфатом аммония. В этом случае продолжительность сенсибилизации антителами частиц латекса, покрытых белком А, можно сократить до 2 ч, исключив длительный 2-й этап, проводимый при 4 °С. Приготовленный таким образом диагностический препарат в 4…16 раз активнее обычного антигельного латексного диагностикума.
Практическое использование. К сожалению, в практических ветеринарных лабораториях РАЛ практически не используют, несмотря на то что она по чувствительности и специфичности превосходит многие классические серологические методы.
В настоящее время имеются сообщения об успешном применении РАЛ для диагностики туляремии, бруцеллеза, ряда вирусных инфекций. При использовании данных диагностикумов чувствительность РАЛ на стекле составляет 10 6 м. т./мл, а при постановке в полистироловых пластинках — 1,8 ∙ 10 4 м. т./мл (бруцеллез) и 1,25 ∙ 10 5 м. т./мл (туляремия). Кроме того, разработаны латексные диагностикумы для выявления возбудителей иерсиниоза, псевдотуберкулеза, листериоза, сальмонеллеза. Имеются также сведения об успешных испытаниях специально разработанного для ветеринарии латексного антигенного диагностикума для выявления антител к возбудителю туберкулеза.
Безусловные преимущества РАЛ: 1) простота постановки; 2) отсутствие какого-либо специального оборудования; 3) достаточно высокие чувствительность и специфичность.
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.
Возбудителем менингококковой инфекции является Neisseria meningitidis (менингококк). Менингококк колонизирует заднюю стенку носоглотки человека и в зависимости от вирулентности штамма и резистентности зараженного лица вызывает инфекционный процесс с широким спектром клинических проявлений: бессимптомное носительство, назофарингит и генерализованную форму – менингококцемию и/ или менингит. Менингококковая инфекция поражает лиц всех возрастов, но чаще (70%) болеют дети. Показатель летальности составляет в среднем 10%, что определяет высокую социальную значимость заболевания. Капсульные штаммы менингококка в зависимости от химического строения капсульного полисахарида делятся на ряд серологических групп: А, В, С, X, Y, Z, W-135, 29-E, H, I, K, L. Более чем 90% случаев генерализованных форм менингококковой инфекции обусловлены штаммами серогрупп А, В и С, значительно реже – штаммами серогрупп X, Y и W-135, остальные серогруппы не представляют эпидемиологического интереса. Определение серогруппы – важнейшая процедура для выбора адекватного вакцинного препарата. Все менингококки экспрессируют на своей поверхности один из аллельных вариантов белков наружной мембраны 2 или 3 класса (PorB). Большинство менингококков экспрессируют белки 1 класса (PorA). Антигенная структура белка PorB определяет серотип штамма, белка PorA – серосубтип. На основании химической структуры капсульного липополисахарида определяют иммунотип. Антигенная характеристика может включать и некоторые другие АГ: Ора и Орс (белки наружной мембраны 5 класса), пили, поверхностный белок FetA.
Показания к обследованию
- Диагностические исследования проводят в условиях стационара при подозрении на гнойный менингит и/или генерализованную форму менингококковой инфекции;
- исследования по эпидемическим показаниям проводят в очаге генерализованной формы менингококковой инфекции среди контактировавших с больным и имеющих клинические проявления назофарингита.
Материал для исследования
- Кровь – микроскопическое исследование, культуральное исследование;
- СМЖ – микроскопическое исследование, культуральное исследование, выявление ДНК, выявление АГ;
- мазки из ротоглотки и носа – культуральное исследование;
- сыворотка крови – выявление АГ, определение специфических АТ
- Возбудители гнойных менингитов другой этиологии: Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenza, Staphylococcus aureus и др.;
- при исследовании носоглотки – пигментирующие нейссерии Neisseria subflava, Neisseria flavescens, Neisseria mucosa, Neisseria sicca, Neisseria lactamica.
Лабораторная диагностика генерализованной формы менингококковой инфекции включает микроскопию биологического материала, посев биологического материала с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности; обнаружение специфических генетических фрагментов менингококка и его АГ, обнаружение специфических АТ.
Посев СМЖ и крови на питательные среды при дальнейшей инкубации в течение 24 ч при 37 оС в атмосфере с 5–10% СО2 и повышенной влажностью позволяет выявить характерные тинкториальные свойства патогена. Исследование рекомендуется проводить в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар) до начала интенсивной антибактериальной терапии.
При определении сахаролитической активности проводят учет результатов посева чистой культуры на плотные питательные среды с углеводами. Метод дает возможность дифференцировать различные виды нейссерий и некоторые другие виды микроорганизмов (таблица 16). Иногда наблюдается вариабельность сахаролитической активности у различных штаммов одного и того же вида.
Уточнение биохимических свойств менингококков проводят с использованием наборов реагентов для расширенного изучения ферментативной и метаболической их активности, что в течение 2-х часов позволяет определить видовую принадлежность возбудителя.
Определение серогруппы менингококков проводят в реакции агглютинации на стекле с набором агглютинирующих серогрупповых антисывороток (серогруппы А,В,С,X,Y,Z,W-135,29E). Реакцию проводят только с чистой культурой менингококков, прошедшей все этапы идентификации. Менингококки серогрупп А, В и С наиболее часто являются причиной возникновения генерализованных форм менингококковой инфекции, реакцию агглютинации проводят в первую очередь с антисыворотками к менингококкам этих серогрупп. Отсутствие реакции с одной из основных серогрупповых АТ, указывает на необходимость продолжения проведения аналогичных исследований с другими специфическими антисыворотками (X, Y, Z, W-135, 29E). Только в том случае, если подтвержденный всеми тестами штамм менингококка не показал положительного результата в реакции агглютинации с полным набором агглютинирующих антисывороток, его следует отнести к категории неаггютинирующегося штамма (НА).
Для обнаружения АГ в СМЖ и/или сыворотке крови используют реакцию латекс- агглютинации. Исследование нативного ликвора (экспресс-метод) проводится при наличии в нем признаков гнойного воспаления и/или при микроскопическом обнаружении возбудителей. Использование реакции позволяет в кратчайшие сроки (15–20 мин) выявить специфические АГ менингококков самых распространенных серогрупп (А, В, С, У, W-135). Рекомендуется проводить исследование в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар).
Для выявления ДНК патогена используется СМЖ и/или свежая чистая культура Neisseria meningitidis, выросших на чашки Петри. Обнаружение специфических генетических фрагментов микроорганизма выполняют с использованием ПЦР. Метод обладает высокой диагностической чувствительностью и специфичностью, позволяет выявлять в клиническом образце микроорганизмы, содержащиеся в единичных количествах или в нежизнеспособном состоянии, характеризуется высокой воспроизводимостью и сжатыми сроками выполнения исследования (в течение нескольких часов).
Показаниями к проведению исследований для выявления ДНК при диагностике бактериальных менингитов являются:
- отрицательные результаты диагностики иными методами, особенно в случае исследования образцов СМЖ после проведения массивной антибиотикотерапии или на поздних сроках болезни;
- необходимость получения срочного ответа об этиологии возбудителя;
- исследование образцов материала, доставленных в замороженном состоянии или фиксированных этанолом.
Детекция специфических АТ в сыворотке крови при диагностике менингококковой инфекции проводят с использованием РНГА. Рекомендуется проводить исследование дважды: в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар) и на 12–14 день заболевания. Диагноз считается подтвержденным при нарастании титров АТ в четыре и более раза в пределах указанного периода.
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.
Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 - 2020
! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.
Диагностический набор реагентов для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов Haemphilus influenza тип b,Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitides типа А, Neisseria meningitides типа В, Neisseria meningitides тип С и Neisseria meningitides тип W 135 в рекции латекс-агглютинации, жидкий
Описание
Латексная тест-система ГБМ Оболенск
Латексная тест-система ГБМ Оболенск предназначена для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов —Haemophilus influenzae тип b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis тип A, Neisseria meningitidis тип B, Neisseria meningitidis тип С и Neisseria meningitidis тип W 135 методом латекс-агглютинации при проведении клинических лабораторных исследований.
Латексная тест-система ГБМ обеспечивает типоспецифическое выявление и идентификацию микробных клеток ГБМ непосредственно в образцах спинномозговой жидкости или крови, полученных от больных людей с клиническими симптомами менингита, а также в суспензиях, полученных из колоний микроорганизмов, выращенных на плотных питательных средах.
Диагностическая чувствительность Латексной тест-системы ГБМ – не менее 80%, диагностическая специфичность – не менее 90%
Латексный тест H. influenzae b (фл. № 1) должен давать реакцию агглютинации латекса (РАЛ) с микробной взвесью H. influenzae тип b, штамм 411 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест H. influenzae b (фл. № 1) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: S. pneumoniae, штамм ATCC 49619; N. meningitidis тип A, штамм M4060;
Латексный тест S. pneumoniae (фл. № 2) должен давать РАЛ с микробной взвесью S. pneumoniae штамм ATCC 49619 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест S. pneumoniae (фл. № 2) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; N. meningitidis тип A, штамм M4060;
N. meningitidis тип B, штамм M5148; N. Meningitidis тип С, штамм M3045 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрациях 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis A (фл. № 3) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип A, штамм M4060 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis B (фл. № 4) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип B, штамм M5148 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis B (фл. № 4) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм M4060; N. meningitidis тип С, штамм M3045 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis С (фл. № 5) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип С, штамм M3045 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis С (фл. № 5) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм M4060; N. meningitidis тип B, штамм M5148 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis W 135 (фл. № 6) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 на 3(+)-4(+) в концентрации
10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis W 135 (фл. № 6) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм, M4060; N. meningitidis тип B, штамм M5148 и N. meningitidis тип С, штамм M3045 в концентрации 10 9 м.к./мл.
Микробные клетки возбудителей ГБМ, присутствующие в исследуемой пробе, взаимодействуют с латексными частицами, сенсибилизированными антителами против полисахаридных антигенов возбудителей ГБМ с последующим образованием видимых агглютинатов. Специфическими мишенями данного теста являются полисахаридные антигены капсул возбудителей гнойных бактериальных менингитов.
Латексная тест-система ГБМ Оболенск представляет собой набор, состоящий из 13 флаконов:
- флакон №1 (латексный тест H.influenzaeb), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену капсулы тип bHaemophilusinfluenzae тип b (HIb);
- флакон №2 (латексный тест S.pneumoniae), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Streptococcuspneumoniae;
- флакон №3 (латексный тест N.meningitidisA), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип A;
- флакон №4 (латексный тест N.meningitidisB), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип B;
(латексный тест N.meningitidisС), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип С;
Потенциальный риск применения Латексной тест-системы ГБМ класс 3 (Приказ МЗ РФ №4н от 06.06.2012г)
Утилизацию неиспользованных тест-систем с истекшим сроком годности проводят любым способом, предотвращающим повторное использование по назначению.
7.1.Образцы спинномозговой жидкости или крови, полученные от больных людей с подозрением на гнойный бактериальный менингит.
7.2.Колонии микроорганизмов, выделенных из клинического материала, выращенные на плотных питательных средах в микроаэрофильных условиях в течение 24-48 часов при температуре 37 °С.
Примечание – Анализируемые образцы не подвергать автоклавированию.
- Подготовка к выполнению анализа
Извлечь из холодильника Латексную тест-систему ГБМ и выдержать при комнатной температуре 20 минут.
Примечание – перед применением латексный тест тщательно суспендировать до гомогенного состояния.
Латексная тест-система ГБМ Оболенск
9.1. Анализируемый образец ( по п.7.1.) объемом по 0,02 мл, механическим дозатором 6 раз нанести на предметное стекло в виде капель, затем внести в каждую полученную каплю образца по 0,015 мл одного из специфических латексных тестов из флаконов №1-6 и оба компонента в каждой капле осторожно перемешать стеклянной палочкой (для каждой смеси отдельной палочкой) до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.
9.2. Идентификация микробных клеток ГМБ ( по п 7.2.): из колоний, выросших на плотной питательной среде — на предметное стекло нанести 20 мкл физиологического раствора, стеклянной палочкой снять часть колонии тестируемого штамма (исследуемый образец) и растереть в капле физиологического раствора до получения гомогенной суспензии. Далее проводить идентификацию по п.9.1.
9.3. Проверка качества контрольного латексного теста. К 0,02 мл анализируемого образца, нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл контрольного латексного теста (флакон №13) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.
9.4 Контроль специфичности латексного теста. К 0,02 мл позитивного контроля (флаконы №7-12), нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл специфического латексного теста (флаконы № 1-6) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.
Учет результатов по п. 9.1;.9.2;.9.3. провести через 2 минуты, руководствуясь таблицей и иллюстрацией.
Таблица 1 – Интерпретация результата (Пример идентификации Haemophilus influenzae тип b)
| Положительный результат | Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц после добавления к исследуемому образцу латексного теста H. influenzae b (флакон №1).
Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц после добавления к позитивному контролю H. influenzae b (флакон №7) латексного теста H. influenzae b (флакон №1). Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный после добавления к исследуемому образцу контрольного латексного теста (флакон №13). |
| Отрицательный результат | Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный после добавления к исследуемому образцу латексного теста H. influenzae b (флакон №1).
Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц после добавления к позитивному контролю H. influenzae b (флакон №7) латексного теста H. influenzae b (флакон №1). |
| Тест не работает | Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный после добавления к позитивному контролю H. influenzae b (флакон №7) латексного теста
H. influenzae b (флакон №1). |
Латексную тест-систему ГБМ транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения или при температуре от 2 до 25 ºС в срок не более 7суток.
Примечание – Не замораживать.
Срок годности – 1 год. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.
Читайте также:
- Роспотребнадзор сибирская язва 2016
- Комплексного плана мероприятий по предупреждению и ликвидации африканской чумы свиней в
- Сп 3 1 3542 18 профилактика менингококковой
- Причины смерти при скарлатине
- Кто из звезд есть на лепре