Бруцеллы (род Brucella) – возбудители бруцеллеза человека и животных. В. melitensis, В. abortus и В. suis – вызывают заболевание у человека; B. ovis, B. canis, B. neotomae заболевания человека не вызывают.

Морфология, физиология. Мелкие Гр– коккобактерии размером 0,5-0,7х0,6-1,5 мкм. Также могут быть палочковидной формы; в мазках обычно расположены беспорядочно. Жгутиков не имеют. Спор не образуют. Свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу при культивировании на средах, содержащих 10% иммунной сыворотки барана или лошади, а также при выращивании на куриных эмбрионах.

Требовательны к питательным средам. Для выращивания обычно применяют триптозный, триптозо-казеиново-соевый и кровяной (5% овечьей крови) агары; оптимальная среда для культивирования - печёночный агар Хеддльсона. Выделяемые из организма больных они размножаются очень медленно, рост может быть обнаружен только через 1–3 недели после посева исходного материала. Многократное пересевание в лабораторных условиях делает культуры способными расти в течение 1–2 дней. На плотных питательных средах образуют мелкие, выпуклые, бесцветные с перламутровым блеском колонии S-формы (жемчужины), легко переходят в мукоидную и шероховатую. В жидких средах возникает равномерное помутнение. Под влиянием антибиотиков образуют L-формы.

Бруцеллы строгие аэробы, а В. abortus в первых поколениях требует увеличенной концентрации (5–10%) СО₂.

БХ: расщепляют глюкозу и некоторые другие углеводы, разлагать мочевину и аспарагин, гидролизовать белок, пептоны, аминокислоты, выделять каталазу, гиалуронидазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу и другие ферменты. Внутри видов бруцелл различают биовары. Их дифференциация основана как на биохимических различиях, так и на способности расти на средах с фуксином и тионином, лизабельности фагом Т6, агглютинабельности моноспецифическими сыворотками.

АГ. Содержат поверхностно расположенный Vi-АГ и соматические видоспецифические АГ А и М, количественное соотношение которых различно у разных видов. У В.melitensis преобладают М-АГы. у В. abortus и В. suis – А-АГ. Для идентификации бруцелл по антигенным свойствам используют реакцию адсорбции агглютининов или монорецепторные сыворотки.

Экология и распространение. Зоонозная инфекция. Возбудители разных видов циркулируют среди животных, от которых заражаются и люди. В.melitensis вызывает заболевания мелкого рогатого скота, В. abortus – КРС, В.suis – свиней. Непатогенные для человека

Бруцеллы устойчивы к действию факторов окружающей среды. Они длительно сохраняют жизнеспособность при низкой температуре. В почве, моче, испражнениях животных, больных бруцеллезом, в навозе, сенной трухе возбудители выживают 4–5 мес., в шерсти– 3– 4 мес., в пыли – 1 мес., в замороженном мясе – до 5 мес. К высокой температуре и дезинфицирующим веществам бруцеллы высокочувствительны: при 60°С погибают за 30 мин, при кипячении – мгновенно. Все дезинфектанты губят бруцелл в течение нескольких минут.

Патогенность и патогенез. Проникновение – алиментарным, контактным и воздушно-капельным путями. Алиментарный путь заражения связан с употреблением в пищу продуктов животноводства (масла, молока, мяса), полученных от больных животных. Контактным путем заражаются чаще ветеринары, зоотехники, работники мясокомбинатов при уходе за больными животными, обработке сырья. Заражение возможно при работе с инфицированной шерстью, ветошью, когда имеет место распыление, попадание бруцелл в воздух. Для человека наиболее патогенными являются В.melitensis – возбудитель болезни мелкого рогатого скота (овец, коз).

Выраженные инвазивные и агрессивные свойства бруцелл обусловливают способность возбудителя проникать в организм через неповрежденные слизистые оболочки. После проникновения в организм распространяются лимфогенным путем, попадают в кровь, а из крови – в селезенку, костный мозг, лимфоузлы, где, локализуясь внутриклеточно, могут длительно сохраняться.

Болезнетворность бруцелл определяется действием эндотоксина. Выделяющиеся ферменты (гиалуронидаза и др.) способствуют распространению микробов в тканях. В патогенезе бруцеллеза имеет значение способность возбудителя размножаться в клетках лимфоидно-макрофагальной системы.

С первых дней болезни возникает реакций ГЗТ, которая сохраняется в течение всей болезни и длительное время после выздоровления.

Иммунитет. В основе иммунитета при бруцеллезе лежит активность системы Т-лимфоцитов. Важную роль играет фагоцитоз и состояние аллергии. Обезвреживание бруцелл происходит при участии антител – опсонинов, агглютининов.

Лабораторная диагностика. Проводится бактериологическим и серологическим методами. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, испражнения и моча больных, иногда – спинномозговая жидкость. Выделением возбудителя занимается специальная режимная лаборатория.

Образцы инкубируют в МПБ или бульоне Мартена (можно использовать соевый бульон) при 37°С. При проведении исследования засевают 2 порции среды и в одной создают повышенную концентрацию СО. Через 4-5 сут наблюдают рост бруцелл, нередко в виде мелких колоний, вкрапленных в тяжи фибрина; среда остаётся слегка мутной или прозрачной. После пересева на твёрдые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отвивают чистые культуры с последующими идентификацией биохимических свойств, определением способности расти на средах с добавлением некоторых анилиновых красителей (бактериостатический метод Хеддльсона) и определением биотипа реакциями агглютинации.

Серологические исследования. Реакция агглютинации (реакция Райта) - один из основных методов диагностики бруцеллёза. Динамика реакции может быть различной, для неё характерно колебание титров в течение суток; положительная реакция с первого дня заболевания; наиболее высокие титры отмечают через 1-2 мес. Для получения адекватных результатов необходимо использовать негемолизированную сыворотку и Аг, приготовленный из S-форм бруцелл (применять Аг диссоциированных форм нельзя); в эндемичных очагах, вызванных Brucella melitensis, рекомендуют применять гомологичный Аг. Следует помнить, что для реакции Райта характерны проагглютинационные зоны, или прозоны (отсутствие агглютинации в первых разведениях и чёткое её проявление в более высоких разведениях сыворотки). Часто применяют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона). В острой фазе заболевания диагностическую ценность имеет иммуноферментный метод, выявляющий IgM в сыворотке больного. Выявление неполных AT (реакция Кумбса) с применением антиглобулиновой сыворотки. Для диагностики, особенно при отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований, используют аллергические кожные пробы (проба Бюрне), обычно положительные у 70-85% пациентов к концу 1 мес заболевания. В качестве Аг применяют бруцеллин (мелитин, абортин) - протеиновый экстракт культуры бруцелл. Пробу также применяют для проведения эпидемиологических обследований; бывает положительной после вакцинации.

Для выявления возбудителя в молоке широко применяется кольцевая проба Банга.

Профилактика и лечение. Общие и специфические мероприятия ветеринарной службы. Выявляют и ликвидируют бруцеллез среди сельскохозяйственных животных, обезвреживают продукты и сырье животного происхождения. Людей, подвергающихся опасности заражения, вакцинируют живой бруцеллезной вакциной. Лечение бруцеллёза затруднено внутриклеточным паразитизмом бруцелл, что защищает их от действия антимикробных препаратов и AT. Препаратами выбора считают тетрациклин и стрептомицин. В тяжёлых и упорных случаях можно назначить рифампин (рифамицин). Смертность без лечения может достигать 5-10%.

Разнообразные клинические проявления бруцеллеза приводят к необходимости широкого использования лабораторных методов исследования: бактериологического, биологического, сероло­гического и аллергического. Комплекс лабораторных исследований с обязательным учетом клинических, эпидемиологических и эпизоотологических данных обеспечивает правильную диагностику заболевания.

Бактериологический метод.Для исследования на бруцеллез в лабораторию поступает патологический материал от больных людей (кровь, мокрота, гной, суставная жидкость, пунктат из селезенки, моча), сельско­хозяйственных животных (абортированный плод, лимфатические узлы, паренхиматозные органы, кровь, моча, молоко, молочные продукты) и различные объекты окружающей среды (вода, навоз). Материал для исследования забирают в стерильную посуду.

Исследование крови необходимо проводить во время лихо­радочного состояния больного до лечения антибиотиками, так как в этот период наблюдается наибольший процент выделения культур. Кровь в количестве не менее 10 мл стерильно берут из локтевой вены и засевают по 5 мл в два флакона среды Кастанеда. Начиная с четвертого дня, посевы ежедневно просматривают и, при отсутствии роста культуры, поверхность агара орошают бульоном путем осторожного покачивания фла­кона. При положительном результате на поверхности агара появляются колонии бруцелл. Если в течение месяца роста бруцелл не обнаруживают, то делают контрольный высев из бульона среды Кастанеда на твердую питательную среду.

При обследовании людей на бруцеллез для удобства доставки флаконов с кровью можно пользоваться транс­портной жидкой средой, которую готовят заранее и хранят в лаборатории в течение полугода. Кровь доставляют в лабораторию в транспортной среде, засевают на среду Каста­неда и исследуют по общепринятой схеме.

Бруцеллы можно выделить из костного мозга, мочи, спинно­мозговой жидкости, грудного молока, желчи, мокроты, трупного материала и т. д. Исследуемый материал по 0,1 мл засевают на плас­тинки питательного агара и по 5-10 мл на жидкие питатель­ные среды. Для задержки роста посторонней микрофлоры при исследовании загрязненного материала к среде добавляют генцианвиолет (1:200 000) или антибиотики (пенициллин 0,25 ед/мл и стрептомицин 0,05 ед/мл).

Особого внимания заслуживает получение культуры из моло­ка сельскохозяйственных животных. Забор молока у овец, коров, верблюдов и коз рекомендуется проводить путем сдаивания его последних порций из каждого соска вымени по 10 мл в стерильную посуду. Если исследовать молоко в течение первых суток не удается, то его консервируют добавлением сухой борной кислоты 1 %, генцианвиолета 1:25 000. Для исследования молока из больших емкостей забирают 100 мл верхнего слоя, затем перемешивают и набира­ют еще 100 мл.

Лучшие результаты дает посев сливок, полученных центри­фугированием молока при 2,5-3 тыс. об/мин в течение 3-5 мин или путем отстаивания в течение одних суток в холо­дильнике. Сливки в количестве 0,1-0,2 мл засевают на твердую питательную среду с подавителем посторонней микрофлоры (4-6 пробирок на 1 пробу).

Бактериологический метод считается самым достоверным, т. к. выделение бруцелл является неопровержимым доказа­тельством бруцеллезной инфекции. Отрицательные результаты бактериологического исследования не дают права для заключе­ния об отсутствии заболевания.

Биологический метод.Для выделения бруцелл из материала, загрязненного посто­ронней микрофлорой или содержащего малые концентрации возбудителя, в качестве биологической пробы используют морских свинок (весом 250-300 г) или белых мышей (весом 17-18 г). Исследуемый материал в объеме не более 0,5 мл вводят под­кожно в паховую область белой мыши и 1 мл морской свинке.

Вскрытие белых мышей производят через 20-25 дней, а мор­ских свинок - через 30-35 дней после введения материала. Перед вскрытием у свинок кровь из сердца исследуют в реакции агглютинации. Для посевов у морских свинок берут лимфатические узлы (паховый, подчелюстной, шейный, парааортальный), кусочки селезенки, печени, костный мозг, кровь, мочу; у белых мышей - лимфатические узлы (пахо­вый, аксиллярный, парааортальный, подчелюстной), кусочки селезенки и печени. Лимфатические узлы, кусочки печени и селе­зенки помещают в стерильную чашку. Костный мозг извлекают пипеткой из рассеченной бедренной кости. Посевы крови из сердца, мочи и костного мозга производят стерильной пипеткой непосредственно на питательную среду (агар и бульон). Лимфа­тические узлы и органы перед посевом надсекают ножницами, берут стерильной деревянной палочкой, вносят первоначально в пробирку с агаром, раздавливают и тщательно втирают мате­риал в поверхность питательной среды. Затем остатки посевного материала переносят в пробирку с бульоном. Палочка должна быть длиной 25-30 см, диаметром 4-5 мм, хорошо отструганная, с несколько заостренным концом. После использования ее погру­жают на 1 час в дезраствор.

Все посевы дублируют (часть помещают в условия повышен­ного содержания углекислоты), выдерживают при 37 °С до 30 дней. Для предотвращения высыхания питатель­ных сред пробирки заливают парафином или закрывают резино­выми колпачками.

Посевы просматривают каждые 3-4 дня. Из помутневших бульонов делают высев в пробирки со скошенным агаром. Коло­нии бруцелл на пластинчатом агаре становятся видимыми на 5-7 сутки, иногда позднее. По истечении 30 дней наблюдение прекращают. Если за это время рост не появился, посевы уничто­жают, а результаты бактериологического исследования считают отрицательными.

Результат оценивают положительно при выделении хотя бы одной колонии бруцелл. Идентификацию возбудителя бруцеллеза проводят по: по характеру роста культуры на плотных питательных средах; морфологии микроба в мазках, окрашенных по Граму, Козловскому; агглютинации со специфической бруцеллезной сывороткой на стекле и объемным методом; свечению на 3-4+ культур, обработанных бруцеллез­ной люминесцирующей сывороткой.

Культуры предварительно проверяют на наличие признаков диссоциации, одним из перечисленных выше методов.

Дифференциации (определение видов и биоваров) подлежат культуры в S-форме после идентификации.

Подкомитетом по таксономии бруцелл Международного комитета номенклатуры бактерий и Объединенным комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу в 1972 г. были определены единые тесты для проведения идентификации и дифференциации бруцелл для всех стран мира.

Серологические и аллергические методы исследования на бруцеллез.Серологические реакции и аллергическая проба являются общедоступными методами и применяются для диагностики бруцеллеза наряду с бактериологическим и биологическим методами.

В случае малой обсемененности пробы и отрицательных результатов, полученных при посеве исследуемого материала на питательные среды и заражении лабораторных животных, серологический метод может быть единственным, позволяющим диагностировать бруцеллез. В зависимости от целей исследования используют те или иные серологические методы.

При проведении эпидемиологического исследования в очагах применяют реакцию агглютинации пластинчатую (Хеддльсона) и объемную (Райта), реакцию Кумбса, РСК, РДСК, РПГА, кожную аллергическую пробу, иммуноферментный анализ (ИФА). Перед профилакти­ческой вакцинацией населения можно ограничиться постанов­кой пластинчатой реакции агглютинации (Хеддльсона) и кожной аллергической пробы.

Для диагностики острого и подострого бруцеллеза ставят реакцию Хеддльсона, Райта и РПГА. В случаях отрицательного результата используют реакцию Кумбса.

При диагностике хронического бруцеллеза и проведении диспансерного наблюдения за переболевшими рекомендуют наряду с реакциями Хеддльсона, Райта, РПГА, использовать реакцию Кумбса и аллергическую пробу (Бюрне).

Серологические реакции и аллергическая кожная проба по своему диагностическому значению в различные периоды заболевания не равноценны, вследствие чего не могут заменить друг друга. Это обусловливает необходимость применения комплексного серологического метода, являющегося наиболее надежным способом диагностики бруцеллеза.

В ранние сроки от начала заболевания (первые 6 месяцев) диагностическая ценность серологического метода выше, чем аллергического. Серологические реакции в этот период оказы­ваются положительными почти в 95 % случаев. По мере удлине­ния срока заболевания процент положительных серологических реакций начинает снижаться. При проведении обследования необходимо учитывать, что высокие титры антител всегда указывают на наличие инфекции, антитела в низких титрах или их полное отсутствие не исключает возможности заболевания. В связи с этим рекомендуется про­водить повторные исследования с интервалом 1-2 недели, особенно при подозрении на острую форму бруцеллеза.

Для постановки диагноза бруцеллеза у крупного рогатого скота применяют серологические и аллергические методы. Обследование начинают с постановки роз-бенгал пробы (РБП). Сыворотки, с которыми получена положительная РПБ, исследуют в РА Райта, РСК (РДСК), РПГА для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих анти­тел. Исследование проводят двукратно с промежутком в 30 дней.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ

Занятие 3.

Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; Нарушение авторского права страницы

СОВРЕМЕННЫЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА

Шумилов К.В., Скляров О.Д.

Всероссийский государственный центр качества и стандартизации ле-карственных средств для животных и кормов (ВГНКИ), Москва, Россия

Бруцеллез (Brucellosis) - хроническое заболевание многочис-ленных видов теплокровных животных и человека, вызываемое бак-териями рода Brucella. Болезнь наносит существенный экономиче-ский ущерб животноводству и имеет социальное значение, поражая человека. Хорошо известно, что для успешной борьбы с бруцеллезом важно, как можно раньше установить диагноз и приступить к прове-дению мероприятий по ликвидации источника инфекции.

В настоящее время диагностика болезни базируется на клини-ческих наблюдениях, эпизоотологических данных и результатах се-рологических, аллергических и бактериологических исследований. Однако, по спектру клинических проявлений бруцеллез похож на другие инфекционные и незаразные болезни (8), серологические и аллергические методы имеют определенные ограничения в чувстви-тельности и специфичности, а бактериологический - является трудо-ёмким и продолжительным по времени выполнения.

Для усовершенствования диагностики бруцеллеза нами разра-ботана тест-система "БРУ-КОМ", основанная на применении поли-меразной цепной реакции (Сертификат соответствия № РОСС RU. ФВ01.В08450), которая позволяет выявлять ДНК бруцелл всех видов в молоке, крови, сперме, внутренних органах и лимфатических узлах инфицированных животных (4,5,6).

Целью настоящего исследования являлось сравнительное изу-чение чувствительности тест-системы "БРУ-КОМ" и бактериологи-ческого метода исследования при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота в полевых условиях.

Материалы и методы. Исследования были проведены с ис-пользованием материала от коров из хозяйства, в котором бруцеллез был зарегистрирован в 2002 году. В течение предыдущих 25 лет хо-зяйство было благополучным по этому заболеванию. Специфическая профилактика бруцеллеза животных не проводилась.

Согласно результатам серологических исследований, выпол-ненных в период с 9.03 по 16.08.02 г., на бруцеллез реагировали по-ложительно 17 коров. При этом положительные результаты при ис-следовании в РА, РСК, РБП и РИД совпадали у 10 голов; в РА, РСК и РБП - у 6 голов; РСК и РБП - у 12 голов.

Сомнительные результаты были зарегистрированы при иссле-довании 12 голов и совпадали в РА, РСК и РБП - у 2 голов; в РА и РБП - у 6 голов; в РСК и РБП - у 1 головы. Сомнительно только в РА реагировали 2 головы и только в РСК - 1 голова.

Все животные, сомнительно и положительно реагировавшие на бруцеллез, были убиты.

При серологическом исследовании оставшихся 704 коров поло-жительно реагировали на бруцеллез 9 голов и сомнительно - 5 голов. Динамика роста количества положительных результатов серологиче-ских исследований свидетельствовала об остром течении болезни.

С целью получения материала для исследования был проведен убой 5-ти коров положительно - и 2-х - сомнительно реагирующих на бруцеллез по результатам серологического исследования.

После убоя из туш животных были отобраны образцы материа-ла: лимфатические узлы (заглоточные, предлопаточные, надколен-ные, надвыменные, парааортальные, тазовые) целиком и внутренние органы (селезенка, печень) в объеме примерно 443 см. Перед ис-следованием лимфатические узлы и кусочки органов погружали в 96 %-ный спирт ректификат и обжигали, повторив подобную операцию 3-4 раза. Для отбора проб из образцов материала использовали пасте-ровские пипетки, у которых были надпилены и отломлены оттянутые концы в области на 1 см выше от начала сужения. Подготовленные таким образом пипетки, путем легкого надавливая и вращения, по-гружали в образцы материала (для каждого образца использовали от-дельную пипетку). Пробы материала, заполнившие пипетки, перено-сили в отдельные универсальные пластиковые пробирки с предвари-тельно налитым в объеме по 3 мл физиологическим раствором и из-мельчали до получения гомогенной взвеси. Для этого стерильную па-стеровскую пипетку с отломленным на 1-2 мм кончиком вносили в пробирку с пробой материала и при легком надавливании производи-ли вращательное движение пипеткой вокруг ее оси в разные стороны, разрушая оттянутую часть. Для измельчения каждой пробы материа-ла использовали 1-2 пипетки.

После отстаивания взвеси в течение 15-20 мин надосадочную жидкость в объеме по 100 мкл переносили в 2-3 пробирки и исполь-зовали для выделения ДНК методом сорбции на силикагеле (7) с по-мощью набора "ДНК-сорб-В" (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва). ПЦР проводили с использованием тест-системы "БРУ-КОМ".

Кроме того, полученные взвеси использовали для бактериоло-гического исследования. С этой целью взвесь каждой пробы материа-ла перемешивали путем пипетирования, затем переносили в объеме по 1,5-2,0 см3 в пробирку с мясо-пептонным печеночным глюкозо-глицериновым бульоном и, перемешав в нем, высевали примерно по 1,5 см3 в две пробирки на скошенный мясо-пептонный печеночный глюкозо-глицериновый агар с добавлением 5 % аминопептида и се-лективной добавкой.

Посевы инкубировали при температуре 37-38 °С в течение 30 суток. Перед помещением в термостат посевы каждой пробы матери-ала в одной пробирке на плотной питательной среде парафинирова-ли. Учет посевов и орошение посевным материалом поверхности плотной питательной среды проводили через каждые 5 дней. Культу-ры бактерий, выросшие на плотной питательной среде в виде коло-ний или налета и похожие при этом на культуру бруцелл, пересева-лина Ml 1111 ГА, скошенный в пробирках. Полученные двухсуточ-ные культуру оценивали визуально, а приготовленные из них мазки, окрашенные по Граму и Козловскому, микроскопировали под иммер-сией при увеличении 1090. Кроме того, культуры идентифицирова-ли в пластинчатой РА с S и R-антибруцеллезными сыворотками, раз-веденными соответственно 1:50 и 1:5, и по способности продуциро-вать сероводород.

Для сравнения чувствительности тест-системы "БРУ-КОМ" и бактериологического метода исследования была выполнена стати-стическая обработка полученных данных.

Объектом статистического наблюдения являлась совокупность проб, отобранных параллельно из одних и тех же образцов материа-ла, взятых от 5 коров положительно- и 2-х – сомнительно реагирую-щих на бруцеллез в серологических реакциях, а также плода одной из коров.

При статистической группировке за единицу наблюдения при-нимались результаты исследования одной пробы патологического материала. Результаты группировали по методу исследования. Дру-гим признаком, характеризующим единицы наблюдения, была оцен-ка результата исследования - положительная либо отрицательная.

Чтобы оценить значимость различий результатов двух совокуп-ностей исследований, использовали методом 2(3):

Ф - эмпирические данные (частоты полученного распределе-ния);

О - ожидаемые данные (частоты теоретического распределе-ния).

Число степеней свободы v для сопоставляемых данных пред-ставленных в виде таблицы 2 определяли по формуле:

 = (число строк -1)  (число граф -1).

При расчетах 2 выдвигается т.н. нулевая гипотеза, согласно которой частота получения положительных результатов в интересу-ющих нас совокупностях предположительно одинакова, т.е. значение 2 равно нулю. При наличии различий между сравниваемыми рас-пределениями оно возрастает. Расчетный результат сравнивали с таб-личными значениями 2.

Достоверность различий в эффективности выявления ДНК бруцелл методом ПЦР из разных образцов патматериала определяли аналогичным образом.

Результаты исследования. Результаты исследования проб ма-териала от коров методом ПЦР представлены на рис.1. Согласно дан-ным рисунка наличие ДНК бруцелл зарегистрировано в материале от 6-ти из 7-ми исследуемых коров. В частности, в 2-х пробах - от коро-вы № 3466, в 13-ти пробах - от коровы № 2360, а также в 1 -ой пробе от плода этой коровы, в 10-ти пробах - от коровы № 99, в 1-ой пробе - от коровы № 3457, в 3-х пробах - от коровы 3157, в 8-ми пробах - от коровы № 3491. Материал от коровы № 230 был исследован с отрица-тельным результатом.

Культура бруцелл выделена из материала от 5 коров: из 1-ой пробы - от коровы № 3466; из 7-ми проб - от коров № 2360; из 4-х проб - от коровы № 99; из 1-ой пробы - от коровы № 3157; из 2-х проб - от коровы № 3491.

Рис. 1 Результаты исследования проб материала от коров №№ 3466, 3457, 2360, 3157, 230, 99, 3491 методом ПЦР

- К+ - положительный контроль

- 6 - надколенный правый

- К– - отрицательный контроль

- 7 - надвыменый левый

- Кв - контроль выделения

- 8 - надвыменный правый

- 1 - заглоточный левый

- 9 - парааортальный левый

- 2 - заглоточный правый

-10 - парааортальный правый

- 3 - предлопаточный левый

- 4 - предлопаточный правый

- 5 - надколенный левый

- 2360* - 14, 15, 16 пробы от плода

Всего, при исследовании 94-х проб материала, культура бруц-елл выделена из 15-ти - что составило 15,3 %. Наличие ДНК бруцелл было выявлено в 38 (40,4 %) пробах от шести коров. Причем, все по-ложительные результаты бактериологического исследования были подтверждены положительными результатами исследования матери-ала методом ПЦР. Согласно результатам идентификации все выде-ленные культуры бруцелл были отнесены к В.abortus.

Представлялось интересным установить, в каких объектах ис-следования (лимфатических узлах, печени, селезенке) статистически достоверно чаще обнаруживается генетический материал бруцелл.

Данные таблицы 1 показывают, что в конкретном случае из лимфатических узлов ДНК бруцелл выделяли значительно чаще. Справедливо ли это заключение для большего числа наблюдений проверили с помощью критерия 2.

Таблица 1

Частота выявления ДНК бруцелл в разных объектах исследования

Бруцеллез - инфекционная хроническая болезнь домашних и диких животных и человека. Клинические признаки и последствия заболевания, дифференциальная диагностика. Эпизоотологические данные, патогенез, течение болезни и патологоанатомические изменения.

Рубрика	Сельское, лесное хозяйство и землепользование
Вид	реферат
Язык	русский
Дата добавления	26.01.2012
Размер файла	28,0 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь

Государственная академия ветеринарной медицины

Кафедра эпизоотологии и инфекционных болезней животных

бруцеллез инфекционная болезнь эпизоотологический

На тему: БРУЦЕЛЛЕЗ: ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ У ЖИВОТНЫХ

Определение болезни
• Историческая справка
• Распространение
• Экономический ущерб
• Этиология
• Эпизоотологические данные
• Патогенез
• Течение и симптомы болезни
• Патологоанатомические изменения
• Диагностика
• Дифференциальная диагностика
• Лечение

Определение болезни

Историческая справка

Распространение

Экономический ущерб

Этиология

Эпизоотологические данные

Патогенез

Течение и симптомы болезни

Патологоанатомические изменения

Диагностика

Бактериологическому исследованию (включая постановку биопробы) подвергают биоматериал от животных в случае наличия у них признаков, вызывающих подозрение на заболевание бруцеллезом. Абортированные плоды, поступающие в ветеринарную лабораторию для исследования на фихомоноз, кампилобактериоз, сальмонеллез, лептоспироз, хламидиоз, подлежат также обязательному исследованию на бруцеллез. В лабораторию направляют абортированный плод с плодными оболочками и желудок плода с содержимым, кусочки печени, селезенки, семенники с придатками, измененные участки рогов матки и лимфоузлы, содержимое бурс, пробы молока. Одновременно в лабораторию направляют I р (ни, или сыворотку абортировавшего животного. Бактериологическое исследование на бруцеллез включает микроскопию мазков, окрашенных по Граму и одному из следующих специальных мг к >дон: по Стемпу, Козловскому или Шуляку-Шину; выделение культуры бруцелл путем посевов материала на мясо-пептонный печеночный бульон (МПБ), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон, печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар и др. Выделение культуры идентифицируют по морфологическим, культуральным « пометам и в реакции агглютинации на стекле с позитивной бруцеллезной сывороткой. Биопробу ставят на морских свинках (не менее двух) массой 400 г. Диагноз на бруцеллез считается установленным в одном из следующих случаев:

при выделении культуры бруцелл из биоматериала или положительной биопробе, а также при положительных результатах серологических исследований не вакцинированных животных при следующих показателях: для крупного рогатого скота и лошадей - РА с наличием антител 200 МЕ/мл и выше; для овец и коз - РА 100 МЕ/мл и выше; для собак - РА 50 МЕ/мл и выше; для всех видов животных РСК в разведении сыворотки 1: 5 и выше;

при выявлении в стадах крупного рогатого скота положительно реагирующих животных только в РА не выше 200 МЕ/мл и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1: 10 проводят повторное исследование через 15-30 дней в РА, РСК. При повышении титров в РА или РСК заболевание считается установленным.

Дифференциальная диагностика

Лечение

Иммунитет и специфическая профилактика.

Мероприятия по профилактике и ликвидации.

Оздоровление крупного рогатого скота от бруцеллеза осуществляется путем полной ликвидации поголовья неблагополучного хозяйства (фермы) и проведения санации помещений. Животных, положительно реагирующих при исследовании на бруцеллез, абортировавших или имеющих другие клинические признаки болезни, немедленно изолируют от другого поголовья и в течение 15 дней сдают на убой без откорма и нагула, независимо от их племенной и производственной ценности, весовых кондиций, возраста, состояния беременности. Хозяйство признается оздоровленным от бруцеллеза крупного рогатого o нота и с него снимается карантин после убоя неблагополучного поголовья, санации животноводческих помещений, территории ферм и получения двух отрицательных результатов серологических исследований на (бруцеллез с интервалом 30 дней животных, имевших контакт с животными неблагополучного стада, включая скот, принадлежащий гражданам, проживающим в данном населенном пункте. На неблагополучных фермах проводят дезинфекцию, дезинсекцию, дератизацию, санитарный ремонт животноводческих помещений и другие ветеринарно-санитарные мероприятия. Для дезинфекции в хозяйствах применяют 20% -ю взвесь свежегашеной и жести, взвесь или осветленный раствор хлорной извести, содержащей активного хлора, препарат ДП - 2,2% -й горячий раствор гидроксида па грим, 3% -й горячий раствор каустифицированной содопогашенной смеси, и раствор формальдегида, 5% -й горячий раствор кальцинированной годы, 0,5% -й раствор глутарового альдегида, 5% -й раствор технического натрия, растворы нейтрального гипохлорита кальция, тексанита, содержащие 3 % активного хлора. При установлении диагноза у овец (коз) в благополучных районах, все неблагополучное поголовье овец (коз) хозяйства, независимо от форм собственности, вместе с приплодом подвергают немедленному убою. Остальное поголовье овец (коз), бывшее в контакте с неблагополучной тарой, подвергается двукратному серологическому исследованию с интервалом в 30 дней. При получении отрицательного результата исследований, убоя неблагополучной отары, проведении санации территории ферм, животноводческих помещений карантин снимается. На фермах и комплексах с поголовьем до 12 тыс. животных, на которых установлено заболевание свиней бруцеллезом, все поголовье, в том числе молодняк, сдают на убой. Супоросных маток сдают на убой после окончании опороса и отъема поросят. Ликвидацию очага бруцеллеза осуществляют в срок не более 6 месяцев. На неблагополучной ферме осеменение свиноматок запрещается. На комплексах по выращиванию свиней, имеющих более 12 тыс. голов, при установлении бруцеллеза убою подвергается все поголовье неблагополучных технологических групп, секторов (блоков) или свинарников. При установлении заболевания крупного рогатого скота в отдельных хозяйствах граждан все поголовье животных, содержащихся в этих хозяйствах, подвергается исследованиям серологическим методом до получения двукратных отрицательных результатов.

Размещено на Allbest.ru

Распространение бруцеллеза животных, степень опасности и ущерб. Возбудитель болезни. Возникновение, патогенез, течение и клиническое проявление. Патологоанатомические признаки. Диагностика и лечение. Иммунитет, специфическая профилактика заболевания.

курсовая работа [3,3 M], добавлен 06.11.2014

Ознакомление с патогенезом, клиническими признаками, течением и основными симптомами бешенства у домашних и диких теплокровных животных. Изучение патологоанатомических изменений организма. Дифференциальная диагностика, лечение и профилактика заболевания.

реферат [24,2 K], добавлен 07.12.2011

Хламидиоз - зооантропонозная, инфекционная болезнь животных, причины и условия ее возникновения, экономический ущерб от нее. Развитие, течение и симптомы заболевания, патологоанатомические изменения. Диагностика, профилактика и лечение хламидиоза.

реферат [19,4 K], добавлен 06.02.2012

Характеристика станции по борьбе с болезнями животных. Бруцеллез - хроническая инфекционная болезнь млекопитающих, возбудитель заболевания. План мероприятий против бруцеллеза, особенности его составления. Течение, симптомы, меры борьбы и профилактика.

курсовая работа [86,7 K], добавлен 12.04.2012

Распространение инвазионных болезней среди домашних и диких млекопитающих животных. Биология развития ценуроза овец, вызываемого личиночной стадией ленточного гельминта. Эпизоотологические данные, патогенез и иммунитет, диагностика и лечение заболевания.

курсовая работа [1,2 M], добавлен 01.04.2012

Понятие и история исследований бруцеллеза у животных, его проявления и степень опасности, оценка ущерба для хозяйства. Возбудитель заболевания и характер его воздействия на организм животного. Дифференциальная диагностика и меры профилактики заболевания.

реферат [20,7 K], добавлен 21.09.2009

Возбудитель ньюкаслской болезни птиц. Эпизоотологические данные, патогенез, клинические признаки и патологоанатомические изменения. Диагностика, методы лечения ньюкаслской болезни и инфекционного бронхита кур. Иммунитет и специфическая профилактика.

курсовая работа [62,3 K], добавлен 24.05.2012

Группа инфекционных болезней, общих для животных и человека. Бруцеллез - инфекционная, хронически протекающая болезнь. Описание симптомов бруцеллеза у Гиппократа. Источник возбудителя инфекции - больные бруцеллезом животные, характеристика возбудителя.

курсовая работа [86,4 K], добавлен 13.12.2010

Инфекционная болезнь сельскохозяйственных и диких животных. Определение и распространение сибирской язвы. Течение и симптомы болезни, патологоанатомические изменения. Иммунитет и специфическая профилактика. Мероприятия по профилактике и ликвидации.

реферат [37,5 K], добавлен 21.01.2012

Биология возбудителя пироплазмоза у собак. Эпизоотологические характеристики данного заболевания. Его симптомы и клинические признаки. Воздействие токсинов piroplasma canis на организм. Диагностика и лечение болезни. Патологоанатомические изменения.

реферат [247,4 K], добавлен 19.06.2014