Лептоспироз у человека микробиология

Лептоспироз – острое природно-очаговое инфекционное заболевание, характеризующееся интоксикацией, волнообразной лихорадкой, поражением кровеносных капилляров, почек, печени, ЦНС, сопровождающееся иногда желтухой, чаще – гемморагическим синдромом.

История открытия: возбудитель описан и изучен в 1915 году. Р. Инадой и У. Идо, Г. Хюбнером, П. Улонгутом и др.

Виды: L.interrogans (патогенные для человека и животных)

Тонкие извитые нити (leptos – тонкий, нежный, spira – спираль), размеры 7-15х0,07-0,014 мкм, с 12-18 мелкими первичными завитками, имеет вторичные завитки на концах, придающие им S- или С – образную форму. Встречаются и бескрючковые лептоспиры, обладающие пониженной вирулентностью. Первичные завитки тесно сжаты, при обычном увеличении не различимы (видны в электронном микроскопе). Спор, капсул не имеют. Очень подвижны (поступательные, сгибательные, вращательные, ротационные, змеевидные, волнообразные движения). Могут быть неподвижны в виде веревки.

Плохо окрашиваются анилиновыми красителями. Грамотрицательные. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет, при импрегнации серебром по Морозову - коричневые или черные.

Для культивирования используют жидкие среды с добавлением кроличьей сыворотки (водно-сывороточная сред Уленгута, фосфатно-сывороточная среда) или полужидкие среды с гемолизированной кроличьей кровью, оптим. рН 7,2-7,4. Отметить, что очень чувствительны к изменению рН, требуют повышенной влажности сред (гидрофилы).

Микроаэрофилы или строгие анаэробы.

Оптимальная температура 28-30°C.

Время – 3-7 дней (генерационное время в средах – 7-16 ч.)

На плотных и полужидких питательных средах растут в нескольких мм от поверхности в виде плоских дисков. При росте в жидких питательных средах визуального изменения не вызывает. О результатах роста судят по данным микроскопии в темном поле – их подвижности.

Биохимические свойства: малоактивны, у патогенных штаммов имеются цитохромные энзимы, каталаза, пероксидаза, липаза.

Антигенная структура: сложная, по химическому составу выделяют полисахаридные, липидные, полипептидные антигены. Различают родовые. видовые и вариантноспецифические антигены. Вариантноспецифические – поверхностные, ЛПС. Известны более 200 сероваров, объединенных в 38 серогруппы (более 100 сероваров патогенны для человека.

Факторы патогенности. Изучены недостаточно. Отметить, что обнаружены эндотоксино- и экзотоксиноподобные вещества:

Эндотоксин – вызывает общую интоксикацию, кровоизлияние за счет повышения проницаемости сосудов.

Токсическое вещество белковой природы. Обладает цитопатогенным действием. Инактивируется при 56°C через 20 мин.

Гемолизин обусловливает гемоноглобинурию, желтуху, анемию.

Ферменты агрессии: фибринолизин, плазмокоагулаза, липаза, каталаза, пероксидаза.

Подвижность за счет жгутиков.

Резистентность: относительно устойчивые. В воде открытых водоемов сохраняются долго (от 5-10 дней до 1 мнс.), в сырой почве 270 дней, в замороженном состоянии переживают месяцы, а при быстром замораживании (-70°C) – годы. Отметить, что на длительность сохранения в воде решающее значение оказывают рН среды. Со снижением рН длительность выживания уменьшается. Чувствительны: к нагреванию (погибают через 30 мин. при 56-60°C, 10 с – 70 °C); к высушиванию (в высушенной почве через 30 мин. теряют подвижность, через 3 часа – способность к размножению, в заболоченной почве – 200 час.); к дез. растворам (быстро погибают под воздействием хлорсодержащих растворов); к УФО; к антибиотикам: пенициллину, тетрациклину, левомицетину. Выживаемость в пищевых продуктах различна: моментально гибнут на поверхности сахара; на масле выживают 20 часов, на хлебе, печенье – 1 час; на поверхности сырых продуктов – от 30 мин. до 13 суток; 2-х часовая варка мяса или посол надежно освобождают его от лептоспир.

Широко распространены в природе, основным резервуаром лептоспир в природе являются различные виды мелких млекопитающих: особенно грызунов. Существуют территориальные очаги лептоспирозов: природные (в лесной зоне по долинам рек, в заболоченных местах); хозяйственные или антропургические (в городе и в селе, обусловлены заражением домашних животных от диких); сезонный (июль-август); смешанные.

Источник инфекции – грызуны (хронические носители лептоспир, выделяющихся с мочой), дикие и домашние животные. Причем больной человек не заразен. Механизм: урино-оральный.

а) основной – через воду (употребление для питья, купания), 75-98 % случаев.

б) алиментарный (чаще мясо и молоко).

в) контактный (при уходе за больными животными, забое, разделке туш). Отметить, что в постановке диагноза играет роль выяснение профессии пациента: заболевают чаще лица, работающие в животноводстве, мясокомбинатах, пастухи, ветеринары. В последнее время повысилась заболеваемость и носительство у собак. Характерна весенне-летняя сезонность (покосные вспышки).

Входные ворота: поврежденная кожа (достаточно экскориации), неповрежденные слизистые (ЖКТ, хотя кислая среда желудка губительна для лептоспир, глаз, мочеполовых органов).

I фаза: (7-20 дней) – инкубационная, внедрение возбудителя в организм, благодаря активному движению быстро проникают в лимфоузлы, кровь –первичная бессимптомная бактериемия и первичная диссеминация возбудителя.

II фаза: (1 неделя болезни), бактериемия (вторичная), проникновение в органы и ткани (в основном паренхиматозные – печень, почки, легкие, оболочки мозга и т.д.), где возникают воспалительные и дегенеративные изменения. Клинически проявляется в резком повышении температуры (38-40°C), лихорадкой, сильной головной болью, мышечной болью (особенно в икроножных мышцах).

III фаза: (2 недели заболевания) – максимальное развитие токсемии. Поражение продуктами метаболизма лептоспир капилляров – капилляротоксиков.

Развитие геморрагического синдрома (гемморагии на коже, слизистых, внутренних органах);

Желтуха (обусловлена гемолизом и некротическими изменениями почечной паренхимы).

Нарушение мочеобразования и мочевыделения (повреждается эпителий почечных канальцев, коркового и подкоркового вещества органа).

Менингит (накопление лептоспир в СМ).

IY фаза - (3-4 неделя) – формирование нестерильного иммунитета, нарастание антител в крови, возбудитель может длительно сохраняться в почках.

Y фаза (4-5 неделя) – освобождение организма от возбудителя.

Иммунитет: постинфекционный, стойкий, длительный, серовароспецифический. Ведущая роль – гуморальным факторам: агглютининам, преципитинам, лизинам, комплементсвязывающим антителам.

Микробиологическая диагностика (см. схему).

Отметить, что для идентификации патогенных сапрофитных лептоспир используется бикарбонатный тест – отсутствие роста патогенных при 1 % растворе бикарбоната натрия. Микроскопия эффективна после предварительного центрифугирования материала. Биологический тест – заражают хомяков и кроликов, через 48-72 ч. проводят микроскопию внутрибрюшного экссудата и крови, через 10-14 дней животные погибают, осуществляют посевы внутренних органов.

строгий санитарно-бактериологический контроль водоемов;

борьба с грызунами;

ветеринарно-санитарный надзор за животными;

запрещение купания, использование воды для питья из подозрительных водоемов;

поливалентная убитая феноловая вакцина с антигенами серогруппы icterohaemorragiae, arippotyphosae, pomonae, полученная А.А.Варфоломеевой и Г.Н.Ковальским, лептоспирозная вакцина (вакцинируют группы риска); по эпид. показаниям.

а) неспецифическое: антибиотики: пенициллин, тетрациклин.

б) специфическое: противолептоспирозный иммуноглобулин (гетерогенный из гипериммунной сыворотки волов).

Лептоспиры вызывают лептоспироз — инфекционную природно-очаговую болезнь животных и человека, характеризующуюся кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Болезнь может протекать бессимптомно. Возбудителя открыли Инад и Идо в 1914—1915 гг.

Лептоспиры относятся к семейству Leptospiraceae (leptos — тонкий, speira — виток, спираль) и роду Leptospira, который включает два вида: патогенный — L. interrogans — и сапрофитический — L. biflexa. Патогенный вид представлен 183 сероварами, которые по составу антигенов объединены в 25 серологических групп.

В инфекционной патологии животных наибольшее значение имеют серогруппы: Pomona, Tarassovi, Hebdomadis, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola.

Морфология. Лептоспиры — спиралевидные бактерии диаметром

0,1—0,25 и длиной 6—15— 30 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и 1—2 вторичных, придающих клетке форму букв Г, S, С. Осевая нить состоит из двух фибрилл. В темном поле они имеют вид тонких, серебристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами (рис. 21). У клеток некоторых штаммов концы прямые (бескрючковые лептоспиры).

Для лептоспир характерна активная подвижность. Главный тип движения — вращательнопоступательный. Спор не образуют. Грамотрицательны, плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому — Гимзе — в красный цвет, но фиксация резко изменяет их морфологию; используют также метод импрегнации серебром по Левадити.

Культивирование. Лептоспиры — хемоорганотрофные факультативноанаэробные бактерии. Культивируют их в аэробных условиях при температуре 28—30 °С на специальных средах, содержащих 5—10 % сыворотки кролика или овцы, дистиллированную, водопроводную, колодезную воду или фосфатный буфер (рН 7,2— 7,6). К ним относятся среды: Уленгута, Терских, Ферворта — Вольфа, Любашенко и др. Размножение лептоспир обычно начинается через 7—20 дней, иногда 1—2 мес. Среда при этом не изменяется и наличие роста определяют микроскопией в темном поле. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) образуют колонии S, О и R-форм. S-Форма — типичная вирулентная, ее колонии прозрачные, в виде диска с ровным краем.

Биохимические свойства. Изучены недостаточно. Ферментация углеводов не доказана; обнаружены каталаза, оксидаза, липаза и др.

Токсинообразование. Истинный экзотоксин лептоспиры не синтезируют. Они обладают эндотоксином и ферментами патогенности: гемолизинами, фибринолизином, плазмокоагулазой, гиалуронидазой, липазой, лецитиназой, которые выделяются в результате лизиса лептоспир. Вирулентными являются свежевыделенные штаммы лептоспир, при культивировании же на питательных средах это свойство относительно быстро теряется.

Антигенная структура. Лептоспиры обладают общим белковым соматическим антигеном, определяющим их видовую специфичность. Поверхностные полиса харидные антигены служат критериями групповой и серовариантной дифференциации. Антигенные свойства лептоспир изучают в реакции микроагглютинации и методом иммуноадсорбционного анализа.

Устойчивость. В воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются от 7 до 30 дней и более; будучи типичными гидрофилами, в почве, перенасыщенной водой, выживают до 280 дней; в свежем молоке — 8—24 ч; в почках убойных животных при температуре 0—4 °С — до 28 дней; в замороженном мясе погибают через 10 дней. Чувствительны к действию поваренной соли; в засоленном (4,8 % NaCl) мясе крупного рогатого скота погибают через 10 дней; в гипертоническом растворе поваренной соли (2,8 %) — через 15 мин.

При кипячении погибают моментально, при 56—58 °С — в течение 25—30 мин. Быстро гибнут при высушивании и под воздействием прямого солнечного света. Растворы (0,1 %-ный соляной кислоты, 0,5 %-ный фенола) инактивируют лептоспиры за 20 мин.

Патогенность. К лептоспирозу наиболее восприимчивы крупный рогатый скот (серогруппы помона и гебдомадис), свиньи (серогруппы помона и тарассови), лисицы, песцы, менее — лошади, козы, овцы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры. Болеет и человек. Основными носителями лептоспир в природных очагах являются: серые и водяные полевки, серые крысы, домовые мыши, землеройки.

К экспериментальному заражению наиболее чувствительны золотистые хомячки, крольчата-сосунки и молодые морские свинки.

Патогенез. Входными воротами возбудителя являются поврежденные кожа и слизистые оболочки. Патогенные лептоспиры благодаря активной подвижности преодолевают защитные барьеры организма и быстро проникают в кровь. Через 12 ч после заражения они обнаруживаются в печени. Затем наступает генерализация инфекции (лептоспиремия), появляется лихорадка, увеличивается число лептоспор в печени, почках, надпочечниках, селезенке, легких. К этому времени образуются антитела. Они разрушают лептоспиры, и происходит их элиминация из крови и паренхиматозных органов. В почечных же клубочках и канальцах лептоспиры недоступны воздействию антител, где они активно размножаются и выделяются с мочой. Почечная недостаточность у кошек и других видов животных часто связано с явным или скрытым носительством лептоспир, поражающих, прежде всего, урологическую сферу у животных.

Лизис лептоспир сопровождается накоплением токсических веществ, под действием которых повышается проницаемость сосудов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, развиваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: кровь (лучше брать на 3—5й день болезни при повышенной температуре тела), моча, кусочки паренхиматозных органов, почка, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод. Патологический материал отбирается не позже 2 ч после гибели животного. Моча собирается при естественном мочеиспускании и в летнее время исследуется в течение 3 ч.

Выделение культур. Материал засевают по 1—3 капли в 3—5 пробирок со специальной питательной средой и инкубируют при температуре 28—30 °С в течение 3 мес. Лептоспиры начинают размножаться через 7—20 дней, иногда через 1—2 и очень редко — 3 мес. Наличие роста определяют темно-польной микроскопией раздавленных капель, которые готовят через 3, 5, 7, 10 дней и далее через каждые 5 дней. При обнаружении размножения лептоспир делают пересев в 3—5 пробирок со свежей средой. Получить культуры лептоспир удается не всегда.

Биологическая проба. Метод более чувствительный, чем культуральный; проводится с целью выделения и очистки культур лептоспир, определения их вирулентности и дифференциации от сапрофитов.

Заражают золотистых хомячков 20—30-дневного возраста и крольчат-сосунов в возрасте 10—20 дней. На каждую пробу берут двух животных; на 4—5й день убивают первого, на 14—16й день — второго, если оно не погибло раньше. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы. Сыворотку крови убитого через 14—16 дней животного исследуют в реакции микроагглютинации (РМА) с лептоспирами 13 серогрупп. Положительная РМА в разведении 1:10 и выше указывает на наличие лептоспир в исследуемом материале.

Серологическое исследование. Для серологической диагностики лептоспироза используют РМА и реакцию агглютинации (РА). Пробы крови берут на 5—7й день болезни и при исследовании отдельных животных повторно через 7—10 дней. Необходимо помнить, что антитела в крови у выздоровевших животных могут сохраняться до двух и более лет.

РА ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят каплю разведенной 1:100 исследуемой сыворотки и добавляют равное количество антигена. Лептоспирозные антигены для РА выпускаются шести серогрупп (для каждой отдельно) и представляют собой концентрированную взвесь лептоспир в альбуминовой питательной среде. При наличии в сыворотке специфических антител наступает агглютинация. Оценка результатов производится в плюсах по 4балльной системе. Положительной считают реакцию в два плюса и выше, сомнительной — в один плюс.

Для выявления лептоспир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве предложен иммунофлюоресцентный метод.

Иммунитет и средства специфической профилактики. После переболевания у животных формируется длительный и напряженный иммунитет. Он характеризуется серовариантной специфичностью, поэтому возможны реинфекции. Ведущее значение в невосприимчивости к лептоспирозу принадлежит антителам, и особенно IgG. Сыворотки иммунных животных обладают превентивными свойствами. Отмечается также длительное лептоспироносительство и вследствие этого инфекционный иммунитет.

При вакцинации коров за 1,5—4 мес, овец и свиноматок за 1,5—2 мес до родов колостральный иммунитет продолжается у телят до 2,5 мес, у ягнят и поросят — до 1,5 мес.

Для активной иммунизации применяют депонированную поливалентную вакцину ВГНКИ против лептоспироза животных. Вакцину выпускают в двух вариантах: первый — изготовляют вакцину из штаммов лептоспир серогрупп помона, тарассови, иктерогеморрагия и каникола, второй — из серогрупп помона, тарассови, гриппотифоза и четырех сероваров группы гебдомадис. Иммунитет после вакцинации наступает через 14—20 дней и длится у молодняка до 6 мес, у взрослых животных — до 1 года.

Для пассивной иммунизации и лечения больных животных используют сыворотку против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных, которую получают из крови воловпродуцентов, гипериммунизированных культурами лептоспир. Иммунитет у животных, привитых сывороткой, сохраняется 10—14 дней.

Учебник предназначен для студентов, аспирантов и преподавателей высших медицинских учебных заведений, университетов, микробиологов всех специальностей и практических врачей.

5-е издание, исправленное и дополненное

Книга: Медицинская микробиология, иммунология и вирусология

Лептоспиры – возбудители лептоспирозов

Лептоспироз – природно-очаговое инфекционное заболевание, характеризующееся поражением капилляров, почек, печени, мышц, сердечно-сосудистой и нервной систем, сопровождающееся или не сопровождающееся желтухой.

Возбудитель лептоспироза впервые был описан и изучен Р. Инадо и У. Идо в 1915 г. и назван Leptospira icterohaemorrhagiae. Позднее были открыты другие лептоспиры.

Лептоспиры имеют вид плотно закрученной пружины, состоящей из 12 – 18 завитков (завитки первого порядка). Осевую нить образуют два или большее число периплазматических жгутиков, каждый из которых одним своим концом прикреплен к одному из полюсов протоплазматического цилиндра, и они редко перекрываются в центральной части клетки. Средняя длина лептоспир от 7 до 15 мкм, но может варьировать от 3 до 30 мкм. Диаметр лептоспир 0,07 – 0,14 мкм, амплитуда первичного завитка около 0,25 мкм. Мелкие завитки спирали тесно примыкают друг к другу (в среднем на 9 мкм 18 завитков), что придает лептоспирам при темнопольной микроскопии вид нитки жемчуга (см. рис. 111, 5) или гирлянды роз, они могут выглядеть и как цепочки мелких кокков. Один конец лептоспиры, а иногда и оба могут быть загнуты в виде крючка (завитки второго порядка), образуя С– или S-образные структуры. Живые лептоспиры очень подвижны, совершают вращательные, скользящие и маятникообразные движения. Спор и капсул не образуют.

Анилиновые красители воспринимают с трудом, по Романовскому – Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет. Легко импрегнируются серебром.

Патогенные лептоспиры хорошо растут в аэробных условиях на жидких и полужидких средах, обязательно содержащих 5 – 10 % кроличьей сыворотки. Оптимальная температура роста 28 – 30 °C, но могут расти в пределах от 22 до 37 °C. Оптимальная для роста рН 7,1 – 7,4. Растут лептоспиры сравнительно медленно, рост обнаруживается не ранее 5 – 8 сут. В полужидких средах образуются колонии округлой формы диаметром 1 – 3 мм. В молодых культурах в области наиболее пышного роста в 1,5 – 2 см от поверхности наблюдается легкое помутнение в виде кольца. В жидких средах культуры прозрачны, не имеют запаха, при пышном росте определяется опалесценция, заметная в проходящем свете при легком встряхивании пробирки. Рост лептоспир в культурах контролируют с помощью микроскопии в темном поле.

Лептоспиры получают энергию путем окисления длинноцепочечных (не менее 14 атомов углерода) жирных кислот и не могут использовать в качестве источников энергии аминокислоты или углеводы. Основным источником азота для них являются соли аммония. В воде, особенно при щелочной реакции среды, лептоспиры могут сохранять жизнеспособность в течение нескольких недель.

Все патогенные лептоспиры объединены в один вид – Leptospira interrogans, в который входят различные серологические варианты. Известно более 200 сероваров, объединенных в 38 серогрупп. На территории СНГ выделены 27 сероваров, относящихся к 13 серогруппам (табл. 54). Основные штаммы лептоспир, выделенные от животных и человека в разных странах, имеют сходную антигенную структуру и при постановке серологических реакций дают положительные перекрестные результаты. Поэтому для специфической серологической диагностики необходимо использовать количественное определение антител к различным сероварам лептоспир. Из многих штаммов лептоспир выделен антиген липополисахаридной природы, дающий групповые реакции.

Лептоспиры, выделенные от людей и животных в СНГ

Основным фактором патогенности лептоспир является эндотоксин, выделяющийся при разрушении возбудителя и вызывающий общую интоксикацию, а также кровоизлияния за счет повышения проницаемости сосудов, разрушения эндотелия и выпотевания крови из сосудов в ткани.

Лептоспиры устойчивы в окружающей среде, сохраняются в воде открытых водоемов до 30 дней и более, во влажной почве – до 270 дней, на пищевых продуктах – от нескольких часов до нескольких дней. Дольше сохраняются во влажной среде при рН 7,0 – 7,4 и при низких температурах. Погибают при высушивании и действии прямых солнечных лучей. При кипячении гибнут мгновенно, быстро инактивируются дезинфицирующими веществами в рабочих концентрациях.

Эпидемиология. Различают природные и антропоургические очаги лептоспироза. Источниками инфекции в природных очагах являются грызуны, насекомоядные, парнокопытные, хищные млекопитающие многих видов, реже птицы. Наибольшее значение имеют мыши, полевки, ондатры. В антропоургических очагах источники инфекции – крупный и мелкий рогатый скот, лошади, свиньи, собаки, домовые мыши и крысы. У животных лептоспироз может протекать бессимптомно, а лептоспиры могут выделяться с мочой в течение нескольких месяцев. Заражение людей происходит при купании и использовании для бытовых нужд воды из открытых водоемов, инфицированных мочой больных животных, при контакте с сырьем, употреблении продуктов, содержащих живые лептоспиры. Больные лептоспирозом люди не опасны для окружающих. Заболевание носит сезонный характер (пик – июль – август). Наиболее частыми в России возбудителями лептоспироза являются L. pomona, L. monijakov, L. grippotyphosa, L. tarassovi, L. canicola, L. icterohaemorrhagiae.

Патогенез и клиника. Возбудитель проникает в организм через слизистые оболочки и поврежденную кожу; с током крови попадает в печень, почки, селезенку, проникает через гематоэнцефалический барьер в ЦНС; в тканях этих органов лептоспиры размножаются. Затем они опять поступают в кровь, обусловливая генерализацию инфекции, лихорадку и интоксикацию. Бывают желтушные и безжелтушные формы лептоспироза. Инкубационный период в среднем 7 – 10 дней. Начало заболевания острое: озноб, высокая температура, характерны головная и мышечная боли, особенно в икроножных мышцах. Возможны сыпь, диспептические явления, признаки менингита. Позже или почти сразу начинают нарастать явления почечной (при безжелтушной форме) или почечно-печеночной (при желтушной форме) недостаточности. Летальность составляет 3 – 4 %.

Иммунитет. После перенесенной лептоспирозной инфекции формируется длительный стойкий иммунитет, имеющий типоспецифический характер. Во время болезни появляются агглютинины, комплементсвязывающие антитела и лизины. Сыворотка переболевших лептоспирозом людей защищает лабораторных животных от гибели при заражении их заведомо смертельной дозой возбудителя.

Специфическая профилактика и лечение. Вакцинация проводится по эпидемиологическим показаниям. Для этой цели в России недавно предложена в дополнение к вакцине А. А. Варфоломеевой и Г. Н. Ковальского более эффективная и менее реактогенная концентрированная инактивированная стандартизованная поливалентная вакцина. Она содержит антигены наиболее распространенных в стране серогрупп лептоспир. Для специфического лечения применяют гамма-глобулин из крови гипериммунизированных волов, содержащий антитела к различным сероварам лептоспир. В качестве этиотропных препаратов эффективны также антибиотики (пенициллин, тетрациклины).

Методические указания для студентов к практическому занятию № 37.

Тема занятия:Микробиологическая диагностика лептоспирозов и боррелиозов.

Цель:Изучение методов микробиологической диагностики, терапии и профилактики заболеваний, вызванных лептоспирами и боррелиями.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема 37: Микробиологическая диагностика лептоспирозов и боррелиозов.

Актуальность темы:

Возбудитель лептоспироза

Лептоспироз - инфекционное заболевание, вызываемое Leptospira interrogans, характеризующаяся поражением кровеносных капилляров, печени, почек, мышц, ЦНС, нередко сопровождающаяся желтухой. Возбудитель лептоспироза был выделен в 1914 г. Р. Инадо и И. Идо.

Таксономия. Возбудитель лептоспироза относится к отделу Gracilicutes, семейству Leptospiraceae, роду Leptospira.

Морфология и тинкториальные свойства. Лептоспиры - бактерии, имеющие извитую форму, длиной 7-14мкм, толщиной 0,1мкм; характеризуются наличием многочисленных мелких завитков, концы лептоспир загнуты в виде крючков (вторичные завитки). Не образуют спор и капсул; подвижны - совершают поступательное, вращательное, сгибательное движения. Лептоспиры анилиновыми красителями красятся плохо, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет, грамотрицательны. Оптимальный способ изучения их морфологии - темнопольная микроскопия.

Культивирование. Лептоспиры культивируют в аэробных условиях на специальных питательных средах с нативной кроличьей сывороткой при 25-35 0 С и рН 7,2-7,4. Растут медленно.

Ферментативная активность. Биохимическая активность лептоспир невысокая.

Антигенная структура. Среди представителей рода Leptospira выделяют около 200 сероваров, объединенных в 19 серологических групп. Родоспецифическим является полисахаридный фибриллярный антиген, принадлежность к группе и варианту определяется соответственно оболочечными белковыми и липопротеиновым антигенами.

Факторы патогенности. Патогенные свойства лептоспир обусловлены образованием малоизученных экзотоксиноподобных веществ и эндотоксинов. Лептоспиры, кроме того, продуцируют фибринолизин и плазмокоагулазу.

Резистентность. Лептоспиры очень быстро погибают при действии высоких температур, дезинфицирующих средств, но достаточно устойчивы к низким температурам. В воде естественных водоемов сохраняют жизнеспособность в течение 5-10 дней, в сырой почве - до 270 дней.

Восприимчивость животных. Многие животные чувствительны к лептоспирам.

Патогенез. Входные ворота инфекции - слизистые оболочки ротовой полости, глаз, носа, кожа. Лептоспиры распространяются по лимфатическим путям, проникают в кровь и током крови разносятся по организму, попадая в различные органы - печень, почки, легкие и т.д. В органах микроорганизмы интенсивно размножаются, затем вновь поступают в кровь. В результате действия возбудителей и их токсинов повреждается стенка кровеносных капилляров и наблюдаются кровоизлияния в различные органы и ткани. Больше всего страдают печень, почки, надпочечники, сердце, мышцы.

Клиническая картина. Инкубационный период обычно продолжается 7-10 дней, заболевание – 5-6 нед. Болезнь, как правило, начинается остро, температура тела повышается до 39-40 0 С, появляются головная боль, резкие боли в мышцах, особенно в икроножных. В зависимости от поражения тех или иных органов появляются симптомы их повреждения: почечная недостаточность, желтуха и др. Характерна волнообразная лихорадка. Клинические формы лептоспироза различны - от легких до тяжелейших, приводящих к смерти.

Иммунитет. Иммунитет длительный, напряженный, но характеризуется строгой серовароспецифичностью.

Лечение. Применяют антибиотики и противолептоспирозный гетерологичный иммуноглобулин.

Профилактика. Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении ряда правил: нельзя употреблять сырую воду из непроточных водоемов для питья и умывания, купаться в небольших водоемах, особенно в местах водопоя скота. Для специфической профилактики по эпидемическим показаниям используют убитую вакцину.

Возбудитель эпидемического возвратного тифа

Эпидемический возвратный тиф (Typhus recurrens) - инфекционное заболевание, вызываемое Borrelia recurrentis, характеризующаяся приступами лихорадки с мышечными и головными болями, сменяющимися безлихорадочными периодами. Антропонозное заболевание. Спирохета открыта в 1868 г. немецким врачом О. Обермейером.

Боррелии - крупные спирохеты с большими неравномерными завитками; грамотрицательны, подвижны.

Переносчиком возбудителей является платяная вошь. При кровососании боррелии от больного поступают в кишечник вши и могут сохраняться там в течение всей ее жизни. Заражение происходит в результате раздавливания вши, втирания возбудителей, содержащихся в гемолимфе, в расчесы. Внедрившиеся в организм боррелии захватываются макрофагами и лимфоидными клетками и по мере размножения поступают в кровь. Разрушаясь, освобождают эндотоксины, являющиеся причиной клинических проявлений - озноба, повышения температуры тела, головных и мышечных болей и других симптомов. Инкубационный период в среднем составляет 7-8 дней.

Постинфекционный иммунитет нестойкий и непродолжительный.

Лечение проводят антибиотиками.

Специфическая профилактика не разработана. Основные меры борьбы сводятся к уничтожению вшей, выявлению больных, санитарной обработке лиц, находившихся в очаге.

Микробиологическая диагностика базируется на обнаружении боррелии в мазках из крови больного, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Вспомогательное значение имеют серологические реакции.

Для дифференциации с эндемическим сыпным тифом применяют заражение морских свинок кровью больного.

Схема микробиологического исследования при возвратном тифе

КРОВЬ СЫВОРОТКА КРОВИ

Микроскопическое Биопроба РСК и другие

водным капля, капля, свинки

новскому- поле окраска фуксином капля, окраска по

· Изучить методы микробиологической диагностики лептоспирозов и боррелиозов.

· Трактовать результаты микроскопического исследования.

· Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии.

Уметь:

· Забирать материал для исследования от больных

· Выделить чистую культуру

· Трактовать результаты микроскопического исследования

Теоретические вопросы:

· Патогенность для человека и животных. Факторы патогенности, токсины.

· Патогенез заболевания у людей, иммунитет.

· Специфическая профилактика и лечение

Практические задания, которые выполняются на занятии:

1. Микроскопия демонстрационных препаратов.

2. Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

3. Разбор схемы лабораторной диагностики

4. Оформление протокола.

Литература:

2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.- М.:Медицина, 1983,- 512с.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.- Киев: Вища школа, 1992.- 431с.

4. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.- 768с.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес.– М.: Медицина, 1986.– 512с.

7. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559с.

5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов.– Мн.: Выш. шк., 1986.– 255с.