Наставление по диагностике бруцеллеза животных от 29 09 2003 г

Утверждаю
Руководитель
Департамента ветеринарии
Е.А.НЕПОКЛОНОВ
29 сентября 2003 г. N 13-5-02/0850
НАСТАВЛЕНИЕ
ПО ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Бруцеллез - инфекционная, хронически протекающая болезнь животных.
Возбудитель - бактерии из рода бруцелла, в который входят шесть самостоятельных видов: мелитензис (овец и коз), абортус (крупного рогатого скота), суис (свиней), канис (собак), овис (баранов и овец) и неотома (кустарниковых крыс).
Микроорганизмы первых четырех видов вызывают бруцеллез животных, а пятого вида - инфекционный эпидидимит баранов (ИЭ).
От животных, больных бруцеллезом, могут заражаться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз.
1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных.
1.2.1. При установлении диагноза на бруцеллез необходимо учитывать следующее:
- различные виды возбудителя являются патогенными, в основном, для животных соответствующего вида. Бруцеллы видов мелитензис, абортус и суис могут мигрировать на животных других видов;
- клинические признаки бруцеллеза у животных не характерны. Наиболее часто клиническое проявление болезни у маточного поголовья - аборт, у свиноматок наблюдается мумификация плодов.
При абортах отмечается утолщение плодовых оболочек, образование на них фибринозных или гнойных хлопьев. Бруцеллез сопровождается нередко поражением суставов (артриты), синовиальной системы (тендовагиниты, бурситы), половой системы (у самок - эндометрит, вагинит, у самцов - орхит, эпидидимит);
- патологоанатомическая картина при бруцеллезе не имеет характерных особенностей, позволяющих использовать их для диагностики этой болезни. Только у свиней на слизистой оболочке матки иногда находят желтовато-гнойные или казеозные узелки величиной с просяное зерно, так называемый "милиарный бруцеллез матки";
- у баранов, больных бруцеллезом, в семенниках и придатках обнаруживают некротические или гнойные очаги различной величины; отмечают заполнение полости мошонки серозно-гнойным транссудатом, разрастание фиброзной ткани, сращение придатка с семенником и общей влагалищной оболочкой, иногда атрофию семенников.
1.3. Диагностика бруцеллеза включает лабораторные (бактериологическое, серологическое и молекулярно-генетическое) исследования материала и аллергическое исследование свиней в хозяйствах.
Плановые серологические исследования являются основным методом выявления больных и подозрительных по заболеванию животных.
Бактериологическую диагностику проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и прочие), вызывающих подозрение на данное заболевание. Одновременно проводят серологическое исследование сывороток крови этих животных.
Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию.
1.4. При взятии проб крови, молока и патологического материала, а также проведении лабораторных исследований необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями.
2. ВЗЯТИЕ МАТЕРИАЛА ОТ ЖИВОТНЫХ И ПЕРЕСЫЛКА
ЕГО ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Материал для лабораторных исследований отбирают от каждого животного в отдельности.
2.2. Для бактериологического исследования на бруцеллез направляют абортированный плод с плодовыми оболочками (от свиноматок берут не менее трех плодов) или селезенку, печень, желудок плода с содержимым, перевязанный со стороны пищевода и двенадцатиперстной кишки, и околоплодную жидкость.
Для прижизненной диагностики бруцеллеза от животных берут кровь, молоко, содержимое гигром (бурситов) и абсцессов. При диагностическом убое - дополнительно селезенку, печень, подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые лимфатические узлы и половые органы. Жидкий материал берут в стерильную посуду (пробирки, банки).
При взятии содержимого гигром, бурс в области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.
Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70%-ным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10 - 15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.
У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.
Молоко должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день взятия пробы. Если это невозможно, молоко консервируют сухой борной кислотой (0,1 г на 10 мл) или генцианвиолетом (0,4 мл 1%-ного спиртоводного раствора краски на 10 мл молока). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10 дней.
2.2.1. Отобранные для бактериологического исследования пробы упаковывают в целлофан или пергаментную бумагу, помещают в непроницаемую тару (ящик, банка, полиэтиленовый пакет) и в этот же день направляют в лабораторию. От абортировавшего животного одновременно с патологическим материалом направляют кровь (сыворотку крови) для серологического исследования на бруцеллез. Если в течение 24 - 30 ч взятый материал доставить в лабораторию не представляется возможным, его консервируют стерильным 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, превышающем его объем в 4 - 5 раз. Крупные плоды направляют в неконсервированном виде.
2.3. Для серологического исследования в лабораторию направляют кровь (сыворотку крови) и молоко.
2.3.1. Кровь у животных берут из яремной вены (у свиней - из яремной, ушной или хвостовой; у собак - головной предплечья или латеральной подколенной голени; у лисиц и песцов - из бедренной вены; у норок - путем отсечения подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста в стерильные пробирки по 5 - 7 мл (от пушных зверей по 1 - 2 мл). Пробирки нумеруют и составляют опись проб.
Сыворотку крови получают методом отстоя. Для свертывания крови и отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают в термостате при 30 - 38 °С в течение 1 ч или при комнатной температуре 8 - 10 ч, сгусток крови от стенок отделяют стальной спицей, а затем пробирки выдерживают при 4 - 10 °С. Через 20 - 24 ч после взятия крови отстоявшуюся сыворотку сливают в сухие стерильные пробирки и направляют для исследования в лабораторию в свежем или консервированном виде (сыворотку крови собак сливают через 3 - 4 ч и повторно через 10 - 12 ч).
Консервирование сывороток проводят:
- добавлением 0,05 мл (1 капля) 5%-ного раствора фенола на каждый миллилитр сыворотки при тщательном перемешивании;
- сухой борной кислотой (2 - 4% к объему сыворотки) до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка;
- путем однократного замораживания.
Неконсервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 6 сут. со дня взятия крови при условии хранения их при 4 - 8 °С.
Сыворотки, консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 сут.; замороженные сыворотки - в течение 3 сут. после однократного оттаивания.
Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию на бруцеллез не подлежат.
2.3.2. Для исследования на бруцеллез в кольцевой реакции пробу цельного свежего молока от коровы (буйволицы) берут сборную из каждой доли вымени одного удоя в одну стерильную пробирку в количестве 10 - 15 мл. При этом, если молоко берут перед дойкой, то первые порции молока сдаивают. Пробы молока на рынках берут из каждой отдельной посуды (бидон, фляга и проч.) после тщательного его перемешивания. Пробирки нумеруют и составляют опись проб.
Молоко исследуют свежее (охлажденное до 4 - 10 °С или неохлажденное) или консервированное добавлением в каждую пробу одной капли 10%-ного раствора формалина на 5 мл молока. Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 2 - 3 сут. Перед исследованием молоко необходимо тщательно перемешать для равномерного распределения сливок.
При массовом исследовании молока работу по отбору проб и постановке кольцевой реакции можно проводить непосредственно на ферме в специально отведенном помещении.
Не разрешается исследовать в кольцевой реакции молоко от коров (буйволиц), больных маститом или болезнями, сопровождающимися повышением температуры тела, а также молоко животных в первые две недели после родов. Молоко, имеющее повышенную кислотность (30° по Тернеру и выше), исследованию не подлежит, т.к. антиген обесцвечивается.
2.4. На направляемый в лабораторию материал заполняют сопроводительный документ установленной формы.
3. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА
3.1. Бактериологическую диагностику бруцеллеза проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и прочие), вызывающих подозрение на данное заболевание.
3.2. Бруцеллы обнаруживают бактериоскопией мазков из патологического материала, выделением культуры бруцелл на питательных средах и, при необходимости, путем постановки биологической пробы на морских свинках.
3.3. Бактериоскопическое исследование
Из доставленного на исследование патологического материала делают по два мазка из каждого объекта. При исследовании абортированных плодов мазки готовят из содержимого желудка, жидкости брюшной и грудной полостей, печени, селезенки, а также котиледонов плодовых оболочек. Из паренхиматозных органов, котиледонов и другого плотного материала делают мазки-отпечатки, жидкий материал наносят на предметные стекла пипеткой.
Мазки, фиксированные над пламенем горелки, окрашивают по Граму и одному из следующих специальных методов: по Стампу (модифицированный метод Циль-Нильсена), Козловскому или Шуляку-Шину (см. Прил. N 1, п. 1). При микроскопии мазков учитывают, что бруцеллы - мелкие, грамотрицательные, расположенные отдельно, попарно или кучно коккобактерии, окрашивающиеся по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шину в красный цвет.
3.4. Бактериологическое исследование
3.4.1. Для культивирования бруцелл используют мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), печеночный глюкозо-глицериновый бульон (ПГГБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночный глюкозо-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар, эритрит-агар, сывороточно-декстрозный агар, печеночно-сывороточный агар и печеночно-аминопептидный агар, (см. Прил. N 1, п. 2) и другие питательные среды, предназначенные для этой цели.
3.4.2. Перед посевом материала кожу абортированного плода с поверхности по белой линии протирают тампонами, смоченными 5%-ным раствором фенола. Стерильными ножницами вскрывают брюшную стенку и грудную клетку плода, содержимое грудной и брюшной полостей набирают пастеровскими пипетками и высевают в 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром, а содержимое желудка - в 2 пробирки с бульоном и не менее 5 пробирок с агаром.
Из печени и селезенки вырезают кусочки размером не менее 2,0 х 1,5 х 2,5 см, увлажняют их спиртом, обжигают с поверхности и растирают в стерильной ступке с песком. Затем в ступку добавляют равное количество стерильного физиологического раствора и вновь растирают. Полученную взвесь пастеровской пипеткой по 0,1 - 0,2 мл высевают на поверхность предварительно подсушенных плотных сред (в пробирках или чашках). Допускается высев материала пастеровской пипеткой из органов (место прокола органа предварительно прижигают раскаленным шпателем). Из каждого органа делают посев на 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром.
Если в лабораторию доставлен только желудок плода, высев проводят не менее чем на 10 пробирок агара.
При поступлении нескольких плодов от одного животного посевы делают из органов и тканей каждого плода отдельно.
Из плодовых оболочек и плаценты вырезают кусочки тканей с утолщенными ворсинками и стенками, наличием на поверхности фибрина или гнойного экссудата (выбирают менее загрязненные участки без некротических изменений).
Для уничтожения посторонней микрофлоры кусочки плаценты помещают в чашку Петри и заливают 3%-ным раствором гидроокиси калия на 30 мин. Затем их обмывают стерильным физиологическим раствором, готовят из этого материала суспензию в ступке со стерильным песком и делают посев пастеровской пипеткой на чашки со средой, содержащей бактериостатические препараты: генцианвиолет 1:200000 (0,1 мл 0,5%-ного спиртоводного раствора на 100 мл среды) или кристаллвиолет 1:100000, генцианвиолет и малахитовую зелень в концентрации каждой краски 1:200000, уксуснокислый натрий из расчета 12,5 мг на 100 мл среды и др.
Содержимое бурс, гигром высевают на 3 - 4 чашки с плотной питательной средой, содержащей бактериостатические препараты.
Пробы молока центрифугируют 30 мин. при 3000 об./мин. Верхний слой (сливки) и осадок набирают в пастеровскую пипетку и по 0,1 - 0,2 мл вносят на 3 - 4 чашки с агаром, содержащим бактериостатические препараты. Молоко, консервированное генцианвиолетом или другими консервантами, высевают на среды без бактериостатических веществ.
3.4.3. Для выращивания культур посевы помещают в термостат при 37 - 38 °С.
При исследовании материала от крупного рогатого скота половину
засеянных пробирок и чашек культивируют в обычных условиях, другую
- в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа (10 - 15%)
в СО -инкубаторе или эксикаторе (микроанаэростате). Аналогичные
2
условия можно создать в пробирках, закрытых резиновыми пробками
или залитых парафином.
Перед парафинированием пробирки закрывают ватными пробками, пронося последние над пламенем горелки. Затем верхнюю часть пробки

Утверждаю Руководитель Департамента ветеринарии Е.А.НЕПОКЛОНОВ 29 сентября 2003 г. N 13-5-02/0850 НАСТАВЛЕНИЕ ПО ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ 1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ 1.1. Бруцеллез - инфекционная, хронически протекающая болезнь животных. Возбудитель - бактерии из рода бруцелла, в который входят шесть самостоятельных видов:

мелитензис (овец и коз), абортус (крупного рогатого скота), суис (свиней), канис (собак), овис

(баранов и овец) и неотома (кустарниковых крыс).
Микроорганизмы первых четырех видов вызывают бруцеллез животных, а пятого вида -

инфекционный эпидидимит баранов (ИЭ).
От животных, больных бруцеллезом, могут заражаться люди, для которых наиболее опасен

возбудитель бруцеллеза овец и коз.
1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического,

серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом

эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом

санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями,

общими для человека и животных.
1.2.1. При установлении диагноза на бруцеллез необходимо учитывать следующее:
- различные виды возбудителя являются патогенными, в основном, для животных

соответствующего вида. Бруцеллы видов мелитензис, абортус и суис могут мигрировать на животных

других видов;
- клинические признаки бруцеллеза у животных не характерны. Наиболее часто клиническое

проявление болезни у маточного поголовья - аборт, у свиноматок наблюдается мумификация плодов.
При абортах отмечается утолщение плодовых оболочек, образование на них фибринозных или

гнойных хлопьев. Бруцеллез сопровождается нередко поражением суставов (артриты), синовиальной

системы (тендовагиниты, бурситы), половой системы (у самок - эндометрит, вагинит, у самцов -

орхит, эпидидимит);
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
- патологоанатомическая картина при бруцеллезе не имеет характерных особенностей,

позволяющих использовать их для диагностики этой болезни. Только у свиней на слизистой оболочке

матки иногда находят желтовато-гнойные или казеозные узелки величиной с просяное зерно, так

называемый "милиарный бруцеллез матки";
- у баранов, больных бруцеллезом, в семенниках и придатках обнаруживают некротические или

гнойные очаги различной величины; отмечают заполнение полости мошонки серозно-гнойным

транссудатом, разрастание фиброзной ткани, сращение придатка с семенником и общей влагалищной

оболочкой, иногда атрофию семенников.
1.3. Диагностика бруцеллеза включает лабораторные (бактериологическое, серологическое и

молекулярно-генетическое) исследования материала и аллергическое исследование свиней в

хозяйствах.
Плановые серологические исследования являются основным методом выявления больных и

подозрительных по заболеванию животных.
Бактериологическую диагностику проводят в случае аборта или при появлении у животных

других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и прочие), вызывающих подозрение на

данное заболевание. Одновременно проводят серологическое исследование сывороток крови этих

животных.
Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у

животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при

получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез

животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных

по данному заболеванию.
1.4. При взятии проб крови, молока и патологического материала, а также проведении

лабораторных исследований необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и

обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и

инструкциями.
2. ВЗЯТИЕ МАТЕРИАЛА ОТ ЖИВОТНЫХ И ПЕРЕСЫЛКА
ЕГО ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Материал для лабораторных исследований отбирают от каждого животного в отдельности.
2.2. Для бактериологического исследования на бруцеллез направляют абортированный плод с

плодовыми оболочками (от свиноматок берут не менее трех плодов) или селезенку, печень, желудок

плода с содержимым, перевязанный со стороны пищевода и двенадцатиперстной кишки, и

околоплодную жидкость.
Для прижизненной диагностики бруцеллеза от животных берут кровь, молоко, содержимое

гигром (бурситов) и абсцессов. При диагностическом убое - дополнительно селезенку, печень,

подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные,

парааортальные, тазовые лимфатические узлы и половые органы. Жидкий материал берут в

стерильную посуду (пробирки, банки).
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
При взятии содержимого гигром, бурс в области поражения выстригают шерсть, кожный покров

дезинфицируют 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с

иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его

в стерильную пробирку с резиновой пробкой.
Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70%-

ным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в

количестве 10 - 15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.
У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное

фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70%-ным спиртом и

смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и

после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в

шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.
Молоко должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день взятия пробы. Если это

невозможно, молоко консервируют сухой борной кислотой (0,1 г на 10 мл) или генцианвиолетом (0,4

мл 1%-ного спиртоводного раствора краски на 10 мл молока). Консервированное молоко пригодно

для исследования в течение 10 дней.
2.2.1. Отобранные для бактериологического исследования пробы упаковывают в целлофан или

пергаментную бумагу, помещают в непроницаемую тару (ящик, банка, полиэтиленовый пакет) и в

этот же день направляют в лабораторию. От абортировавшего животного одновременно с

патологическим материалом направляют кровь (сыворотку крови) для серологического исследования

на бруцеллез. Если в течение 24 - 30 ч взятый материал доставить в лабораторию не представляется

возможным, его консервируют стерильным 30%-ным водным раствором химически чистого

глицерина. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, превышающем его объем

в 4 - 5 раз. Крупные плоды направляют в неконсервированном виде.
2.3. Для серологического исследования в лабораторию направляют кровь (сыворотку крови) и

молоко.
2.3.1. Кровь у животных берут из яремной вены (у свиней - из яремной, ушной или хвостовой; у

собак - головной предплечья или латеральной подколенной голени; у лисиц и песцов - из бедренной

вены; у норок - путем отсечения подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста в

стерильные пробирки по 5 - 7 мл (от пушных зверей по 1 - 2 мл). Пробирки нумеруют и составляют

опись проб.
Сыворотку крови получают методом отстоя. Для свертывания крови и отстаивания сыворотки

пробирки с кровью выдерживают в термостате при 30 - 38 °С в течение 1 ч или при комнатной

температуре 8 - 10 ч, сгусток крови от стенок отделяют стальной спицей, а затем пробирки

выдерживают при 4 - 10 °С. Через 20 - 24 ч после взятия крови отстоявшуюся сыворотку сливают в

сухие стерильные пробирки и направляют для исследования в лабораторию в свежем или

консервированном виде (сыворотку крови собак сливают через 3 - 4 ч и повторно через 10 - 12 ч).
Консервирование сывороток проводят:
- добавлением 0,05 мл (1 капля) 5%-ного раствора фенола на каждый миллилитр сыворотки при

тщательном перемешивании;
- сухой борной кислотой (2 - 4% к объему сыворотки) до получения насыщенного раствора и

образования на дне пробирки небольшого осадка;
- путем однократного замораживания.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Неконсервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 6 сут. со дня взятия

крови при условии хранения их при 4 - 8 °С.
Сыворотки, консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в

течение 30 сут.; замороженные сыворотки - в течение 3 сут. после однократного оттаивания.
Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию на бруцеллез не подлежат.
2.3.2. Для исследования на бруцеллез в кольцевой реакции пробу цельного свежего молока от

коровы (буйволицы) берут сборную из каждой доли вымени одного удоя в одну стерильную

пробирку в количестве 10 - 15 мл. При этом, если молоко берут перед дойкой, то первые порции

молока сдаивают. Пробы молока на рынках берут из каждой отдельной посуды (бидон, фляга и проч.)

после тщательного его перемешивания. Пробирки нумеруют и составляют опись проб.
Молоко исследуют свежее (охлажденное до 4 - 10 °С или неохлажденное) или

консервированное добавлением в каждую пробу одной капли 10%-ного раствора формалина на 5 мл

молока. Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 2 - 3 сут. Перед

исследованием молоко необходимо тщательно перемешать для равномерного распределения сливок.
При массовом исследовании молока работу по отбору проб и постановке кольцевой реакции

можно проводить непосредственно на ферме в специально отведенном помещении.
Не разрешается исследовать в кольцевой реакции молоко от коров (буйволиц), больных

маститом или болезнями, сопровождающимися повышением температуры тела, а также молоко

животных в первые две недели после родов. Молоко, имеющее повышенную кислотность (30° по

Тернеру и выше), исследованию не подлежит, т.к. антиген обесцвечивается.
2.4. На направляемый в лабораторию материал заполняют сопроводительный документ

установленной формы.
3. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА
3.1. Бактериологическую диагностику бруцеллеза проводят в случае аборта или при появлении у

животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и прочие), вызывающих

подозрение на данное заболевание.
3.2. Бруцеллы обнаруживают бактериоскопией мазков из патологического материала,

выделением культуры бруцелл на питательных средах и, при необходимости, путем постановки

биологической пробы на морских свинках.
3.3. Бактериоскопическое исследование
Из доставленного на исследование патологического материала делают по два мазка из каждого

объекта. При исследовании абортированных плодов мазки готовят из содержимого желудка,

жидкости брюшной и грудной полостей, печени, селезенки, а также котиледонов плодовых оболочек.

Из паренхиматозных органов, котиледонов и другого плотного материала делают мазки-отпечатки,

жидкий материал наносят на предметные стекла пипеткой.
Мазки, фиксированные над пламенем горелки, окрашивают по Граму и одному из следующих

специальных методов: по Стампу (модифицированный метод Циль-Нильсена), Козловскому или

Шуляку-Шину (см. Прил. N 1, п. 1). При микроскопии мазков учитывают, что бруцеллы - мелкие,
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
грамотрицательные, расположенные отдельно, попарно или кучно коккобактерии, окрашивающиеся

по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шину в красный цвет.
3.4. Бактериологическое исследование
3.4.1. Для культивирования бруцелл используют мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ),

печеночный глюкозо-глицериновый бульон (ПГГБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-

глицериновый агар (МППГГА), печеночный глюкозо-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар,

эритрит-агар, сывороточно-декстрозный агар, печеночно-сывороточный агар и печеночно-

аминопептидный агар, (см. Прил. N 1, п. 2) и другие питательные среды, предназначенные для этой

цели.
3.4.2. Перед посевом материала кожу абортированного плода с поверхности по белой линии

протирают тампонами, смоченными 5%-ным раствором фенола. Стерильными ножницами

вскрывают брюшную стенку и грудную клетку плода, содержимое грудной и брюшной полостей

набирают пастеровскими пипетками и высевают в 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром, а

содержимое желудка - в 2 пробирки с бульоном и не менее 5 пробирок с агаром.
Из печени и селезенки вырезают кусочки размером не менее 2,0 х 1,5 х 2,5 см, увлажняют их

спиртом, обжигают с поверхности и растирают в стерильной ступке с песком. Затем в ступку

добавляют равное количество стерильного физиологического раствора и вновь растирают.

Полученную взвесь пастеровской пипеткой по 0,1 - 0,2 мл высевают на поверхность предварительно

подсушенных плотных сред (в пробирках или чашках). Допускается высев материала пастеровской

пипеткой из органов (место прокола органа предварительно прижигают раскаленным шпателем). Из

каждого органа делают посев на 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром.
Если в лабораторию доставлен только желудок плода, высев проводят не менее чем на 10

пробирок агара.
При поступлении нескольких плодов от одного животного посевы делают из органов и тканей

каждого плода отдельно.
Из плодовых оболочек и плаценты вырезают кусочки тканей с утолщенными ворсинками и

стенками, наличием на поверхности фибрина или гнойного экссудата (выбирают менее загрязненные

участки без некротических изменений).
Для уничтожения посторонней микрофлоры кусочки плаценты помещают в чашку Петри и

заливают 3%-ным раствором гидроокиси калия на 30 мин. Затем их обмывают стерильным

физиологическим раствором, готовят из этого материала суспензию в ступке со стерильным песком и

делают посев пастеровской пипеткой на чашки со средой, содержащей бактериостатические

препараты: генцианвиолет 1:200000 (0,1 мл 0,5%-ного спиртоводного раствора на 100 мл среды) или

кристаллвиолет 1:100000, генцианвиолет и малахитовую зелень в концентрации каждой краски

1:200000, уксуснокислый натрий из расчета 12,5 мг на 100 мл среды и др.
Содержимое бурс, гигром высевают на 3 - 4 чашки с плотной питательной средой, содержащей

бактериостатические препараты.
Пробы молока центрифугируют 30 мин. при 3000 об./мин. Верхний слой (сливки) и осадок

набирают в пастеровскую пипетку и по 0,1 - 0,2 мл вносят на 3 - 4 чашки с агаром, содержащим

бактериостатические препараты. Молоко, консервированное генцианвиолетом или другими

консервантами, высевают на среды без бактериостатических веществ.
3.4.3. Для выращивания культур посевы помещают в термостат при 37 - 38 °С.
При исследовании материала от крупного рогатого скота половину
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
засеянных пробирок и чашек культивируют в обычных условиях, другую
- в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа (10 - 15%)
в СО -инкубаторе или эксикаторе (микроанаэростате). Аналогичные
2
условия можно создать в пробирках, закрытых резиновыми пробками
или залитых парафином.
Перед парафинированием пробирки закрывают ватными пробками, пронося последние над

пламенем горелки. Затем верхнюю часть пробки обрезают, а оставшуюся часть углубляют на 0,5 - 1,0

см внутрь пробирки и заливают расплавленным парафином.
Необходимое содержание углекислого газа в эксикаторе можно получить путем:
- заполнения части объема углекислым газом из баллона или аппарата Киппа;
- внесения бикарбоната натрия и серной или соляной кислоты (0,48 г бикарбоната натрия и 5

мл 25%-ного раствора кислоты или 0,4 г бикарбоната натрия и 0,35 мл концентрированной соляной

кислоты на 1 л объема);
- сжигания ваты, смоченной спиртом. При этом пробирки и чашки с посевами должны

занимать не более половины объема эксикатора. Для определения концентрации углекислого газа в

эксикаторе можно использовать химический метод (см. Прил. N 1, п. 3).
3.4.4. Посевы выдерживают в термостате при 37 - 38 °С в течение 30 сут. Первичный осмотр

посевов проводят через 24 - 48 ч. Пробирки с агаром и бульоном, заросшие посторонней

микрофлорой, обезвреживают путем автоклавирования при 1,5 атм. в течение 1 ч.
В дальнейшем для обнаружения роста бруцелл посевы просматривают каждые 3 - 4 сут.

визуально, при необходимости через лупу или малом увеличении микроскопа. При отсутствии роста