Мониторинг по африканской чуме свиней

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

Отбор проб для вирусологических исследований. Для обнаружения вируса африканской чумы свиней, антигена или генома от павших или убитых с диагностической целью свиней отбирают массой 5-10 г - селезёнку (1/3 часть), портальные, желудочные и подчелюстные (или мезентериальные) лимфоузлы (целиком), лёгкое (5х5 см) и почку (1/3 часть), 3-5 мл крови (или сгусток). Кроме того, рекомендуется в случае аутолизиса трупа отбирать грудинную или трубчатую кость.

Отбор проб для серологических исследований. Минимальное количество проб, которые должны быть отобраны для серологических исследований, рассчитывают с учётом 10%-ой серопревалентности заболевших с 95%ой достоверностью для обследования каждого помещения.

Пробы крови отбирают их полой вены не менее 10 мл от каждой свиньи [3].

Для лабораторных исследований применяют следующие методы: реакцию гемадсорбции (РГАд) в культурах клеток, реакцию прямой иммунофлюоресценции (РПИФ), полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в формате электофорезной детекции, ПЦР в формате реального времени, применяют твёрдофазный иммуноферментный анализ (ТФ – ИФА) (сэндвич-вариант). В сомнительных случаях окончательный диагноз устанавливают заражением подозрительным материалом (кровь, суспензия селезенки и лимфатических узлов) свиней, вакцинированных против классической чумы. Заражение свиней (биопроба) проводят в специализированной лаборатории с соблюдением особых мер предосторожности. Серологические типы вируса определяют в реакции преципитации (РП), реакции связывания комплемента (РСК), реакции задержки геамадсорбции (РЗГАд) и другими методами. [2]

Реакция прямой иммунофлуоресценции (РПИФ) ставят в вирусологических лабораториях для прямого обнаружения вирусного антигена в клетках органов свиней, подозреваемых в заражении вирусом африканской чумы свиней. Внутриклеточный антиген обнаруживают люминесцентной микроскопией препаратов мазков-отпечатков, окрашенных ФИТЦ-иммуноглобулинами (специфические антитела к вирусу африканской чумы свиней, меченные флуоресцеинизотиацианатом). Лучшими органами для РПИФ являются селезёнка и лимфоузлы. Исследование может быть выполнено в течение 2-4 час [2].

Оценку результатов микроскопии проводят по условной четырех крестовой шкале при окуляре 10х20-объективе 10. В положительных случаях наблюдают сверкающую, желто-зеленого цвета флуоресценцию клеток с включениями или очаговыми флуоресцирующими комплексами диффузного и гранулярного антигена, в одном из 10-50 полей зрения.

При визуальном учёте реакцию считают положительной при окрашивании хромогенного субстратного раствора в лунках, в которых предварительно инкубировали исследуемые и специфический антиген в сине-зеленый цвет и отсутствии окрашивания субстрата в лунках, в которых предварительно инкубировали нормальный антиген.

Анализ по выявлению вируса АЧС включает выделение ДНК и амплификации специфического фрагмента в полимеразной цепной реакции и электрофорез в агарозном геле [3].

Реакция считается положительной, если полоса в соответствующем треке располагается в геле точно на таком же расстоянии от старта, что и полоса положительного контроля амплификации. Размер апликонов после проведения ПЦР- 485 п.н.

Реакция считается отрицательной, если в соответствующих треках полос не обнаружено или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом расстоянии от старта) [4].

Для обнаружения антигена вируса африканской чумы свиней применяют ПЦР в формате реального времени. Реакции заключается в использовании специфического флюоресцентно-меченного зонда, сайт гибридизации которого лежит между сайтами связывания основных диагностических праймеров. В случае присутствия в исследуемом образце генома возбудителя, зонд будет связываться с его ДНК и прибор регистрирует накопление флуоресцентного сигнала в ходе реакции. Регистрация сигнала происходит через стенки пробирки в режиме реального времени [1].

Учёт результатов проводят по анализу кривых накопления флуоресцентного сигнала по каналу FAM с помощью программного обеспечения используемого прибора.

Положительными считают результаты реакции при значениях Ct, не превышающих 35.

Образцы, для которых не определено значение Ct (кривая флуоресценции не пересекает пороговую линию) – результаты считают отрицательными [4].

Белоусова Л.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии. М.: КолосС, 2006. — 248 с [Текст] с.131-140.

Госманов Р.Г., Колычев Н.М. Ветеринарная вирусология М.: KoлoсC, 2006. — З04 c. [Текст] с.151-153.

Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, А.А., Е.С. Воронин и др.; Под ред. А.А. Сидорчука. - М.: Колосс, 2007.-671с [Текст] с.206-275.

Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Черных О.Ю., Шевкопляс В.Н. Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных. Учебное пособие. Краснодар. – 2009. – 575 С. [Текст] с.340-402

Памятка для охотников

Осуществление мониторинга распространения африканской чумы свиней у кабанов.

В связи с возникновением угрозы распространения вируса африканской чумы свиней на территории Республики Карелия, в целях мониторинга эпизоотической обстановки и усиления контроля за возможным распространением и циркуляцией вируса африканской чумы свиней, необходимо:

сдавать образцы биоматериалов (селезенка, трубчатая кость, в случае отсутствия селезенки) от всех добытых и погибших кабанов на исследования в ветеринарные службы; вести мониторинг на несанкционированных свалках по своевременному обнаружению трупов павших животных, продукции забоя животных, пищевых отходов; регулярно проводить обследование охотничьего угодья с целью выявления павших животных, в том числе в районе свалок и населенных пунктов; при обнаружении трупов павших кабанов в охотничьих угодьях немедленно оповещать специалистов отдела государственного контроля и надзора управления охотничьего хозяйства; контролировать место происхождения кормов для подкормки, а также наличие необходимой ветеринарно-сопроводительной документации на корма; оказывать необходимое содействие специалистам Министерства сельского, рыбного и охотничьего хозяйства Республики Карелия при проведении мероприятий, связанных с предотвращением возникновения и распространения заболеваний.

Необходимо обратить особое внимание и предпринять необходимые меры по контролю за обнаружением павших диких кабанов и несанкционированных выбросов трупов домашних свиней в лесных массивах после таяния снега, своевременно уведомлять о выявленных фактах.

Обо всех случаях заболевания и падежа свиней на фермах и личных подворьях граждан, а также в случаях обнаружения трупов кабанов или неутилизированных трупов свиней необходимо немедленно сообщить в государственные ветеринарные учреждения по зонам обслуживания и в отдел охотничьего хозяйства 8(814-2)76-92-41, 8-9212220525.

Правила отбора и доставки проб биологического (патологического) материала

для исследования на африканскую чуму свиней (АЧС)

С целью мониторинга эпизоотической ситуации по АЧС пробы патологического материала от добытых, больных и павших кабанов направляют в ветеринарную лабораторию или близлежащие государственные районные ветеринарные станции по борьбе с болезнями животных.

Для проведения исследований от добытых кабанов берут пробы органов и тканей: лимфатические узлы целиком (подчелюстные, печёночные, брыжеечные), часть селезенки массой 5-10 гр.(1/3 часть), часть легкого (5x5 см), часть почки (1/3 часть). Пробы берут не позднее, чем через 10 часов после добычи.

В случае обнаружения трупа кабана в состоянии аутолизиса (разложения), отбирают грудную или трубчатую кость.

Каждую пробу, взятую от добытого или павшего кабана помещают в отдельный полиэтиленовый пакет, который герметично закрывают. На внешней стороне пакета указывают номер пробы, который должен соответствовать номеру, указанному в сопроводительном документе.

Материал от каждого животного отбирают отдельным стерильным инструментом.

Пробы обертывают марлей, смоченной дезинфицирующими растворами (5% раствоором хлорамина или осветленным 20% раствором хлорной извести и др.) и укладывают в полиэтиленовый пакет.

Пакеты с пробами помещают в герметичный контейнер с охладителем или пакетом со льдом.

Пробы органов хранят и транспортируют в термосе при температуре 4-8 С, не более 24 часов после отбора. При длительном хранении пробы замораживают.

На содержимое контейнера составляют сопроводительное письмо, в котором указывается:

Адрес и телефон охотника

Вид животного (кабан)

Вид исследования, название заболевания. (АЧС)

Вид направляемого материала

Место отстрела кабана или обнаружения трупа кабана.

Координаты направляющего лица, организации

Правила отбора проб мехового и кожевенного сырья

для проведения радиологического исследования

Согласно методическим указаниям по отбору проб для проведения радиологических исследований пушно-мехового, шубно-мехового и кожевенного сырья от каждой шкурки (шкуры медведя) отрезают полоски по периметру, преимущественно от пашины (область паха).

Количество средней пробы необходимой для проведения исследования для шкур мокрого посола не менее 400 грамм.

В сопроводительном документе на доставленный материал указываются следующие данные: наименование и адрес отправителя; наименование материала; район отстрела; номер разрешения на добычу и дата его выдачи.

Правила отбора проб для проведения исследований на трихинеллёз

Трихинеллезом болеют свиньи, кабаны, медведи, другие всеядные и плотоядные (собаки, волки, лисы), морские млекопитающие (киты, тюлени, моржи), насекомоядные, грызуны и другие животные.

Для исследования отбираются пробы из ножек диафрагмы (на границе перехода мышечной ткани в сухожилие), при отсутствии - части межреберных, шейных, жевательных, поясничных, икроножных мышц, сгибателей и разгибателей пясти, а также мышцы языка, пищевода и гортани; от туш морских млекопитающих - мышцы языка и глаза.

Масса пробы от каждой группы мышц должна быть не менее 5 г, а общая масса пробы от одного животного должна составлять не менее 25 г.

Пробы упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора с сопроводительным документом, который составляется специалистами государственной районной ветеринарной службы, где был произведен отстрел.

Правила отбора проб для проведения исследований материала на бешенство

Бешенство - заразная неизлечимая болезнь. Бешенством могут болеть все теплокровные животные, птицы, а также люди. Из диких животных переносчиками заболевания являются волки, лисицы, енотовидные собаки, барсуки.

Во избежание заражения человека вирусом бешенства запрещено снимать шкуру с диких животных, найденных мёртвыми, а так же с тех, которые до отстрела отличались необычным поведением.

При обнаружении в лесу трупа дикого или домашнего животного необходимо сообщить в государственную ветеринарную службу района.

Для исследования на бешенство в ветеринарную лабораторию направляют с нарочным свежий труп (мелкое животное) или голову от животного, тщательно упакованную в водонепроницаемую тару (мешок из полимерных материалов).

Патологический материал сопровождают документом, содержащим следующие данные: наименование и адрес отправителя; вид животного; район отстрела или место обнаружения трупа ; дату и время отстрела или обнаружения трупа.

Отделение головы от трупа проводят в резиновых перчатках, исключив возможность попадания мозга, слюны, крови на обувь и одежду. В дальнейшем перчатки необходимо сжечь, руки тщательно вымыть с мылом. Провести обработку одежды (стирка при температуре 60 градусов в течение 15 минут) и обуви (в 1% растворе перманганата калия 30 минут).

Охотники в зонах эпизоотий бешенства должны пользоваться резиновыми перчатками и в тех случаях, когда снимают шкуры диких животных, у которых не наблюдалось никаких подозрительных симптомов заболевания, при снятии шкуры животного не допускать повреждения кожных покровов рук.

Материал от животных (голова, труп), добытых на охоте или обнаруженных в лесу, в кратчайшее время направляют в ближайшую ветеринарную лабораторию:

г. Петрозаводск, Шуйское шоссе д.26, т. (8142) 70-20-69; 70-20-67

При отсутствии в районе ветеринарной лаборатории, материал доставляют в государственное районное или городское ветеринарное учреждение.

В случае нападения животного на человека (укусе, оцарапывании, ослюнении) необходимо немедленно обращаться за медицинской помощью в травмпункт или другое медицинское учреждение.

ВАЖНАЯ ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ СХТП

«Конкретно сказать, откуда взялся вирус АЧС на территории области, нельзя. Можно только предполагать, либо это дикая фауна занесла данный вирус, либо был завоз зараженного объекта. Дело в том, что в естественных условиях переносчиками являются кровососущие насекомые, хищные птицы, а также звери. Если говорить о естественном заражении, то оно происходит при контакте здоровых свиней с больными, а так же с вирусоносителями. Вариантов может быть масса.

Данная болезнь – вирусная. Она характеризуется лихорадкой, синюшностью кожи, а так же обширными кровоизлияниями во внутренних органах. Сама опасность ее в том, что летальность при заболевании достигает 100%. Следует так же отметить, что для человека опасности как таковой болезнь не представляет…

Возбудителем заболевания является вирус, который обладает большой устойчивостью и вирулентностью (способностью вызывать болезнь). Во внешней среде, продуктах убоя больных свиней, а так же в почве, он может сохраняться до 6 месяцев. Что касается клещей, которые являются переносчиками данного вируса, то в их организме данное заболевание сохраняется до 15 лет. Вакцина на сегодняшний день не разработана.

На сегодняшний день в Ростовской области насчитывается 25 неблагоприятных пунктов по африканской чуме свиней. Ввиду сложившейся ситуации, Управлением Россельхознадзора по Ростовской области в целях предупреждения дальнейшего распространения африканской чумы свиней, а так же скорейшей ликвидации ее на территории Ростовской области, в очередной раз, хочу подчеркнуть, предлагается ряд необходимых, на наш взгляд, мероприятий.

А конкретно, необходимо продолжить мониторинг АЧС по всем населенным пунктам Ростовской области, а так же организовать отбор проб патологического материала павших свиней, в том числе при обнаружении у владельцев, на скотомогильниках, а так же на свалках. Весь падеж свиней, как у населения, так и в хозяйствах пропускать через исследования на африканскую чуму свиней. Помимо этого, на наш взгляд, необходимо организовать отбор и доставку проб биоматериала при проведении санитарно-ветеринарной экспертизы на обрабатывающих предприятиях при подозрении на АЧС. Кроме этого необходимо организовать клиническое наблюдение и пересчет поголовья во всех, подчеркиваю – во всех, населенных пунктах области. Не только там, где выявлен вирус, но и во всех для того, чтобы если вдруг вспышка произойдет еще в одном районе области, мы уже имели достоверные данные о том поголовье, которое находится сейчас в данном районе.

Помимо этого по результатам мониторинга необходимо провести регионализацию зараженной африканской чумой свиней зоны и определиться с дальнейшим проведением карантинно-ограничительных мероприятий. Так же необходимо провести проверки мясоперерабатывающих предприятий на предмет выявления поступления сырья без ветеринарных документов. Так же провести проверку хозяйствующих субъектов, занимающихся разведением и содержанием свинопоголовья.

Я поясню данный пункт. Дело в том, что в связи с законодательством РФ, Россельхознадзор имеет право не чаще, чем раз в три года проводить проверки поднадзорных ему организаций. В связи со сложившейся ситуацией, сложной ситуацией по АЧС в области, мы предлагаем хотя бы раз в квартал проводить данные проверки непосредственно в свинокомплексах для того, чтобы не допустить дальнейшего распространения вируса на территории области.

- Вы все эти пункты высказываете в каком-то предположительном тоне. Почему? Ведь, допустим, в штатах, когда что-то такое случается, главным командиром всех, начиная от МЧС, армии, которая ограничивает и не пускает, становится именно ветеринарный врач?

- Дело в том, что ветеринарный врач относится к другой от нас организации, это Управление Ветеринарией, так называемая субъектовая служба. Россельхознадзор – это надзорный карательный орган. Мы только надзираем и соответственно делаем какие-то выводы, и вносим предложения. Что касается ветеринарного врача, то да, действительно, вы абсолютно правы, но это вопрос скорее всего к этой организации – Управление Ветеринарией по Ростовской области.

- Дальше вопрос касаемо проверки мясоперерабатывающих предприятий. Понятное дело, что коль скоро зараженное мясо было обнаружено на Северо-Западе, стало быть, каким-то образом это мясо было быстренько продано, как только было обнаружено заражение вот этой самой болезнью?

- Я так понимаю, вы говорите об очаге, который был в Ленинградской области. Дело в том, что точно не было известно, откуда было завезено, но как предположение, да, может быть. Но это совершенно не факт, что данный зараженный объект был вывезен из зоны карантина, которые сейчас существуют в области. Дело в том, что мы как раз об этом и говорим для того, чтобы предостеречь вывоз зараженного мяса. Да, сейчас понятно, ограничения на область ввели и вывоз свиней и иной свиноводческой продукции - запрещен. Вполне возможно, что это было сделано каким-то не легальным способом.

Вот именно поэтому мы говорим, что необходимо сделать мониторинг АЧС по всем населенным пунктам Ростовской области. Не только в районах, где уже зарегистрированы очаги инфекции, но также по всем для того, чтобы понять, где у нас благополучное состояние, а где нет.

- Эта беда в очередной раз обнаруживает то, что у нас нет практически сведений о своем собственном сельском хозяйстве. Мы не знаем, сколько свиней в хозяйствах населения?

- На счет того есть ли у нас сведения о сельском хозяйстве, я ответить не могу. Я могу отвечать только за Ростовскую область. Что касается того, сколько сейчас непосредственно содержится поголовья, то опять же это вопрос к Управлению ветеринарии, потому что от них главный ветеринарный врач есть в каждом населенном пункте, т.е. он обязан знать. И все-таки есть данные, что, допустим, вот в Ремонтненском районе находится свыше 5 тыс. свиней. Но на самом деле, надо, чтобы мы точно знали.

Вот смотрите, не дай Бог, в каком-то районе сейчас новый очаг, люди как только узнают об этом, они стараются всякими нелегальными способами продать, перепродать, забить и т.д., главным образом вывести из очага животное. Понимаете, не важно, зараженное оно или не зараженное. Чем они способствуют распространению АЧС не только на территории Ростовской области.

Африканская чума свиней (лат. Pestis Africana suum), африканская лихорадка, восточно африканская чума, болезнь Монтгомери – высококонтагиозная вирусная болезнь домашних и диких свиней, характеризуется лихорадкой, цианозом кожи и обширными геморрагиями во внутренних органах, протекает в виде эпизоотии. Относится к списку А согласно Международной классификации заразных болезней животных.

Лабораторные мониторинговые исследования на африканскую чуму свиней являются крайне необходимыми.

Отбор проб патологического материала и его доставка требуют выполнения ряда условий, обеспечивающих сохранение активности возбудителя в отобранных пробах и предусматривающих надежную упаковку, т.к. нарушение упаковки сопряжено с риском попадания вируса во внешнюю среду, что может привести к возникновению новых очагов болезни на благополучных по АЧС территориях.

Для установления диагноза или мониторинга АЧС при исследовании павших или убитых с диагностической целью домашних свиней отбирают:

— лимфатические узлы (подчелюстные, портальные и мезентеральные);

— кусочки селезенки по 5,0 – 10,0 граммов;

— кусочки легкого и почек, убитых в стадии агонии или не позже чем через 10 час после гибели.

От животных с повышенной температурой тела, имеющих клинические признаки болезни, отбирают пробы крови в количестве 3-5 мл, в специальные вакуумные пробирки с антикоагулянтом (6% раствор ЭДТА — вакутейнеры с фиолетовой крышкой), в соотношении 1:20 и пробы сывороток крови.

Отбор проб патологического материала от диких свиней (кабанов)

— лимфатические узлы (подчелюстные, портальные и мезентеральные);

— кусочки селезенки по 5,0 – 10,0 граммов. В случае аутолизиса трупа рекомендуется отбирать грудинную или трубчатую кость, независимо от ее состояния, отбирают от каждой обнаруженной павшей или отстрелянной охотниками дикой свиньи, независимо от пола, возраста и сезона года.

Упаковка и транспортировка патологического материала

Пробы указанных органов по 5 – 10 граммов помещают в стерильные флаконы, которые герметически закрывают резиновыми пробками, этикетируют, обрабатывают 5% раствором Хлорамина-Б или осветленным, 20% раствором хлорной извести, обвертывают марлей, смоченной одним из указанных дезинфицирующих растворов, укладывают в полиэтиленовые пакеты.

На внешней стороне пакета указывают номер пробы, который должен соответствовать номеру, указанному в сопроводительном документе. Если транспортировка занимает более чем 24 часа, пробы органов перед упаковкой замораживают при минус 10-18оС.

Пакеты с пробами герметично завязывают и помещают в термоконтейнер для транспортировки с хладоэлементами. Содержимое термоконтейнера перекладывают абсорбционным материалом для защиты от повреждений и предотвращения утечки жидкости.

На содержимое термоконтейнера составляют, в двух экземплярах, сопроводительное письмо, в котором описывают происхождение проб, указывают их номера, соответствующие маркировке пакета.

Закрытый и опечатанный контейнер снаружи обрабатывают смесью этанола (спирта ректификата) и эфира (1:1) и доставляют в сопровождении ветеринарного специалиста (с нарочным) в ветеринарную лабораторию.

Пробы отправляют в лабораторию с сопроводительным письмом, содержащим информацию о виде, поле и возрасте свиней, ставших источниками материалов. Указывается личный номер или кличка каждого животного, делается краткое описание клинических признаков, прикрепляется составленный протокол патологоанатомического вскрытия. Если животные содержались на свиноферме, следует уточнять данные по поводу категории и местонахождения каждой особи, которое закреплено за ее номером.

При подозрении АЧС среди диких свиней должно быть обозначено географическое место отстрела или локализации павшего животного на территории охотничьих угодий, заповедника и проч. Пробы органов и крови хранят и транспортируют в термосе при температуре 4-8оС, не более 24 ч после отбора. При более длительном хранении пробы замораживают при минус 10-18оС.

Грипп (инфлюэнца) птицы (Grippus (influenzae) avium, классическая чума птиц, европейская чума птиц) — высококонтагиозная, с острым течением болезнь, характеризующаяся явлениями септицемии, поражением органов дыхания и пищеварения.

1. Общие положения

1.1. Лабораторный мониторинг проводится в рамках мероприятий по предупреждению гриппа птиц на территории Российской Федерации.

1.2. Лабораторно-диагностические исследования проводятся в соответствии с Ветеринарными правилами лабораторной диагностики гриппа А птиц, Правилами по борьбе с гриппом птиц, Правилами по организации и проведению профилактических мероприятий по предупреждению гриппа птиц на территории Российской Федерации.

1. Организация проведения лабораторного мониторинга

2.1. Исследования на грипп птиц проводят в ветеринарных лабораториях, имеющих необходимое оборудование, кадровый состав, диагностические наборы.

2.3. ФГУ ЦМВЛ является учреждением, осуществляющим методическое руководство деятельностью межобластных ветеринарных лабораторий и ветлабораторий субъектов Российской Федерации (областных, краевых, республиканских) при проведении мониторинга, сбор и обработку данных, составление сводного отчета по результатам исследований на грипп птиц.

2.4. Составление сводного плана мониторинга возлагается на ФГУ Центральную научно-методическую ветеринарную лабораторию. Сводный план мониторинга утверждается руководителем Россельхознадзора.
Ветеринарные лаборатории субъектов Российской Федерации, ФГУ межобластные ветеринарные лаборатории разрабатывают совместно с территориальными управлениями Россельхознадзора и органами управления в ветеринарии в субъектах Российской Федерации на основании Методических рекомендаций по лабораторному мониторингу гриппа птиц в Российской Федерации план мониторинга по гриппу на следующий календарный год к 1 декабря текущего года. Одновременно с планом субъектовые ветлаборатории составляют и передают в межобластные ветеринарные лаборатории данные о потребности в диагностических препаратах для диагностики гриппа птиц (ИФА, РТГА, РДП, ПЦР) с учетом объемов планируемых исследований, птицепоголовья в птицеводческих хозяйствах и населенных пунктах, обследования водоемов и периодичности отбора проб согласно настоящему порядку мониторинга.
ФГУ межобластные ветеринарные лаборатории составляют сводный план по региону обслуживания с учетом собственных исследований и направляют его к 10 декабря текущего года в ФГУ ЦНМВЛ вместе с информацией о потребностях в диагностических наборах.
ФГУ ЦНМВЛ составляет и направляет в Россельхознадзор сводный план мониторинга, информацию о потребности в диагностических наборах для выполнения работ по мониторингу гриппа птиц по каждому региону.

3. Мониторинговые исследования домашней птицы

3.1. Исследованию подлежит птица промышленных стад и племенных птицехозяйств, частного сектора (с индивидуальных подворий), птица, содержащаяся в птицепитомниках, зоосадах, синантропная птица, обитающая на территории птицехозяйств, птица, ввозимая на территорию Российской Федерации, а также при купле-продаже внутри страны, ввозимое на территорию Российской Федерации инкубационное яйцо.

3.2. В период карантина (в течение 21 дня) для исследования на наличие антител к вирусу гриппа птиц типа А отбирают не менее 25 проб сывороток крови от каждой партии птицы (если партия составляет более 1000 особей); при поставке от 10 до 1000 голов птицы — 10 проб; менее 10 — пробы крови отбираются от каждой птицы.

3.3. При ввозе на территорию Российской Федерации эмбрионов и инкубационного яйца для контроля на грипп используют метод ПЦР-диагностики. С этой целью отбираются трахеальные и клоакальные смывы от 25 птиц, 30 эмбрионов/инкубационных яиц. Для исследования рекомендуется формировать объединенные пробы: одну пробу из смывов от 5 голов птиц, одну пробу из 5 эмбрионов/инкубационных яиц.

3.4. Серологическое обследование мелких видов птиц (волнистые попугайчики, канарейки и др.) не проводят, а в период их содержания в карантине (в течение 21 дня) осуществляют отбор проб помета в зависимости от ввозимой партии. Отбор проб рекомендуется проводить индивидуально от каждой птицы или в виде общей пробы от птиц, содержащихся в одном вольере/клетке. В данном случае также можно отбирать клоакальные и/или трахеальные смывы, при этом отбор проб проводится аналогично отбору проб сывороток крови п.3.2.

3.5. Схемы серологического обследования птицеводческих хозяйств и подворий.
В благополучных племенных и товарных птицеводческих предприятиях яичного и мясного направления (куроводческих, индейководческих, гусеводческих и др.) отбирается от каждого стада птицы, содержащейся в одном птичнике (зале, корпусе), по 25 проб крови.
В страусоводческих хозяйствах обследованию подлежат 15% от стада взрослой птицы и 10% от молодняка.
Отбор проб в бройлерных хозяйствах проводится в момент убоя птицы в количестве не менее 25 проб сыворотки крови от стада птицы из одного птичника (зала).
В личных хозяйствах граждан отбирается не менее 25 проб сыворотки крови от птицы из одного населенного пункта, если количество птицы в населенном пункте более 100 голов, при этом необходимо обеспечить сбор проб крови от птицы из разных дворов, если в населенном пункте разведением птицы занимаются одновременно несколько граждан.
В населенных пунктах, где поголовье птицы составляет менее 100 голов, серологическое обследование не проводят. В данных населенных пунктах ведется наблюдение за клиническим состоянием птицы. В случае обнаружения признаков заболевания отбирается материал для лабораторного исследования в соответствии с пунктом 3.7.
На территории крупных птицеводческих хозяйств, комбикормовых предприятий отбирать по 10 проб крови от синантропных птиц (голуби, воробьи и др.).

3.6. В случае получения положительных результатов серологических исследований проводится отбор проб для вирусологических исследований и ПЦР-диагностики в соответствии с пунктом 3.7.

3.7. При подозрении на грипп птиц (наличие клинических, патологоанатомических признаков заболевания, внезапном падеже) в стадах домашней птицы рекомендуется проводить отбор проб для проведения ПЦР-диагностики и вирусологических исследований. Для исследований отбираются клоакальные и/или трахеальные смывы, помет, патматериал (головной мозг, легкие, трахея, селезенка, участки кишечника). Отбор и транспортировку трупов птиц, проб биоматериала и патматериала осуществляют в соответствии с пунктом 7.

1. Мониторинговые исследования дикой птицы

4.1. Мониторинг дикой птицы необходимо проводить сезонно: весна, лето, осень (т.е. весенняя миграция, гнездование после вылупления птенцов, осенняя миграция) с привлечением зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации.

4.2. Во время сезонных совместных экспедиций ветеринарных специалистов, зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации пробы рекомендуется отбирать в местах массового гнездования птиц, зимовок, а также на пути основных миграционных маршрутов. Видовой состав птицы, подлежащей мониторингу, определяется в соответствии с особенностями каждого региона с привлечением специалистов охотоуправлений или зоологов. Исследованиям подвергаются синантропные (воробьи, голуби, грачи, вороны), полусинантропные (чайки), а также дикие мигрирующие виды водоплавающих и околоводных птиц (утки, гуси, массовые виды куликов, колониально гнездящиеся цапли и др.). Периодичность отбора проб указана в п.5. От отловленных птиц рекомендуется отбирать пробы сывороток крови, клоакальные и/или трахеальные смывы. Отловленные нетравмированные птицы, если применялся метод живоотлова, в случае отрицательного результата отпускаются. В случае положительного результата птицы умерщвляются бескровным методом и отправляются в лабораторию для дальнейших исследований. При проведении отстрела птиц или в случае их умерщвления в диагностических целях берутся клоакальные, трахеальные смывы и пробы патматериала.
Помет от дикой птицы, а также клоакальные, трахеальные смывы и патматериал исследуются методом ПЦР.

4.3. Для предупреждения отстрела редких видов птиц в состав совместной экспедиции включается специалист-орнитолог, зоолог или охотовед.

4.4. При выявлении в дикой природе случаев внезапного падежа птиц или в случае обнаружения при клиническом обследовании птицы на водоемах характерных клинических признаков болезни проводится отбор патматериала на вирусовыделение и для ПЦР-диагностики.

1. Рекомендуемая периодичность отбора проб

5.1. Домашняя птица обследуется: в благополучных регионах — 2 раза в год; в неблагополучных регионах и в угрожаемой зоне — один раз в месяц (каждый птичник, каждый населенный пункт): ввозимая из-за рубежа птица, эмбрионы, инкубационное яйцо — при ввозе, в период карантинирования.

5.2. Дикая птица обследуется: в благополучных регионах — 3 раза в год (весна, лето, осень); в неблагополучных районах — 1 раз в квартал.

6.1. Иммуноферментный анализ (непрямой метод ИФА для выявления антител к гриппу типа А) — исследуют сыворотки крови с целью выявления антител к вирусу гриппа птиц у кур из птицеводческих предприятий, фермерских хозяйств, населенных пунктов и ввозимых из-за рубежа; патологический материал, экстраэмбриональную жидкость зараженных куриных эмбрионов на наличие вируса гриппа птиц.

6.2. Иммуноферментный анализ (конкурентный метод ИФА для выявления антител к гриппу птиц Н5) — исследуются сыворотки крови различных видов птиц на наличие антител к гриппу птиц Н5.

6.3. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) — исследуют сыворотки крови кур реагирующих положительно в ИФА; сыворотки крови других видов птиц (гусей, уток, индеек, голубей, дикой птицы и др.).

6.4. Реакция диффузионной преципитации (РДП) — исследуют сыворотки крови с целью выявления антител к вирусу гриппа у птиц различных видов. РДП может быть использована для выявления вируса гриппа птиц при исследовании патматериалов и для идентификации изолятов при проведении вирусологических исследований.

6.5 Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) — исследования проводят:
при внезапном падеже птицы или характерных для гриппа клинических признаках;
при получении у птиц положительных результатов серологических исследований в ИФА и РТГА;
с целью определения типа гемагглютинина и нейраминидазы выделенных штаммов (ВНИИЗЖ, ВГНКИ);
при исследовании мяса птицы, полуфабрикатов, субпродуктов, яйца, куриных эмбрионов;
при исследовании комбикормов и мясокостной муки.

6.6. Серологические и вирусологические исследования рекомендуется проводить согласно действующей нормативной документации и наставлениям к диагностическим наборам. РТГА проводится с обязательной постановкой контроля проб сывороток крови на спонтанную агглютинацию. Сыворотка крови обрабатывается обязательно от термолабильных и в случае необходимости от термостабильных ингибиторов.

6.7. Диагностические наборы (ИФА, РТГА, РДП и ПЦР) получают ФГУ ЦНМВЛ, межобластные ветлаборатории и ветлаборатории субъектов Российской Федерации в соответствии с заявками.

7.1. Отбор проб сывороток крови и патологического материала от всех категорий птицы организуют совместно специалисты СББЖ и районных, межрайонных, зональных ветеринарных лабораторий или диагностических кабинетов. Отбор проб осуществляет ветеринарный специалист, имеющий специальную подготовку.

7.2. Отбор проб сывороток крови. Отбор проб крови у птиц осуществляется в соответствии с планом мониторинга из подкрыльцовой вены, или при забое птицы взятие проб крови у больной или подозреваемой в заражении птицы проводят с соблюдением требований безопасности. Транспортировка проб сывороток крови в лабораторию осуществляется в стеклянных или пластиковых пробирках, закрытых крышками (пробками). Пробирки маркируются. В сопроводительном документе указывается: вид и возраст птицы, наименование предприятия и адрес (Ф.И.О. владельца, адрес), количество проб, дата отбора проб.

7.3. Отбор проб патологического и биологического материалов. При подозрении на грипп птиц (наличие клинических, патологоанатомических признаков заболевания, внезапного падежа) осуществляют отбор проб патматериала: головной мозг, легкие, трахея, селезенка, участки кишечника, почки, сердце. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5-10 трупов или патматериал от 5-10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10-15 голов (смывы от 5 голов можно объединять в одну пробу), 1 пробу помета от стада. Пробу помета отбирают: примерно по 1 грамму помета из 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест.

Доставку трупов птиц и отобранных проб патматериала (органов, тканей) в лаборатории осуществляют в кратчайшие сроки во влагонепроницаемой таре, герметично упакованной. При доставке проб в течение 24 часов отобранные органы и ткани помещают в пластиковые контейнеры, герметичные целлофановые пакеты, упаковывают в широкогорлые термосы (небьющиеся) с сухим льдом или хладоэлементами.
Если доставка образцов длится более 24 часов, они охлаждаются и доставляются на льду (можно использовать хладоэлементы). Хранение суспензий из органов возможно до 4 дней при 4°С. Для увеличения сроков хранения образцы хранят при температуре -80°С. Хранение при 20°С может отрицательно сказаться на выделении вируса.
Образцы фекалий рекомендуется хранить и осуществлять их доставку при 4°С.
Клоакальные и трахеальные смывы можно доставлять в сухом виде или в транспортных средах.

7.4. Отбор проб биоматериала (трахеальные и клоакальные смывы, помет) осуществляется в целях мониторинговых исследований от клинически здоровой птицы, птицы, подозреваемой в заражении вирусом гриппа, и осуществляется аналогично отбору проб сывороток крови по пункту 3.2.
В населенных пунктах отбираются клоакальные и/или трахеальные смывы от 5-10 домашних птиц (при наличии в населенном пункте водоплавающей птицы отбор проб проводится прежде всего от данных видов).
Сбор проб помета осуществляется с 5 подворий одного населенного пункта (5 проб).
В случае выявления падежа дикой птицы или обнаружения диких птиц с характерными клиническими признаками заболевания вблизи населенных пунктов, расположенных у водоемов, отбор проб патологического материала осуществляют в соответствии с пунктом 7.3.
Для взятия и транспортировки смывов используют транспортные среды. Правила пересылки смывов в соответствии с пунктами 7.2 и 7.3.

7.5. Отбор проб от дикой птицы осуществляется в соответствии с п.4 и п.п.7.2, 7.3, 7.4 с привлечением зоологов и специалистов охотоуправлений в субъектах Российской Федерации.
При направлении на исследование проб сывороток крови, патматериалов или биоматериалов от дикой птицы необходимо указывать вид птицы, место отбора проб, количество проб, примерный возраст (взрослая, молодняк), дату отбора.

7.6. Пробы сыворотки крови и патматериал направляют нарочным с сопроводительным письмом в ветлаборатории субъектов Российской Федерации или в межобластные ветеринарные лаборатории.

Начальник противоэпизоотического отряда