Пневмококковая пневмония диагностика лабораторная диагностика

Сайт СТУДОПЕДИЯ проводит ОПРОС! Прими участие :) - нам важно ваше мнение.

ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

Методы изучения нормальной микрофлоры

Для изучения нормальной микрофлоры применяют два метода; бактериоскопический и бактериологический.

Бактериоскопический метод. Имеет большое самостоятельное значение для тех биотопов организма человека, в которых обитает большое количество различных видов микроорганизмов (полость рта. кишечник, вагина). Он позволяет получить общее представление о составе микрофлоры (преобладание грам/+ или грам/- бактерий той или иной формы - кокки, диплококки, стрептококки, палочки, бациллы, стрептобациллы, фузиформные бактерии, наличие грибов и т.д.), а также выявить те микроорганизмы, которые не удается культивировать на питательных средах. Бактериологический метод. Применяют для биотопов с широким спектром микроорганизмов (полость рта, кишечник, вагина), выполняют с учетом данных бактериоскопии.

Основные принципы бактериологического исследования:

а) использование качественной (видовой состав) и количественной

(количественное соотношение разных видов) оценки микрофлоры; 6) первичный посев материала без предварительного обогащения, так как

обогащение нарушает количественные соотношения видов; в) использование большого набора различных питательных сред, подбор

условий культивирования (аэробные, анаэробные, атмосфера СО₂ и т.д.). Методы взятия материала для исследования:

1. Получение естественных экскретов <слюна, моча и т.д.).

2. Метод реплик; а) отпечатки на поверхности агаровой среды, б) отпечатки марлево-агаровыми пластинами.

3. Метод смывов увлажненным тампоном.

4. Аспирационный метод (из межзубных пространств, гингивальных карманов, из верхних и средних отделов дыхательных путей, аспирация на фильтры).

5. Введение зондов в кишечник.

6. Метод аппликаций - снятие микроорганизмов с помощью бумажных или тканевых пластинок определенной площади.

Пневмококк (Streptococcus pneumoniae) - грамположительный ланцетовидный диплококк, имеет полисахаридную капсулу. Культивируется на средах с белком при рН 7,6 (5% кровяной агар), образует мелкие (средние) уплощенные колонии с а-гемолизом. Лучше растет при насыщении воздуха СО . По типу К-антигена имеет 84 варианта. Чувствителен к химическим и физическим факторам, в частности, к солям желчи (лизис), оптохину, NaCI. К факторам патогенности пневмококка относят капсулу, гиалуронидазу, нейраминидазу, экзопротеазу IgA, О-пневмолизин, лейкоцидин. Патогенен для белых мышей. Пневмококк вызывает острые и хронические заболевания дыхательного тракта (гайморит, бронхит, пневмония), менингит, сепсис, гнойно-воспалительные заболевания, ползучую язву роговицы. Материал для диагностического исследования берут в зависимости от формы пневмококковой инфекции: например, при пневмонии- мокроту, при сепсисе -кровь, при гнойном заболевании-гной, при отите - отделяемое из слухового прохода и т.д. Материал важно забрать до начала этиотропного лечения.

Для обнаружения антител исследуют сыворотку крови.

С целью лабораторной диагностики применяют следующие методы.

I. Экспресс-методы (обнаружение возбудителя в патологическом материале):

1. Микроскопическое исследование- мазок из патологического материала с окраской по Граму. Обнаружение грамположительных капсульных диплококков.

2. Определение антигена капсулы в реакции "Набухание капсулы" (по Нейфельду - феномен увеличения размеров капсулы в присутствии поливалентной противокапсульной сыворотки). Последняя наносится на мазок исследуемого материала; учет с помощью фазовоконтрастного микроскопа.

3. Обнаружение антигена в сыворотке или ликворе (РСК, латекс-агглютинация, встречный иммуноэлектрофорез). Экспресс-методы чаще являются ориентировочными, так как:

а) не всегда обнаружение пневмококка свидетельствует о его этиологической роли (часто носительство);

б) возбудитель не обнаруживается с началом этиотропного лечения.

II. Культуральный (бактериологический) метод:

1 этап. Материал (не позднее 1-2 часов с момента забора) засевают на 5% -и кровяной агар, культивируют в эксикаторе со свечой (СО2) 20-24 часа при температуре 37°С;

2 этап. Отбирают подозрительные колонии, дающие а-гемолиз, микроскопируют (окраска по Граму, на капсулу), отсевают в сывороточный бульон;

3 этап. Определяют чистоту культуры (окраска по Граму). Идентификацию проводят по морфологическим, серологическим (р. агглютинации на стекле с поливалентной противокапсульной сывороткой), культуральным, биологическим свойствам. Последние проводят путем посева в среду с оптохином (нет роста), в 10%-й желчный бульон (лизис), внутрибрюшинного заражения мышей (гибель). При необходимости (например, при пневмонии) доказывают этиологическую значимость пневмококка (в частности, определяют КОЕ/мл). Определяют также чувствительность к антибиотикам. Культуральный метод является ведущим методом диагностики, так как он ранний, точный, чувствительный и позволяет выбрать адекватное этиотропное лечение.

III. Серологический метод: определение противокапсульных антител и их динамики в сыворотке крови с помощью РНИФ (с ауто штамма ми), РСК и РИГА (с эталонными штаммами пневмококка). Чаще используют при хронических формах инфекции. Применение метода ограничивается более поздними сроками получения результата и отсутствием готовых диагностикумов.

IV. Биологический метод: внутрибрюшинное заражение белых мышей исследуемым материалом (чаще мокротой). Погибших мышей вскрывают, делают мазки-отпечатки, посевы крови и органов на кровяной агар с последующей идентификацией возбудителя. Метод вспомогательный, ограничивается трудоемкостью, наличием в материале других видов микроорганизмов, патогенных для мышей, низкой чувствительностью мышей к некоторым сероварам пневмококка.

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Пневмококковая инфекция обусловлена патогенным микроорганизмом Streptococcus pneumoniae. Этот возбудитель является главной причиной острых внебольничных пневмоний, занимает ведущее место в этиологии бактериальных менингитов, острых средних отитов, синуситов, вызывает первичный сепсис, заболевания кожи, суставов и другие инфекции, пневмококки являются этиологической причиной пневмонии в 20–75% случаев. Риносинусит имеет пневмококковую этиологию в 20–43% случаев, средний отит – 30–50%.

Ежегодно в США диагностируется около 4 млн. случаев внебольничной пневмонии и более 3 млн. в странах Европейского союза. В России число таких больных превышает 1,5 млн. человек в год, а заболеваемость составляет 14–15 случаев на 1000 населения. По данным Министерства обороны РФ у военных срочной службы в течение 2000–2003 гг. заболеваемость пневмонией превышала показатель 40 случаев на 1000 военнослужащих.

Заболеваемость пневмококковым менингитом в США определяется на уровне 1–2 случая на 100 тыс. населения с уровнем летальности 19–46% в различных возрастных группах. В России, по данным Референс-центра по надзору за гнойными бактериальными менингитами за 2010 г., общий уровень заболеваемости составил 0,19 на 100 тыс. населения (с колебаниями по Федеральным округам от 0,11 до 0,30 на 100 тыс. населения), с летальностью 13%.

В тоже время, пневмококк относится к нормальным обитателям ротоглотки и частота здорового носительства в популяции может достигать 40–70%. При этом возможно как одновременное носительство различных серотипов пневмококка, так и смена одного серотипа другим в течение непродолжительного времени. Заболевание пневмонией, отитом, синуситом, как правило, возникает при попадании микроба в нижние или верхние дыхательные пути на фоне нарушения защитных механизмов организма человека (снижение уровня общего и местного иммунитета, нарушение мукоцилиарного клиренса и др.). При генерализации процесса развивается сепсис, менингит, абсцессы внутренних органов, поражения сердца (эндокардит), почек, суставов.

Резервуаром пневмококковой инфекции является человек. Вместе с тем, пневмококковая патология встречается у диких и домашних копытных животных (овец, коз, телят и т. д.), преимущественно в виде пневмонии или сепсиса. Выделенный возбудитель от животных не отличается по свойствам от пневмококка, вызывающего заболевание у людей.

Основной путь передачи инфекции – воздушно-капельный, иногда контактный. Отмечены случаи внутриутробного заражения. Пик заболеваемости приходится на холодные сезоны года и носит спорадический характер. Среди заболевших преобладают мужчины. Наиболее уязвимыми возрастными контингентами являются дети до 5 лет и лица пожилого возраста (старше 65 лет). Пневмококковая инфекция наиболее тяжело, с генерализацией инфекционного процесса, протекает у лиц старших возрастов, особенно при наличии сопутствующих хронических патологий (хроническая обструктивная болезнь легких, злокачественные новообразования, алкоголизм, сахарный диабет, заболевания сердечно-сосудистой системы, почек и печени и др.), а также иммунодефицитов различного генеза.

Показания к обследованию. Пациенты при подозрении на крупозную пневмонию, острый бронхит; отит, синусит; менингит, менингоэнцефалит; септическое состояние; поражения кожи, подкожной клетчатки, соединительной ткани (редкая локализация инфекции); конъюнктивит (редкая локализация инфекции).

Дифференциальная диагностика проводится с микробными агентами:

при подозрении на внебольничную пневмонию: Haemophilus influenzae, Chlamydia pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Staphylococcus aureus, семейством Enterobacteriaceae, вирусами гриппа;
• при отитах, синуситах – Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Moraxella catarrhalis, Streptococcus pyogenes, дрожжевыми грибами рода Candida;
• при менингите – Neisseria meningitides, Haemophilus influenzae тип b, Staphylococcus aureus, семействомEnterobacteriaceae;
• при поражениях кожи, подкожной клетчатки, соединительной ткани – Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa.

Материал для исследования

• Мокрота, БАЛ, пунктаты (при подозрении на пневмонию); гнойное отделяемое, пунктаты (средний отит, синусит); СМЖ, кровь (менингит, менингоэнцефалит); кровь (септические состояния); отделяемое из раны (кожные поражения); секционный материал – культуральные исследования, выявление ДНК микроорганизма;
• СМЖ – определение АГ;
• сыворотка крови – определение АГ, АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выявление пневмококков методом микроскопии, посев исследуемого материала с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности; обнаружение специфических генетических фрагментов пневмококка и его АГ, обнаружение специфических АТ.

• взятие материала должно проводиться до начала антибиотикотерапии;
• контроль правильности отбора, доставки и обработки материала:
• • задержка приготовления препарата на 2–5 ч от момента взятия материала может привести к ошибочным результатам;
  • подтверждением взятия образца мокроты из нижних отделов дыхательных путей служит выявление менее 10 эпителиальных клеток в поле зрения при малом увеличении микроскопа;
  • материал считается пригодным для бактериологического посева при обнаружении в мокроте большого количества нейтрофилов (более 25 в поле зрения), небольшого количества эпителиальных клеток (менее 10 в поле зрения) и преобладании монофлоры, по морфологии сходной с пневмококком.

Для посева с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности используют различные виды материала: мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, отделяемое из уха и придаточных пазух, кровь, ликвор, плевральная жидкость.

При наличии роста на чашках проводится обязательная количественная оценка бактериального роста и выделение чистой культуры предполагаемого возбудителя для дальнейшей идентификации.

Принадлежность к виду Streptococcus pneumoniae подтверждается:

• характерным видом колоний на средах, содержащих кровь (колонии по форме напоминают игральные шашки или блюдца, мелкие, прозрачные, окружены зоной зеленоватого гемолиза);
• чувствительностью микроорганизма к оптохину;
• чувствительностью к желчным кислотам;
• положительной реакцией набухания капсулы с антипневмококковой omniсывороткой;
• биохимической характеристикой возбудителя с использованием соответствующих наборов реагентов.

Оценка результатов культурального исследования. Для нестерильных локусов:

• выявление при посеве в мокроте или лаважной жидкости более чем 10 3 КОЕ/мл пневмококков является диагностическим критерием постановки диагноза пневмония;
• выявление в гнойном экссудате при остром бактериальном синусите более 10 5 КОЕ/мл пневмококков является диагностическим критерием постановки диагноза синусит;
• выявление в гнойном отделяемом при остром среднем отите более 10 4 КОЕ/мл пневмококков, является диагностическим критерием постановки диагноза отит.

Для стерильных локусов:

• любое выявление возбудителя в стерильных жидкостях организма служит основанием для постановки диагноза пневмококковой инфекции.

Для определения чувствительности к антибиотикам используются несколько методов.

• Метод серийных разведений в бульоне или агаре. Принцип метода основан на оценке чувствительности возбудителя к серии последовательных разведений тестируемого антибиотика. При этом определяется точное значение минимальной подавляющей концентрации (МПК) препарата для микроорганизма. Однако изза значительной трудоемкости, метод используется преимущественно в научных лабораториях. Более широкое применение получил модифицированный метод серийных разведений, основанный на использовании пограничных концентраций антибиотика, который не дает точного определения МПК препарата для возбудителя, но позволяет оценить его принадлежность к чувствительным (S), промежуточно устойчивым (I) или резистентным (R) штаммам. Большинство готовых наборов реагентов используют именно этот принцип.
• Диско-диффузионный метод – основан на оценке диаметра зоны подавления роста вокруг бумажного диска с антибиотиком, наложенного на растущую на плотной питательной среде культуру исследуемого микроорганизма. Образование зоны ингибирования роста происходит за счет диффузии антибактериального препарата из носителя (диска) в питательную среду, при которой величина диаметра ингибирования роста жестко связана с величиной МПК. Метод не определяет точное значение минимальной подавляющей концентрации антибиотика для микроорганизма, а только позволяет отнести его к одной из категорий чувствительности (S, I, R).
• Метод эпсилометрии (Е-тест) – в качестве носителя используется полоска полимера, пропитанная различными концентрациями антибиотика, с нанесенными на нее значениями таких концентраций. Интерпретации результатов выполняют в соответствии с инструкцией к набору реагентов.

Наиболее важным при тяжелых пневмококковых инфекциях является определение чувствительности пневмококков к пенициллину и другим бета-лактамным антибиотикам (аминопенициллинам, карбапинемам, цефалоспоринам) – основным препаратам выбора. В качестве скринингового теста для определения чувствительности к этим препаратам используется диско-диффузионный метод.

В исследование обязательно включают изучение чувствительности к макролидам, линкозамидам, стрептограминам. Данные препараты часто используются для лечения внегоспитальной пневмококковой пневмонии и заболеваний верхних дыхательных путей. Пневмококки могут быть устойчивыми только к 14- и 15-членным макролидам, при сохранении чувствительности к 16-членным макролидам и линкозамидам, а могут быть устойчивыми ко всем представителям этих классов.

Определение устойчивости к хинолонам, хлорамфениколу, тетрациклину, котримоксазолу, рифампицину, ванкомицину, позволяет более полно характеризовать фенотип возбудителя. При этом необходимо учитывать, что ранние хинолоны (офлоксацин), которые применяются в отношении пневмококков, резистентных к пенициллину, в последнее время показывают рост устойчивости к этому препарату. Для преодоления устойчивости используют новые фторхинолоны с повышенной антипневмококковой активностью: спарфлоксацин, моксифлоксацин и др.

Примерно от 5 до 15% культур пневмококков в России демонстрируют полирезистентные свойств, т. е. одновременной устойчивостью к 3 и более классам препаратов.

Для обнаружение АГ пневмококка в пробах биологических жидкостей пациента применяют методы латекс-агглютинации и ИХА. Наборы реагентов, основанные на реакции латекс-агглютинации или коагглютинации, предназначены для работы с материалом, полученным из стерильных локусов (кровь, ликвор), при работе с нестерильными локусами эти наборы могут давать ложноположительный результат. Чувствительность и специфичность наборов разных производителей составляет 94–100% и 85–98%, соответственно. Набор реагентов с использованием ИХА позволяет определить наличие указанного АГ у больных пневмонией (в моче) и менингитом (в СМЖ). Этот тест рекомендован как дополнительный метод диагностики пневмоний. При исследовании проб пациентов с высоким уровнем назофарингеального носительства возможны ложноположительные результаты.

Для обнаружения специфических генетических фрагментов пневмококка применяют ПЦР, в качестве мишеней используют специфические фрагменты генов, кодирующих факторы патогенности: пневмолизин (Ply), аутолизин (LytA), пневмококковый поверхностный АГ (PsaA), пневмококковый поверхностный протеин А (PspA), марганец-зависимая супероксид-дисмутаза (sodA), поверхностный пенициллин-связывающий белок 2b (Pbp2b), Spn9802, Spn9828. Для повышения специфичности исследования применяется мультиплексная ПЦР, при которой проводится одновременная индикация нескольких генов патогенности с сохранением высокой чувствительности реакции.

Остается проблемой установление диагностически значимых количественных показателей, позволяющих дифференцировать заболевание от носительства при исследовании материала из нестерильных локусов.

Использование метода секвенирования участка 16S рибосомальной РНК для идентификации пневмококков затруднено сходством с некоторыми видами стрептококков, входящих в группу Mitis. Гомология ДНК-ДНК между стрептококками, входящими в группу Mitis, составляет 40–60%, тогда как сходство сиквенсов 16S рРНК генов между S.mitis, S.oralis и S.pneumoniae может достигать более чем 99%. Сравнение участков 16S рРНК между штаммами S.pseudopneumoniae и S.pneumoniae (суммарный размер 1 468 пар нуклеотидов) показало 99,7% совпадение сиквенса, различие отмечено только в 5 парах нуклеотидов.

Обнаружение АТ редко используются при проведении лабораторной диагностики пневмококковой инфекции. Это связано с отсутствием надежных доступных методик, имеющих достаточную чувствительность и специфичность и ролью временного фактора, поскольку для выявления роста титров АТ необходимо значительное время от начала заболевания. В настоящий момент используются определения АТ против четырех АГ пневмококка (С-антигена, капсульных полисахаридов, фосфорилхолина и пневмолизина). Чувствительность метода для С-антигена и капсульных полисахаридов составляет 89% и 97% соответственно. Наиболее распространенные методы определения – ИФА и РИФ (МФА). При применении МФА в качестве АГ рекомендуется использовать аутоштамм пневмококка, выделенный от данного больного. В случае отсутствия аутоштамма применяют смесь штаммов из наиболее часто встречающихся на данной территории серотипов. Выявление минимального диагностического титра АТ к пневмококку у детей до 3 лет 1:320 и 1:640 у взрослых свидетельствует о пневмококковой этиологии перенесенного заболевания.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Выявление возбудителя стрептококковой инфекции (Streptococcus pneumoniae), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) пневмококка в образце биоматериала.

Пневмококк, Вейксельбаума диплококк, Френкеля диплококк.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, мазок из зева (ротоглотки), мазок из носоглотки, мокроту, плевральную жидкость, ликвор.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Рекомендуется употребить большой объем жидкости (чистой негазированной воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
• За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Streptococcus pneumoniae (пневмококк) – грамположительный диплококк, являющийся основным возбудителем внебольничной пневмонии. Также этот микроорганизм может вызывать менингит и сепсис. Имеются данные о роли пневмококка в развитии и прогрессировании бронхиальной астмы и хронического бронхита.

Наиболее подвержены стрептококковой пневмонии и менингиту люди со сниженным иммунным статусом: дети, пожилые люди, ВИЧ-инфицированные, страдающие алкоголизмом и наркоманией.

Существует несколько лабораторных методов выделения пневмококка: бактериологический (посев мокроты на питательные среды), микроскопия мокроты и выявление генетического материала (ДНК) S. pneumoniae методом полимеразной цепной реакции.

Достаточно часто образец мокроты оказывается неинформативным, а результат его окраски по Граму – ложноотрицательным. Результат бактериологического метода может быть получен только через несколько дней, что затрудняет диагностику и откладывает начало специфической терапии. В отличие от этих методов, ПЦР обладает высокой чувствительностью и специфичностью и позволяет получить точный результат в максимально короткие сроки после доставки образца в лабораторию. ПЦР не требует наличия большого количества жизнеспособных микроорганизмов в образце биоматериала, так как определяется не сам микроорганизм, а его генетический материал. Данное преимущество позволяет устанавливать этиологию заболевания на фоне начатой антибактериальной терапии. Также полностью исключены ложноположительные результаты.

Так как S. pneumoniae – представитель нормальной микрофлоры верхних и нижних отделов дыхательных путей большинства людей, для диагностики пневмококковой пневмонии требуется не только обнаружение этого микроорганизма в мокроте, но и наличие дополнительных клинических и лабораторных признаков инфекционно-воспалительного процесса в органах дыхания. Например, S. pneumoniae, выявленный в мокроте пациента без клинических признаков инфекционного поражения легких, без отклонений в анализе крови и без изменений на рентгенограмме, следует рассматривать как нормального представителя микрофлоры дыхательных путей.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики инфекционных (пневмонии, хронического бронхита) и инфекционно-аллергических заболеваний легких.

Когда назначается исследование?

• симптомов типичной внебольничной пневмонии (лихорадка, одышка и боль в грудной клетке, кашель с отхождением мокроты оранжевого цвета ("ржавой" мокроты);
• симптомов обострения хронического бронхита (кашель с мокротой на фоне повышения температуры тела, усиления потливости, недомогания).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

• пневмококковая пневмония;
• обострение хронического бронхита.

• отсутствие пневмококковой инфекции.

Что может влиять на результат?

• Большинство людей является бессимптомными носителями пневмококка в верхних и нижних отделах дыхательных путей, поэтому результат исследования следует интерпретировать с учетом других клинических и лабораторных признаков заболевания.



Кто назначает исследование?

Врач общей практики, пульмонолог, инфекционист, педиатр, аллерголог.

Литература

• Blaschke AJ. Interpreting assays for the detection of Streptococcus pneumoniae. Clin Infect Dis. 2011 May;52 Suppl 4:S331-7.
• Waterer G, Rello J. Why should we measure bacterial load when treating community-acquired pneumonia? Curr Opin Infect Dis. 2011 Apr;24(2):137-41.
• Korppi M. Bacterial infections and pediatric asthma. Immunol Allergy Clin North Am. 2010 Nov;30(4):565-74.
• Schwerk N, Brinkmann F, Soudah B, Kabesch M, Hansen G. Wheeze in preschool age is associated with pulmonary bacterial infection and resolves afterantibiotic therapy. PLoS One. 2011;6(11):e27913. Epub 2011 Nov 29.

ВНИМАНИЕ! САЙТ ЛЕКЦИИ.ОРГ проводит недельный опрос. ПРИМИТЕ УЧАСТИЕ. ВСЕГО 1 МИНУТА.

И ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ (ОРЗ)

Основным возбудителем (около 60%) бактериальных пневмоний в настоящее время является пневмококк (Streptococcus pneumoniae), реже (30-40%) – клебсиеллы (Klebsiella pneumoniae), хламидии (Chlamydophila pneumoniae), микоплазмы (Mycoplasmapneumoniae), стафилококк (Staphylococcus aureus), гемофильные палочки (Haemophilus influenzae), легионеллы (Legionella pneumophila).

Подходы к лабораторной диагностике бактери­альных пневмоний и ОРЗ, независимо от вида возбудителя, принципиально, одинаковы.

Материалом для исследования являются мокрота, отделяемое слизистой оболочки трахеи и бронхов, промывные воды бронхов, экссудат из плев­ральной полости, кровь, спинномозговая жидкость при менин­гите, отделяемое зева и носа при ОРЗ.

Микроскопический метод (микроскопия мазков из исследуемого материала, окрашенных по Граму) имеет ориентировочное значение. Наличие в препаратах значительного количества удлиненных ланцетовидных, грамположительных диплококков, окруженных капсулой (Streptococcus pneumoniae – рис. 19), скоплений грамположительных кокков в виде гроздьев (S.aureus)или грамотрицательных коккобактерий (H.influenzae) позволяет поставить пред­варительный диагноз бактериальной пневмонии и служить ориентиром для назначения антибактериальной терапии.

Рис. 19. Пневмококк(Streptococcus pneumoniae). Окраска по Граму. х 900

Бактериологическое исследованиеявля­ется ведущим методом диагностики пневмоний и ОРЗ бактериальной этиологии, которое дает возможность не только выделить возбудителя инфекции, но и определить его чувствительность к антибиотикам.

Для выделения пневмококка (Streptococcus pneumoniae) осуществляют посев исследуемого материала на МПБ с глюкозой и на кровяной МПА. Посевы выращивают в термостате при 37 0 С в течение суток. Выросшие на кровяном МПА нежные колонии окружены зеленоватой зоной гемолиза. Из колоний готовят мазок, изучают морфологические и тинкториальные свойства, после чего остаток колонии пересевают на скошенный кровяной МПА или сахарный (или сывороточный) МПБ с целью выделения чистой культуры и ее идентификации на основании комплекса биологических свойств.

Дифференциация S.pneumoniae и S.pyogenes основывается на проверке чувствительности выделенной культуры к желчи и оптохину, а также способности ферментировать инулин.

Серотипирование пневмококка проводится с помощью РА на стекле с использованием типоспецифических пневмококковых сывороток (известно около 90 серова­ров пневмококка, из которых 23 играют важную роль в патологии человека). Для серотипирования пневмококков может использоваться реакция Нейфельда (фено­мен набухания капсулы стрептококка в присутствии типоспецифической сыворотки).

Для изоляции клебсиелл выполняют посев исследуемого материала на МПА с пенициллином (для подавления сопутствующей микрофоры) в чашках Петри или на дифференциально-диагностические среды с лактозой и индикатором бром-тимоловым синим, на которых спустя сутки культивирования при 37 0 С образуются блестящие выпуклые слизистые колонии (на дифференциально-диагностической среде колонии имеют желтый цвет в результате разложения лактозы). На 2 день колонии исследуют визуально и с помощью микроскопического метода (окраска по Граму и Гинсу-Бурри для выявления капсул), после чего пересевают типичные колонии на среду Ресселя или скошенный МПА для выделения чистой культуры возбудителя. На 3 день учитывают рост на указанных средах (окрашивание столбика и скошенной части среды Ресселя в желтый цвет с разрывами агара в результате расщепления глюкозы и лактозы с образованием газа) и проводят идентификацию культуры клебсиелл по основным биологическим свойствам (образование капсулы, отсутствие подвижности, биохимические и антигенные свойства).

Для выделения микоплазм производят посев на специальные питательные среды с добавлением сыворотки, на которых они не ранее чем через месяц после образуют характерные микроскопические колонии с ровными краями и зернистой структурой. Выделенную чистую культуру микоплазм идентифицируют по биохими­ческим и антигенным свойствам.

Выделение легионелл, являющихся медленно рас­тущими микроорганизмами, осуществляют с применением селективных питательных сред сложного состава, содержащих дрожжевой экстракт и другие факторы роста, а также различные антибиотики для подавления роста сопутст­вующей микрофлоры. Легионеллы относятся к медленно растущим микроорганизмам, однако микроколонии, видимые под мик­роскопом, появляются на 2-е сутки роста, тогда как макроскопически видимые мелкие колонии (2-4 мм) правильной округлой формы, с ровными краями и блестящей поверхностью с характерным ро­зовым или сине-зеленым ободком и опалесцирующим центром - через 3-5 суток. Идентификацию выделенной чистой культуры до уровня рода проводят на основании изучения биологических свойств. Для видовой идентификации разработаны ИФМ, газожидкостная хрома­тография, генодиагностика (рестрикционный анализ, метод ДНК-зондов).

Серологический метод диагностики пневмоний, вызванных пневмококками, микоплазмами, хламидиями и легионеллами при исследовании парных сывороток крови больных (в остром периоде и в стадию реконвалесценции) с помощью РСК, РНГА, ИФА не является клинически обязательным и имеет эпидемиологическое значение. Для определения антител к легионеллам используют, кроме того, непрямой ИФМ с антигеном из легионелл (диагностический титр 1:32 и более).

Экспресс-методы. Разработан иммуноферментный тест для определения в моче специфичного антигена легионелл, а также иммунохроматографический тест для выявления в моче пневмококкового антигена, однако широкое применение этих методов ограничено.

Генодиагностика. Предложена ПЦР для диагностики хламидиозов и микоплазмозов, однако метод широко в клинической практике не используется.

Биопроба.Исследуемыйматериал для выделения пневмококков вводят внутрибрюшинно белым мышам или морским свинкам. Культуру пневмококка выделяют из крови и органов погибшего или забитого животного, а также проводят бактериоскопию мазков-отпечатков, сделанных из его органов. В настоящее время метод практически не применяется.