Окраска стрептококков по граму

1. Изучение мазка из чистой культуры стрептококка, окрашенного по Граму (зарисовать)

В мазке, окрашенном по Граму, видны грамположительные кокки, располагающиеся цепочками, иногда цепочки очень длинные, проходят через все поле зрения.

2. Изучение мазка из гноя, окрашенного по Граму(зарисовать)

На розовом фоне, который образует клеточный детрит, видны лейкоциты, а между ними грамположительные кокки, располагающиеся в виде коротких цепочек (3–4 кокка) или парами.

3. Изучение характера роста стрептококков на кровяном агаре(зарисовать):

По характеру роста на кровяном агаре стрептококки делятся на:

3.1. бета-гемолитические стрептококки, они образуют на кровяном агаре мелкие колонии с большой зоной полного просветления среды вокруг них. Бета-гемолизин действует на строму эритроцитов, разрушая их, поэтому в зоне гемолиза эритроциты не видны

3.2. альфа-гемолитические стрептококки, они растут на кровяном агаре в виде мелких сероватых колоний с гладкой или шероховатой поверхностью, окруженных полупрозрачной зеленоватой зоной гемолиза. Альфа-гемолизин действует на гемоглобин, превращая его в метгемоглобин. В зоне гемолиза под малым увеличением видны тени эритроцитов. Так как зона имеет зеленоватый цвет, эти стрептококки названы зеленящими.

3.3. негемолитические стрептококки, они образуют мелкие колонии, кровяной агар не изменяют.

4. Изучение лабораторной диагностики стрептококковых инфекций по схеме (зарисовать)

При острых формах стрептококковых инфекциях применяют методы:

При хронических заболеваниях используют

Идентификация Str.рyogenes проводится на основании:

- морфологических особенностей роста

• определение чувствительности к бацитрацину

- антигенной структуры (серологический метод)

Микроскопический метод. Метод основан на обнаружении стрептококков в исследуемом материале. Из гноя, отделяемого ран, осадка мочи готовят мазки, окрашивают их по Граму. Обнаружение грамположительных кокков в виде коротких цепочек или расположенных парами позволяет поставить ориентировочный диагноз.

Бактериологический метод. Метод основан на выделении чистой культуры стрептококка на питательных средах. Исследуемый материал засевают на плотные и жидкие питательные cреды. Питательные потребности стрептококков сложные, на МПА они не растут, особенно в первых генерациях. Поэтому используют для посева cреды с добавлением крови, сыворотки, углеводов. Более информативен посев на кровяной агар с 5% бараньих эритроцитов, так как на нем виден характер гемолиза. Материал с тампона размазывают по поверхности 5% кровяного агара, но не втирают его в агар. Затем ополаскивают тампон в сахарном бульоне. Посев крови проводят у постели больного с последующим высевом на кровяной агар. Все посевы помещают в термостат на 18-20 часов.

На следующий день просматривают посевы на жидких средах. При наличии роста делают пересев на кровяной агар. На жидких питательных средах патогенные стрептококки дают придонно-пристеночный рост с образованием мелкокрошковатого осадка, бульон остается прозрачным. В мазке культуры из бульона видны длинные цепочки грамположительных кокков. Просматривают колонии на кровяном агаре. Гемолитическая реакция является важной в идентификации пиогенного стрептококка. Гемолиз обусловлен действием кислородолабильного стрептолизина О. Str.рyogenes образует три типа колоний:

- матовые (круглые колонии серовато-белого цвета 1–2 мм в диаметре с характерным, слегка приподнятым центром);

- слизистые (колонии правильной круглой формы, блестящие, напоминающие своим видом капельки росы, диаметр колонии 2–2,5 мм). Такие микроорганизмы продуцируют много гиалуроновой кислоты;

- гладкие (относительно небольшие колонии 1 мм в диаметре, сферической формы, с ровным краем и блестящей влажной поверхностью).

Другие виды стрептококков, относящиеся к β-гемолитическим серогруппы А, формируют очень мелкие колонии, адкиее

ри типа колоний:ием стрептолизина Онтификации пиогенного стрпетококка. зона гемолиза вокруг них значительно превышает размеры колоний.

Для дальнейшего изучения, отбирают мелкие сероватые колонии, окруженные зоной полного гемолиза или зеленоватой зоной. Из подозрительных колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму. В препарате видны грамположительные кокки, располагающиеся короткими цепочками по 2–4.

На принадлежность к роду стрептококков указывает морфология, характер роста на кровяном агаре и сахарном бульоне. Для определения принадлежности выделенной культуры к определенному виду проводят дополнительные исследования: фенотипические методы идентификации. Str.рyogenes дает отрицательную каталазную реакцию. Str.рyogenes обладает чувствительностью к антибиотику бацитрацину. Зона задержки роста ≥12 мм. Str.рyogenes продуцируют фермент пирролидонил пептидазу (PYR-аза), который разрушает L-пирролидонил в-нафтиламид при добавлении реагента (0,01% циннамальдегида), возникает красное окрашивание.

Серологический метод идентификации. Метод основан на выявлении группового полисахарида клеточной стенки. Этот полисахарид не является поверхностной структурой клеточной стенки. Для взаимодействия со специфическими антителами, содержащимися в сыворотке, необходимо провести экстракцию антигена. Экстракция может быть проведена с помощью кислоты или ферментов. Реакцию взаимодействия антигена с антителом определяют по видимой агглютинации (тест коагглютинации и латекс-агглютинации), по изменению цвета (хроматографический тест), либо по другим изменениям в зависимости конкретной тест-системы.

Дифференциацию стрептококков на серовары проводят только в группе А с помощью реакции иммунопреципитации по белковому антигену М. М – белок высокоспецифичный антигенный маркер и фактор вирулентности. Стрептококки можно типировать по Т-антигену с помощью реакции агглютинации.

Серологическая диагностика применяется при подтверждении диагноза, как правило, ревматизма. Она основана на обнаружении антител против стрептолизина О, антистрептокиназы, антидезоксирибонуклеазы В, антигиалуронидазы. Антистрептолизины определяют в реакции нейтрализации – способности стрептолизина О растворять эритроциты. Антигиалуронидазу и антифибринолизин также определяют в реакции нейтрализации.

К роду Stomatococcus относятся кокки диаметром 0,9-1,3 мкм, которые располагаются в виде гроздей винограда или по 4, неподвижны, имеют капсулу.

Факультативные анаэробы, хемоорганотрофы, имеют ферментативный и окислительный тип метаболизма. Каталазный тест вариабелен, содержат цитохромы, восстанавливают нитраты в нитриты, разлагают глюкозу в анаэробных условиях, чувствительны к бацитрацину.

На плотных питательных средах образуют колонии слизистой консистенции. Некоторые представители данного рода обитают в ротовой полости и в верхних дыхательных путях.

Стоматококки иногда выделяют от больных с сепсисом и эндокардитом.

9.2 Семейство Streptococcaceae

К семейству Streptococcaceae отнесено 6 родов, патогенных для человека: Streptococcus, Enterococcus, Aerococcus, Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus. Наибольшее значение в патологии имеют роды Streptococcus и Enterococcus.

9.2.1. Род Streptococcus

Стрептококки впервые обнаружены в тканях человека при рожистом воспалении и раневых инфекциях (Т.Бильрот, 1874), а также при септицемиях и гнойных поражениях (Л.Пастер, 1880).

Морфология, свойства стрептококков. В род включены сферические или овоидные кокки размером 0,5-2,0 мкм, которые в мазках располагаются парами или короткими цепочками (особенно при выращивании на жидких средах). При различных внешних воздействиях они могут принимать вытянутую или ланцетовидную форму. Неподвижны, спор не образуют, некоторые имеют капсулу. Хемоорганотрофы, метаболизм бродильный, ферментируют глюкозу с образованием молочной кислоты. Факультативные анаэробы, некоторые являются микроаэрофилами, каталазоотрицательны. Большинство видов обладают гемолитической активностью. При росте на кровяном агаре различают b-гемолитические стрептококки, дающие прозрачную зону гемолиза, a—зеленящие, дающие вокруг колоний зону зеленого цвета (гемоглобин превращается в метгемоглобин) и негемолитические – среда не изменяется.

Классификация и антигенная структура. На основании отличий в полисахаридных антигенах Ленсфильд в 1933 г. разделила стрептококки на 20 серогрупп, обозначенных буквами от А до V. Заболевания у людей чаще вызывают стрептококки серогрупп А (S. pуogenes), В и С.

По наличию типоспецифических протеиновых антигенов стрептококки делятся на серовары M, R, T. По М-антигену различают более 100 сероваров в группе А, по Т – еще несколько десятков.

Род Streptococcus объединяет 21 вид стрептококков, которые отличаются по антигенным свойствам, биохимическим тестам и патогенности в отношении человека.

S. pyogenes – облигатно-патогенный для человека (b-гемолитический, группа А), который вызывает скарлатину, ангину, хронический тонзиллит, фарингит, ревматизм, гнойно-воспалительные процессы кожи и подкожной клетчатки, остеомиелит, рожу, диффузный гломерулонефрит, сепсис, целлюлит.

S. pneumoniaе – (не входит в схему Ленсфильд), является возбудителем очаговой и крупозной пневмонии, сепсиса, менингита у детей, отитов, гнойных конъюнктивитов, бронхитов, ползучей язвы роговицы.

S. mitis, S. sanguis, S. salivarius, S. mutans (серогруппа К) – это условно-патогенные микроорганизмы, которые принимают участие в образовании зубных бляшек и возникновении кариеса зубов. Они имеют фермент гликозилтрансферазу, которая превращает сахарозу в декстран, что способствует прикреплению стрептококков к поверхности зубов.

Стрептококки серовара 12 (нефритогенные) выделяют цитотоксины; имеют рецепторы к почечной ткани.

S. agalactiae относятся к серогруппе В, имеют капсулу, вызывают послеродовые инфекции, сепсис новорожденных, эрозивный стоматит, урогенитальные процессы. Эпидемиологически они связаны с носительством этого вида стрептококка у матери и персонала.

S.anginosus – стрептококки группы С, вызывают респираторные инфекции, заболевания мочеполовой системы.

Экология и распространение. Стрептококки группы А встречаются повсеместно. Микроорганизмы часто колонизируют кожные покровы и слизистые оболочки человека. Резервуар инфекции – больной человек или бактерионоситель. Основной путь передачи – контактный и воздушно-капельный, а также через инфицированные пищевые продукты. Стрептококки длительно сохраняются при низких температурах, устойчивы к высушиванию, в гное, мокроте сохраняются месяцами. При температуре 70 о С они погибают в течение 1 часа, а 3% фенол убивает их через 15 минут.

Патогенез. Первым этапом инфекционного процесса является адгезия микроорганизмов к эпителию слизистых оболочек, что обеспечивает возможность быстрой их колонизации. Основным адгезином является липотейхоевая кислота, покрывающая поверхностные фимбрии. Фимбриальный белок (или белок М) – основной фактор вирулентности и типоспецифический антиген. Антитела к нему обеспечивают невосприимчивость к повторным заражениям. Большое разнообразие серотипов белка М значительно снижает действие гуморальных защитных реакций.

Белок М препятствует фагоцитозу за счет связывания фибриногена, фибрина и продуктов его деградации, адсорбирует их на своей поверхности, маскируя рецепторы для компонентов комплемента и опсонинов; способствует размножению стрептококков в крови. Он имеет свойства суперантигена, вызывает поликлональную активацию лимфоцитов, что ведет к нарушению толерантности к собственным тканевым АГ и развитию аутоиммунных реакций, потому что вызывает перекрестные реакции с кардиомиоцитами (антигенная мимикрия).

Капсула защищает стрептококки от антимикробного действия фагоцитов и облегчает адгезию к эпителию.

Факторы патогенности и ферменты инвазии и агрессии играют большую роль в патогенезе: стрептококки вызывают воспалительную реакцию, обусловленную секрецией более 20 растворимых продуктов (стрептолизины О и S, гиалуронидаза, ДНКазы, стрептокиназы, эритрогенные токсины и т.д.)

Лейкоцидин стрептококков разрушает полиморфноядерные нейтрофилы, парализует фагоцитоз; гиалуронидаза облегчает проникновение бактерий в соединительную ткань; стрептокиназа активирует плазминоген, что приводит к образованию плазмина и растворению фибриновых волокон; различные виды нуклеаз разрушают ДНК; цитотоксический нефритогенный токсин пептидной природы поражет почечную ткань.

Бета-гемолитические стрептококки серогруппы А образуют токсины О- и S-стрептолизины.

О-стрептолизин – белок, оказывает гемолитическое, цитотоксическое, кардиотоксическое и пирогенное действие. Этот токсин является антигеном, и у больных синтезируются антитела к нему. О-стрептолизин – порообразующий цитотоксин, повреждающий мембраны клеток посредством образования трансмембранных каналов.

S-стрептолизин – нуклеопротеид, секретируется в среду, содержащую сыворотку, оказывает гемолитическое, лейкотоксическое действие. Разрушает лизосомы и мембраны митохондрий.

Штаммы S. pyogenes выделяют токсин, который вызывает гломерулонефрит (серовар 12). При острых гломерулонефритах образуются иммунные комплексы антигенов стрептококка с IgG на базальной мембране, которые активируют систему комлемента, что стимулирует воспалительную реакцию.

Скарлатинозный эритрогенный токсин Дика (токсин сыпи) продуцируется стрептококками, выделенными от больных скарлатиной; он вызывает поражение ЦНС, эндокринной, сердечно-сосудистой систем, поражение зева, паралитические изменения мелких кровеносных сосудов.

Эритрогенные токсины проявляют суперантигенные свойства, оказывают митогенное действие на Т-клетки, стимулируют выработку макрофагами ИЛ-1 и фактора некроза опухоли, являясь медиаторами септического шока.

Кардиогепатический токсин продуцируют некоторые штаммы стрептококков группы А, он вызывает поражения миокарда и диафрагмы и образование гигантоклеточных гранулем в печени.

Стрептококковый синдром токсического шока развивается как результат сочетанного действия различных эндотоксинов, продуцируемых стрептококками.

С5_а–пептидаза подавляет активность фагоцитов. Фермент расщепляет и инактивирует С5_а-компонент комплемента, который является хемоаттрактантом.

Роль стрептококков в этиологии скарлатины. Скарлатина – острое инфекционное заболевание, ее вызывает b–гемолитический стрептококк группы А. В патогенезе заболевания ведущую роль играет эритрогенный токсин.

Источник инфекции – больной человек со стрептококковой ангиной, скарлатиной или носитель патогенного стрептококка. Восприимчивы лица, у которых нет антитоксического иммунитета. Путь передачи – воздушно-капельный. Стрептококки попадают на слизистую оболочку миндалин, мягкого неба, задней стенки глотки, вызывают воспалительную реакцию за счет выделения токсинов.

У ослабленных лиц местные изменения могут носить некротический характер и распространяться на близлежащие ткани – клетчатку шеи, среднее ухо, придаточные пазухи носа, сосцевидный отросток.

Клиника. Инкубационный период составляет 2-7 дней (1-12 дней). Острое начало: озноб, повышение температуры, нарастание интоксикации. Больные жалуются на головную боль, слабость, тошноту, рвоту. Отмечается гиперемия мягкого неба, дужек, задней стенки глотки, увеличение миндалин, язык обложен белым налетом, отечный. Увеличиваются регионарные лимфоузлы, поражаются периферические кровеносные сосуды, появляется мелкоточечная сыпь, которая подвергается шелушению. Характерен вид больного – на фоне ярко-розовой окраски кожи лица – отчетливо выделяется бледный носогубный треугольник. Сыпь держится 3-5 дней, а затем угасает. Стрептококки могут гематогенно проникать в различные ткани и вызывать нефрит, миокардит, ревматизм.

Выделяют особую – экстрабуккальную – форму скарлатины (раневую, ожоговую), когда входными воротами инфекции является не слизистая оболочка зева, а раны, вокруг которых возникает яркая мелкоточечная сыпь. Заболевание сопровождпется лихорадкой и интоксикацией.

Иммунитет после перенесенной скарлатины стойкий, антитоксический.

Лечение. Антибиотики пенициллинового и цефалоспоринового ряда, при аллергии на b-лактамные антибиотики – эритромицин, азитромицин.

Материалом для исследования являются гной, мокрота, слизь из зева и носа, кровь.

Микроскопический метод включает приготовление мазка и окраска его по Граму, при обнаружении грамположительных цепочек кокков необходимо производить посев на чашки с кровяным и сахарным агарами.

Бактериологический метод – основной, при посеве на чашках с кровяным агаром обращают внимание на рост гемолитических и зеленящих стрептококков, из колоний делают мазки, окрашивают по Граму, при обнаружении грам(+) цепочек кокков ставят каталазный тест, который у стрептококков отрицательный. Далее колонии пересевают на сывороточный бульон или тиогликолевую среду, где стрептококки дают придонный рост. Затем определяют серогруппу путем постановки реакции преципитации в геле или ИФА с группоспецифическими сыворотками. Следующий этап – определяют серотип путем постановки реакции латекс-агглютинации с М-антисыворотками.

Более 99% изолятов чувствительны к бацитрацину.

Серологические методы. Определяют АТ к токсинам и ферментам. При ревматизме оценивают нарастание титра антител к О-стрептолизину, ДНКазе, гиалуронидазе.

При заболеваниях мочеполовой системы и инфекциях новорожденных штаммы гемолитических стрептококков дифференцируют со S. agalactiae используя САMР-тест (название произошло от первых букв фамилий австралийских исследователей, предложивших тест). Для этого проводят совместное выращивание на кровяном агаре с добавлением глюкозы штамма стафилококка, вырабатывающего бета-гемолизин, и исследуемых культур стрептококка; при наличии S. agalactiae в месте пересечения культур образуется гемолиз, приобретающий форму бабочки. S. agalactiae нечувствительны к бацитрацину.

Дальнейшую идентификацию проводят после обработки мазков противострептококковыми моноклональными антителами, меченными флюорохромами: свечение при взаимодействии с определенным антителом указывает на тип и серовар.

Роль стрептококков в этиологии ревматизма. Ревматизм представляет собой врспалительное заболевание, возникающее как отерогенное следствие инфекционного поражения глотки -гемолитическими стрептококками группы А.

Этиологическая связь стрептококков группы А с ревматизмом подтверждается клиническими и эпидемиологическими данными. В острой фазе ревматизма всегда обнаруживаются иммунологические признаки перенесенной ранее стрептококковой инфекции и повышение титров антител к стрептококковым антигенам.

Обычно ревматизм обостряется после перенесенной стрептококковой инфекции. Первичные и повторные атаки ревматизма можно предотвратить с помощью антибактериальной терапии (бициллина, пенициллина).

Воротами инфекции при начале ревматического процесса служит глотка.

Выявлена перекрестная реактивность некоторых стрептококковых антигенов с тканями сердца. В основе патогенеза ревматизма находится аутоиммунный механизм (с генетической предрасположенностью и без нее).

В диагностике ревматизма используют серологические исследования, в которых определяют титры антител к О-стрептококку (антистрептолизиновый тест, к гиалуронидазе, антидезоксирибонуклеазе). При однократном исследовании повышенным сяитают титры не менее 250 ед Тодда у взрослых и 333 ед – у детей в возрасте старше 5 лет.

Используют антистрептозимовый тест. Это РПГА, в которой используют эритроцитарный антигенный диагностикум. Определение антител к внеклеточным стрептококковым антигенам служит чувствительным индикатором недавно перенесенной стрептококковой инфекции.

Streptococcus pneumoniae (пневмококк). Этот стрептококк имеет тропизм к легочной ткани, что обусловлено наличием специфических адгезинов; имеет вытянутую ланцетовидную форму. Располагается попарно, окружен полисахаридной капсулой. Под капсулой расположен М-белок, придающий типовую специфичность. Грамположителен, спор и жгутиков не имеет, на кровяном агаре образует мелкие колонии с зоной гемолиза зеленого цвета (a-гемолиз). Разлагает инулин.

Антигены. Имеет полисахаридный антиген клеточной стенки; по К антигену – 90 сероваров.

Факторы патогенности. Пневмококки образуют пневмолизин – мембраноповреждающий токсин, протомеры токсина адсорбируются холестерином, входящим в состав билипидного слоя мембраны, далее протомеры олигомеризуются в гептамеры, которые после ряда конформационных изменений проникают через цитоплазматическую мембрану, через образовавшуюся пору (в виде ножки) происходит вход и выход небольших молекул и ионов, что ведет к осмотическому лизису эритроцитов; имеют лейкоцидин; М-белок и капсула обеспечивают способность к адгезии и устойчивость к фагоцитозу. Имеется гиалуронидаза и фермент пептидаза, которая расщепляет секреторный иммуноглобулин А, нейроминидаза.

Важное значение имеет субстанция С – холинсодержащая тейхоевая кислота клеточной стенки, специфически взаимодействующая с С-реактивным белком, в результате чего происходит активация системы комплемента и высвобождение медиаторов острой фазы воспаления, которые аккумулируются в легочной ткани, что стимулирует миграцию полиморфноядерных фагоцитов и развитие воспаления.

Инфекции вирулентным сероваром 3 могут сопровождаться образованием полостей в паренхиме легких. Из первичного очага возбудитель может проникать в плевральную полость и перикард или гематогенно диссеминировать и вызывать менингиты, эндокардиты, поражения суставов.

Патогенез. Пневмококки персистируют в верхних дыхательных путях. При ослаблении иммунитета они попадают в нижние дыхательные пути, возникает эндогенная инфекция, особенно если есть предрасполагающие факторы: застойные явления в легких; снижение уровня секреторных иммуноглобулинов А, активности макрофагов, разрушение сурфактанта легких.

В связи с выделением патогенных пневмококков от больного или носителя возможно воздушно-капельное заражение чувствительных людей, т.е. экзогенная инфекция. Пневмококки могут вызывать менингит.

Сайт СТУДОПЕДИЯ проводит ОПРОС! Прими участие :) - нам важно ваше мнение.

Способы окраски

Простой способ окраски. Использование одного вида красителя:

1. Растворы метиленового синего, время окраски 3-5 минут

2. Растворы фуксина, время окраски 1-2 минут

3. Растворы бриллиантового зеленого, время окраски 3-5 минут

Данный способ прост в работе, позволяет изучить форму клетки микроорганизмов, взаиморасположение.

Сложные способы окраски позволяют выявить определенные структуры микроорганизмов (капсулы, споры, жгутики, нуклеотид), провести дифференциацию видов микроорганизмов (Грам плюс и Грам минус кислотоустойчивые и некислотоустойчивые). При окраске сложным способом используют 2-3 красителя, протраву, дифференцирующее вещество.

Дифференциация микроорганизмов на Грам положительные и Грам отрицательные основано на различии строения клеточной стенки. У Грам положительных микроорганизмов в клеточную стенку входит многослойный пептидогликан, с которым связаны тейхоевые кислоты. Этот комплекс образует прочное соединение с генцианвиолетом, не разрушающееся при воздействии спирта 96º.

У Грам отрицательных микроорганизмов пептидогликан однослойный, тейхоевых кислот мало, больше фосфолипидов и липопротеидов, что создает непрочное соединение с генцианвиолетом, окрашиваясь дополнительным красителем — фуксином. Используемые красители: карболово-спиртовой генцианвиолет, фуксин Пфейффера. Протравка — раствор Люгеля. Дифференцирующее вещество — 96º этиловый спирт.

Грам положительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет — стафилококки, стрептококки, пневмококки.

Грам отрицательные окрашиваются в малиновый цвет — менингококки, гонококки.

1. На препарат кладут фиолетовую бумажку по Синёву и сверху наносят несколько капель физраствора. Окрашивают 1-2 мин.

2. Снять пинцетом бумажку с препарата, слить в лоток избыток краски

3. Не промывая препарат водой, нанести несколько капель раствора Люголя и держать до почернения препарата примерно 1 минуту.

4. Не промывая препарат водой, нанести сверху раствор 96º этилового спирта; держать до отхождения красителя

5. Промыть физраствором или стерильной дистиллированной водой

6.
Докрасить фуксином Пфейффера — 3 минуты

7. Промыть физраствором или стерильной дистиллированной водой.

1. Приготовить 2 препарата из микробной культуры.

2. Окрасить простым способом (м/с) и сложным по Граму

3. Провести иммерсионную микроскопию, зарисовать.

1. Морфологические особенности шаровидных форм бактерий.

2. Тинкториальные свойства шаровидных форм бактерий

3. Окраска по Бурри-Гинсу и Ожешко

1. Морфологические структуры, размеры шаровидных форм бактерий

2. Микроскопию шаровидных форм

3. Методики окраски по Бурри-Гинсу и Ожешко

1. Провести микроскопию демонстрационных препаратов шаровидных форм бактерий, зарисовать

2. Приготовить препарат из капсульных бактерий, окрасить по Бурри-Гинсу

3. Провести микроскопию, зарисовать

4. Приготовить препарат из споровой кульуры, окрасить по Ожешко, провести микроскопию, зарисовать.

Шаровидные бактерии — кокки имеют средний диаметр около 1 мкм. В зависимости от их расположения в мазке, что определяется характером деления клеток, патогенные кокки подразделяются на локки (двойной), стрептококки (цепочечный) и стафилококки (виноградная гроздь). Диплококки и стрептококки делятся в одной плоскости, но остаются соединенными цитоплазматическими мостиками. К диплококкам относятся:

1. Пневмококки — диплококки ланцетовидной формы

2. Менингококки — диплококки бобовидной формы

3. Гонококки — диплококки бобовидной формы.

Стафилококки делятся в двух плоскостях и образуют скопления клеток, напоминающие грозди.

Непатогенные кокки располагаются беспорядочно (микрококки) тетрадами и пакетами по 8-16 особей (сарцины). Тетракокки и сарцины делятся в двух-трех плоскостях.

Спор и жгутиков патогенные кокки не образуют. Капсулы имеют только некоторые кокки, например пневмококки.

Гр +: стафилококки, стрептококки, пневмококки

Гр -: менингококки, гонококки

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Глава 15. Стрептококки

К роду Streptococcus относятся: Streptococcus pyogenes (гемолитический) и Streptococcus pneumoniae (пневмококк). Впервые стрептококки были обнаружены Бильротом (1874), Л. Пастером (1879). Изучены они были Э. Розенбахом (1884).

Морфология. Стрептококки - это кокки, имеющие шаровидную форму. Диаметр каждого кокка в среднем 0,6-1 мкм, однако для них характерен полиморфизм: встречаются мелкие и крупные кокки, строго шаровидные и овальные. Стрептококки располагаются цепочкой, что является результатом деления их в одной плоскости. Длина цепочек разная. На плотной питательной среде цепочки обычно короткие, на жидких - длинные. Стрептококки неподвижны, не имеют спор (см. рис. 4) Свежевыделенные культуры иногда образуют капсулу. На ультратонких срезах видна микрокапсула, под ней расположена трехслойная клеточная стенка и трехслойная цитоплазматическая мембрана. Грамположительны.

Культивирование. Стрептококки - факультативные анаэробы. Растут при температуре 37° С и рН среды 7,6-7,8. Оптимальными средами для их выращивания являются среды, содержащие кровь или сыворотку крови. На плотных питательных средах колонии стрептококков мелкие, плоские, мутные, сероватого цвета. На агаре с кровью некоторые разновидности стрептококков образуют гемолиз. β-Гемолитические стрептококки образуют четкую зону гемолиза, α-гемолитические стрептококки образуют небольшую зеленоватую зону (результат перехода гемоглобина в метгемоглобин). Встречаются стрептококки, не дающие гемолиза.

На сахарном бульоне стрептококки растут с образованием пристеночного и придонного мелкозернистого осадка, бульон при этом остается прозрачным.

Ферментативные свойства. Стрептококки обладают сахаролитическими свойствами. Они расщепляют глюкозу, лактозу, сахарозу, маннит (не всегда) и мальтозу с образованием кислоты. Протеолитические свойства у них слабо выражены. Они свертывают молоко, желатин не разжижают.

Токсинообразование. Стрептококки образуют ряд экзотоксинов: 1) стрептолизины - разрушают эритроциты (О-стрептолизин обладает кардиотоксическим действием); 2) лейкоцидин - разрушает лейкоциты (образуется высоковирулентными штаммами); 3) эритрогенный (скарлатинозный) токсин - обусловливает клиническую картину скарлатины - интоксикацию, сосудистые реакции, сыпь и пр. Синтез эритрогенного токсина детерминирован профагом; 4) цитотоксины - обладают способностью вызывать гломерулонефрит.

Антигенная структура и классификация. У стрептококков обнаружены различные антигены. В цитоплазме клетки содержится видовой нуклеопротеидной природы антиген - единый для всех стрептококков. На поверхности клеточной стенки расположены протеиновые типовые антигены. В клеточной стенке стрептококков обнаружен полисахаридный групповой антиген.

По составу полисахаридной группоспецифической фракции антигена все стрептококки делятся на группы, обозначаемые большими латинскими буквами А, В, С, D и т. д. до S. Кроме групп, стрептококки разделены на серологические типы, которые обозначаются арабскими цифрами.

Группа А включает 70 типов. В эту группу входит большинство стрептококков, вызывающих различные заболевания у человека. Группа В включает в основном условно-патогенные для человека стрептококки. Группа С включает патогенные для человека и животных стрептококки. Группа D состоит из непатогенных для человека стрептококков, однако в эту группу входят энтерококки, которые являются обитателями кишечного тракта человека и животных. Попадая в другие органы, они обусловливают воспалительные процессы: холециститы, пиелиты и др. Таким образом, их можно отнести к условно-патогенным микробам.

Принадлежность выделенных культур к одной из серологических групп определяют с помощью реакции преципитации с групповыми сыворотками. Для определения серологических типов используют реакцию агглютинации с типоспецифическими сыворотками.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Стрептококки довольно устойчивы в окружающей среде. При температуре 60° С погибают через 30 мин.

В высушенном гное и мокроте они сохраняются месяцами. Обычные концентрации дезинфицирующих веществ губят их через 15-20 мин. Энтерококки значительно устойчивее, дезинфицирующие растворы убивают их только через 50-60 мин.

Восприимчивость животных. К патогенным стрептококкам чувствителен рогатый скот, лошади, собаки, птицы. Из лабораторных животных чувствительны кролики и белые мыши. Однако стрептококки, патогенные для человека, не всегда патогенны для экспериментальных животных.

Источники инфекции. Люди (больные и носители), реже животные или инфицированные продукты.

Пути передачи. Воздушно-капельный и воздушно-пылевой, иногда пищевой, возможен контактно-бытовой.

Заболевания могут возникать в результате экзогенного заражения, а также эндогенно - при активации условно-патогенных стрептококков, обитающих на слизистых оболочках зева, носоглотки, влагалища. Снижение сопротивляемости организма (охлаждение, голодание, переутомление и пр.) может привести к возникновению аутоинфекций.

Большое значение в патогенезе стрептококковых инфекций имеет предварительная сенсибилизация - как следствие ранее перенесенного заболевания стрептококковой этиологии.

При проникновении в кровяное русло стрептококки обусловливают тяжело протекающий септический процесс.

Заболевания у человека чаще вызывают β-гемолитические стрептококки серологической группы А. Они продуцируют ферменты патогенности: гиалуронидазу, фибринолизин (стрептокиназу), дезоксирибонуклеазу и др. Кроме того, у стрептококков обнаруживают капсулу, М-протеин, обладающие антифагоцитарными свойствами.

Стрептококки вызывают у человека различные острые и хронически протекающие инфекции, как с образованием гноя, так и не нагноительные, различающиеся по клинической картине и патогенезу. Нагноительные - флегмоны, абсцессы, раневые инфекции, ненагноительные - острые инфекции верхних дыхательных путей, рожистое воспаление, скарлатина, ревматизм и др.

Стрептококки часто вызывают вторичные инфекции при гриппе, кори, коклюше и других заболеваниях и нередко осложняют раневые инфекции.

Иммунитет. По характеру иммунитет - антитоксический и антибактериальный. Постинфекционный антимикробный иммунитет малонапряженный. Это объясняется слабой иммуногенностью стрептококков и большим количеством сероваров, не дающих перекрестного иммунитета. Кроме этого, при стрептококковых заболеваниях наблюдается аллергизация организма, чем объясняют склонность к рецидивам.

Профилактика. Сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям, укреплению общей резистентности организма. Специфическая профилактика не разработана.

Лечение. Применяют антибиотики. Чаще используют пенициллин, к которому стрептококки не приобрели устойчивости, а также эритромицин и тетрациклин.

Значение стрептококка в этиологии ревмокардита. Патогенез ревмокардитов изучен недостаточно. Но в пользу роли стрептококка в развитии этого заболевания говорит ряд фактов:

1. У больных ревмокардитом из зева высевают В-гемолитический стрептококк.

2. Ревматизм часто возникает после перенесенной ангины, тонзиллитов, фарингитов, сенсибилизирующих организм.

3. В сыворотке крови больных обнаруживают антистрептолизин, антистрептогиалуронидазу - антитела к стрептококковым ферментам, токсинам.

4. Косвенным подтверждением роли стрептококка является успешное лечение пенициллином.

В последнее время в возникновении хронических форм ревмокардита придают значение L-формам стрептококка.

Профилактика обострений ревмокардита сводится к предупреждению стрептококковых заболеваний (например, весной и осенью проводят профилактический курс введения пенициллина). Лечение сводится к применению антибактериальных препаратов - пенициллина.

Значение стрептококка в этиологии скарлатины. Г. Н. Габричевский (1902) впервые высказал предположение о том, что гемолитический стрептококк является возбудителем скарлатины. Но так как стрептококки, выделяемые при других заболеваниях, не отличались от возбудителей скарлатины, то это мнение не всеми разделялось. В настоящее время установлено, что скарлатину вызывают стрептококки группы А, вырабатывающие эритрогенный токсин.

У переболевших возникает иммунитет - стойкий, антитоксический. Его напряженность определяют постановкой реакции Дика - внутрикожным введением эритрогенного токсина. У не болевших вокруг места введения возникают гиперемия и отек, что характеризуется как положительная реакция (отсутствие антитоксина в сыворотке крови). У переболевших такая реакция отсутствует, так как образовавшийся у них антитоксин нейтрализует эритрогенный токсин.

Профилактика. Изоляция, госпитализация. Контактным, ослабленным детям вводят гамма-глобулин. Специфическая профилактика не разработана.

Лечение. Используют пенициллин, тетрациклин. В тяжелых случаях вводят антитоксическую сыворотку.

Цель исследования: выявление стрептококка и определение его серовара.

1. Слизь из зева (ангина, скарлатина).

2. Соскоб с пораженного участка кожи (рожа, стрептодермия).

5. Кровь (подозрение на сепсис; эндокардит).

Способы сбора материала