Проверка аллергической пробы на бруцеллез проводится через

Серологические реакции и аллергическая проба являются общедоступными методами и применяются для диагностики бруцеллеза наряду с бактериологическим и биологическим методами.

В случае малой обсемененности пробы и отрицательных результатов, полученных при посеве исследуемого материала на питательные среды и заражении лабораторных животных, серологический метод может быть единственным, позволяющим диагностировать бруцеллез. В зависимости от целей исследования используют те или иные серологические методы.

При проведении эпидемиологического исследования бруцеллеза в очагах применяют 1.реакцию агглютинации пластинчатую (Хеддльсона) и 2.Объемную (Райта), а так же реакции Кумбса, РСК, РДСК, РПГА, кожную аллергическую пробу, иммуноферментный анализ (ИФА). Перед профилактической вакцинацией населения можно ограничиться постановкой пластинчатой реакции агглютинации (Хеддльсона) и кожной аллергической пробы.\

Реакция Райта (Реакция агглютинации с бруцеллезным антигеном в пробирках )

Реакция Райта проводится в пробирках в объеме 1 мл с разведениями сыворотки 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800 и единым бруцеллезным диагностикумом. Последний представляет собой взвесь убитых нагреванием и фенолом бруцелл. Для пробирочной реакции диагностикум разводят в 10 раз карболизированным (0,5%) физраствором. Методика разведения сыворотки обычна для пробирочной реакции агглютинации. Пробирки встряхивают, ставят в термостат при температуре 37° до следующего дня. Учет реакции проводят обычным способом или по 50% агглютинации (2+) в сравнении со стандартом мутности. Серийные титры 50% агглютинации 1:50, 1:100, 1:200, 1:400,1:800 свидетельствуют о том, что в 1 мл исследуемой сыворотки содержится соответственно 50, 100, 200, 400, 800 МЕ антител. Выраженность реакции больного оценивают по следующей схеме: титр 1:50 оценивается как сомнительный, 1:100 – слабо положительный, 1:200 и 1:400 – положительный, 1:800 – резко положительный.

При остром бруцеллезе реакция Райта положительна у больных в титре 1:200-1:800, тогда как при хроническом бруцеллезе – в титре 1:50-1:100. В то же время обострение хронического бруцеллеза сопровождается повышением титра 1:200-1:400.

Иногда резко выраженная реакция Райта наблюдается у больных со слабо выраженными клиническими проявлениями бруцеллеза.

Напечатать перед райта

Серологическая реакция агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона)

Реакция Хеддльсона (пластинчатая – применяют на стекле) чувствительна, но менее специфична, дает возможность выявлять агглютинины в первые дни болезни, быстро получить ответ. На большое (9х12см) хорошо обезжиренное сухое стекло на расстоянии 3-4 см друг от друга микропипеткой наносят исследуемую сыворотку в дозах 0,04, 0,02, 0,01 мл (опытные капли) и 0,02 мл (контрольная капля). К трем первым каплям сыворотки добавляют по 0,03 мл единого неразведенного диагностикумума, к последней – 0,03 мл физраствора. Максимальный срок наблюдения – 8 минут. Учет осуществляют невооруженным глазом по 4+ системе. При положительной реакции в опытных каплях появляются хлопья и жидкость становится более или менее прозрачной. Агглютинацию во всех трех дозах 4+ принимают за резко положительный результат, в первой и второй дозах – за положительный результат, только в первой дозе – сомнительный результат, отсутствие агглютинации во всех дозах – отрицательный результат.

Реакция Кумбса либо антиглобулиновый тест.

Его проводит для обнаружения антител, которые атакуют эритроциты.

Для обнаружения бруцеллеза используется прямая реакция. Эта реакция различает антитела, которые напрямую связаны с эритроцитами. Если антиглобулиновый тест показывает отрицательный результат – значит кровь чистая, и антител нет. Положительный результат означает появление антител, которые активно борются с эритроцитами.

ПЦР-диагностика основывается, на обнаружении ДНК-цепей бруцелл из биологического материла пациента. Для этого материал обеззараживают, прибавляя метиолят натрия концентрацией 0,01% с дальнейшим прогреванием в течение получаса. Когда завершится инкубирование в лизирующем растворе, который содержит, все необходимые реагенты для экстракции ДНК при поддерживании температуры в 66С на протяжении 10-15 минут биологическая ткань обезвреживается.

Этот анализ обладает положительной чертой в том плане, что можно использовать абсолютно любую биологическую ткань пациента.

5.1. Метод аллергического исследования основан на выявлении у больных бруцеллезом

животных повышенной чувствительности замедленного типа к специфическому аллергену.

5.2. Аллергический метод применяют для исследования на бруцеллез крупного рогатого скота,

буйволов, овец, коз, свиней и северных оленей, не подвергавшихся прививке вакцинами против

бруцеллеза, в случаях, предусмотренных инструкцией о мероприятиях по профилактике и

ликвидации бруцеллеза животных.

Аллергическое исследование на бруцеллез животных разрешается проводить только

ветеринарным врачам или фельдшерам со средним специальным образованием под наблюдением

5.3. Для аллергической диагностики бруцеллеза у животных применяют бруцеллин ВИЭВ.

Бруцеллин - стерильный биологический препарат, представляет собой прозрачную жидкость

коричневато-желтого цвета без опалесценции, содержащую продукты жизнедеятельности и

специфические вещества, извлеченные из бруцелл.

Флаконы с бруцеллином должны быть плотно закрыты пробками и закатаны алюминиевыми

колпачками. При встряхивании и переворачивании флакона препарат не должен просачиваться через

пробку. На каждом флаконе должна быть этикетка (или надпись) с обозначением наименования

биопредприятия, изготовившего бруцеллин, наименования препарата и его количества, номера

серии, даты выпуска, срока годности, номера госконтроля, условий хранения, стандарта (ГОСТ) и

5.4. Бруцеллин используют только в день вскрытия флакона. Он пригоден для применения в

течение 18 месяцев со дня изготовления при условии хранения в темном сухом помещении при

температуре плюс 2 - 15 °С.

5.5. Каждый флакон с бруцеллином перед применением просматривают. При обнаружении в

препарате каких-либо примесей, плесени, хлопьев, при нарушении целостности стекла или укупорки,

отсутствии надписи на флаконе, а также бруцеллин, подвергавшийся замораживанию и давший

осадок или помутнение, к применению не допускается.

5.6. Для введения животным бруцеллина используют короткие инъекционные иглы (N 0420 -

0813) или иглы для внутрикожных инъекций с двумя трубками (N 0706, ТУ 46-22-607-80) и шприцы,

снабженные бегунком, вместимостью 2 или 5 мл. При исследовании свиней можно применять

Шприцы и иглы перед и после их использования стерилизуют кипячением в течение 30 минут в

дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих средств. Безыгольные

инъекторы стерилизуют в соответствии с инструкцией по их использованию.

Во время исследования животных инъекционные иглы меняют перед каждым наполнением

шприца бруцеллином, а в промежутках между инъекциями препарата иглу держат в ватном тампоне,

смоченном 70° спиртом.

5.7. Непосредственно перед применением бруцеллина алюминиевый колпачок флакона с

препаратом приоткрывают, резиновую пробку обрабатывают спиртом, прокалывают инъекционной

иглой и шприцем через нее набирают необходимое количество аллергена.

Бруцеллин вводят животным под кожу нижнего века на 1 см ниже края века со стороны

наружного угла глаза (пальпебральная проба): овцам, козам и оленям в дозе 0,5 мл, крупному

рогатому скоту и буйволам в дозе 1,0 мл.

Вводить бруцеллин под кожу века, имеющую травматические повреждения, уплотнения,

абсцессы и другие поражения, не разрешается. Животных с заболеванием глаз или с густым

шерстным покровом в области век метят и вводят им бруцеллин внутрикожно в центре одной из

подхвостовых складок в дозах: овцам и козам - 0,2 мл и крупному рогатому скоту и буйволам - 0,3 мл

Свиньям бруцеллин вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины, ближе к

основанию уха в дозе 0,2 мл. Правильность внутрикожной инъекции препарата контролируют по

образованию бугорка размером с горошину.

При инъекции препарата животным обязательно соблюдение правил асептики. Участок кожи

перед уколом протирают ватой, смоченной в спирте или 3-процентном растворе борной кислоты.

5.8. У животных, больных бруцеллезом, на месте введения бруцеллина наступает

воспалительная реакция в виде плотной или тестоватой припухлости, обычно хорошо видимой при

осмотре; у свиней, кроме того, может развиваться гиперемия, иногда кровоизлияние в виде темно-

красного пятна в центре отека. У здоровых животных местная реакция не возникает.

5.9. Реакцию на бруцеллин у овец, коз, оленей, крупного рогатого скота и буйволов учитывают

один раз через 48 часов, у свиней - два раза, через 24 и 48 часов после введения препарата, путем

осмотра, а при неясно выраженной реакции - пальпацией места инъекции.

При обнаружении на месте введения препарата припухлости реакцию оценивают как

В случае неясно выраженной реакции пальпируют место введения препарата и сравнивают с

кожей века другого глаза (или подхвостовой складки), а у свиней - с кожей основания другого уха.

Если обнаруживают хотя бы небольшую разницу, реакцию считают положительной. При отсутствии

указанных признаков реакции результат исследования считают отрицательным.

Реагирующих на бруцеллин животных метят и выделяют из отары (стада).

5.10. С животными, признанными при исследовании бруцеллина реагирующими

положительно, поступают согласно Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации

5.11. После применения бруцеллина у животных можно в любые сроки брать кровь для

исследования на бруцеллез серологическими методами.

5.12. Проведение аллергического исследования на бруцеллез животных оформляют актом с

приложением к нему описи реагировавших животных (указывают инвентарный номер, пол и возраст

животных, характер реакции на бруцеллин). Один экземпляр акта направляют главному ветврачу

района, другой хранят в хозяйстве.

С выходом настоящих Методических указаний утрачивают силу:

"Наставление по лабораторной диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных" от 17

"Наставление по диагностике бруцеллеза у коров методом кольцевой реакции (КР) с молоком"

от 2 ноября 1960 г.;

"Наставление по применению бруцеллина ВИЭВ для аллергической диагностики бруцеллеза у

мелкого рогатого скота и свиней" от 24 декабря 1969 г.;

"Временное наставление по клинической и лабораторной диагностике инфекционного

заболевания овец, вызываемого бруцеллой овис (инфекционный эпидидимит баранов)" (приложение

к циркулярному письму Главного управления ветеринарии МСХ СССР от 10 марта 1970 г. N 116-9);

"Наставление по постановке и учету реакции агглютинации при диагностике бруцеллеза

сельскохозяйственных животных" от 19 мая 1964 г. с изменениями и дополнениями, внесенными 11

"Наставление по постановке и учету реакции связывания комплемента (РСК) и реакции

длительного связывания комплемента (РДСК) при диагностике бруцеллеза у животных" от 27 мая

"Наставление по постановке и учету пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал

антигеном (роз бенгал проба или РБП) при диагностике бруцеллеза у животных" от 12 декабря 1978 г.

Указания по диагностике бруцеллеза животных разработаны Всесоюзным Ордена Ленина

научно-исследовательским институтом экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко

(проф. П.С. Уласевич, кандидаты вет. наук А.Н. Касьянов и В.А. Ромахов), Всесоюзным

государственным ордена Трудового Красного Знамени научно-контрольным институтом

ветеринарных препаратов МСХ СССР (канд. вет. наук К.В. Шумилов), Главным управлением

ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР (Э.С. Плотников) и Центральной

ветеринарной лабораторией (Б.И. Антонов, Т.А. Сысоева, В.В. Борисова).

Возбудители бруцеллеза (Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis и Brucella canis) высоко контагиозны и работа с ними проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций. Постановку серологических реакций и аллерги­ческих проб для диагностики бруцеллеза производят соответственно в обычных микробиологических лабораториях и больничных условиях.

Главным резервуаром бруцелл являются домашние сельскохозяйственные животные, а также другие виды животных, от которых человек заражается преимущественно контактным или контактно-бытовым, реже алиментарным путем. Клинические проявления бруцеллеза многообразны, поражаются лимфатическая, сосудистая, гепато-лиенальная системы и особенно опорно-двигательный аппарат Методы микробиологической диагностики бруцеллеза представлены в схеме 7.

Схема 7. Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Материал: кровь, костный мозг, моча, испражнения, грудное молоко у кормящих женщин

Генодиагностика. ПЦР

Серологический метод- постановка РА с сывороткой крови больного (реакция Райта, ставят в начале 2-й недели болезни, диагностический титр 1:200 и выше), ускоренной РА на стекле (реакция Хеддльсона), РСК и ИФА.

Диагностикумом в реакции Райта и Хеддльсона является взвесь убитых бруцелл с красителем генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым.

Реакцию агглютинации Хеддльсона ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят микропипеткой неразведенную исследуемую сыворотку в количествах 0,08; 0,04; 0,02; 0,01 и 0,02 мл, добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума, кроме по­следней дозы, в которую вносят 0,03 мл ФР (контроль сыворотки). Контролем диагностикума является смесь из 0,03 мл антигена и 0,03 мл ФР. Все капли перемешивают стеклянной палочкой или бактериологической петлей и после легкого покачивания стекла наблюдают за появлением мелкозернистого окрашенного агглютината. Отсутствие агглюти­нации во всех пробах сыворотки оценивается как отрицательная реакция, наличие агглютинации в 1-й пробе (0,08 мл сыворотки) - сомнительная, во 2-й (0,04 мл) - слабоположительная, в 3-й или 4-й пробах (0,02-0,01 мл) - положительная, во всех пробах - рез­ко положительная реакция. Поскольку реакция агглютинации Хеддльсона иногда бывает положительной у здоровых людей за счет нормальных антител, она обязательно подтверждается реакцией Райта.

РИФ, РНГА, РСК и особенно ИФА более чувствительны, чем реакция агглютинации. Для ранней диагностики бруцеллеза особую ценность имеет ИФА, позволяющий выявить в сыворотке больных антибруцеллезные антитела класса IgM,которыев отличие от IgG по­являются в ранние сроки болезни, свидетельствуя о свежем инфицировании.

Аллергический метод –постановка внутрикожной аллергической пробы Бюрне с 15-20 дня заболевания. Учет реакции проводится через 24-48 часов, положи­тельной считается реакция в случае появления на месте введения аллергена (бруцеллина) болезненности, гиперемии и инфильтрации кожи диаметром 3 см и более. Положительная аллергическая ре­акция на бруцеллин сохраняется в течение длительного времени после перене­сенного бруцеллеза, а также после прививки.

Бактериологический метод- посев крови для выделения гемокультуры в 2 флакона с 50 мл печеночного или асцитического бульона (рН 7,1-7,2) или МПБ с добавлением 1 % глюко­зы, 2 % глицерина и антифаговой сыворотки (для инактивации бруцеллезного бактериофага) в первые дни болезни при наличии лихорадки. При отрицательных резуль­татах исследование повторяют, т.к. бактериемия наблю­дается в течение 1 года и более.

Один флакон выращивают в обычных аэробных условиях, другой — в герметично закрытом сосуде с 10 % углекислого газа (или СО₂-инкубаторе) при температуре 37 0 С до 1 ме­сяца, делая пересевы на скошенный пече­ночный агар или эритрит-агар каждые 4-5 дней. На жидких средах бруцеллы растут с образованием легкого помутнения и небольшого слизистого осадка, на плотных средах в виде округлых, диаметром до 5 мм, серовато-белых, блестя­щих, прозрачных с янтарным оттенком в проходящем свете колоний. Типичные колонии пересевают на скошенный агар и идентифицируют выделенную культуру до уровня вида.

Выполняются также посевы ис­следуемого материала в желток свежего куриного яйца или в жел­точный мешок куриного эмбриона с последующей их инкубацией в течение 5 дней при 37 0 С и пересевом содержимого желточного мешка на плотные и жидкие питательные среды для выделения чистой культуры бруцелл.

Бруцеллы идентифицируют на основании изучения морфологических (рис. 13 - грамотрицательные коккобактерии), культуральных, биохимических (они не ферментируют уг-

Рис. 13. Возбудитель бруцеллеза (Brucella melitensis). Окраска по Граму. Мелкие грамотрицательные коккобактерии.

леводы, не свертывают молоко и не разжижают желатину, выделяют сероводород), антигенных свойств (постановка РА с моноспеци­фическими сыворотками против антигеновА, М, R), чувствительности к специфическому бактери­офагу и бактериостатическому действию анилиновых красителей (табл. 8).

Таблица 8.Дифференциация основных видов бруцелл

Признак	Вид бруцелл
Br. melitensis	Br. abortus	Br. suis
Условия культивирования	аэробные	10% СО2	аэробные
Рост на средах с красителями:
фуксином 1:50000	+	+	-
тионином 1:25000	+	-	+
пиронином 1:200000	+	+	-
Образование Н2S	-	±	±
РА с монорецепторными сыворотками
А	±	±	+
М	±	±	±
Чувствительность к бруцеллезному фагу	-	+	±

Действующее вещество:

Инструкция по медицинскому применению

Инструкция по медицинскому применению - РУ №

Дата последнего изменения: 27.04.2017

Раствор для внутрикожного введения.

1 внутрикожная доза (0,1 мл) содержит:

Полисахаридно-белковый комплекс, полученный из вакцинного штамма Brucella abortus 19-ВА в процессе химической обработки в 0,9 % растворе натрия хлорида изотонического для инъекций, от 3,8 до 5,4 мкг белка.

Прозрачная бесцветная или светло-желтого цвета жидкость.

Аллерген бруцеллезный жидкий (Бруцеллин), раствор для внутрикожного введения, который представляет собой полисахаридно - белковый комплекс, полученный из вакцинного штамма Brucella abortus 19-ВА в процессе химической обработки в 0,9 % растворе натрия хлорида.

Внутрикожное введение аллергена у больного бруцеллезом вызывает развитие местной реакции (отек, гиперемия, болезненность). У здоровых лиц местная реакция на введение аллергена в течение 24 - 48 ч должна отсутствовать.

Специфическая диагностика повышенной чувствительности к бруцеллам.

а) гиперчувствительность к бруцеллезному антигену;

б) наличие противопоказаний к введению препарата Вакцина бруцеллезная живая;

С целью выявления противопоказаний врач (или фельдшер) в день постановки пробы проводит осмотр и опрос пациента с обязательной термометрией.

Противопоказано при беременности и в период грудного вскармливания.

Внутрикожно (по 0,1 мл).

Аллергическую пробу ставят на внутренней поверхности средней трети предплечья. Кожу на месте введения аллергена предварительно обрабатывают 70% этиловым спиртом. Вскрытие ампул и процедуру введения препарата осуществляют при строгом соблюдении правил асептики и антисептики. Вскрытая ампула с аллергеном, сохраняемая с соблюдением правил асептики, может быть использована в течение 2 ч.

0,1 мл препарата (1 доза) набирают шприцем вместимостью 1 мл с тонкой иглой и вводят строго внутрикожно, таким образом, чтобы на месте введения образовалась небольшая папула диаметром 3-5 мм.

Учет результатов реакции. Проводится через 24-48 ч после введения аллергена путем осмотра и ощупывания кожи. В некоторых случаях аллергическая реакция становится положительной к 72 ч.

При положительной реакции на месте введения аллергена появляется красноватая или бледная болезненная отечность удлиненной или овальной формы. Отек может быть хорошо контурирован с ясным возвышением над уровнем нормальной кожи. При слабо выраженной реакции отек распознается только при ощупывании (сравнить с аналогичным участком кожи на другой руке). Гиперемию кожи при отсутствии отека принимают за отрицательный результат. При учете реакции отмечается размер отека в сантиметрах (длина и ширина), степень болезненности через 24 и 48 часов. При отрицательном результате следует учитывать реакцию и через 72 ч.

Наличие выраженного отека кожи на месте введения аллергена считается положительной аллергической реакцией. Отсутствие болезненности и гиперемии при наличии отека не исключает положительной оценки пробы.

Реакция, появившаяся и исчезнувшая ранее шести часов после введения аллергена, считается неспецифической.

Оценка результатов реакции:

• слабо положительная – слабо выражен отек не более 2 см в диаметре;
• положительная – отек размером от 2 до 6 см в диаметре;
• резко положительная – отек свыше 6 см, иногда сопровождающийся лимфаденитом и общей реакцией организма.

Введение бруцеллезного аллергена регистрируют в установленных учетных формах с указанием наименования препарата, даты постановки, дозы, названия предприятия - производителя препарата, номера серии, реакции на введение.

После постановки аллергической пробы через 20-30 мин на месте введения аллергена могут возникать аллергические реакции немедленного типа в виде отека (инфильтрата), гиперемии и болезненности кожи. У лиц, высоко сенсибилизированных к бруцеллезному антигену, возможно развитие общей реакции (повышение температуры, головная боль, озноб, недомогание), иногда лимфаденита, болей в суставах, болезненности в месте введения аллергена, повышение температуры (до 38°С).

Пациента необходимо предупредить о возможности развития побочных эффектов, не указанных в инструкции.

КАТЕГОРИЧЕСКИ ЗАПРЕЩАЕТСЯ проводить постановку аллергической пробы одновременно с введением вакцин.

Учитывая возможность развития анафилактического шока у отдельных высокочувствительных лиц, обследуемый должен находиться под медицинским наблюдением не менее 30 мин. Места проведения внутрикожной пробы должны быть обеспечены средствами противошоковой терапии.

Не допускается введение аллергена и прием больных в одном помещении.

Не подлежит применению аллерген, целостность упаковки которого повреждена, с измененными физическими свойствами (посторонние примеси, не растворяющиеся хлопья), с истекшим сроком годности, при нарушении режима хранения.

Сведения о возможном влиянии лекарственного препарата на способность управлять транспортными средствами, механизмами.

Раствор для внутрикожного введения, 10 доз/мл, по 1 мл (10 внутрикожных доз) в ампуле. По 10 ампул в картонной пачке вместе с инструкцией по применению и ножом ампульным.

В соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С в недоступном для детей месте.

В соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С

2 года. Препарат с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Диагностика бруцеллеза имеет ведущее значение в борьбе с нею. Своевременное выявление реагирующих животных - залог успеха при сохранении благополучия и оздоровлении неблагополучных хозяйств. У большинства животных бруцеллез протекает часто без клинических проявлений и поэтому выявить в таких случаях проще методом серологической, бактериологической диагностики.

При заболевании животных бруцеллезом изменяется реактивность организма, что приводит организм к образованию антител и развитию аллергического состояния, т.е. в результате этого происходит специфический ответ иммунной системы (гуморальной, клеточной).

Поэтому при диагностике бруцеллеза необходимо учитывать проявление иммунобиологических реакций на различных стадиях инфекционного процесса, т. к. при этом происходят активизации различных антител в крови (агглютининов, преципитинов, комплементсвязывающих веществ и т.д.), а также аллергического состояния организма.

Так как проявление различных иммунобиологических реакций на различных стадиях инфекционного процесса не постоянны, результатом которого является неполное выявление реагирующих животных даже при комплексном исследовании. В связи, с чем исследование животных надо проводить многократно.

Разработке диагностики и методов их применения посвящено множество работ, но до сих пор не изыскан совершенный метод диагностики и диагностикум.

С несомненным успехом был испытан, а затем применен на практике абортин С.Н. Вышелесского (1934), который готовили в виде суспензии в физиологическом растворе убитой нагреванием агаровой культуры бруцелл, содержащей 2 х10 9 микробных тел. По отзывам С.Н. Вышелесского, Е.С. Орлова, М.Е. Авакумово, Д.К. Бессонова (1935), Е.К. Волик и Г.М. Базылева (1935), И.А. Каркадиновской (1936), М.И. Штуцера и Н.Ф. Федотова (1936), П.Н. Жованик, Б.Г. Петренко и А.М. Говорова (1937, 1940), В.В. Павловского (1940), Е.С. Орлова (1940) и многих других, этот препарат при внутрикожной пробе давал хорошие результаты, как на крупном, так и на мелком рогатом скоте. Недостатком его было то, что он обладал сенсибилизирующими свойствами. Кроме того, после внутрикожной инъекции абортина Вышелесского, как, впрочем, и после других подобных аллергенов, у животных наблюдалось появление агглютининов, которые могли сохраняться до 3 месяцев [21].

В 1937 г. для аллергической диагностики бруцеллеза у мелкого рогатого скота П.Ф. Здрадовский предложил аллерген в виде экстракта из размолотых клеток бруцелл. Этот препарат получил название бруцеллизат. Он оказался высокоактивным и был принят для применения в широкой практике. После внутрикожной инъекции этого препарата также наблюдалось кратковременное появление у некоторых животных специфических агглютининов.

Н.П. Жованик (1940) применил для диагностики бруцеллеза у крупного рогатого скота изготовленный им бруцеллин - шутель-экстракт убитой нагреванием отмытой взвеси из агаровой культуры нескольких штаммов B. abortus. В опыте на 150 коровах, реагировавших положительно на бруцеллез в РА, при первом исследовании на бруцеллин реагировали положительно 69,3% и сомнительно - 17,3% животных, а при повторном исследовании, проведенном через 25-30 дней после первого, реагировали положительно 90% и сомнительно - 9% животных.

Проявление аллергической реакции на введение антигена (аллергена) связано с иммунной реакцией клеточного типа, формирование которого происходит тимус зависимыми или Т-лимфоцитами [22,23].

В 1968 г. Е.С. Орлов и А.Н. Касьянов предложили новый бруцеллезный аллерген - бруцеллин ВИЭВ, изготавливаемый из неагглютиногенного штамма B. abortus.

Бруцеллин ВИЭВ в исследованиях авторов показал высокую специфичность и активность при диагностике бруцеллеза у овец и коз путем пальпебральной пробы и у свиней путем внутрикожной пробы, что было подтверждено производственной проверкой, проведенной в различных республиках страны на 115 тыс. овец и коз в 236 стадах, благополучных и неблагополучных по бруцеллезу. Авторы отметили также, что пальпебральная проба с применением бруцеллина ВИЭВ может быть использована для исследования на бруцеллез северных оленей. Бруцеллин ВИЭВ, как и бруцеллогидролизат ВИЭВ, совершенно лишен сенсибилизирующих свойств. Широкое применение бруцеллина ВИЭВ в практике получило положительную оценку со стороны ветеринарных специалистов (Е.М. Борисов, В.С. Дуранов, И.И. Брудков, 1970; Ф.Г. Муфтеев, И.Ф. Коновалов, А.Ф. Ашаткин, В.П. Юрейчук, В.В. Гуськов, 1972, и другие) [24].

Аллергическое состояние у больных бруцеллезом животных возникает позже, чем появляются специфические антитела в сыворотке крови, но может сохраняться очень долго. По данным П.П. Самойлова (1952), аллергическая реакция на бруцеллез у экспериментально зараженных бруцеллезом овец проявляется на 15-30-й день, но может выпадать у 16,7% животных на срок до одного месяца, у 16,7% - до двух-трех месяцев, а у 6,6% - даже до шести-девяти месяцев. Отрицательной аллергическая реакция становится у большинства искусственно инфицированных овец через 16 месяцев.

Аллергические реакции, как и серологические, у больных бруцеллезом животных могут выпадать под влиянием истощения, интеркурентных инфекций, поражения чесоткой и других факторов, вызывающих состояние анергии.

Н.П. Ивановым был разработан оригинальный способ получения аллергена при помощи ультразвукового дезинтегратора УЗДН - 2 [25].

В.Б. Теном был изыскан более упрощенный вариант получения бруцеллезного аллергена.

В процессе иммуногенеза количество Т-лимфоцитов коррелирует с выраженностью аллергических реакций, в то время как В-лимфоциты являются источником проявления антителообразования [26].

Активизацию иммунологической реактивности во время беременности наблюдал А.К. Бронников.

Несмотря на то, в специальной литературе имеется значительное количество сообщений по изысканию методов приготовления бруцеллезного аллергена, способов введения и необходимости его применения, перспективность разработки и применения его в зависимости от вида животного все еще актуально[27].

Общая характеристика процедуры

Согласно статистике ВОЗ, аллергия – одна из наиболее распространенных заболеваний на всей планете. Каждый пятый житель Америки, каждый четвертый немец и каждый третий россиянин становятся жертвами этой болезни. Аллергия может быть как врожденным, так и приобретенным явлением и периодически обостряться в определенное время года или при внутренних изменениях (к примеру, снижении иммунитета). Чтобы обнаружить причину и методы коррекции болезни, проводят комплексное медицинское обследование. Его важнейшая часть – аллергические диагностические пробы.

АПД назначают при любых системных изменениях организма – от пищевой аллергии до бронхиальной астмы с аллергической этиологией. Обычно пациент получает результаты анализов в тот же день или спустя 3-4 дня после проведения манипуляций. На основании анализов врач разрабатывает терапевтический курс, чтобы подавить патогенные вещества, избавив пациента от дискомфорта.

Где можно сдать аллергические пробы

Перед началом АПД следует посетить врача общей практики. Он проанализирует состояние пациента, назначит перечень анализов и, по необходимости, выдаст направление на исследование аллергических проб. Помимо терапевта этим занимаются аллергологи и дерматологи. Дополнительно пациент может обратиться в частный медико-диагностический центр.

АПД проводят в центрах иммунологии или кожных диспансерах. Некоторые разновидности диагностики (к примеру, провокационные тесты) разрешено делать только в стационарах. Это обосновано высоким риском для здоровья пациента. Исследование проводится под строгим наблюдением специалистов, которые, при необходимости, смогут оказать первую помощь.

Результат стандартных аллергических проб выдают в день их проведения. Информацию об анализе крови пациент сможет получить только спустя 1-3 дня (зависит от медицинского учреждения).

Подготовка к процедуре

Если у вас есть сомнения о корректности результатов АПД – закажите повторное исследование в частном медицинском центре или коммерческой лаборатории.

• прекратить употребление лекарств (в том числе и антигистаминных) за 3-4 дня до диагностики;
• отказаться от употребления спиртных напитков за 2-3 дня до сдачи;
• прекратить контакт с домашними или уличными животными (от кошек и собак до рептилий);
• избегать чрезмерной физической нагрузки, чтобы состояние тела не повлияло на результаты;
• предварительно посетить врача, если перед диагностикой зафиксирован резкий упадок здоровья, сообщите о любых простудных симптомах своему доктору.

Анализы сдаются утром натощак. Детям допускается проходить диагностику спустя 3 часа с момента последнего приема пищи. Аллергические пробы малышей ничем не отличаются от аналогичной диагностики взрослых пациентов. За всеми возрастными группами должен наблюдать врач, чтобы вовремя отследить реакцию, предотвратить побочные эффекты и обеспечить максимальную безопасность.

Малышам до 3-х лет проводят только анализ крови. Если аллергическая реакция проявилась у грудного ребенка, то потребность в диагностике крови отпадает.

В крови малыша находятся материнские антитела, которые поступают в организм с молоком. Решение о наиболее безопасном и информативном методе обследования принимает врач.

Показания и противопоказания к проведению АПД

Основное показание к проведению АПД – подозрение на аллергию или оценка рисков аллергических патологий при соответствующем анамнезе (например, у пациентов с генетическими болезнями). Аллергические диагностические пробы (кроме анализа крови) не проводят в таких случаях:

• обострение любой хронической патологии;
• декомпенсированная стадия астмы;
• острая стадия инфекционного процесса;
• аутоиммунные заболевания;
• повышенный риск развития анафилактических реакций;
• расстройства психики;
• беременность/лактация;
• возраст до 3-х лет;
• первые дни менструального цикла (состояние гормонального фона может повлиять на точность результатов).

Разновидности диагностики

Диагностические пробы выявляют аллергические заболевания и патологии с аллергическим компонентом в патогенезе. Они основаны на общей/местной реакции живого организма на введение конкретного аллергена. Выделяют несколько разновидностей проб, использование которых варьируется от индивидуальных особенностей пациента и специфики болезни. Среди них – кожные пробы, элиминационные, провокационные АДП, анализ крови.

Кожные пробы считаются наиболее доступным и безопасным вариантом диагностики. Существует несколько методик введения аллергена – внутрикожная, скарификационная, аппликационная. При повышенной чувствительности к грибковым или бактериальным аллергенам врачи используют внутрикожные пробы. Их назначают пациентам, которые страдают от бронхиальной астмы, хронической рецидивирующей крапивницы, инфекционных патологий.

Некоторые аллергены могут спровоцировать ряд побочных эффектов – от шока до летального исхода. Чтобы максимально обезопасить пациента, используют реакцию Праустница-Кюстнера. Сыворотку крови аллергика вводят внутрикожно здоровому добровольцу. Это может быть член семьи или совершенно незнакомый человек. Спустя сутки доктор вводит аллерген и наблюдает за реакцией кожи. Через несколько минут на коже образуется переполненный кровью волдырь, на основании которого ставят диагноз.

Некоторые разновидности АДП используют при инфекционных или паразитарных патологиях. Единственное условие – болезнь должна протекать с выраженными аллергическими проявлениями. К примеру, для диагностики туберкулеза используют внутрикожную пробу Манту и скарификационную пробу Пирке, для бруцеллеза – внутрикожную пробу Бюрне, эхинококкоза – внутрикожную пробу Касони, дизентерии – пробу Цуверкалова. Если реакция положительная, то на месте введения аллергена сформируется воспаление с гиперемией и отечностью.

Некоторые пробы необходимы для выявления предрасположенности к тому или иному заболеванию. К примеру, реакция Шика при диагностике дифтерии или реакция Дика при определении риска развития скарлатины.

Их используют для подтверждения или опровержения диагноза после проведения кожных проб. Возможны ситуации, когда результат АДП не соответствует анамнезу болезни и ставит врачей в ступор. Чтобы окончательно решить вопрос проводят дополнительное исследование.

Выделяют несколько разновидностей провокационных проб, среди них – назальный тест. Он необходим для диагностики аллергического ринита.

Пациенту в обе ноздри вводят несколько капель контрольной жидкости. Человек может ощущать ухудшение носового дыхания, чихание, дискомфорт или слабое покалывание в носовых путях. Эти симптомы указывают на положительную реакцию теста. Если реакция не происходит – врач увеличивает дозу и наблюдает за реакций пациента.

Конъюнктивальный тест используют для диагностики поллинозов и конъюнктивита. Сперва врач проводит манипуляции с контрольным веществом и только после предварительного испытания приступает к аллергену. Его закапывают пациенту в конъюнктивный мешок (область нижнего века) и ждут реакции. Зуд, слезоточивость или покраснение указывают на положительный исход теста.

Еще одна разновидность провокационных проб – ингаляционный тест. Он необходим для подтверждения бронхиальной астмы. Раствор аллергена распыляют при помощи аэрозоля. Если проба положительная, то жизненная емкость легких резко снижается, что влечет за собой бронхоспазм. Врачи должны незамедлительно купировать его специальными медикаментами.

Это самый простой, но длительный метод диагностики, который используют при пищевой аллергии. Пациенту достаточно на время исключить из пищи предполагаемый аллерген. Чаще всего метод применяют в младенчестве, если родители не могут выявить причину аллергической реакции у малыша.

Временные рамки элиминационных проб варьируются от 7 до 12 дней для 1-го пищевого продукта. На время диагностики следует вести пищевой дневник, отмечать общее состояние здоровья, реакцию организма на смену рациона.

Живой организм вырабатывает особые белковые молекулы в ответ на поступление аллергена. Эти белковые молекулы называют антителами или иммуноглобулинами Е (IgE). Иммунная система производит антитела, чтобы вычислить и уничтожить патогенный раздражитель. Может показаться, что организм оснащен идеальной системой защиты, но это не так. В битве с аллергеном белковые молекулы разрушают клетки собственного организма, что и становится причиной аллергической реакции.

Для каждого аллергена существует особенная разновидность иммуноглобулина Е. Анализ крови определяет концентрацию/тип IgE, указывая на специфический антиген.

Как проходит анализ крови? В первую очередь специалист берет кровь из вены, разгоняет ее в центрифуге, после чего в сыворотку добавляет необходимый аллерген или их комбинацию. Провокатор и подходящее антитело формируют иммунные комплексы, которые становятся видны в результатах исследования. Для проявления медики используют реактивы. После исследования пациенту выдают индивидуальный перечень потенциально опасных аллергенов.

В качестве профилактики пациент может сдавать тест на определение общего уровня антител. Эта диагностика ориентирована на количественный, а не качественный показатель. Лаборант вычисляет концентрацию иммуноглобулина в крови пациента и сравнивает полученные цифры с нормой (варьируется в зависимости от возраста). Превышение нормы указывает на наличие сильного внутреннего аллергена, который требует дополнительной диагностики и лечения.

Тест на определение общего уровня антител подходит малышам до 3-х лет, пациентам с обострением любых хронических патологий и людям, которые принимают антигистаминные препараты.

Возможные осложнения

Осложнения могут варьироваться в зависимости от индивидуальных показателей организма и разновидности диагностики. Кожные пробы считаются наиболее простым, экономичным и приемлемым методом выявления индивидуальной гиперчувствительности. Тем не менее они не лишены побочных эффектов. Спустя 6 часов после введения аллергена может развиться гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ). Общая длительность состояния достигает от 6 до 24 часов.

Гиперчувствительность – повышенная чувствительность организма к определенному веществу. Состояние относят к категории излишне нежелательных, поскольку гиперчувствительность оказывает серьезное влияние на иммунитет. Этот феномен провоцирует долговременное повреждение тканей на месте введения аллергена. Дополнительно может возникнуть общая чувствительность организма или формирование новой аллергии.

Негативные реакции могут развиться как от врачебных ошибок (игнорирования асептики), так и от специфической реакции организма. Даже минимальная доза аллергена может стать причиной ангионевротического отека или анафилактического шока. Чтобы обезопасить пациента, диагностика проводится под контролем медицинского персонала.

Ангионевротический отек или отек Квинке – увеличение (опухание) лица, его части или конечностей. Анафилактический шок – аллергическая реакция немедленного типа. Человеческий организм становится максимально чувствительным при повторном введении аллергена. В 10-20% случаев заканчивается летальным исходом.

В целом, АПД считается безопасной процедурой. Ее методика проста и понятна, а осложнения возникают в редких случаях. Главное – подобрать качественный центр для тестирования и четко следовать рекомендациям врача. Регулярно следите за состоянием организма и будьте здоровы!

Специальность: врач педиатр, инфекционист, аллерголог-иммунолог .

Общий стаж: 7 лет .

Образование: 2010, СибГМУ, педиатрический, педиатрия .

Опыт работы инфекционистом более 3 лет.