Мук микробиологическая диагностика туляремии

Резервуаром возбудителя туляремии (Francisella tularensis) являются грызуны, человек заражается от них всеми известными способами (при прямом и непрямом контакте, алиментарным, аэрогенным, трансмиссивным путем). По клиническим проявлениям тулерямия напоминает чуму, однако летальность при этой инфекции не высока (1-2%). Выделяют язвенно-железистую (бубонную), глазо-бубонную, ангинозно-буббонную, кишечную и легочную формы туляремии.

Методы микробиологической диагностики туляремии отражены в схеме 5. Для лабораторной диагностики туляремии широко используются иммунологические методы (серологическая диагностика, аллергические пробы), осуществляемые в обычных клинических условиях. Биопробы с выделением чистой культуры возбудителя проводятся в специализированных лабораториях особо-опасных инфекций.

Серологический метод.В сыворотке крови больных специфические антитела появляются с 10-12 дня болезни. В диагностических целях используют развернутую РА (диагностический титр 1:100 и выше), РНГА (диагностический титр 1:1280 и выше), ИФА.

Аллергическая проба.Выпускается 2 вида аллергена– туляринадля постановки соответственно накожной и внутрикожной аллергической пробы – раннего (положительная реакция ГЗТ с 5 дня болезни) и специфического метода диагностики туляремии. Наличие инфильтрата и гиперемии диаметром 1 см и более через 24-48 часов после введения тулярина расценивается как положительная реакция.

Биологический и бактериологический методы. Выделить культуры возбудителя от больного путем непосред­ственного посева материала на питательные среды не удается. Для выделения чистой культуры возбудителя туляремии применяется биопроба. С этой целью исследуемый материал (см. схему 5) вводят мышам или морским свинкам подкожно, накожно, внутрибрюшинно и/или через рот. Если эксперименталь­ные животные в течение 7-15 дней не погибают, их умерщвляют и трупы подвергают бактериоскопическому и бактериологическому исследованию. Для этого готовят мазки-отпечатки из внутренних органов и окрашивают их по Романовскому-Гимзе. Возбудите­ль туляремии - мелкие (0,2-0,7 мкм) кокковидные и палочковидные бактерии, располагающиеся в мазках-отпечатках из органов внутриклеточно и в виде скоплений с образованием нежной капсулы (рис. 8). Применяют также методы экспресс- диагностики (обнаружение возбудителя в материале с помощью ИФМ и ИФА). Параллельно с микроскопическим исследованием кровь, костный мозг, участки внут­ренних органов и лимфатических узлов трупа животного засевают на одну из плотных питательных сред (желточная среда, среда МакКоя, глюкозо-цистиновый агар с кроличьей кровью и антибиотиками), которую культивируют при 37 0 С. Рост туляремийного микроба в виде нежных мелких колоний (рис. 10) появляется на 3-5-20 день, иногда позже. Возбудитель туляремии хорошо размножается также в желточном меш­ке 12-дневного куриного эмбриона.

Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфоло­гическим, антигенным (РА с туляремийной агглютинирующей сывороткой) и биологическим свойствам, определяют ее чувствительность к антибиотикам. В биохими­ческом отношении возбудитель туляремии мало активен (ферментация глюкозы, продукция сероводорода).

Схема 5. Микробиологическая диагностика туляремии

Материал: кровь, пунктат из бубона, соскоб из язвы, отделяемое конъюнктивы, налет из зева, мокрота и др., органы павших и больных животных, переносчики (слеп­ни, клещи, комары), объекты внешней среды (вода, пищевые продукты, воздух).

Генодиагностика. ПЦР

а б

Рис. 9. Возбудитель туляремии(Francisella tularensis) в мазках из чистой культуры (а) и в мазках-отпечатках органов белой мыши (б), погибшей в результате биопробы. х630.

Рис. 10. Колонии возбудителя туляремии на глюкозо-цистеиновом агаре. х56

Генодиагностика.Для обнаружения ДНК возбудителя туляремии разработана ПЦР.

Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопия демонстрационных микропрепаратов Francisella tularensis (окраска по Граму). Возбудитель туляремии представляет собой полиморфные мелкие бактерии кокковидной или палочковидной формы. Препараты зарисовать.

Последнее изменение этой страницы: 2016-04-23; Нарушение авторского права страницы

Таксономия: отдел Gracilicutes, род Francisella. Возбудитель – Francisella tularensis.

Морфология: мелкие кокковидные полиморфные палочки, неподвижные, грамотрицательные, не образующие спор, могут образовывать капсулу.

Культуральные свойства: Факультативный аэроб, оптим. температура+37С. На простые питательных средах не растет. Культивируется на желточных средах, на средах с добавлением крови и цистеина. Рост медленный. Образуют мелкие колонии, круглые с ровным краем, выпуклые, блестящие.

Биохимические свойства: слабо ферментируют до кислоты без газа глюкозу, мальтозу, левулезу, маннозу, образуют сероводород. Туляремийный микроб по вирулентности разделен на подвиды: голарктическую (не ферментирует глицерин, цитруллин), неарктическую (ферментирует глицерин, не ферментирует цитруллин; среднеазиатскую (ферментирует глицерин и цитруллин, мало вирулентен).

Антигенные свойства: Содержит соматический О-и поверхностный Vi- антигены. Имеют антигенную близость с бруцеллами. В R- форме теряют Vi- антиген, а вместе с ним вирулентность и иммуногенность.

Факторы патогенности: неарктический подвид – высокая патогенность для человека при кожном заражении, голарктический и среднеазиатский подвиды – умеренно патогенны. Вирулентными являются S-формы колоний. Патогенные свойства связаны с оболоченным антигенным комплексом и токсическими веществами типа эндотоксина. Вирулентность обусловлена:капсулой, угнетающей фагоцитоз; нейраминидазой, способствующей адгезии; эндотоксином (интоксикация); аллергенными свойствами клеточной стенки;

Эпидемиология: природно-очаговое заболевание. Источник инфекции – грызуны. Множественность механизмов передачи. Передача возбудителя через клещей, комаров. Человек заражается контактным, алиментарным, трансмиссивными путями.

Резистентность: в окружающей среде сохраняется долго, нестоек к высокой температуре, чувствителен к антибиотикам (тетрациклин, левомицетин).

Патогенез: На месте внедрения возбудителя (кожа, слизи­стые оболочки глаз, дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта) развивается первичный воспалительный очаг, откуда воз­будитель распространяется по лимфатическим сосудам и узлам, поражая их с образованием первичных бубонов; в различных органах формируются гранулемы. Микроб и его токсины проникают в кровь, что приводит к бактериемии и генерализации процесса, метастазированию и развитию вто­ричных туляремийных бубонов.

Клиника. Инкубационный период 3—7 дней. Болезнь начинается остро, внезапно с повышения темпера­туры тела. Различают бубонную, язвенно-бубонную, глазо-бубонную, абдоминальную, легочную и генерализованную(септи­ческую) клинические формы туляремии.

Иммунитет. После перенесенной инфекции иммунитет со­храняется длительно, иногда пожизненно; развивается аллергизация организма к антигенам возбудителя.

Микробиологическая диагностика:

Бактериоскопическое исследование:Из исследуе­мого материала готовят мазки, окрашивают по Грамму. В чис­той культуре - мелкие кокки. В мазках из органов преобладают палочковидные формы. Спор не образуют, грамотрицательные, иногда выражена биполярная окраска.

Бактериологическое исследование и биопроба.Применяются для выделения чистой культуры бактерий туляремии. Наиболее чувствительными животными являются мыши и морские свинки, которые погибают даже при подкожном введении еди­ничных бактерий. Выделение бактерий туляремии проводят на свернутой яично-желточной среде, глюкозоцистиновом кровяном агаре. Вирулентные штаммы образуют S-формы колоний — мел­кие, гладкие, беловатого цвета с голубоватым оттенком.

Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бактериальных клеток, характеру роста, биохимическим и анти­генным свойствам. Биохимические свойства этих бактерий вы­являются на специальной плотной среде с ограниченным содер­жанием белка. Бактерии туляремии содержат оболочечный анти­ген, с которым связаны их вирулентные и иммуногенные свойст­ва, и О-соматический антиген. По антигенным свойствам близки к бруцеллам.

Серодиагностика.Ставится реакция агглютинации с туляремийным диагностикумом. Относительно позднее появление агглю­тининов в крови (на 2-й неделе болезни) затрудняет применение этой реакции для ранней диагностики, однако их длительное сохранение делает возможной ретроспективную диагностику. Обязательно прослежива­ется нарастание титра агглютинации. Наиболее чувствительным методом серодиагностики туляремии является РПГА.

Для экспресс-диагностики применяется кровяно-капельная ре­акция: кровь из пальца наносят на стекло, добавляют каплю дистиллированной воды (для лизиса эритроцитов), вносят каплю диагностикума и смешивают стеклянной палочкой. При наличии в крови агглютининов в диагностическом титре (1:100 и выше) в капле немедленно на­ступает агглютинация диагностикума; при титрах ниже диагно­стических агглютинация происходит через 2—3 мин.

Кожно-аллергическая проба.Выпускаются два вида тулярина: для внутрикожной пробы и для надкожной. Проба высоко­чувствительна и дает положительные результаты у больных, на­чиная с 3—5-го дня болезни, но также и у переболевших и вак­цинированных, поэтому оценка реакции должна проводиться с осторожностью.

Лечение: антибиотики стрептомицинового и тетрациклинового ряда. В случае затяжного течения – комбинированная антибиотикотерапия с использованием убитой лечебной сыворотки.

Профилактика: специфическая профилактика - применяют живую туляремийную вакцину. Иммунитет длительный, проверяется с помощью пробы с тулярином.

Туляремийный диагностикум –взвесь убитых бактерий туляремии, применяется в случае постановки реакции агглютинации при серодиагностике.

Тулярин– взвесь туляремийных бактерий (вакцинного штамма), убитых нагреванием, для постановки кожно-аллергической пробы.

Туляремийная живая сухая накожная вакцина –высушенная живая культура вакцинного штамма, для профилактики.

Учебник предназначен для студентов, аспирантов и преподавателей высших медицинских учебных заведений, университетов, микробиологов всех специальностей и практических врачей.

5-е издание, исправленное и дополненное

Книга: Медицинская микробиология, иммунология и вирусология

Микробиология туляремии

Туляремия – первичная болезнь животных (грызунов), у человека протекает в виде острого инфекционного заболевания с разнообразной клинической картиной и медленным восстановлением трудоспособности. Возбудитель – Francisella tularensis – открыт Г. Мак-Коем и Ш. Чепином в 1912 г. во время эпизоотии среди земляных белок в местности с озером Туляре (Калифорния), подробно изучен Э. Френсисом, в честь которого и назван род. Это очень маленькие (см. цв. вкл., рис. 96.2), размерами 0,2 – 0,7 мкм кокковидные или эллипсоидные полиморфные палочки, которые очень часто при специальных методах окрашивания дают биполярную окраску;

неподвижны, грамотрицательны, спор не образуют; каталазонегативны, образуют H₂S, строгие аэробы, температурный оптимум для роста 37 °C, рН 6,7 – 7,2. Вирулентные штаммы имеют капсулу, образуют кислоту без газа при ферментации некоторых углеводов (глюкоза, мальтоза, манноза, фруктоза, декстрин), степень ферментации у разных штаммов варьирует, содержание Г + Ц в ДНК – 33 – 36 мол %. F. tularensis на обычных средах не растет. Г. Мак-Кой и Ш. Чепин использовали свернутую желточную среду. На ней туляремийная палочка растет в виде нежных мелких колоний, напоминающих капельки росы, затем культура приобретает характер нежного шагреневого налета со слабо выраженной слизистой консистенцией. Э. Френсис предложил для выращивания туляремийной палочки питательный агар, содержащий 0,05 – 0,1 % цистина, 1 % глюкозы и 5 – 10 % крови. На такой среде рост более пышный и грубый: колонии круглые с гладкой поверхностью, молочного цвета, влажные, со слизистой консистенцией, окружены характерным зеленым ореолом. Рост медленный, максимального размера колонии достигают на 3 – 5-й день (1 – 4 мм). Туляремийные бактерии хорошо размножаются в желточном мешке куриного эмбриона, вызывая его гибель на 3 – 4-й день.

Для роста F. tularensis необходимы следующие аминокислоты: аргинин, лейцин, изолейцин, лизин, метионин, пролин, треонин, гистидин, валин, цистин, для некоторых подвидов – серин, тирозин, аспарагиновая кислота; кроме того, для роста они нуждаются также в пантотеновой кислоте, тиамине и ионах Mg 2+ . С учетом этих особенностей для культивирования F. tularensis можно использовать синтетические среды.

Род Francisella отнесен к классу Gammaproteobacteria, тип Proteobacteria. К этому же роду относится F. novicida, патогенность которой для человека не установлена.

Возбудитель туляремии является внутриклеточным паразитом. Его вирулентность обусловлена капсулой, угнетающей фагоцитоз; нейраминидазой, которая способствует адгезии; эндотоксином; аллергенными свойствами клеточной стенки, а также способностью размножаться в фагоцитах и подавлять их киллерный эффект. Механизмы вирулентности пока не расшифрованы. Кроме того, у туляремийной палочки обнаружены рецепторы, способные взаимодействовать с Fc-фрагментами иммуноглобулинов класса IgG. В результате такого связывания нарушается активность систем комплемента и макрофагов.

F. tularensis в S-форме (вирулентный) имеет два антигена – О и Vi (капсульный антиген). О-антиген обнаруживает родство с антигенами бруцелл. Диссоциация S?SR?R приводит к утрате капсулы, вирулентности и иммуногенности. Вид F. tularensis подразделяют на три географические расы (подвида):

1) голарктическую (слабопатогенная для домашних кроликов, не ферментирует глицерина и не имеет фермента цитруллинуреидазы, встречается в странах северного полушария);

2) среднеазиатскую (малопатогенная для кроликов, имеет цитруллинуреидазу и ферментирует глицерин);

3) неарктическую (американскую), более патогенна для кроликов, ферментирует глицерин, имеет цитруллинуреидазу.

Кроме того, штаммы американского и среднеазиатского подвидов обладают фосфатазной активностью, отсутствующей у штаммов голарктического подвида.

Резистентность. F. tularensis довольно устойчива во внешней среде, особенно если содержится в патологическом материале. В фураже, зерне, загрязненных выделениями больных грызунов, выживает до 4 мес.; в воде – до 3 мес.; во льду – более 1 мес. Чувствительна к прямым солнечным лучам (погибает за 30 мин), высокой температуре (при 60 °C гибнет через 10 мин), под действием 3 % раствора лизола, 50 %-ного спирта, формалина и других антисептиков погибает через 5 – 10 мин.

Эпидемиология. Основным резервуаром туляремии в природе являются грызуны, среди которых в естественных условиях наблюдаются эпизоотии. Человек заражается только от животных, от человека к человеку возбудитель не передается. Возбудитель обнаружен у 82 видов грызунов и зайцеобразных, наиболее часто встречается у представителей 4 семейств: мышевидных (Muridae), заячьих (Leporidae), беличьих (Sciuridae) и тушканчиковых (Dipodidae). На территории России основными носителями являются мышевидные грызуны: водяные крысы, обыкновенные полевки, домовые мыши и ондатры.

По чувствительности к туляремии животные могут быть разбиты на четыре группы:

1-я группа – наиболее восприимчивы (полевки, водяные крысы, домовые мыши, белые мыши, морские свинки и некоторые другие). Минимальная смертельная доза составляет одну микробную клетку;

2-я группа – менее чувствительны (серые крысы, суслики и др.). Минимальная смертельная доза – 1 млрд микробных клеток, однако для заражения некоторых из них достаточно одной микробной клетки;

3-я группа (хищники – кошки, лисицы, хорьки). Устойчивы к высоким заражающим дозам, заболевание протекает без видимых проявлений;

4-я группа – невосприимчивы к туляремии (копытные животные, холоднокровные, птицы).

Для человека минимальная инфицирующая доза – одна микробная клетка. Заражение человека происходит всеми возможными способами: прямым и непрямым контактом с больными грызунами, их трупами или с предметами, зараженными грызунами; алиментарным (при употреблении пищевых продуктов и воды, инфицированных грызунами), воздушно-пылевым и трансмиссивным путем. Зараженность туляремийными бактериями установлена у 77 видов кровососущих членистоногих. Особенно большое значение имеют иксодовые клещи, у которых возбудитель сохраняется в течение всей жизни и даже передается трансовариально потомству. Эти обстоятельства способствуют укоренению болезни в природе. Заражение человека клещами происходит не путем укуса, а в результате попадания возбудителя на кожу вместе с испражнениями клеща.

На территории России различают 7 основных ландшафтных типов природных очагов туляремии: пойменно-болотный, луго-полевой, степной, лесной, предгорноручьевой, тундровый и тугайный (пойменно-пустынный).

Особенности патогенеза и клиники. F. tularensis проникает в организм через наружные покровы (поврежденную и неповрежденную кожу и слизистые). На месте внедрения нередко образуются язвочки. Через лимфатические сосуды бактерии попадают в регионарный лимфатический узел и беспрепятственно размножаются в нем; воспалительный процесс приводит к формированию бубона. Отсюда возбудитель проникает в кровь, бактериемия обусловливает генерализацию процесса, в него вовлекаются различные органы и ткани, размножение в которых бактерий приводит к образованию гранулем и некротических язв. С бактериемией и генерализацией связана аллергическая перестройка организма. Инкубационный период при туляремии варьирует от 2 до 8 дней. Болезнь начинается остро: появляются лихорадка, головная боль, боли в мышцах, гиперемия лица. Дальнейшее течение зависит от места входных ворот, в соответствии с которым различают следующие клинические формы туляремии: язвенно-железистую (бубонную), глазо-железистую, ангинозножелезистую, абдоминальную и легочную. Летальность при туляремии не превышает 1 – 2 %.

Постинфекционный иммунитет прочный, стойкий, в большинстве случаев пожизненный, имеет клеточную природу, обусловлен главным образом Т-лимфоцитами и макрофагами, в меньшей степени – антителами. Фагоцитоз у лиц, имеющих иммунитет, имеет завершенный характер.

Лабораторная диагностика. В связи с полиморфной клинической картиной туляремии в ее диагностике решающее значение имеют лабораторные методы: бактериологический, биологический, серологические реакции и аллергическая проба. Бактериологический метод имеет существенную особенность: выделить возбудителя от больного человека непосредственно не удается. Поэтому исследуемым материалом (пунктат бубона, гной из конъюнктивы, пленка из зева, мокрота, испражнения, кусочки органов из трупов грызунов) вначале заражают подкожно белых мышей или морских свинок, а затем уже делают посев крови или материала из органов для получения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным (не растет на обычных средах) свойствам, по реакции агглютинации со специфической сывороткой и окончательно – биологической пробой на белых мышах.

F. tularensis можно выделить также путем заражения в желточный мешок куриных эмбрионов. Возбудитель легко в нем обнаруживается с помощью метода иммунной флуоресценции. Однако биологические пробы и бактериологические исследования по туляремии возможно проводить только в специальных лабораториях. В обычных клинических условиях для диагностики туляремии применяют только серологические реакции (со 2-й нед. развернутая пробирочная агглютинация, РПГА и др.) и аллергическую пробу с тулярином. Последняя является наиболее ранним методом специфической диагностики. При внутрикожной постановке она бывает положительной с 3 – 5-го дня болезни, при накожной – с 6 – 8-го дня. В природных очагах туляремии для контроля эпизоотий среди грызунов используют РПГА и ее варианты (РНАг, РТПГА), а также ИФМ с целью обнаружения антигенов туляремийной палочки в трупах грызунов, погадках хищных птиц, помете хищников.

Специфическая профилактика. Основным методом предупреждения заболевания людей, проживающих на территории природных очагов туляремии, является вакцинация, осуществляемая с помощью живой (ослабленной) сухой накожной вакцины. Вакцину вводят однократно, иммунитет не менее 5 – 7 лет.

Глава 28. Возбудитель туляремии

Возбудитель туляремии впервые был выделен в 1911 г. Мак-Коем и Чепином при изучении заболевания сусликов в США (штат Калифорния, округ Туляре). В 1921 г. американский исследователь Э. Френсис выяснил, что эта болезнь свойственна также людям и описал ее. Поэтому возбудитель получил название Francisella tularensis.

Морфология. Возбудители туляремии мелкие коккобактерии. Средняя величина их 0,3-0,6 × 0,1-0,2 мкм. Они очень полиморфны: в мазках обнаруживают шарообразные, нитевидные и другие формы. Встречаются культуры, которые проходят через бактериальные фильтры. Бактерии туляремии неподвижны, спор не образуют. Обладают нежной капсулой, грамотрицательны. В мазках-отпечатках, сделанных из органов и окрашенных по Романовскому, бактерии имеют нежно-фиолетовую окраску.

Культивирование. Возбудители туляремии - факультативные анаэробы. Растут они на средах, богатых питательными веществами: свернутой желточной среде, на агаровых мясных или рыбных средах с добавлением цистина, глюкозы и крови. Размножаются лучше на плотных питательных средах, но рост может быть и на жидких и полужидких средах. На плотных питательных средах бактерии туляремии растут медленно, 4-14 дней при температуре 36-37° С и рН 6,8-7,2. Они образуют мелкие, беловатого цвета, выпуклые, блестящие с ровными краями колонии диаметром в 1-3 мм. Вирулентные штаммы в S-форме. Вакцинные штаммы в SR-форме. R-форма бактерий - авирулентна (при длительном культивировании в лабораторных условиях они переходят в R-форму).

Ферментативные свойства. У бактерий туляремии ферментативные свойства мало выражены и выявляются только на специальных средах. Они могут ферментировать глюкозу, мальтозу, маннозу, левулезу с образованием кислоты без газа. Некоторые штаммы расщепляют глицерин, иногда образуют сероводород.

Токсинообразование. Экзотоксин у бактерий туляремии не обнаружен. Болезнетворное действие микробов связано, по-видимому, с эндотоксином.

Антигенная структура. S-форма туляремийных бактерий содержит два антигенных комплекса: О- и Vi-антигены. С Vi-антигеном связаны вирулентность и иммуногенность. R-формы теряют Vi-антиген. О-антиген имеет общий антиген С бруцеллезными бактериями.

Устойчивость к факторам окружающей среды. При температуре 100° С бактерии туляремии гибнут мгновенно, при температуре 60° С - сохраняются 20 мин. При низких температурах и во влажной почве возбудители сохраняются до 4-5 мес. При 1° С в воде они сохраняются до 9 мес, зерне и соломе при 0° С - до 150 дней, хлебе - до 14 дней, мясе - до 30 дней и т. д. Обычные растворы дезинфицирующих веществ убивают их в течение 10-15 мин. Бактерии туляремии чувствительны ко многим антибиотикам.

Восприимчивость животных. Возбудители туляремии патогенны для многих видов животных. Естественная зараженность туляремией известна у 145 видов позвоночных и более 100 видов беспозвоночных животных. Наиболее восприимчивыми к туляремии являются многие виды грызунов и некоторые насекомоядные.

Из экспериментальных животных чувствительны морские свинки и белые мыши.

Источники инфекции - грызуны, преимущественно водяные крысы, полевки, домовые мыши, ондатры, хомяки и зайцы. Источником заражения может быть вода, пищевые продукты, солома и другие субстраты, загрязненные выделениями больных животных.

Пути передачи. Трансмиссивный, воздушно-пылевой, пищевой, контактно-бытовой.

Патогенез. Бактерии туляремии обладают высокой инвазивной способностью. Они проникают через поврежденную и неповрежденную кожу и слизистые оболочки.

В зависимости от пути проникновения в организм возбудители могут локализоваться в коже, слизистых оболочках кишечного тракта, дыхательных путей, глаз и других органах. Из входных ворот по лимфатическим путям они попадают в ближайшие лимфатические узлы, где размножаются и поступают в кровь. В очагах скопления возбудителей туляремии образуются специфические туляремийные гранулемы - первичные бубоны. При дальнейшем распространении микробов могут возникнуть вторичные бубоны. Размеры бубонов колеблются от лесного ореха до куриного яйца.

Различают следующие клинические формы заболевания: бубонную, ангинозно-бубонную, глазобубонную, легочную, абдоминальную и генерализованную. По тяжести течения - легкую и тяжелую формы. По длительности течения - острую и затяжную формы.

Иммунитет. Напряженный и длительный. Определяется гуморальными и клеточными факторами. Характерным для туляремии является аллергическое состояние, возникающее с первых дней заболевания.

Профилактика. Борьба с грызунами и насекомыми. Общесанитарные мероприятия.

Специфическая профилактика. Иммунизируют людей, проживающих в зоне природных очагов. Иммунизацию проводят живой вакциной Гайского - Эльберта. Вакцинируют однократно, накожно. Продолжительность иммунитета 3-6 лет.

Лечение. Бактерии туляремии чувствительны ко многим антибиотикам: стрептомицину, биомицину, тетрациклину, мономицину, канамицину. К пенициллину и сульфамидам они не чувствительны.

1. Каковы морфологические и культуральные особенности возбудителей туляремии?

2. Антигенная структура. С каким антигеном связана вирулентность и какая форма S или R является более вирулентной?

3. Какова устойчивость бактерий туляремии во внешней среде?

4. Какие животные восприимчивы к туляремии? Основные источники заражения.

5. Входные ворота инфекции. Патогенез. Основные формы заболевания.

6. Специфическая профилактика.

Цель исследования: выявление возбудителя туляремии.

Сбор материала и исследование проводят в строго режимных условиях!

1. Содержимое бубона (бубонная, язвенно-бубонная и ангинозно-бубонная формы).

2. Отделяемое слизистой глаз (глазобубонная форма).

3. Мокрота (легочная форма).

4. Испражнения (абдоминальная форма).

5. Кровь (генерализованная форма).

В специальных лабораториях исследуются грызуны и их выделения, членистоногие (клещи, блохи, комары, слепни), вода, пищевые продукты и т. д.

Способы сбора материала

5. Бактериологический (не нашел широкого применения, так как непосредственный посев исследуемого материала на искусственные питательные среды роста бактерий не дает).

Ход исследования

1. Перечислите, какой материал для исследования используют при разных клинических формах заболеваний туляремией.

2. Перечислите основные методы исследования.

3. Какие серологические методы применяют для диагностики туляремии?

4. На каких животных ставят биологическую пробу?

5. Почему бактериологический метод не нашел широкого применения?

Составьте таблицу морфологических, культуральных и ферментативных свойств бактерий туляремии.

Желточная среда. Желтки свежих яиц смешивают с изотоническим раствором натрия хлорида в соотношении 3:2. Смесь разливают по 4-5 мл в пробирки и в скошенном положении стерилизуют при температуре 80° С в течение часа. Проверяют среду на стерильность (в термостате при 37° С) и сохраняют на холоде до 1 мес.

2. Бактериоскопия

3. Серологические исследования

4. Проба с тулярином

5. Биологический метод

1.Организм человека восприимчив к туляремии.У человека туля­ремия — лихорадочное заболевание с относительно доброкаче­ственным течением, не представляющее опасности заражения для окружающих. Летальность при туляремии в России ниже 0,5% (без лечения). Для диагностики туляремии у больного вполне достаточно применения 2 реакций, кожной пробы и ре­акции агглютинации. Другие иммунологические реакции тех­нически более сложны (например, реакция связывания ком­племента).

Выделение от больного культуры возбудителя доступно лишь специально оснащенным лабораториям и применяется в основном с исследовательскими целями. Для обнаружения туля-ремийных бактерий в органах животных и объектах внешней среды в лабораторной практике чаще всего используют бакте­риологические методы исследования материала. Грызунов, кро­вососущих членистоногих доставляют в лабораторию для иссле­дования с соблюдением предосторожностей, предусмотренных правилами работы с особо опасными инфекциями.

Бактериологический метод для диагностики заболевания у че­ловека по сравнению с биологическим методом малоэффекти­вен, так как в организме больного человека туляремийные микробы содержатся в скудном количестве. Для выращивания туляремийных бактерий используют специальные среды, так как на простых питательных средах (мясо-пептонном агаре, бульоне) этот микроб не растет, обычно применяется сверну­тая желточная среда, рыбно-глюкозо-цистиновый агар и агар с добавлением крови. При массивном обсеменении органов рост культуры туляремийных бактерий появляется через 18—24 ч в виде нежного синего налета на поверхности среды.

2. Бактериоскопия: ввиду очень мелких размеров туляремийного микроба он может быть с достоверностью обнаружен в мазках-отпечатках из патологического материала только при обильном обсеменении последнего. При изготовлении мазков-отпечатков используют окраску по Романовскому-Гимзе. Путем бактерио­скопии (в сочетании с реакцией преципитации) может быть получен быстрый (через 2—3 ч) положительный ответ при ис­следовании доставленных грызунов. Однако он является лишь предварительным, так как положительные результаты бакте-риоскопического исследования должны быть подтверждены выделением культуры.

3. Серологические исследования: из серологических методов иссле­дования применяют реакцию агглютинации по общепринятой методике с использованием туляремийного диагноста. Диагно­стическим считается титр 1 : 100 и выше. Более чувствительной является реакция непрямой гемагглютинации, применяемая как для ранней, так и для ретроспективной диагностики. В ка­честве антигена используют туляремийный эритроцитарный диагностикум.

Ускоренный метод серологической диагностики туляремии. Для той цели применяют кровяно-капельную реакцию на стекле. В качестве антигена используют обычный туляремийный диагностикум. В положительных случаях при наличии у больного титра сыворотки 1 : 100 и выше агглютинация на стекле насту­пает немедленно после смешения крови с антигеном. Для ускоренной диагностики туляремии у людей может быть использована также микросерореакция. Для ее постановки на предметное стекло наносят не каплю крови, а каплю сыворот­ки крови обследуемого больного и к ней добавляют столько же антигена. Положительная микрореакция на стекле может слу­жить для предварительной ориентации в диагнозе.

4. Аллергическая реакция строго специфична, у больных туляреми­ей людей она становится положительной при всех химических формах туляремии и, как правило, опережает реакцию агглю­тинации. Проба состоит во введении внутрикожно в область предплечья, передней поверхности 0,1 мл тулярина (взвесь убитых туляремийных микробов). Оценку пробы производят через 24, 48 и 72 ч. Проба является положительной при появ­лении отека или инфильтрата. Гиперемия без отека, исчезающая через сутки, диагностического значения неимеет. Внутрикож-ную пробу применяют и для ретроспективной диагностики ту­ляремии. Надо иметь в виду, что проба с тулярином бывает положительной у лиц, подвергшихся прививкам туляремийной вакциной. Вместо внутрикожной пробы пользуются накожной пробой: нанесением двух капель антигена на ладонную по­верхность предплечья с последующими поверхностными на­сечками и легким втиранием антигена. В положительных случаях через 24—36 ч появляются гиперемия и отечность, сохраняю­щиеся 2—3 дня.

5. Биологический метод является самым чувствительным способом обнаружения туляремийных бактерий в любом исследуемом ма­териале. Биологический метод исследования заключается в за­ражении лабораторных животных (морская свинка, белая мышь) результатом бубонов, взятым до 14—20-го дня болезни; соскобом со дна язвы, смешанным с физиологическим раство­ром, полученным до 8—12-го дня, отделяемым конъюнктивы, взятым до 15—17-го дня болезни; кровью 5—6 мл, взятой до 6-го дня болезни. Исследуемый материал вводят подопытным животным подкожно или внугрибрюшно. Зараженные живот­ные погибают от туляремии в течение 4—14 дней. Кусочки пе­чени, селезенки, лимфатического узла и кровь засевают на желточную среду для выделения возбудителя.

Вопрос 68.Стафилококковые инфекции наружных покровов

1. Биология, культуральные свойства стафилококков

2. Антигенное строение; серотины; фаготипы

3. Лабораторная диагностика стафилококковых инфекций

1.филококки широко распространены в природе и являются возбудителями многих заболеваний человека и животных, весьма различных по своим проявлениям, от легких местных фолли­кулитов до стафилококкового сепсиса. Наиболее часто стафи­лококковые заболевания возникают у рожениц и новорожденных в родильных домах (сепсис, маститы, пиодермия и пневмония у новорожденных). Большинство заболеваний стафилококко­вой этиологии возникают в результате заражения патогенными стафилококками, устойчивыми к антибиотикам.

Биология стафилококков, культуральные свойства: для выра­щивания, избирательного выделения и дифференцирования стафилококков существует ряд сред. Корреляцию между био­химическими и культуральными свойствами стафилококков и их патогенностью можно установить при выращивании на сре­де, содержащей водный 1,5%-ный агар, хлористый натрий, магний, дрожжевой экстракт, желатин, двузамещенный фос­форнокислый калий.

Биохимические свойства: стафилококки ферментируют лактозу и маннит, поэтому исследуемый материал засевают на плотные или жидкие среды (агар) с добавлением лактозы и маннита. Патогенные стафилококки при выращивании при 37 "С в те­чение 18 ч разлагают углеводы, и индикатор изменяет цвет среды. Однако значительное число штаммов непатогенных стафилококков (от 11 до 55%) также способно ферментировать маннит, что не позволяет признать эту пробу достаточным критерием патогенности. Кроме того, в связи с выделением штаммов стафилококков, резистентных к действию антибиоти­ков, их способность ферментировать маннит значительно из­менилась.

Существует ряд других методик идентификации и дифференци­рования стафилококков.Нахождение фосфатазы в культурах на чашках с питательной средой рекомендовано для исключения евирулентных штаммов, в частности культур, выделяемых из носа от возможных носителей патогенных стафилококков. Для этой цели применяют агаровую среду, включающую фенолфталеиндифосфат. Микробы, продуцирующие фосфатазу, ос­вобождают свободный фенолфталеин, который затем обнару­живается при помещении чашки с культурой в пары аммония.

Образование токсинов. Связь гемолитической способности стафилококка с его патогенностью позволяет считать гемолиз достаточным критерием патогенности. Для практических целей имеет значение определение гемолитической функции стафи­лококковых L- и В-токсинов. При посеве патогенных штаммов стафилококков, выделяющих А-гемолизин при выращивании при 37 °С на чашках с агаром, содержащих эритроциты барана, вокруг колоний обнаруживают значительные зоны гемолиза, В-гемолизин лизирует эритроциты барана, но при условии, что после выращивания при 37 °С посевы будут помещены на 24 ч щ холод. В связи с указанным свойством В-гемолизин полу­чил название тепло-холодового гемолизина.

2.Патогенные и непатогенные стафилококки могут быть также дифференцированы с помощью реакции адсорбции. С помощью адсорбированных сывороток пиогенные стафилококки были разделены на 7 специфических типов и 8 типов с менее спе­цифическими реакциями. Большое значение имеет метод фаго-типажа стафилококков. С помощью специфических стафило­кокковых фагов стафилококки отнесены к различным фаготипам.

Метод фаготипирования позволяет выявить патогенность штаммов стафилококка. Для фагодиагностики стафилококков с помощью специфического фага применяются фаги, принад­лежащие к 5 группам. Основными фагами удается пикетиро­вать до 60% выделяемых бактерий, процент пикетируемых фа­гами стафилококков достигает 73,7%.

По степени патогенности и токсичности стафилококки могут быть разделены на 3 группы:

• стафилококки 1-й группы дают значительный гемолиз на 5%-ном кровяном агаре с кровью кролика и барана в течение 1—2 ч. Стафилококков этой группы выделяют при фурункулезе, гид-раденитах, остеомиелитах, флегмонах, сепсисе и при ряде дру­гих гнойных заболеваний. Стафилококки, принадлежащие к первой группе, считаются патогенными;

• стафилококки 2-й группы вызывают незначительный гемолиз на 5%-ном кровяном агаре с кровью кролика и барана. Счита­ются условно патогенными. Встречаются часто на открытых по­верхностях кожи, при фолликулитах, иногда на поверхности ран;

• стафилококки 3-й группы не вызывают гемолиза на 5%-ном кровяном агаре с кровью кролика или барана. Эти стафило­кокки следует считать сапрофитами, их часто выделяют с по­верхности здоровой кожи, а также с различных предметов.

3. Стафилококки относительно легко выделяются из очагов пора­жения у человека, и нет необходимости прибегать к методу обо­гащения.

При стафилококковой пневмонии стафилококки чаще всего выделяются в чистой культуре. Для выделения стафилококков производят посев на чашку Петри с молочно-солевым агаром. Одновременно засевают чашки с 5%-ном кровяным агаром с кровью кролика или барана. Через 18—20 ч инкубации при 37 °С выросшие на чашках колонии микроскопируют, делают мазок и окрашивают по Граму. Колонии стафилококков затем пересевают на пробирки с питательной средой и помещают в термостат при 37 "С. Через 12—18 ч роста после микроскопи-рования мазков из выросшей культуры, окрашенных по Граму, ставят реакцию плазмокоагуляции, а из оставшейся культуры готовят взвесь и вводят кролику внутрикожно. Реакцию учиты­вают через 24—48 ч (появление некроза).

Вопрос 69.Возбудитель рожи

|	следующая лекция ==>
Вопрос 64. Возбудитель чумы	|	Особенности диагностики

Дата добавления: 2019-07-26 ; просмотров: 541 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ