Отбор смывов на иерсиниоз
Энтеропатогенные иерсинии (Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis) вызывают кишечные инфекции, характеризующиеся поражением лимфоидного аппарата кишечника, токсико-аллергическими осложнениями, развитием генерализованных процессов.
Микробиологическая диагностика иерсиниозов включает бактериологическое и серологическое исследования.
Бактериологическое исследование.Материал, подлежащий исследованию (фекалии, кишечные биоптаты, лимфоузлы или ткань удаленного аппендикса, кровь, слизь из ротоглотки), обрабатывают в течение 1 минуты 0,5% раствором гидроксида калия в 0,5% хлориде натрия, затем делают посевы на агар CIN, Серова или среду Эндо, которые после посева инкубируют при 32 °С в течение 24—48 ч или 24 ч при 37 0 С и столько же при комнатной температуре. Параллельно посевы помещают в холодильник при температуре +4 0 С (иерсинии хорошо растут при низких температурах). Пересевы со среды накопления выполняют на 3, 5, 10, 15-е сутки на указанные выше питательные среды.
На 3-й (4-й) день проводят идентификацию чистой культуры по биохимическим и антигенным свойствам (биовар, серогруппа с помощью РА у культур, выращенных при температуре ниже 30 0 С), учитывают температуру физиологического оптимума иерсиний (28-30 0 С), определяют чувствительность к антибиотикам. Возбудители иерсиниоза и псевдотуберкулеза оксидазоотрицательны, ферментируют до кислоты глюкозу, обладают нитратредуктазой и другими свойствами (см. табл. 5).
В отличие от возбудителя псевдотуберкулеза, бактерии вида Y. enterocoliticaпо биологическим свойствамгетерогенны, включая безусловно-патогенные, условно-патогенные (возбудители оппортунистической инфекции или пищевого отравления) и непатогенные для человека иерсинии. Определение факторов вирулентности у Y. enterocoliticaпредполагает постановку реакций аутоагглютинации и кальцийзависимости, пиразинамидазного теста, определение плазмидассоциированных антигенов.
Тест аутоагглютинации.В две пробирки со средой Кларка засевают исследуемый штамм, инкубируют в течение 24 ч одну пробирку при 37 0 С, другую - при 26 - 28 0 С. При наличии вирулентности бактерии, выращенные при температуре 37 0 С, склеиваются в виде хлопьев, оседающих на дно и стенки пробирки. Культура, инкубированная при температуре 26 – 28 0 С, не агглютинируется.
Определение пиразинамидазной активности.На скошенную среду с пиразинамидом, засевают исследуемые культуры, выращенные при температуре 25-30 0 С на ПА, инкубируют при той же температуре в течение 48 часов, после чего смачивают скошенную поверхность раствором сульфата аммонийного железа, оставляя пробирку при комнатной температуре в течение 15 мин. В пробирках с культурами патогенных иерсиний цвет среды остаются без изменений; непатогенные иерсинии меняют цвет скошенной части среды на коричневый.
Тест кальцийзависимости ставят на кальций-дефицитном агаре, который готовят путем добавления раствора оксалата натрия к расплавленному МПА. После перемешивания вносят 4 мл 0,5М раствора хлорида магния. Исследуемую культуру засевают на 2 чашки с кальций-дефицитным агаром, одну чашку инкубируют 24 — 48 часов при 37 0 С, другую - при 26 - 28 0 С. При наличии вирулентности при дефиците кальция у клеток, инкубированных при 37 °С (но не 26 – 28 0 С), прекращается рост бактерий, при этом колонии на чашке либо имеют карликовые размеры (Y. enterocolitica), либо отсутствуют совсем (чаще у Y. pseudotuberculosis). При 26 – 28 0 С так же, как у непатогенных иерсинии при двух температурных режимах, наблюдается рост колоний обычных размеров.
Серологическое исследованиезаключается в постановке РА, РНГА или ИФА с иерсиниозными диагностикумами и парными сыворотками крови больных с подозрением на иерсиниоз с целью определения специфических антител.
Генодиагностика – обнаружение типичных фрагментов ДНК патогенных иерсиний в клиническом материале или пищевых продуктах методами ДНК-ДНК-гибридизация или ПЦР-анализа.
| Подготовка к исследованию: |
