Рпга с дифтерийным диагностикумом флекснера

Диагностикум эритроцитарный шигеллезный Флекснера 1-5 получен путем сенсибилизации эритроцитов смесью антигенов шигелл Флекснера - одтипов 1а, 1в, 2а, 3а, 4в и 5 или Диагностикум эритроцитарный шигеллезный Зонне получен путем сенсибилизации эритроцитов моноантигенами из шигелл Зоне.

Представляют собой 1 % взвесь формалинизированных эритроцитов барана сенсибилизированных липополисахаридными антигенами из шигелл в фосфатном буферном растворе (рН- 7,2 ± 0,2; концентрация – 0,06 моль/л).

Консервант – формалин.
Гомогенная суспензия коричневого цвета без хлопьев; при отстаивании образуется 2 слоя: плотный коричневый осадок эритроцитов и прозрачная желтоватая надосадочная жидкость. 1 флакон– 3 мл.

Сыворотки диагностические шигеллезные (Флекснера 1-5 или Зонне) неадсорбированные сухие - гомогенная масса от белого с коричневатым оттенком до бежевого цвета. 1 флакон- из 0,1 мл.

1 % взвесь формалинизированных, несенсибилизированных эритроцитов барана - гомогенная суспензия коричневого цвета без хлопьев; при отстаивании образуется 2 слоя: плотный коричневый осадок эритроцитов и прозрачная желтоватая надосадочная жидкость. 1 флакон – 1 мл.

Поддерживающий раствор - 0,9 % раствор натрия хлорида – прозрачная бесцветная жидкость, рН от 6,5 до 7,5. 2 флакона – по 8 мл.

Планшет круглодонный для иммунологических реакций однократного применения - состоит из 8 рядов, каждый из которых включает в себя 12 лунок с прозрачным, бесцветным, круглым дном. 1 шт.

В качестве анализируемых образцов используют образцы сыворотки крови человека.
Анализируемый образец хранят в условиях, предотвращающих бактериальный пророст при температуре от 2 до 8 0С не более 72 часов. Допускается замораживание, замороженные анализируемые образцы перед исследованием разморозить при комнатной температуре.
Анализ образцов с выраженным гемолизом, бактериальным проростом, а также длительно хранившихся без замораживания или повторно замораживаемых не допускается.
Приготовление растворов для РПГА.
Флакон с сывороткой диагностической шигеллезной (Флекснера 1-5 или Зонне) неадсорбированной сухой вскрыть и добавить 1 мл прилагаемого 0,9 % раствора натрия хлорида, получив, таким образом, разведение 1:10. Разведение 1:100 готовить в первой лунке прилагаемого планшета: к 0,09 мл 0,9 % раствора натрия хлорида добавить 0,01 мл сыворотки диагностической шигеллезной, разведенной 1:10.
Вскрытый флакон с сывороткой диагностической шигеллезной (Флекснера 1-5 или Зонне) неадсорбированной сухой при разведении 1:10 в закрытом виде можно хранить при температуре от 2 до 8 ºС в течение одного месяца.
Диагностикум готов к применению. Перед вскрытием флакон с диагностикумом необходимо осторожно встряхнуть до получения гомогенной суспензии. В ходе работы встряхивание рекомендуется повторять.
Вскрытый флакон с диагностикумом в закрытом виде можно хранить при температуре от 2 до 8 ºС в течение одного месяца.
0,9 % раствор натрия хлорида. Готов к применению.

Проведение РПГА.
При контроле любого количества анализируемых сывороток обязательна постановка 1 ряда агглютинации с сывороткой диагностической шигеллезной (Флекснера 1-5 или Зонне) неадсорбированной сухой.
Для постановки РПГА используют планшет для иммунологических реакций однократного применения. Готовят двукратные серийные разведения анализируемых сывороток в 0,05 мл прилагаемого 0,9 % раствора натрия хлорида начиная с 1:10 до 1:2560 и 1 ряд двукратного серийного разведения сыворотки диагностической шигеллезной (Флекснера 1-5 или Зонне) неадсорбированной сухой, начиная с разведения 1:100, до удвоенного титра, указанного на этикетке флакона.
В каждую из лунок с разведениями сывороток прибавляют по 0,025 мл диагностикума.
Обязательными контролями являются:
1. Контроль сыворотки диагностической шигеллезной (Флекснера 1-5 или Зонне) неадсорбированной сухой в разведении 1:100; контроль анализируемой сыворотки в разведении 1:10, для чего в 2 лунки вносят по 0,05 мл каждой из сывороток.
2. Проверка отсутствия спонтанной агглютинации диагностикума, для чего в 2 лунки, содержащие 0,05 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, добавляют по 0,025 мл диагностикума;
3. Контроль на отсутствие в анализируемых сыворотках агглютининов к эритроцитам барана, для чего в 2 лунки вносят по 0,05 мл анализируемой сыворотки в разведении 1:10 добавляют по 0,025 мл 1 % взвеси несенсибилизированных формалинизированных эритроцитов барана (контрольные эритроциты).
Планшет встряхивают и помещают на 2-2,5 ч в термостат при температуре (37 + 1) оС, после чего проводят учет результатов.

Стоимость услуги:

530 руб.* Заказать

Срок исполнения: 2 - 4 к.д. Заказать Указанный срок не включает день взятия биоматериала

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: РПГА

Антитела к возбудителям шигеллеза – косвенный маркер инфицирования шигеллами. Шигеллез (бактериальная дизентерия) – антропонозное заболевание, возбудителями которого являются микроорганизмы рода шигелл (S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii, S. sonnei). Путь передачи инфекции– фекально-оральный. Клинической особенностью шигеллеза является наличие у части заболевших классических форм поражения толстого кишечника в виде гемоколита со скудным стулом с примесью крови и слизи и ложными позывами на дефекацию.

Серологические методы используются для диагностики шигеллеза при отрицательных результатах бактериологического исследования, обнаружения ДНК и для эпидобследований. Не используются для ранней диагностики.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Обследование пациентов с симптомами острой кишечной инфекции при позднем обращении, когда применение других методов (ПЦР и бактериологического исследования) неинформативно;
Эпидемиологические обследования.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр	Референсные значения	Единицы измерения
Anti-Shigella flexneri I-V, VI и Anti-Shigella sonnei	≥ 1:400 - при острой дизентерии; ≥ 1:100 - при затяжном течении	титр

Результаты считаются положительными при исследовании парных сывороток крови, взятых с интервалом 10 дней, при нарастании титра антител не менее чем в 4 раза.

Результаты необходимо оценивать с учетом эпидемиологической обстановки, формы заболевания, сроков взятия сыворотки от начала заболевания.

Не обнаружено	Обнаружено
Отсутствие инфекции Ранний период инфекции	Текущая инфекция Перенесенная инфекция в прошлом

" ["serv_cost"]=> string(3) "530" ["cito_price"]=> NULL ["parent"]=> string(2) "25" [10]=> string(1) "1" ["limit"]=> NULL ["bmats"]=> array(1) < [0]=>array(3) < ["cito"]=>string(1) "N" ["own_bmat"]=> string(2) "12" ["name"]=> string(31) "Кровь (сыворотка)" > > >

Биоматериал и доступные способы взятия:

Тип	В офисе
Кровь (сыворотка)

Подготовка к исследованию:

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: РПГА

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Обследование пациентов с симптомами острой кишечной инфекции при позднем обращении, когда применение других методов (ПЦР и бактериологического исследования) неинформативно;
Эпидемиологические обследования.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр	Референсные значения	Единицы измерения
Anti-Shigella flexneri I-V, VI и Anti-Shigella sonnei	≥ 1:400 - при острой дизентерии; ≥ 1:100 - при затяжном течении	титр

Не обнаружено	Обнаружено
Отсутствие инфекции Ранний период инфекции	Текущая инфекция Перенесенная инфекция в прошлом

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Уважаемые пациенты! Каталог анализов в настоящее время находится в стадии наполнения информацией и содержит в себе далеко не все выполняемые нашим центром исследования. Филиалами Центра эндокринологии проводится более 700 видов лабораторных анализов. С их полным списком Вы можете ознакомиться здесь.

Пожалуйста, уточняйте информацию о стоимости услуг и подготовке к анализам по телефонам (812) 344-0-344, +7 953 360 96 11. При сдаче анализов крови, пожалуйста, учитывайте стоимость забора биоматериала.

Готово к оформлению: 0 анализов

Код исследования: 408
Время выполнения: до 3 дней
Стоимость анализа 380 руб.

Исследование представляет собой обнаружение антител к антигенам возбудителей бактериальной дизентерии (шигеллеза) методом РНГА (реакция непрямой гемагглютинации). Также встречается название РПГА - реакция пассивной гемагглютинации.

Бактериальная дизентерия (или шигеллез) вызывается микроорганизмами - бактериями рода Shigella. Данный род включает в себя порядка 50 серотипов, которые объединены по антигенным, биохимическим свойствам в четыре группы, а именно Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii и Shigella sonnei.

Наиболее высокая патогенность среди этих групп присуща S. dysenteriae, образующим так называемый цитотоксин Шига (другие разновидности шигелл его не синтезируют или почти не синтезируют). Наибольшее эпидемическое значение применительно к большинству стран мира имеют S. flexneri и S. sonnei. Заболевание, вызванное S. sonnei, в целом протекает легче и сравнительно реже обусловливает развитие осложнений, нежели S. dysenteriae и S. flexneri.

Инфекция передается лишь от человека посредством загрязненной пищи, воды, при контакте.

Источник инфекции - больные люди, а также бактерионосители, выделяющие возбудителя с фекалиями. Больные дизентерией представляют опасность в плане заразности с начала заболевания. Продолжительность выделения возбудителя, как правило, не более недели, однако может затягиваться также до 2-3 недель.

В желудке шигеллы могут находиться от нескольких часов и - в редких случаях - до нескольких суток. Пройдя кислотный барьер желудка, микроорганизмы попадают в тонкий кишечник. Здесь они фиксируются к клеткам и вырабатывают токсин, вызывающий усиленное выделение в просвет кишки жидкости и солей. Шигеллы достаточно активно перемещаются, обусловливая развитие воспалительного процесса, поддерживаемого действием выделяемого возбудителем токсина. По мере развития заболевания шигеллы в большом количестве попадают далее в толстую кишку.

В клиническом плане заболеванию присуще острое начало. Появляется общая интоксикация, отмечается лихорадка, схваткообразные боли в животе (или тенезмы), которые усиливаются перед актом дефекации. Обычно стул сначала обильный водянистый, а затем частый небольшими порциями, с примесью слизи и крови.

Выздоровление сопровождается обычно освобождением организма от микроорганизма. Однако при ослабленной иммунной системе очищение от возбудителя может затягиваться до одного месяца и дольше. Формируется носительство, у части перенесших заболевание формируется хроническое его течение.

Специальная подготовка не проводится. Сдавать кровь для проведения исследования рекомендуется по прошествии не менее 4 часов после еды.

Приведены лишь некоторые процессы, состояния и заболевания, при которых целесообразно назначение данного анализа.

РНГА с шигеллезными диагностикумами может проводиться в качестве вспомогательных исследований при распознавании острых кишечных инфекций.

С целью подтверждения клинического диагноза в случае отрицательного результата бактериологического исследования.

Для ретроспективного подтверждения диагноза.

В случае позднего обращения заболевшего лица, назначения антибактериальной терапии.

При затяжном течении заболевания.

Для профилактического обследования так называемой декретированной группы лиц, работающих в сфере обслуживания.

Ниже приведены лишь некоторые возможные процессы, состояния и заболевания, при которых отмечаются положительные или отрицательные результаты РНГА с шигеллезными диагностикумами. Следует помнить, что результат исследования может не всегда являться достаточно специфичным и достаточным критерием для формирования заключения. Представленная информация никоим образом не служит целям самодиагностики и самолечения. Окончательный диагноз устанавливается только врачом при сочетании полученных данных с результатами других методов исследования.

Положительный результат может встречаться при текущей или ранее перенесенной инфекции. Исследование необходимо проводить с повторением в динамике с промежутком 7-10 дней; имеет место ложноположительный результат по причине перекрестных реакций.

Отрицательный результат может встречаться как показатель недостаточной чувствительности теста; при отсутствии текущей или же недавней инфекции; при низком содержании, а также отсутствии антител - в частности в первые дни с момента начала заболевания (исследование необходимо повторить в динамике спустя 7-10 дней); сравнительно поздний период инфекции.

9 мая 2017, 17:56 Эксперт статьи: Блинова Дарья Дмитриевна 0 8,511

Инфекционное заболевание ЖКТ, вызванное бактерией рода шигелла Флекснера, называется бактериальная дизентерия (шигеллез). Это острая кишечная инфекция, которая поражает толстый кишечник, нарушает его работу и вызывает интоксикацию организма. У больных отмечается рвота, понос, обезвоживание. Подтверждением данного диагноза является лабораторное выделение шигеллы из анализа кала и крови больного.

Что это такое?

Болезни подвержены все возрастные категории населения. Это инфекция кишечника, которая возникает в любую пору года, но пик заболевания приходится на лето, когда создаются благоприятные условия для развития бактерий. Наиболее распространен недуг в странах Азии, Африки, где плохие экологические условия, низкий уровень жизни, а плотность населения высокая. Этот микроорганизм вызывает урогенитальный шигеллез — заболевание, которое распространено между гомосексуалистами.

Шигелла дизентерии — микроорганизм, который неустойчив во внешней среде. Кипячение и высокая температура моментально разрушают структуру микроба, а замораживание не влияет на бактерии, не действует на них и желудочный сок. Возбудители недуга относятся к типу палочкообразных, которые разделяют на 4 группы:

Флекснера и Зонне;
Григорьева-Шига;
Штуцера-Шмитца;
Ларджа-Сакса.

Вернуться к оглавлению

Патогенез данного заболевания заключается в том, что когда возбудитель попадает в кишечник человека, он продолжает свою жизнедеятельность в эпителии толстого кишечника и выделяют эндотоксин (при распаде микроба), экзотоксин (выделение живых микробов). Эти токсины изменяют работу кишечника (нарушается всасывание жидкости), его микрофлору (развиваются патогенные микробы), а также неблагоприятно влияют на нервную систему больного. В группе риска — дети до 6-ти.

Пути передачи шигеллеза зависят от способа заражения и делятся на виды:

контактно-бытовой;
фекально-оральный;
через загрязненную воду (переносчики шигеллы Зонне);
пищевой;
от больного к больному.

Контактный путь передачи самый распространенный, потому что заражение происходит через грязные руки, инфицированные пищевые продукты, предметы быта. Некоторые больные являются переносчиками патогена, не подозревая об этом. У таких пациентов отмечается скрытая или легкая форма, и они считаются разносчиками возбудителя. Пациенты в период выздоровления (2—3 недели с момента заражения) — еще один источник инфицирования.

Симптомы и классификация дизентерии

Инкубационный период заболевания зависит от количества и степени вирулентности микроба, а также физического состояния больного. Дизентерия Флекснера имеет свою симптоматику и обусловлена длительностью и характером протекания. Классификация шигеллеза имеет такие виды:

Хронический — характеризуется длительным (до 2-х месяцев) периодом протекания.
Острый — возникает внезапно и симптоматика протекает ярко.
Колитическая — самая распространенная форма. В начале болезни пациенты ощущают недомогание, озноб, беспокойство. Потом появляются блуждающие боли, которые позже локализуются в подвздошной области. Возникает диарея с характерным кашицеобразными каловыми массами, а потом в стул примешиваются кровь и слизь. Характер болей становится схваткообразным. Нарастают симптомы интоксикации (головные боли, обморок) и обезвоживания (сухость кожи, язык сухой и покрыт налетом), появляются частые позывы к дефекации.
Гастроэнтероколитическую — возникает остро и характеризуется одновременным появлением признаков токсикации и обезвоживания, потому состояние пациентов определяют, как тяжелое. Присутствуют симптомы гастроэнтерита (жар, частая рвота, боли в эпигастральной области). Появляется диарея, при которой кал светлый, жидкий с частицами неперетравленной еды.
Энтероколитическая форма имеет симптомы обезвоживания или некоторые проявления колитической формы протекания, но рвота не наблюдается.

Вернуться к оглавлению

Шигеллез у детей вызывают те же причины, что и у взрослых. Симптоматика болезни такая же, как и у взрослых, но протекает несколько тяжелее. У детей появляется вялость или, наоборот, они возбуждены, снижается аппетит, болит голова, появляется диарея. Заражение происходит фекально-оральным, пищевым и водным способом. Наиболее распространен между детьми контактный путь передачи заболевания. Поэтому, при даже незначительных признаках болезни, ребенка нужно оставить дома и не посещать с ним общественные места (садик, школа, магазины и пр.). Для подтверждения диагноза проводится лабораторная диагностика, которая помогает обнаружить наличие бактерий Флекснера и Зонне.

Диагностика шигеллы Флекснера

Консультация гастроэнтеролога и врача-инфекциониста. Доктора соберут анамнез болезни, эпидемиологический, семейный и аллергологический, а также проведут пальпацию и перкуссию живота.
Общий анализ мочи.
Общий анализ крови — повышенное количество лейкоцитов и СОЭ.
Бактериологический анализ кала — определятся колонии шигеллы.
Серологическое исследование — позволяют точно диагностировать заболевание и вычислить тип микроорганизма:
- ИФА;
- имунофлюоресцентный анализ;
- реакция угольной агломерации;
- ПЦР.
Дополнительные серологические методы:
- РНГА;
- РСК.
Копрологическое исследование кала — выявляет воспалительный процесс в кишечнике, характерный для инфекционных заболеваний.
Ректороманоскопия — показывает изменение кишечной стенки. Дополнительно делается биопсия.

Вернуться к оглавлению

Дифференциальная диагностика шигеллеза проводится с холерой, пищевыми инфекциями, ротавирусным гастроэнтеритом. При холере кал жидкий, бесцветный, дефекация безболезненная, частая рвота, которая не приносит облегчения, у пациента урчит живот, отмечается обезвоживание 3—4-й степени. Пищевые токсикоинфекции характеризуются очень жидким, с неприятным запахом, зеленоваты на цвет калом. Дефекация болезненная, боли схваткообразные и локализуются в эпигастрии, частые позывы на рвоту, после которой становится легче. Обезвоживание 3—4-й степени бывает редко. При ротавирусном гастроэнтерите кал пенообразный, обильный, ярко-желтый. Дефекация безболезненная, боли умеренные без точной локализации, громкое урчание в животе, 3—4-разовая рвота. Отмечается покраснение и зернистость слизистых покровов мягкого неба.

Лечение недуга

Принципы терапии — начать лечение на ранних стадиях заболевания, индивидуальный подход к каждому больному и комплексность терапии. Лечение шигеллеза возможно без госпитализации и зависит от состояния пациента. Госпитализируют больных со средней и тяжелой степенью тяжести. Пациентам назначают специально подобранное диетическое питание, медикаментозное лечение (бактериофаги, антибиотики, пробиотики, растворы для возобновления утраченной жидкости, дезинтоксикационную терапию, ферменты). Пациентам назначают и витамины.

Вначале заболевания назначается диета № 4, позже — переводят на диету № 2. Питание пациентов должно быть дробным (5—6 раз в сутки). Есть продукты, которые следует исключить из своего рациона:

свежий хлеб;
жирные бульоны и супы;
мясо и рыба жирных сортов;
молоко;
яйца вкрутую, яичница;
макаронные изделия и бобы;
свежие фрукты и овощи;
сладкое;
газированные напитки, кофе, какао.

подсушенный хлеб;
супы с нежирным мясом и рыбой;
отварные мясо и рыба;
свежий творог;
яйца всмятку (не больше 2-х штук в сутки);
каши, вареные на воде;
отварные овощи.

Вернуться к оглавлению

После нормализации стула можно употреблять:

вчерашний хлеб, галетное печенье;
мясные и рыбные изделия в запеченном виде;
кефир, ряженка, творог;
яйца (сваренные вкрутую нельзя);
ягоды в перетертом виде;
варенье, мед.

Вернуться к оглавлению

При этом недуге могут возникнуть:

поражения оболочки кишечника (язвы, эрозия);
непроходимость кишечника;
токсический гепатит;
гангрена толстой кишки;
почечная недостаточность;
парез мускулатуры кишечника;
инфекционно-токсический шок.

Вернуться к оглавлению

Профилактика

Принципами профилактики считается соблюдение санитарно-гигиентических правил хранения, приготовления пищи, правил личной гигиены. Важно проходить регулярное обследование на бактерионосительство, особенно работниками пищевых предприятий, проводить санитарное обследование источников водоснабжения. Немаловажными в предупреждении заболевания являются меры, способствующие раннему выявлению и регистрации больных с острыми кишечными инфекциями, и их лечение.

Во все лунки планшета вносят по 0,025 мл разведенного ФБР с твином.

Петлей вместимостью 0,025 мл в 1 лунку ряда вносят 0,025 мл разведенной 1:5 прогретой, адсорбированной испытуемой сыворотки, тщательно перемешивают, получают разведение 1:10 и, перенося по 0,025 мл раствора из предыдущей лунки в последующую, делают двукратные разведения до 10 лунки включительно. Из 10 лунки, после перемешивания, удаляют 0,025 мл. Для экономии всех ингредиентов титрование сывороток можно проводить в 8 лунках по короткому ряду планшета.

Если испытуемые сыворотки разведены 1:10, то в 1 лунку планшета вносят по 0,025 мл разведенной 1:10 испытуемой сыворотки. Внесение сыворотки в этом случае осуществляют мерной пипеткой (с наконечником). Титрование сыворотки начинают со 2 лунки.

Для контроля на отсутствие агглютининов к эритроцитам барана, при постановке РПГА "по длинному ряду", в 11 лунку петлей вносят 0,025 мл испытуемой сыворотки, прогретой, адсорбированной, разведенной 1:10 (или 1:5), перемешивают и переносят 0,025 мл в 12 лунку. Из 12 лунки, после перемешивания, удаляют 0,025 мл. При титровании "по короткому ряду" этот контроль для испытуемых сывороток ставят на специально выделенных рядах этого же планшета (в редких случаях - в отдельном планшете).

Внесение сыворотки противодифтерийной контрольной (для оценки чувствительности эритроцитарного диагностикума).

В 1 лунку ряда вносят 0,025 мл разведенной СДК, получают разведение 1:200, содержимое лунки тщательно перемешивают петлей и, перенося по 0,025 мл раствора из предыдущей лунки в последующую, делают двукратные разведения до 10 лунки включительно. Из десятой лунки, после перемешивания, удаляют 0,025 мл, 11 и 12 лунки, содержащие по 0,025 мл разведенного ФБР с твином, являются контролем диагностикума на отсутствие спонтанной агглютинации.

В 1 лунку ряда, так же как и при титрировании испытуемых сывороток, лучше не вносить 0,025 мл разведенного ФБР с твином. При этом, в 1 и 2 лунки мерной пипеткой с наконечником вносят по 0,025 мл СДК, разведенной 1:100. Титрование СДК начинают со 2 лунки.

Контроль на чувствительность диагностикума следует ставить при каждом опыте!

При постановке РПГА "по длинному ряду", в 11 и 12 лунки с испытуемой сывороткой вносят по 0,025 мл рабочего разведения контрольных эритроцитов барана. При постановке РПГА "по короткому ряду", контрольные эритроциты барана вносят в две специально выделенные лунки для каждой испытуемой сыворотки (см. п. 2).

Флакон с разведенным диагностикумом тщательно встряхивают до образования однородной взвеси эритроцитов и капельницей вносят по 0,025 мл (одна капля) диагностикума в каждую лунку до конца ряда с разведениями контрольной сыворотки и с 1 до 10 лунки включительно с разведениями испытуемых сывороток (или с 1 до 8 лунки с разведениями испытуемых сывороток при постановке реакции "по короткому ряду".

Разведенный диагностикум может быть использован в течение недели, если его активность соответствует требуемой.

Равномерное распределение эритроцитов в лунках пластин достигается путем постукивания по углам пластины. Пластины остаются на ровной поверхности в течение 2,5-3,5 часов при температуре 20 град. C (перемещение пластин до учета результатов реакции исключается). Допускается учет результатов реакции через 18-24 часа.

УЧЕТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты РПГА оценивают визуально - по степени агглютинации эритроцитов:

++++ гемагглютинат тонким слоем выстилает все дно лунки;

+++ агглютинировавшие эритроциты ровным слоем выстилают дно лунки, но размер агглютината меньше, может наблюдаться фестончатое утолщение края осадка;

++ агглютинировавшие эритроциты располагаются в центральной части лунки, окружены слоем эритроцитов в виде кольца;

+ на дне лунки образуется широкое, плотное кольцо с незначительной агглютинацией по краю;

- осадок в центральной части лунки в виде диска или кольца с ровным краем.

Реакция в контролях на отсутствие в испытуемой сыворотке агглютининов к эритроцитам барана и на отсутствие спонтанной агглютинации диагностикума должна быть отрицательной. Если испытуемая сыворотка в лунках с контрольными эритроцитами дает гемагглютинацию, нужно повторно адсорбировать из нее гетерогемагглютинины: то есть повторно провести обработку сыворотки 50-процентными формалинизированными эритроцитами.

За титр испытуемой и контрольной сывороток принимают последнее разведение, дающее агглютинацию эритроцитов на два плюса (++).

При определении специфической активности (чувствительности) диагностикума, агглютинация на два плюса с сывороткой противодифтерийной контрольной должна быть не ниже 1:3200 и не выше 1:12800, что соответствует 5-7 лункам. В противном случае диагностикум бракуется и реакция не учитывается. (Активность столбнячного диагностикума с противостолбнячной контрольной сывороткой должна быть не ниже, чем 1:1280.)

Условно-защитным титром как противодифтерийных, так и противостолбнячных антител принимается титр 1:20.

Испытуемые сыворотки с титром противодифтерийных антитоксических антител 1:20 и менее подлежат повторному исследованию в РПГА с использованием уже разведенной 1:5 или 1:10, прогретой, адсорбированной эритроцитами барана сыворотки. При наличии достаточного количества нативной сыворотки, ее вновь разводят 1:5 или 1:10, прогревают, сорбируют эритроцитами барана и исследуют в РПГА. За окончательный результат исследования принимают более высокий титр.

Не рекомендуется использовать РПГА для дифференциальной диагностики дифтерийной инфекции и носительства токсигенных коринебактерий дифтерии, поскольку нарастание титра антитоксических антител может иметь место как в том, так и в другом случае. Кроме того, 4-кратного нарастания титра реакции, которое некоторыми исследователями трактуется как критерий наличия дифтерийной инфекции, может не наблюдаться, поскольку РПГА является полуколичественным методом, с допустимой ошибкой метода +/- одно разведение. Однако РПГА позволяет оценить состояние антитоксического противодифтерийного иммунитета у больного и, в некоторой степени, прогнозировать течение и исход заболевания.

Читайте также: