Латекс тест на пневмококки

Латексная агглютинация

Наборы для идентификации и дифференциации микроорганизмов из клинического материала или из чистой культуры методом латексной агглютинации.

Выпускаются в двух форматах:

1) Жидкие

Латексный реагент представлен в жидкой форме, хранение при + 2-8° С 1 год

Латексный реагент нанесен на реакционную карточку и лиофилизирован, хранение при + 2-25° С до 2 лет

Артикул

Название (русское/английское)

Фасовка

Описание

Бактериальный менингит

Набор Wellcogen на менингококковые инфекции/Wellcogen Bacterial Antigen Kit

Быстрый тест для прямого определения антигенов в жидкостях тела методом латексной агглютинации (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды):

- Streptococcus гр. B

- H. influenzae тип b

- N. meningitidis групп A, C, Y, W135

- N. meningitides гр. B/E.coli K1.

• Время реакции – 3 минуты
• Чувствительность – 97% *
• Специфичность – более 98%
• В состав набора входят все необходимые компоненты

*для Н. influenzae тип b

Набор Wellcogen для определения H. influenzae b/Wellcogen Haemophilus influenzae b Test Kit

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения N. meningitidis A, C, Y, W 135/Wellcogen Neisseria meningitidis A, C, Y, W135 Test Kit

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения N. meningitidis B/E. coli K1/Wellcogen Neisseria meningitidis B/E. coli K1

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения стрептококков группы B/Wellcogen Strep B Rapid Latex Agglutination Test

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения Streptococcus pneumoniaе/Wellcogen Streptococcus pneumoniae Test Kit

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Streptococcus

Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, D, F и G /PathoDxtra Strep Grouping Kit

Быстрый тест для дифференциации групп стрептококков A, B, C, D, F и G по Лансфильду с первичных чашек с культурой.

• Мгновенная экстракция без инкубации для восстановления
• Работа напрямую с колониями, без разведения в пробирках
• Сокращение времени проявления результатов
• Не требует дополнительных реагентов
• Идентификация всех клинически значимых стрептококков, включая группу D
• Возможность дополнить набор наиболее расходуемыми реагентами

Набор для диагностики стрептококков групп A/PathoDxtra Strep Group A Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп B/PathoDxtra Strep Group B Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп C/PathoDxtra Strep Group C Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп D/PathoDxtra Strep Group D Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп F/PathoDxtra Strep Group F Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп G/PathoDxtra Strep Group G Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор Streptex для диагностики групп стрептококков A, B, C, D, F и G (ферментная экстракция)/Streptex

Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, D, F, G по Лансфильду с использованием ферментной экстракции

Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Rapid

Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду с использованием кислотной экстракции

Набор для быстрой диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Acid Extraction Kit

Набор для быстрой кислотной экстракции для использования с Streptex Rapid Latex Agglutination Test для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду

Набор DrySpot для диагностики Streptococcus pneumonia/Pneumo

Сухой латексный тест для подтверждения Streptococcus pneumoniae в культурах на чашках или положительных культурах крови.

Staphylococcus и MRSA (метициллин-резистентный стафилококк)

Набор DrySpot для идентификации Staphylococcus aureus (MRSA)/Dryspot Staphytect Plus

Сухой латексный тест для идентификации S. aureus после первичного посева

Плазма кроличья для выявления коагулазы (лиофилизированная)/Coagulase Plasma (lyphohilized)

Реагент для выявления фермента коагулазы у стафилококков

Диагностический набор реагентов для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов Haemphilus influenza тип b,Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitides типа А, Neisseria meningitides типа В, Neisseria meningitides тип С и Neisseria meningitides тип W 135 в рекции латекс-агглютинации, жидкий

Описание

Латексная тест-система ГБМ Оболенск

Латексная тест-система ГБМ Оболенск предназначена для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов —Haemophilus influenzae тип b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis тип A, Neisseria meningitidis тип B, Neisseria meningitidis тип С и Neisseria meningitidis тип W 135 методом латекс-агглютинации при проведении клинических лабораторных исследований.

Латексная тест-система ГБМ обеспечивает типоспецифическое выявление и идентификацию микробных клеток ГБМ непосредственно в образцах спинномозговой жидкости или крови, полученных от больных людей с клиническими симптомами менингита, а также в суспензиях, полученных из колоний микроорганизмов, выращенных на плотных питательных средах.

Диагностическая чувствительность Латексной тест-системы ГБМ – не менее 80%, диагностическая специфичность – не менее 90%

Латексный тест H. influenzae b (фл. № 1) должен давать реакцию агглютинации латекса (РАЛ) с микробной взвесью H. influenzae тип b, штамм 411 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест H. influenzae b (фл. № 1) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: S. pneumoniae, штамм ATCC 49619; N. meningitidis тип A, штамм M4060;

Латексный тест S. pneumoniae (фл. № 2) должен давать РАЛ с микробной взвесью S. pneumoniae штамм ATCC 49619 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест S. pneumoniae (фл. № 2) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; N. meningitidis тип A, штамм M4060;
N. meningitidis тип B, штамм M5148; N. Meningitidis тип С, штамм M3045 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрациях 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis A (фл. № 3) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип A, штамм M4060 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis B (фл. № 4) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип B, штамм M5148 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis B (фл. № 4) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм M4060; N. meningitidis тип С, штамм M3045 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis С (фл. № 5) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип С, штамм M3045 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis С (фл. № 5) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм M4060; N. meningitidis тип B, штамм M5148 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis W 135 (фл. № 6) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 на 3(+)-4(+) в концентрации
10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis W 135 (фл. № 6) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм, M4060; N. meningitidis тип B, штамм M5148 и N. meningitidis тип С, штамм M3045 в концентрации 10 9 м.к./мл.

Микробные клетки возбудителей ГБМ, присутствующие в исследуемой пробе, взаимодействуют с латексными частицами, сенсибилизированными антителами против полисахаридных антигенов возбудителей ГБМ с последующим образованием видимых агглютинатов. Специфическими мишенями данного теста являются полисахаридные антигены капсул возбудителей гнойных бактериальных менингитов.

Латексная тест-система ГБМ Оболенск представляет собой набор, состоящий из 13 флаконов:

• флакон №1 (латексный тест H.influenzaeb), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену капсулы тип bHaemophilusinfluenzae тип b (HIb);
• флакон №2 (латексный тест S.pneumoniae), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Streptococcuspneumoniae;
• флакон №3 (латексный тест N.meningitidisA), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип A;
• флакон №4 (латексный тест N.meningitidisB), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип B;

(латексный тест N.meningitidisС), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип С;

флакон №6 (латексный тест N.meningitidisW135), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену N.meningitidis тип W135;

флакон №7 (позитивный контроль H.influenzaeb), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Haemophilusinfluenzae тип b,штамм 411(Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.

флакон №8 (позитивный контроль S.pneumoniae), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Streptococcuspneumoniae, штамм 19F, ATCC 49619, концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.

флакон №9 (позитивный контроль N.meningitidisA), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Neisseriameningitidis тип A, штамм M4060 (Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.

флакон №10 (позитивный контроль N.meningitidisB), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Neisseriameningitidis тип B, штамм M5148 Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.

флакон №11 (позитивный контроль N.meningitidisС), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Neisseriameningitidis тип С, штамм M3045 (Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.

флакон №12 (позитивный контроль N.meningitidisW135), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Neisseriameningitidis тип W 135, штамм M7037 (Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.

флакон №13 (контрольный латексный тест), содержит 0,5 % взвесь частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса, сенсибилизированного иммуноглобулинами из сывороток крови не иммунизированных кроликов;

Потенциальный риск применения Латексной тест-системы ГБМ класс 3 (Приказ МЗ РФ №4н от 06.06.2012г)

Утилизацию неиспользованных тест-систем с истекшим сроком годности проводят любым способом, предотвращающим повторное использование по назначению.

7.1.Образцы спинномозговой жидкости или крови, полученные от больных людей с подозрением на гнойный бактериальный менингит.

7.2.Колонии микроорганизмов, выделенных из клинического материала, выращенные на плотных питательных средах в микроаэрофильных условиях в течение 24-48 часов при температуре 37 °С.

Примечание – Анализируемые образцы не подвергать автоклавированию.

1. Подготовка к выполнению анализа

Извлечь из холодильника Латексную тест-систему ГБМ и выдержать при комнатной температуре 20 минут.

Примечание – перед применением латексный тест тщательно суспендировать до гомогенного состояния.

Латексная тест-система ГБМ Оболенск

9.1. Анализируемый образец ( по п.7.1.) объемом по 0,02 мл, механическим дозатором 6 раз нанести на предметное стекло в виде капель, затем внести в каждую полученную каплю образца по 0,015 мл одного из специфических латексных тестов из флаконов №1-6 и оба компонента в каждой капле осторожно перемешать стеклянной палочкой (для каждой смеси отдельной палочкой) до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.

9.2. Идентификация микробных клеток ГМБ ( по п 7.2.): из колоний, выросших на плотной питательной среде — на предметное стекло нанести 20 мкл физиологического раствора, стеклянной палочкой снять часть колонии тестируемого штамма (исследуемый образец) и растереть в капле физиологического раствора до получения гомогенной суспензии. Далее проводить идентификацию по п.9.1.

9.3. Проверка качества контрольного латексного теста. К 0,02 мл анализируемого образца, нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл контрольного латексного теста (флакон №13) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.

9.4 Контроль специфичности латексного теста. К 0,02 мл позитивного контроля (флаконы №7-12), нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл специфического латексного теста (флаконы № 1-6) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.

Учет результатов по п. 9.1;.9.2;.9.3. провести через 2 минуты, руководствуясь таблицей и иллюстрацией.

Таблица 1 – Интерпретация результата (Пример идентификации Haemophilus influenzae тип b)

Положительный результат	Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц после добавления к исследуемому образцу латексного теста H. influenzae b (флакон №1). Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц после добавления к позитивному контролю H. influenzae b (флакон №7) латексного теста H. influenzae b (флакон №1). Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный после добавления к исследуемому образцу контрольного латексного теста (флакон №13).
Отрицательный результат	Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный после добавления к исследуемому образцу латексного теста H. influenzae b (флакон №1). Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц после добавления к позитивному контролю H. influenzae b (флакон №7) латексного теста H. influenzae b (флакон №1).
Тест не работает	Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный после добавления к позитивному контролю H. influenzae b (флакон №7) латексного теста H. influenzae b (флакон №1).

Латексную тест-систему ГБМ транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения или при температуре от 2 до 25 ºС в срок не более 7суток.

Примечание – Не замораживать.

Срок годности – 1 год. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

Related JoVE Videos

The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.

If that doesn't help, please let us know.

Латекс тестирование агглютинации является простым, быстрым и недорогим методом для серотипирование Пневмококк, и также широко применяется в диагностической микробиологии. Эта рукопись описывает в собственное производство латексной агглютинации реагентов, процедур контроля качества и применение этого метода к пневмококковой серотипирования.

Porter, B. D., Ortika, B. D., Satzke, C. Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination. J. Vis. Exp. (91), e51747, doi:10.3791/51747 (2014).

Translate text to:

Please note that all translations are automatically generated.

Пневмококк (пневмококк) является одной из основных причин заболеваемости и смертности среди детей в возрасте до пяти лет во всем мире, особенно в условиях ограниченных ресурсов 1,2. Пневмококковые диапазоны болезни от локализованных инфекций, угрожающих жизни заболеваний, таких как пневмония, сепсис и менингит 1,2.

Эта рукопись излагаются основные этапы производства латексных реагентов с использованием пассивного вложения имеющихся в продаже антисыворотки латексных частиц. Контроль качества (QC) аспекты этого метода описаны, и протокол для использования латексных реагентов для пневмококковой серотипирования включен.

1 Подготовка внутренних латексных реагентов

1. Приготовление солевого буферного раствора глицина (GBS)
   1. Добавить 1,5 г глицина, 11,7 г хлористого натрия и 100 мл дистиллированной воды в стеклянном стакане 200 мл.
   2. Смешать, чтобы растворить с помощью магнитной мешалки.
   3. Передача смеси до 500 мл мерный цилиндр и добавить дистиллированную воду, чтобы сделать в общей сложности 200 мл.
   4. Перенесите раствор обратно в 200 мл стакан, проверить рН и приспособиться к 8,2 гидроксидом 5 М натрий. ПРИМЕЧАНИЕ: гидроксид натрия вызывает коррозию, средства индивидуальной защиты.
   5. Фильтр стерилизовать решение с использованием 0,22 мкм фильтры и несколько 60 мл шприцев в мл preautoclaved винт ограничен стеклянной бутылке 250.
   6. Храните при комнатной температуре.
2. Подготовка GBS с 0,2% бычьего сывороточного альбумина
   1. Добавить 0,2 г бычьего сывороточного альбумина (BSA) порошка и 100 мл GBS в стеклянном стакане 200 мл и перемешивают до растворения с использованием магнитной мешалки.
   2. Фильтрстерилизовать раствор через 0,22 мкм фильтры, используя несколько 60 мл шприцев в мл preautoclaved винтовой крышкой стеклянной бутылке 250.
   3. Хранить при 4 ° С.
3. Подготовка Латекс реагент
   1. Этикетка 2 мл с круглым дном пробирке.
      ПРИМЕЧАНИЕ: круглым дном трубы используются для минимизации оседание частиц, которые могут повлиять на антитела привязанность.
   2. Использование P1000 пипетки с стерильные наконечники добавить 975 мкл GBS в пробирке, затем добавить 25 мкл соответствующей пневмококковой антисыворотки для латекс реагент готовится (т.е., бассейн, группа, тип или фактор). Обратить пять раз перемешать.
   3. Развести полистирольных латексных частиц 1:10 добавлением 120 мкл латексных частиц в 1080 мкл стерильного физиологического солевого раствора.
      Примечание: Это может быть сделано в больших объемах, но должны быть свежим каждый раз, когда латекс реагенты производятся.
   4. Добавить 1000 мкл 1:10 латексной суспензии (полученного на стадии 1.3.3) к 1,000 мкл антисыворотки 1:40 подвеска (полученного на стадии 1.3.2). Обратить пять раз перемешать.
   5. Инкубируют при 37 ° С на медленно вращающемся колесе (например, 4 оборота в минуту в течение колесо диаметром 38,5 см) в течение 2 часов.
   6. Центрифуга течение 15 мин при 1100 х г. Жидкость над осадком сливают и осторожно ресуспендируют осадок в 2 мл стерильного физиологического раствора.
   7. Центрифуга течение 15 мин при 1100 х г. Удалите супернатант и добавить 1 мл GBS и осторожно ресуспендируют осадок.
   8. Внесите латекса суспензии в меченым 5 мл винт закрытой пробирке. Добавить еще 1 мл GBS.
   9. Добавить 2 мл GBS содержащем 0,2% БСА (вес / объем) (рН 8,2) (полученного на стадии 1.2). Добавить 40 мкл 10% (масса / объем) раствора азида натрия в качестве консерванта.
      ПРИМЕЧАНИЕ: натрия азид опасен при вдыхании, и кожа, и раздражение глаз. Желательно приобрести готовую 10% раствор, а не порошкообразной форме, так как это сводит к минимуму риск вдыхания. Средства индивидуальной защиты (в том числе перчаткид Очкидлязащитыотбрызг) следует носить при работе с этим реагентом. Обратитесь к Паспорт безопасности для подробной информации.
   10. Магазин латексные реагенты при температуре 4 ° С.
4. Подготовка отрицательного контроля латекса реагента
   1. Этикетка 2 мл с круглым дном пробирке.
      ПРИМЕЧАНИЕ: круглым дном трубы используются для минимизации оседание частиц, которые могут повлиять на антитела привязанность.
   2. Использование P1000 пипетки с стерильные наконечники добавить 975 мкл GBS в пробирке, затем добавить 25 мкл нормальной кроличьей антисыворотки. Обратить пять раз перемешать.
   3. Действуйте с шагом 1.3.3 для 1.3.10 выше

2 Контроль качества (QC) из латексных реагентов

1. Доведите латекс реагент до комнатной температуры. Непосредственно перед использованием, осторожно перемешать латексный реагент путем обращения трубки несколько раз.
2. Проверьте реагент для autoagglutination с помощью пипетки 15 мкл на предметное стекло микроскопа и действуйте с шагом 4,7 и 4,8 ниже. Там не должно бытьgglutination из латексных частиц. Реагент должен появиться белая и гладкая.
3. Проверьте реагент против панели низкого прохода пневмококковых изолятов. Используйте недавно выращенные культуры, полученные, как в шаге 3 Панель изолятов должна включать изолятов в "целевой" серотипа (удельная серотип для реагента проходит испытания) и "нецелевые" серотипов (изоляты других серотипов, которые не должны обычно пересекают вступать в реакцию с реагентом). Включите по крайней мере один изолят каждой целевой и нецелевой серотипа для каждого латекса реагента, подвергающегося QC. Если есть только один целевые или нецелевые серотипа, тест две разные изоляты конкретного серотипа.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Тестирование панель должна включать в себя несколько изолятов каждого серотипа, некоторые из которых являются редкостью в инвазивных заболеваний и / или коллекций культур типа. Желательно, чтобы включать в себя некоторые каретки изолирует, так как они часто более требовательный к серотипа (данные не показаны), тем самым дополнительно проверки Выхе реагентов и обеспечение того, чтобы реагенты, скорее всего, способны серотипирование как инвазивные и перевозку изолирует.
4. Продолжайте тестирования латексных реагентов с являющихся и не являющихся целевой пневмококковой изолирует согласно методу, описанному в пунктах 3 и 4 ниже.
5. Контроль качества реагентов в момент производства, а затем, по меньшей мере ежегодно.
   Примечание: Если реагент не пройти контроль качества, партия должна быть отброшена и новый препарат производства. В случае отказа повторите QC мы рекомендуем реагенты быть представлено с использованием альтернативных методов, описанных в Ortika и др., 2013 8 и в обсуждении ниже.

3 Получение пневмококковой культур для серотипирования

1. Использование стерильной петли выбрать один колонию пневмококковой изолировать и серия на это на твердую неселективном кровяной агар так, что основная посевной охватывает примерно треть поверхности пластины. Подряд для отдельных колоний.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Плиты, изготовленные из дефибринированной лошади или овечьей крови подходят; но пластины крови, полученные с человеческой крови или цитратной крови животных нет.
2. Планшеты инкубируют O / N при 37 ° С в атмосфере 5% CO _2.
3. Соблюдайте рост на тарелке для чистоты и оценить, что есть достаточный рост для серотипирования.
   ПРИМЕЧАНИЕ: чистая культура пневмококковой изолята требуется для серотипирования. В нашем опыт, сливающиеся, или вблизи сплошной рост, охватывающий примерно одну треть поверхности пластины, как правило, достаточно для завершения серотипирование. Как пневмококковых культуры могут быть склонны к автолиза, культуры, подготовленные для серотипирования должны быть проверены в течение 24 часов субкультуры. Не берите культуры пластину из инкубатора более 15 до 20 мин, после чего серотипирование начинается.

4.Проведение Латекс Агглютинация Серотипирование

Положительная реакция латекс имеет место, когда тип-специфическое антитело прикрепляется к латексной частицы связывается с капсулой пневмококка и агглютинации частиц в антитело, меченное наступает 15. 1А показывает положительную реакцию, которая характеризуется видимой агглютинации и очистки фоне подвеска. Отрицательная реакция характеризуется латекс агглютинации реагента оставшейся гладкой и белой (фиг.1В) суспензии. Реагенты оптимизированы таким образом, что положительная реакция следует соблюдать до конца временного интервала одним мин (обычно обнаруживаемого в приблизительно 20 сек). Мы не рекомендуем читать реакции после временного интервала 1 мин. Очень редко, реакции отображения слабую агглютинацию вокруг края капли, которая не сопровождается, очистив фонового приостановления или появляются "тягучий" без фоновой очистки (данные не представлены). Это самые как LY негативные реакции. В таких случаях мы рекомендуем повторное тестирование и / или дальнейшего расследования, используя другой метод серотипирования (например реакции Quellung 17).

Рисунок 1. Положительные и отрицательные реакции латекс агглютинации. Препараты пневмококковой изолировать смешивают с латексом агглютинации реагента, показывая положительную реакцию (А) или отрицательную реакцию (B). Агглютинация сопровождается очистки фоне видится в позитивной реакции (А) .There не видно агглютинации с отрицательным контроль латексной реагента или в негативной реакции теста (B). Фотографии 8 используется с ее разрешения."Целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Латекс агглютинации является простой, быстрый и недорогой метод для пневмококковой серотипирования. Коммерческие пневмококковых латекс агглютинации реагенты доступны, но они в настоящее время не проводится различия все известные пневмококковой серотипы 10,12. Однако, латекс агглютинации реагенты могут быть легко получены в доме с помощью приобрели антитела на конкретных пневмококковых капсульных антигенов. В способе, описанном здесь, антитела пассивно прикреплен к латексных частиц, чтобы сделать набор реагентов латексной агглютинации.

Положительная реакция латекс происходит, когда специфические антитела, связанные с частицами латекса придают антигенов на полисахарид капсулы из пневмококковых изолировать 18,19. Частицы латекса, прикрепленные к антителам позволяют специфическая реакция антиген-антитело, чтобы быть визуализированы без увеличения.

Латекс агглютинации является подходящим методом для высокой пропускной лабораторий апD также для ограниченными ресурсами. Основные преимущества метода латекс агглютинации в том, что никакое специализированное оборудование не требуется для выполнения теста, реагенты имеют срок годности не менее 2 лет при хранении при 4 ° С 8, и что это недорого, просто и быстро выполнить. Серологическое типирование пневмококковой изолят на латексной агглютинации занимает около 10 мин, и до четырех латексные реагенты могут быть проверены параллельно на одном слайде. Кроме того, если распространенность серотипов известен соответствующий эпидемиологического, тестирование может быть выполнено в раундах, начиная с бассейнов, содержащих наиболее распространенных серотипов аналогично испытанию Quellung 17. Такой подход снижает количество тестов, необходимых для определения серотипа. Способ также высокой воспроизводимостью между различными операторами (данные не показаны). Недостатком латекс агглютинации серотипирования в том, что производство реагентов требует больших затрат времени, с приблизительно 4 ч; хотя многократного reageНТС могут быть легко получены параллельно. Кроме того, некоторые антигены, являются общими для различных серотипов пневмококков, в результате чего перекрестных реакций с некоторой антисыворотки (например, серотипа 29, 42 и группа 35). Тем не менее, эти перекрестные реакции хорошо охарактеризованы при использовании коммерческого антисыворотки (который, как правило, предварительно адсорбированный для удаления более проблематичным перекрестно реагирующих антител) и дополнительные таблицы реакции, при условии, производителем для того, чтобы различать, который присутствует серотипа. Латекс реагенты могут также пересекать реагировать, если антитела не выровнены латексных частиц; они определяются как КК неудач. По нашему опыту, строгий контроль качества является залогом успеха этого метода, даже если имеющиеся в продаже антисыворотки используются для производства. КК занимает примерно 15 мин для каждого реагента и зависит от набора соответствующего QC изолятов, как описано выше.

Метод, описанный здесь приводит реагентов, которые дают положительную реакцию также Wiтонкий тестовый период. По нашему опыту, ложных срабатываний редки в практике (данные не представлены). Наблюдаются Иногда ложные негативные реакции; обычно они касаются известных проблем с конкретной антисыворотки (например, серогруппы 6 изоляты не может реагировать с бассейном B антисыворотки), или вниз регуляции экспрессии капсулы по изолята. Использование серотипирования algrorithm, предоставляемая производителем Также важно, как и в большинстве случаев ложный положительный или отрицательный реакция приведет к "слепой конец 'результате. В этих случаях, и когда реакции трудно интерпретировать, мы рекомендуем повторить тестирование и / или тестирование с помощью альтернативного способа, таких как реакции Quellung.

Некоторые устранение неисправностей иногда требуется сделать удовлетворительные латексные реагенты. В способе, описанном здесь, антитело прикрепляется к латексных частиц с помощью пассивной адсорбции 15,19, таким образом, является критической переменной концентрации антител использовали, который определяет, насколько хорошоповерхность латексных частиц покрыта и последующее выравнивание антител активных участков 15,20. Следовательно, если слишком мало или слишком антитело присоединены к латексных частиц, что реакции антиген-антитело не будет оптимальным, и неудовлетворительные реагенты могут быть получены 15,20,21. Как титры антител варьироваться между различными партиями антисыворотки, стандартный набор разведения не могут производить реагенты, которые хорошо 8. В качестве отправной точки использовать разбавление антисыворотки 1:40, и если это не удается, разбавить антисыворотки дальше. По нашему опыту это обычно решает проблему 8. В небольшом количестве случаев реагенты могут показать слабую агглютинацию, что не сопровождается очистки суспензии, при проверке с целевой изолирует. В этих случаях разбавление антисыворотки не улучшает качество реагента, но, как правило, удовлетворительные реагенты могут быть получены путем исключения центрифугирования и промывки шаги 8,22 .

, Покрытых антителом, частицы латекса обычно используются в диагностической микробиологии для обнаружения, идентификации или серотипирования различных микробов 15,20. Таким образом, способ, описанный здесь, может быть пригоден для получения латекса реагенты для других целей, при условии, пригодны антисыворотки доступен, и соответствующие процедуры КК принимаются.