Микробиология возбудителя лептоспироза реферат

Глава 40. Возбудители лептоспирозов

Патогенные лептоспиры включены в семейство Spirochaetaceae, род Leptospira. Открыты в 1915 г. японскими исследователями Инадо и Идо.

К роду Leptospira относится группа микроорганизмов, вызывающих заболевания у животных и человека.

Морфология. Лептоспиры - спиралевидные нити, длиной 6-20 × 0,1-0,25 мкм. Имеют многочисленные (12-18) мелкие, тесно прилегающие друг к другу завитки. Концы спиралей загнуты в виде крючков. Существуют и безкрючковые штаммы. Лептоспиры очень подвижны. Имеют все формы движения.

Они плохо окрашиваются анилиновыми красителями, поэтому с целью обнаружения их в патологическом материале и в культурах используют метод микроскопии живых лептоспир в темном поле или метод серебрения - при этом способе они окрашиваются в коричневый цвет.

Культивирование. Лептоспиры строгие аэробы. Размножаются с жидких и полужидких питательных средах, содержащих сыворотку кролика, при температуре 28-30° С и рН среды 7,2-7,4. Растут медленно (7-10 дней). Среды при размножении лептоспир остаются прозрачными. Рост определяют по опалесценции или при микроскопии препаратов в раздавленной капле (в темном поле). Лептоспиры можно выращивать и на плотных питательных средах, содержащих кроличью сыворотку. Рост появляется на 5-7-й день. При выращивании лептоспир на искусственных питательных средах они теряют вирулентность.

Ферментативные свойства. У лептоспир обнаружены ферменты: каталаза, оксидаза, липаза и др.

Токсинообразование. Наличие эндотоксина у лептоспир не доказано.

Антигенная структура. Антигенную структуру лептоспир изучают в реакции микроагглютинации с монорецепторными сыворотками. На основании этой реакции лептоспиры делят на 19 серо групп и 169 сероваров. Каждая серогруппа и серовар имеют название.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Лептоспиры чувствительны к высоким температурам: 56° С губит их через 30 мин. При низких температурах (- 70-80° С) они длительно сохраняются. Лептоспиры очень чувствительны к высыханию. Они чувствительны к действию кислот, желчи. Обычные концентрации дезинфицирующих веществ губят их через несколько минут.

В воде лептоспиры выживают до двух месяцев, в молочных продуктах, хлебе - несколько часов.

Восприимчивость животных. Наиболее восприимчивы к лептоспирам грызуны, но болеют парнокопытные, крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, собаки и даже хищные животные. У животных заболевание протекает обычно в хронической форме.

Из экспериментальных животных наиболее чувствительны к лептоспирам морские свинки, золотистые хомяки. Однако вызвать у них заболевание могут только некоторые серовары лептоспир. У грызунов заболевание протекает тоже в хронической форме и лептоспиры выделяются с мочой.

Источники инфекции. Источниками заражения являются больные животные - сельскохозяйственные и грызуны (в основном крысы). Они инфицируют мочой окружающую почву, открытые водоемы (речки, пруды, колодцы). Кроме того, они заражают пищевые продукты.

Пути передачи. Контактно-бытовой (при купании и выполнении различных работ в воде, зараженной лептоспирами больных животных; при уходе за больными животными), пищевой (через воду и пищевые продукты).

Патогенез. Входными воротами являются поврежденная кожа и неповрежденные слизистые оболочки рта, глаз и желудочно-кишечного тракта. Первичный аффект на коже и слизистых оболочках не образуется. Лептоспирозы протекают в желтушной и безжелтушной форме. Проникнув в организм, лептоспиры через лимфатические пути проникают в кровь, где циркулируют. С током крови они проникают в паренхиматозные органы и локализуются в печени и почках. К этому времени образуются антитела, разрушающие лептоспиры.

В процессе распада лептоспир выделяется токсическое вещество, которое приводит к явлениям интоксикации и кровоизлияниям в паренхиматозных органах. В тяжелых случаях развивается желтуха и острая почечная недостаточность (нефрит) у человека и у чувствительных к лептоспирам животных.

При легких формах течения поражения паренхиматозных органов выявляются только при специальных методах исследования.

Иммунитет. Связан с образованием агглютининов и спирохетолизинов, максимальная концентрация которых достигается на 3-4 нед (антитела бывают в высоких титрах 1:1000 и выше). Иммунитет сохраняется длительно.

Профилактика. Борьба с грызунами, осушение болот и другие мелиоративные мероприятия, а также защита пищевых продуктов от крыс и мышей. Сельскохозяйственных животных вакцинируют.

Специфическая профилактика. Вакцинация людей, работающих в очаге. Лептоспирозная вакцина представляет собой взвесь убитых нагреванием лептоспир нескольких сероваров.

Лечение. Пенициллин, тетрациклин, противолептоспирозный иммуноглобулин (приготовленный из наиболее распространенных серогрупп лептоспир).

1. Расскажите о морфологических и культуральных свойствах лептоспир.

2. Какова устойчивость лептоспир во внешней среде?

3. Патогенность для животных, источники заражения и пути передачи.

4. Назовите входные ворота. Каков патогенез лептоспирозов?

5. Иммунитет. За счет каких антител он образуется?

Цель исследования: выявление лептоспир у больных и обнаружение их во внешней среде. Определение серовара.

3. Спинномозговая жидкость.

4. Водные источники и пищевые продукты.

5. Секционный материал.

Способы сбора материала

2. Бактериологический (с микроскопией).

Ход исследования

1. Что служит материалом для исследования при подозрении на лептоспироз?

2. Перечислите основные методы исследования.

3. Расскажите как ставят биологическую пробу.

Среда Терских. Готовят фосфатную смесь: 1) фосфат натрия двузамещенный - 11876 г; 2) дистиллированная вода - 1 л; 3) фосфат калия однозамещенный - 9078 г (приготовленные растворы хранят в темном месте). Смесь стерилизуют и добавляют 10% прогретой сыворотки кролика. После посева среду покрывают слоем жидкого парафина или вазелинового масла.

Среда Ферворта - Вольфа. На 1 л среды: 1) пептон - 1 г; 2) натрия хлорид - 0,5 г; буферная смесь Зермсена - 100 мл; 4) дистиллированная вода - 900 мл; 5) 10% инактивированная сыворотка кролика.

Лептоспиры являются возбудителями зоонозной бактериальной инфекции, харак­теризующейся волнообразной лихорадкой, интоксикацией, поражением капилляров печени, почек, ЦНС.

Возбудитель L. interrhogans относится к се­мейству Leptospiraceae, poд Leptospira.

Морфология.Лептоспиры представ­ляют собой тонкие спирохеты, с изогнутыми концами. Двигательный аппарат - фибрил­лы. Легко различимы при микроскопии в темном поле и фазово-контрасте. Цист не образуют.

Культуральные и биохимические свойства.Аэробы. Источником углерода и энергии слу­жат липиды. Каталаза-и оксидазаположительны. Культивируются на питательных средах, содержащих сыворотку или сывороточный альбумин, при темпера­туре 30С. Особенность роста на жидкой питательной среде — отсутствие помутнения. Делятся поперечным делением. Растут мед­ленно. Цист не образуют.

Антигенная структура. Содержат общеродовой антиген белковой природы, выявляемый в PCК, а также вариантоспецифический повер­хностный антиген липополисахаридной при­роды, выявляемый в реакции агглютинации. Таксономическим критерием для лептоспир служит антигенный состав. Основным таксо­ном является серовар.Серовары объединены в серогруппы (насчитывается более 25 серогрупп).

Резистентность.L. interrhogans чувствитель­на к высыханию, нагреванию, низким зна­чениям рН, дезинфицирующим веществам. При нагревании до 56С погибает в течение 25—30 мин. Кипячение убивает микроб мгно­венно.

Эпидемиология.Лептоспироз относится к природно-очаговым зоонозам, с преимущес­твенно фекально-оральным механизмом пе­редачи возбудителя. Основным резервуаром и источником инфекции служат домовые и полевые грызуны, дополнительными — до­машние животные. У диких животных инфек­ция имеет хроническое течение без клини­ческих проявлений, при этом возбудитель выделяется с мочой, загрязняя водоемы и почву. Каждый из сероваров циркулирует в популяции определенного вида животного и является самостоятельным возбудителем заболевания. Восприимчивость людей к лептоспирозу высокая, но больной человек, хотя и выделяет лептоспиры в окружающую среду не имеет практического значения в распро­странении заболевания. Основные пути пе­редачи: водный, алиментарный, контактный.

Факторы патогенности.Некоторые серовары характеризуются гемолитической и липазной активностью, продуцируют плазмокоагулазу, фибринолизин, цитотоксины.

Патогенез и клиника заболевания.острая инфекционная бо­лезнь, которая вызывается различными сероварами. Инкубационный период составляет 7—10 дней. Входные ворота — слизистые оболочки пищеварительного тракта, поврежденная ко­жа. Проникнув в организм, микроб с кровью разносится к органам ретикулоэндотелиальной системы (печень, почки), где размножа­ется и вторично поступает в кровь, что совпа­дает с началом болезни.

Возбудитель поражает капилляры печени, почек, ЦНС, что приводит к развитию гемор­рагии в этих органах. Болезнь протекает остро, с явлениями волнообразной лихорадки, ин­токсикации, с желтухой, развитием почечной недостаточности, асептического менингита.

Иммунитет:Стойкий, гуморальный, серовароспецифический иммунитет.

Микробиологическая диагностика. Материа­лом для исследования служат кровь, спин­номозговая жидкость, моча, сыворотка кро­ви в зависимости от стадии заболевания. Для диагностики используют бактериоскопический (обнаружение лептоспир в темнопольном микроскопе), бактериологический и серологи­ческие методы (РА, РСК), а также применяют ПЦР. Биопробу на кроликах.

Профилактика и лечение.Специфическая про­филактика проводится вакцинацией по эпиде­мическим показаниям убитой нагреванием, кор­пускулярной вакциной, содержащей 4 основных серогруппы возбудителя. Для лечения исполь­зуют антибиотики (пенициллин, тетрациклин) в сочетании с лептоспирозным гетерологичным иммуноглобулином.

Возбудители бореллиозов. Таксономия и характеристика. Микробиологическая

Диагностика.

Спирохеты рода Borrelia вызывают антропонозные (возвратный тиф), зоонозные (болезни Лайма) инфекционные болезни с трансмиссивным механизмом передачи воз­будителей (клещи, вши).

Морфологические свойства: тонкие спи­рохеты с крупными завитками. Двигательный аппарат представлен фибриллами. Они хоро­шо воспринимают анилиновые красители, по Романовскому—Гимзе окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Боррелии обладают генетическим аппаратом, который состоит из небольших размеров линейной хромосомы и набора циркулярных и линей­ных плазмид.

Культуральные свойства: культивируются на сложных питательных средах, со­держащих сыворотку, тканевые экстра­кты, а также в куриных эмбрионах.

Чувствительны к высыханию и нагреванию. Устойчивы к низким t-рам.

Болезнь Лайма - возбудитель В. burgdorferi. Хроническая инфекция с поражением кожи, сердечной и нервной систем, суставов.

Морфология и культуральные свойства:типичные боррелии.

Антигенная структура: Сложная. Белковые антигены фибрил­лярного аппарата и цитоплазматического цилиндра, антитела к которым появля­ются на ранних этапах инфекции. Протективную активность имеют антигены, представленные липидмодифицированными интегральными белками наружной мембраны А, В, С, D, E, F.

Факторы патогенности.Липидмодифицированные белки наружной мембраны обеспе­чивают способность боррелий прикрепляться и проникать в клетки хозяина. В результате взаимодействия боррелий с макрофагами про­исходит выделение ИЛ-1, который индуци­рует воспалительный процесс.

Патогенез: На месте укуса клеща образуется красная папула. Воз­будитель распространяется из места укуса через окружающую кожу с последующей диссеминацией с током крови к различным органам, особенно сердцу, ЦНС, суставам. Клиника подразделяется на 3 стадии:

1.Мигрирующая эритема, которая сопро­вождается развитием гриппоподобного симптомокомплекса.

2.Развитие доброкачественных поражений сердца и ЦНС

3.Развитие артритов крупных суставов

Иммунитет.Гуморальный, видоспецифический к антигенам клеточной стенки.

Микробиологическая диагностика.Исполь­зуются бактериоскопический, серологичес­кий методы и ПЦР в зависимости от стадии заболевания. Материалом для исследования служат биоптаты кожи, синовиальная жид­кость

суставов, ликвор, сыворотка крови. На 1-й стадии заболевания проводится бактери­ологическое исследование биоптатов кожи из эритемы.

Начиная со 2-й стадии заболевания осу­ществляется серологическое исследование определением IgM или нарастания титра IgG ИФА или РИФ.

ПЦР используется для определения наличия боррелий в ликворе, суставной жидкости.

Лечение: антибиотики тетрациклинового ряда.

Возвратные тифы — группа острых инфек­ционных заболеваний, вызываемых боррелиями, характеризующихся острым нача­лом, приступообразной лихорадкой, общей интоксикацией. Различают эпидемический и эндемический возвратные тифы.

Возбудителем эпидемического возвратного тифа является В. recurrentis.

Эпидемический возвратный тиф - антропоноз. Специфические пе­реносчики - платяная, головная вши. Человек заражается возврат­ным тифом при втирании гемолимфы раздав­ленных вшей в кожу при расчесывания места укуса.

Эндемический возвратный тиф— зооноз. Возбудители - В. duttoni и В. persica. Резервуар - грызуны, клещи. Человек заражается через укусы клещей.

Патогенез:Попав во внутреннюю среду организма, боррелии внедряются в клет­ки лимфоидно-макрофагальной системы, где размножаются и поступают в кровь, вызывая лихорадку, головную боль, озноб. Взаимодействуя с АТ, боррелии образуют агрегаты, которые нагружаются тромбоцитами, вызывая заку­порку капилляров, следствием чего являет­ся нарушение кровообращения в органах.

Иммунитет: к эпидемическому возвратному тифу гуморальный, непродол­жительный.

Микробиологическая диагностика. Бактериоскопический метод — обнару­жение возбудителя в крови, ок­рашенной по Романовскому—Гимзе. Биопробу ставят для дифференциации В. recurrentis от возбуди­телей эндемического возвратного тифа.В качестве вспомога­тельного используют серологический метод с постановкой РСК.

Лечение: антибиотики тетрациклинового ряда, левомицетин, ампициллин.

Роль условно-патогенных микроорганизмов в возникновении внутренних инфекций. Клиническая микробиология, ее задачи. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами.

Внутрибольничная инфекция — это инфекция, зара­жение которой происходит в больничных учреждениях: наслаиваясь на основное за­болевание, она утяжеляет клиническое те­чение болезни, затрудняет диагностику и лечение, ухудшает прогноз и исход заболе­вания, нередко приводя к смерти больного.

Внутрибольничная инфекция (ВБИ) явля­ется одной из форм ятрогенных, т. е. связан­ных с медицинскими вмешательствами, за­болеваний. Возбудителями ВБИмогут быть патогенные микробы, например, в случаях госпитализации инфекционного больного в соматические отделения, неправильной или несовершенной изоляции больных в инфекционных отделениях, заноса возбу­дителей в больницы посетителями во время эпидемий.

Клиническая микробиология — это раздел медицинской микробиологии, изучающий взаимоотношения, складывающиеся между макро- и микроорганизмами в норме, при патологии, в динамике воспалительного процесса с учетом проводимой терапии до констатации клиницистом состояния кли­нического или полного выздоровления.

Задачи клинической микробиологии близки к тем задачам, которые стоят перед медицинс­кой микробиологией. Их специфика определя­ется лишь тем, что клиническая микробиоло­гия исследует одну группу микробов— УПМ, одну группу заболеваний — оппортунистичес­кие инфекции и одну антропогенную экосис­тему — больничные учреждения.

Исходя из этого, задачами клинической микробиологии являются:

1. Изучение биологии и роли УПМ в этио­логии и патогенезе ГВЗ человека.

2. Разработка и использование методов микробиологической диагностики, специфи­ческой терапии и профилактики микробных заболеваний, встречающихся в неинфекци­онных стационарах.

3. Исследование микробиологических ас­пектов проблем ВБИ, дисбактериоза, лекарс­твенной устойчивости микробов.

4. Микробиологическое обоснование и контроль за антимикробными мероприятия­ми в больничных стационарах.

Лептоспироз — инфекционная природно-очаговая болезнь жи­вотных и человека, характеризующаяся кратковременной лихо­радкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Болезнь может протекать бессимптомно.

По актуальности, эпидемиологической значимости и экономическому ущербу лептоспироз стоит в одном ряду с туберкулезом и бруцеллезом впереди пастереллеза, сибирской язвы, листериоза, эмкара и др

Именно поэтому проблема, рассмотренная в данной работе, является актуальной.

Объектом данной работы является возбудитель лептоспироза, предметом – характеристика болезни; характеристика возбудителя; биопрепараты и иммунитет.

Целью данной работы является изучение болезни, которую вызывает возбудитель, рассмотрение его свойств и изучение средств специфической профилактики.

Для достижения цели мы изучили механизм развития и клинические признаки болезни. Подробно рассмотрели морфологию, культуральные свойства, биохимические свойства, антигенную структуру, токсинообразование и устойчивость возбудителя. Проанализировали целесообразность применения биопрепаратов и формирование иммунитета.

Данная работа написана на основе теоретических, методических и публицестических материалов.

Патогенность. К лептоспирозу наиболее восприимчивы круп­ный рогатый скот (серогруппы L. Pomona и L. Hebdomadis), свиньи (серогруппы L.Pomona и L. Tarassovi), овцы, лисицы, песцы, ме­нее—лошади, козы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры. Болеет и человек. Основные носители лептоспир в природных очагах: серые и водяные полевки, ондатры, серые кры­сы, домовые мыши, землеройки.[приложение 1]

К экспериментальному заражению наиболее чувствительны зо­лотистые хомяки, крольчата-сосуны и молодые морские свинки.

Патогенез. Входными воротами возбудителя являются повреж­денные кожа и слизистые оболочки. Патогенные лептоспиры бла­годаря активной подвижности преодолевают защитные барьеры организма и быстро проникают в кровь. Через 12 ч после зараже­ния их обнаруживают в печени. Затем наступает генерализация инфекции (бактеремия), размножение и накопление лептоспир в печени, почках, надпочечниках, селезенке, легких, появляется ли­хорадка. К этому времени образуются антитела. Они инактивиру­ют лептоспиры, и происходит их элиминация из крови и паренхи­матозных органов. В почечных же клубочках и канальцах лептос­пиры недоступны воздействию антител, где они активно размно­жаются и выделяются с мочой.[8]

Лизис лептоспир сопровождается накоплением токсических веществ, под действием которых повышается проницаемость со­судов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, раз­виваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Ток­сикоз может привести к гибели животного.[приложение 2]

Клиническая картина. Инкубационный период обычно продол­жается 7—10 дней, заболевание — 5—6 нед. Болезнь, как пра­вило, начинается остро, температура тела повышается до 39— 40 "С, появляются головная боль, резкие боли в мышцах, осо­бенно в икроножных. В зависимости от поражения тех или иных органов появляются симптомы их повреждения: почечная недо­статочность, желтуха и др. Характерна волнообразная лихорадка. Клинические формы лептоспироза различны — от легких до тяжелейших, приводящих к смерти.

2. 1 Материал для исследования

Материалом для исследования слу­жат: кровь (лучше брать на 3. 5 сутки болезни при повышенной температуре тела), моча, кусочки паренхиматозных органов, поч­ка, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод. Патологический материал отбирают не позже 2 ч после гибели животного. Мочу собирают при естественном мочеиспускании; в летнее время исследуется не позднее 3 ч после взятия.

Выделение культур. Материал засевают по 1. 3 кап­ли в 3. 5 пробирок со специальной питательной средой и инкуби­руют при 28. 30°С в течение З мес. Лептоспиры начинают раз­множаться через 7. 20 сут, иногда через 1. 2 и очень редко — 3 мес. Наличие роста определяют темнопольной микроскопией раздавленных капель на 3, 5, 7, 10-е сутки и далее через каждые 5 сут. При обнаружении размножения лептоспир делают пересев в 3. 5 пробирок со свежей средой. Выделить культуры лептоспир удается не всегда.[4]

Биологическая проба. Метод более чувствительный, чем культуральный; проводится с целью выделения и очистки культур лептоспир, определения их вирулентности и дифферен­циации от сапрофитов.

Заражают 20. 30-суточных золотистых хомяков и крольчат-со­сунов в возрасте 10. 20 сут. Каждую пробу испытывают на двух животных; на 4. 5-е сутки убивают первого, на 14. 16-е сутки — второго, если оно не погибло раньше. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы. Сыворотку крови убитого через 14. 16 сут животного исследуют в реакции микроаг­глютинации (РМА) с лептоспирами 13 серогрупп. Положительная РМА в разведении 1:10 и выше указывает на наличие лептоспир в исследуемом материале.

Серологическое исследование. Для серологи­ческой диагностики лептоспироза используют РМА и реакцию аг­глютинации (РА). Пробы крови берут на 5. 7-е сутки болезни и при необходимости повторно через 7. 10 сут. Следует учитывать, что антитела в крови у выздоровевших животных могут сохранять­ся до двух лет и более.

РА ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят каплю разведенной 1:100 исследуемой сыворотки и добавляют равное ко­личество антигена. Лептоспирозные антигены для РА выпускают шести серогрупп (для каждой отдельно), представляющие собой концентрированную взвесь лептоспир в альбуминовой питатель­ной среде. При наличии в сыворотке специфических антител на­ступает агглютинация. Оценка результатов производится в крестах по 4-балльной системе. Положительной считают реакцию два кре­ста и выше, сомнительной — один крест. Для выявления лепто­спир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве предложен иммунофлюоресцент-ный метод.[9]

Лептоспиры — спиралевидные бактерии диамет­ром 0,1. 0,25 мкм и длиной от 6. 15 до З0 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и 1. 2 вто­ричных, придающих клетке форму букв Г, S, С. Осевая нить со­стоит из двух фибрилл. В темном поле они имеют вид тонких се­ребристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами [приложение 3]. У клеток некоторых штаммов концы прямые (бескрючковые лептоспиры).

Для лептоспир характерна активная подвижность, наиболее ча­стый тип движения — вращательно-поступательный. Спор не об­разуют. Грамотрицательные, плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому—Гимзе — в красный цвет, фиксация мазка существенно изменяет их мор­фологию; используют также метод имп­регнации серебром по Левадити.[1]

2. 3 Культуральные свойства микроорганизма

Лептоспиры — хемоорганотрофные факультативно-анаэроб­ные бактерии. Культивируют их в аэроб­ных условиях при 28. 30°С на специаль­ных средах, содержащих 5. 10 % сыворот­ки крови кролика или овцы, дистиллиро­ванную, водопроводную, колодезную во­ду или фосфатный буфер (рН 7,2. 7,6): среды Уленгута, Терских, Ферворта—Воль­фа, Любашенко и др. Рост лептоспир обыч­но проявляется через 7. 20сут, иногда 1. 2 мес. Среда при этом не изменяется.

Среда Уленгута. Готовят ее из водопроводной воды (рН 7,2— 7,3), стерилизуют дробно текучим паром. К 10 объемным частям во­ды добавляют 1 часть стерильной сыворотки крови лошади или кро­лика, смешивают, разливают асептически в пробирки по 3 мл и за­ливают 1 мл стерильного жидкого парафина.[6]

Среда Ферворта — Вольфа (модификация С. И. Тарасова)

900 см 3 дистиллированной воды смешивают с 0,5 г натрия хло­рида, 1 г пептона Дифко или Витте, 100 см 3 концентрированного раствора фосфатного буфера (рН 7,2). Смесь в колбе автоклавиру-ют при 105 ± 1 0С в течение 30 мин. На следующий день ее дважды фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки по 5 см 3 и снова автоклавируют 30 мин при 120 ± 1 0С. В пробирки с прозрачной средой добавляют по 0,5 см 3 кроличьей сыворотки и прогревают на водяной бане при 56—58 °С в течение 30 мин.

Для проверки на стерильность пробирки со средой выдержива­ют в термостате 3—5 сут при 37 °С.[3]

Среда Любашенко. Фильтрованную через бумажный фильтр нехлорированную водопроводную воду (или колодезную, речную) стерилизуют в автоклаве при 1 атм 30 мин, охлаждают, устанавли­вают рН 7,3—7,4, добавляют 5 % сыворотки крови кролика или барана, прогретой при 56 °С в течение I ч. Затем среду пропускают через фильтрующие пластины СФ в фильтре Зейтца и асептически (в боксе) разливают в пробирки. Для контроля стерильности среды пробирки помещают в термостат при 37 0 С на 48 ч.

На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) образуют колонии S-, О- и R-форм. S-форма — типичная для патогенных штаммов, ее коло­нии прозрачные, в виде диска с ровным краем.

2. 4 Биохимические свойства

Изучены недостаточно. Способность ферментировать углеводы отсутствует; образуют каталазу, оксидазу, липазу и другие ферменты.[2]

2. 5 Антигенная структура

Лептоспиры обладают белковым сомати­ческим антигеном, определяющим их видовую специфичность. Поверхностные полисахаридные антигены служат критериями групповой и серовариантной дифференциации. Антигенные свой­ства лептоспир изучают в реакции микроагглютинации и методом иммуноадсорбционного анализа.

2. 6 Токсинообразование

Истинный экзотоксин лептоспиры не синтезируют. Они образуют эндотоксин и патогенные ферменты: гемолизин, фибринолизин, плазмокоагулазы, гиалуронидазы, ли­пазы, лецитиназу, которые выделяются в результате лизиса леп­тоспир. Патогенностью обладают свежевыделенные штаммы леп­тоспир; при культивировании на питательных средах это свойство относительно быстро теряется.

2. 7 Устойчивость

Резистентность лептоспир к физическим и химическим средствам соответствует устойчивости вегетативных форм бактерий. Лептоспиры — типичные гидробионты. В воде рек и озер сохраняются до 200 дней, в сточных водах — до 10 дней, в навозной жиже — 24 ч, во влажной почве с нейтральной или слабощелочной реакцией — до 279 дней, но быстро (0,5-2,5 ч) погибают в сухой почве.

В моче крупного рогатого скота, свиней и грызунов они сохраняются от 4 ч до 6-7 дней в мышечной ткани – 48 ч; в свежем молоке — 8. 24 ч; в почках убойных животных при 0. 4 °С — до 28 сут; в замороженном мясе погибают через 10 сут. Чувствительны к действию поваренной соли: в засоленном (4,8 % NaCl) мясе крупного рогатого скота погибают через 10 сут; в гипертоническом растворе поваренной соли (2,8 %) — через 15 мин.[7]

При кипячении погибают моментально, при 56. 58 0 С — в те­чение 25. 30 мин. Быстро гибнут при высушивании и под воздей­ствием прямого солнечного света. Низкие температуры консервируют лептоспир. Растворы (0,1%-й соляной кис­лоты, 0,5%-й фенола) инактивируют лептоспиры за 20 мин. Лептоспиры чувствительны также к некоторым антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам.

После переболевания у животных формируется длительный и напряженный иммунитет. Он характеризуется серовариантной специфичностью, поэтому возможны реинфекции. Ведущее значение в невосприим­чивости к лептоспирозу принадлежит антителам, и особенно IgG. Сыворотки иммунных животных обладают превентивными свой­ствами. Отмечается также длительное лептоспироносительство и вследствие этого инфекционный иммунитет.

Вакцинацию коров проводят за 1,5. 4мес, овец и свинома­ток—за 1,5. 2 мес до родов, колостральный иммунитет продол­жается у телят до 2,5 мес, у ягнят и поросят до 3 нед.

Для активной иммунизации применяют депонированную по­ливалентную вакцину ВГНКИ против лептоспироза животных. Вакцину выпускают в двух вариантах: первый — из штаммов леп­тоспир серогрупп помона, тарассови, иктерогеморрагия и каникола, второй — из серогрупп помона, тарассови, гриппотифоза и че­тырех сероваров группы гебдомадис. Иммунитет после вакцина­ции наступает через 14. 20 сут и длится у молодняка до 6 мес, у взрослых животных — до одного года.

Для пассивной иммунизации и лечения больных животных ис­пользуют гипериммунную сыворотку против лептоспироза сельс­кохозяйственных и промысловых животных, которую получают из крови волов-продуцентов, иммунизированных культурами лептослир. Иммунитет у животных, привитых сывороткой, сохраня­ется 10—14 сут.[10]

Лептоспироз — инфекционная, природно-очаговая, нетрансмиссивная болезнь многих видов животных, в том чис­ле птиц, проявляющаяся кратковременной лихорадкой, гемоглобинурией, желтушным окрашиванием и некрозами слизистых оболо­чек и кожи, атонией желудочно-кишечного тракта, абортами, мас­титами, рождением нежизнеспособного потомства, снижением про­дуктивности животных или протекающая бессимптомно, К лептоспирозу восприимчив и человек.

В темном поле микроскопа лептоспиры имеют вид тонких серебристых нитей с загнутыми концами, обладающих разными движениями. Лептоспир выращивают на жидких, полужидких и плотных питательных средах. Наилучшие условия для культивирования - температура 26-28 °С и рН 7,2-7,4. Факторами патогенности лептоспир являются экзо- и эндотоксины (обусловливающие гемолитическое и цитотоксическое воздействие возбудителя на макроорганизм), плазмокоагулаза, липаза, фибринолитический фермент, эстераза и др.

Лептоспиры весьма устойчивы к различным физическим и химическим факторам.

После переболевания у животных формируется длительный и напряжённый иммунитет. Существуют различные средства иммунизации путём применения поливалентной вакцины или гипериммунной сыворотки.

Рис 1 Пути распространения лептоспироза: непрерывная стрел­ка— постоянная связь; пунктирная стрелка —непостоянная связь. Заштрихованы животные-лептоспироносители

Рис. 2 Лептоспиры. Микроскопия в тёмном поле.

Рис. 3 Некроз кожи при хроническом течении лептоспироза