Вакцина против чумы мелких жвачных животных производитель

ЧУМА МЕЛКИХ ЖВАЧНЫХ – это вирусная болезнь овец и коз, протекает остро и подостро, характеризуется некротическим стоматитом и катарально-геморрагическими поражениями кишечника и лимфоидной системы. Источником ЧМЖ являются как больные, так и инфицированные животные, находящиеся в инкубационном периоде болезни. После переболевания формируется стойкий иммунитет, обеспечивающий устойчивость их к повторному инфицированию.

Он чувствителен к большинству дезинфицирующих средств. Так, 2 %-ные растворы фенола и едкого натрия инактивируют вирус за 24 часа. При проведении противоэпизоотических мероприятий используют следующие дезинфектанты: горячий 2% раствор NaOH, 20% взвесь свежегашеной извести, осветленный раствор хлорной извести (содержание активного хлора – 4%) или гипохлорит натрия (2% активного хлора), из расчёта 1,5 л раствора на 1 м² площади, 2% раствор формальдегида. Вирус обезвреживается при 70° С в течение 60 минут, быстро инактивируется под действием ультрафиолетовых прямых солнечных лучей, плохо переносит замораживание и оттаивание. Однако, длительно сохраняет инфекционную активность в охлажденных и замороженных тканях при температурах минус 60°С и ниже.

Аэрогенный путь передачи возбудителя является основным, но возможны также алиментарный и контактный – через загрязненные корма и предметы ухода за животными, инфицированные экскретами и секретами больных животных.

Протекает остро и подостро. Инкубационный период — от 6 до 15 дней. При остром течении – повышение температуры тела до 41—41,5°С. Затем – угнетение общего состояния, отсутствие аппетита. Носовое зеркальце сухое, слизистые оболочки ротовой и носовой полостей воспалены. Появляются зоны гиперемии, затем очаги некроза, на месте которых образуются язвы. Истечение из носа и ротовой полости сначала слизисто-серозное, затем гнойное с гнилостным ихорозным запахом. Появляются признаки пневмонии. На 5 – 10-й день – гибель. Летальность у коз может достигать 95% у овец — 40%.
При подостром течении первые признаки появляются только на 5 – 10-е сутки в виде перемежающейся лихорадки, легкого угнетения и истечения из носовой и ротовой полостей. На 15—18-й день появляются признаки пневмонии (в результате осложнения вторичной микрофлорой) и поражения желудочно-кишечного тракта (диарея). При летальном исходе эти признаки прогрессируют, наступает обезвоживание организма, и животное погибает через 2—3 недели от начала болезни. При благоприятном исходе признаки постепенно затухают, происходит заживление язв и животные выздоравливают.

При типичном течении болезни диагноз ставят на основании клинических симптомов и патоморфологических изменений. Для лабораторных исследований берут пробы органов и тканей больных животных или сыворотки от переболевших.

Чуму мелких жвачных необходимо дифференцировать от ящура, катаральной лихорадки овец.

Специфическая терапия чумы мелких жвачных не разработана. Рекомендуется симптоматическое лечение. Имеются сообщения о положительных результатах применения новарсенолбензола.

В период 2001 – 2011 гг. чума охватывала 35 стран в Африке и 21 – в Азии. Турция, Иран, Индия, Непал, Оман, Йемен и др. В Таджикистане циркуляция вируса среди животных в некоторых стадах составляла около 80%. В 2003 г. в южной части территории Республики Казахстан произошла вспышка чумы мелких жвачных животных. В 2012 г. очаги вспышек болезни: в Алжире, Египте, Тунисе, Демократической республике Конго, в 2014 году Китае. С января по март 2016 года произошло несколько вспышек в Грузии, одна в Алжире.
Для Российской Федерации реальная опасность возникновения ЧМЖ представляет для Северо-Кавказского и Южного Федеральных округов, а также для зон отгонно-пастбищного животноводства Уральского, Сибирского и Дальневосточного федеральных округов.

В неблагополучных зонах по чуме мелких жвачных восприимчивым животным прививают живую культуральную вакцину против чумы крупного рогатого скота (штамм TCRV) или аттенуированный вирус чумы мелких жвачных . Препараты создают иммунитет продолжительностью более одного года. При появлении болезни в новых очагах уничтожают всех больных и подозреваемых в заражении животных. В угрожаемой зоне овцам и козам прививают одну из указанных вакцин и накладывают карантин. Он предусматривает ограничение вывоза животных (овец и коз) из неблагополучной зоны в течение 2 месяцев. Ввоз разрешается через 14 дней после прививки. Все продукты животноводства обеззараживают и используют на месте.

Чума мелких животных (pestis ovium et caprarum) – остро протекающая, высококонтагиозная болезнь овец и коз, характеризующаяся лихорадкой, геморрагическим диатезом, язвенно-некротическим стоматитом, катарально-геморрагическим энтеритом, расстройством функции желу­дочно-кишечного тракта.

Этиология.Возбудитель болезни – РНК-геномный вирус, относя­щийся к семейству Paramixoviridae, подсемейству Morbillivirus, имеет слегка оваль­ную форму, размеры от 150-700 нм до 200-400 нм. В ан­тигенном и иммуногенном отношении близок к возбудите­лям чумы крупного рогатого скота, чумы плотоядных и кори.

Эпизоотологические данные.В естественных условиях болезнь поражает коз и овец всех возрастов, но тяжелее протекает у 2-18-месячного молодняка. Козы более вос­приимчивы, чем овцы. У крупного рогатого скота вирус вы­зывает бессимптомное течение инфекции. Источником воз­будителя инфекции являются больные и находящиеся в инкубационном периоде животные, начиная с 3 дней после инфицирования. Некоторые исследователи считают, что ре­зервуаром чумы мелких жвачных в природе служат дикие африканские животные, которые поддерживают существо­вание вируса в межэпизоотический период, а также способ­ствуют его распространению в период эпизоотии.

Вирус передается аэрогенным и алиментарным путем, при прямом контакте овец и коз с больными животными, а также через инфицированные корм, воду, подстилку, ин­вентарь, одежду обслуживающего персонала. Инфекция чаще всего возникает после завоза животных из неблаго­получных по чуме хозяйств. Протекает в виде энзоотии, ча­ще проявляется в сезон дождей. Установлена периодичность эпизоотии в Сенегале, повторяющаяся через каждые 3-4 года. Летальность у коз может достигать 95%, у овец — 40%.

У овец нередко наблюдается осложнение болезни секундарной бактериальной инфекцией и паразитарной инвазией. У коз такие осложнения бывают при хроническом течении болезни. Чума мелкого рогатого скота обостряет латентные формы пироплазмоза, тейлериоза, анаплазмоза, трипаносо­моза, кокцидиоза.

Течение и симптомы.Инкубацион­ный период при чуме жвачных составляет 6-15 дн. Тече­ние болезни у коз — сверхострое иострое, у овец –острое и подострое.

При сверхострой форме у коз наблюдают повышение температуры тела до 40-42°С, угнетение, отсутствие аппе­тита, истечение из носа, слезотечение, чихание, диарею. Продолжительность болезни — 4-5 дн. У большинства больных смерть наступает внезапно.

При подостром течении у овец отмечают лихорадку пе-ремеживающегося типа, некроз и язвы вокруг ноздрей, ро­товой полости, при осложненных формах — пневмонию, диа­рею, истощение и обезвоживание организма, парезы и па­раличи конечностей. В тяжелых случаях больные животные погибают через 2-3 недели. Вирус вызывает разрушение эпителия дыха­тельных путей, желудочно-кишечного тракта и лимфоидных органов.

Диагноз.Диагноз ставят комплексно на основании клинических, патологоанатомических, эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований. Лабораторные исследования предусматривают выделе­ние вируса в культуре клеток почки эмбриона овцы, иден­тификацию его иммунофлюоресцентным и электронномикроскопическим методами. Предложены также РСК и РИД, которые, однако, не позволяют отличить чуму мелкого рогато­го скота от чумы крупного рогатого скота. В затруднительных случаях проводят гистологи­ческие исследования и постановку биопробы на 2-4-месячных козлятах. Характерным является обнаружение в эпителии слизистой оболочки ротовой полости, кишечника ив ретикулярных клетках лимфоидных органов эозинофильных цитоплазматических и внутриядерных телец-вклю­чений в гистологических препаратах.

Дифференциальный диагноз.Чуму мелких жвачных не­обходимо дифференцировать от ящура, катаральной лихо­радки овец и болезни Найроби.

Лечение.Специфическая терапия чумы мелких жвачных не разработана. Рекомендуется симптоматическое лечение. Имеются сообщения о положительных результатах приме­нения новарсенолбензола, позволяющего значительно со­кратить летальность среди больных животных.

Профилактика и меры борьбы.После переболевания чумой у животных на­блюдается пожизненный иммунитет. Молодняк от иммун­ных маток приобретает колостральный иммунитет сроком до 6 мес. Для активной иммунизации применяют культуральную вакцину против чумы крупного рогатого скота.

При первичном появле­нии чумы жвачных в ранее благополучных зонах проводят уничтожение всего восприимчивого поголовья. В стацио­нарно неблагополучных хозяйствах осуществляют профи­лактическую иммунизацию коз и овец вакциной против чу­мы крупного рогатого скота. В африканских странах вак­цину под коммерческим названием Tissupest изготавливают из штамма Кабете О, которая выпускается в ампулах в лиофилизированном виде. Вакцина пригодна для употреб­ления в течение 2 лет при хранении ее при температуре – 15°С, при температуре плюс 4°С пригодность ее ограничи­вается сроком в 1 мес. Вакцину применяют для профилак­тических и вынужденных прививок животных начиная с 2-месячного возраста. Препарат вводят подкожно в дозе 1 мл. Иммунитет формируется спустя 8 сут после прививки и сохраняется до 1 года.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к способам получения живых культуральных вирус-вакцин против чумы мелких жвачных животных, и может использоваться на предприятиях биологической промышленности.

Для изготовления вакцин используется вируссодержащее сырье, полученное при культивировании в статических, вращающихся культуральных сосудах или в суспензии в реакторе (1).

При изготовлении вирус-вакцины против чумы мелких жвачных животных используется вируссодержащее сырье, полученное в монослое клеток Vero (2) или первичной культуре клеток почки ягненка (3).

Наиболее близким аналогом предполагаемого изобретения является способ получения вирус-вакцины в стационарном монослое первичной культуры клеток почки ягненка (ПЯ), включающий: выращивание культуры клеток ПЯ в стационарном монослое, получение вирусного сырья в монослойной культуре клеток ПЯ, лиофилизацию вируса со стабилизатором (конечная концентрация по массе - %) 10 - пептона, 2 - лактозы (4).

Недостатком известного способа в современных условиях производства является использование технологии, предусматривающей получение вируссодержащего сырья в первичной культуре клеток почки ягнят. Получение клеточного субстрата связано с сезонностью, возможностью контаминации его эндогенными контаминантами и нерентабильным использованием молодых ягнят, что приводит к большим затратам на получение промышленных серий культуры клеток и повышает себестоимость препарата.

Целью изобретения является разработка способа получения вирус-вакцины против чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) сухой культуральной, обладающей высокой иммуногенной активностью и стабильностью при хранении.

Поставленная цель достигается тем, что при предлагаемом способе изготовления вирус-вакцины против ЧМЖЖ в качестве культуры клеток используют перевиваемую культуру клеток почки сайги (ПС), инфицированную вирусом культуру инкубируют в роллерных условиях в течение 5-7 суток со сменой поддерживающей среды через каждые 2-3 суток культивирования, вируссодержащее сырье перед лиофилизацией смешивают с защитной средой в соотношении 1:1, затем лиофилизируют до содержания массовой доли влаги не более 4% и расфасовывают в ампулы. По предлагаемому способу получают целевой продукт следующего состава, мас.%:

Классы МПК:	A61K39/275 Poxviridae, например вирус оспы птиц A61P31/12 противовирусные средства
Автор(ы):	Калантаенко Юрий Федорович (RU) , Балышев Владимир Михайлович (RU) , Курченко Федор Петрович (RU) , Жестерев Виктор Иванович (RU) , Луницин Андрей Владимирович (RU) , Горшкова Татьяна Федоровна (RU) , Михалкин Илья Петрович (RU)
Патентообладатель(и):	ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии (RU)
Приоритеты:

Вируссодержащее сырье	48,0-52,0
Пептон	9,8-10,2
Сахароза	4,9-5,1
Желатин	0,9-1,1
Деминерализованная вода	Остальное

Способ осуществляют следующим образом. Получают перевиваемые клетки почки сайги в роллерных сосудах вместимостью 3,0 дм 3 при посевной концентрации 100,0-120,0 тыс.клеток в см 3 , скорости вращения сосудов 10-12 об/ч, объеме их заполнения 0,5 дм 3 , температуре выращивания 37,0±0,5°С в течение 48-72 часов; инфицируют сформированный монослой посевным вирусом в дозе 0,001-0,01 ТЦД 50 /клетку, инкубируют инфицированную культуру клеток в указанных условиях в течение 6-7 суток со сменой поддерживающей среды через каждые 2-3 суток культивирования; замораживают пораженную на 75,0-80,0% культуру клеток при минус 40°С и оттаивают при комнатной температуре; смешивают полученное вируссодержащее сырье с защитной средой (конечная концентрация, % по массе) пептона - 10,0, сахарозы - 5,0, желатины - 1,0, деминерализованной воды - остальное в объемном соотношении 1:1 и проводят лиофильное высушивание до содержания массовой доли влаги не более 4,0%.

Другим отличием предлагаемого способа от прототипа является использование более производительной роллерной технологии культивирования вируса, что позволяет получить вирусного сырья за один цикл культивирования по сравнению со стационарным в 2,0-2,5 раза больше, чем при стационарном монослое.

В качестве защитной среды используется среда следующего состава с исходной концентрацией (% по массе): пептона - 20,0, сахарозы - 10,0, желатины - 2,0, деминерализованной воды - остальное.

При реализации предлагаемого способа получения вирус-вакцины против чумы мелких жвачных животных используют вируссодержащее сырье с биологической активностью не ниже 5,0 lg ТЦД 50 /см 3 и защитную среду в объемном соотношении 1:1, что обеспечивает следующее содержание защитных веществ (конечная концентрация - % по массе): пептона - 10,0; сахарозы - 5,0 и желатины - 1,0. Предлагаемая защитная среда обеспечивает минимальные потери титра вируса при лиофилизации (не более 0,5 lg) и стабильность физических и иммунобиологических свойств вирус-вакцины.

Пример 1. Адаптация вируса ЧМЖЖ к перевиваемой культуре клеток.

Пример 2. Получение вируссодержащего сырья.

Для получения вируссодержащего сырья используют культуру клеток ПС, выращенную на среде Игла MEM с 5,0% сыворотки крови КРС в роллерных сосудах.

Оптимальным режимом культивирования вируса на роллерной установке в бутылях вместимостью 3,0 дм 3 являются следующие параметры: множественность заражения 0,001-0,01 ТЦД 50 /клетку, содержание сыворотки 2,0% в поддерживающей среде, скорость вращения роллерных сосудов 10-12 об/мин, смена питательной среды через каждые 2 суток культивирования, продолжительность культивирования 7 суток. Содержимое роллерных сосудов замораживают при минус 40°С и оттаивают при комнатной температуре. Накопление вируса составляет 5,5-6,0 lg ТЦД 50 /см 3 . Вируссодержащее сырье до лиофилизации хранят при 4,0°С или минус 40°С в течение 3 или 6 месяцев соответственно.

Пример 3. Изготовление вирус-вакцины и контроль биологических показателей

К 50 л вируссодержащего сырья добавляют, при постоянном перемешивании, 50 л защитной среды, содержащей в конечной концентрации (% по массе) пептона - 10,0; сахарозы - 5,0, желатина 1,0 и деминерализованной воды - остальное. К полученной смеси добавляют комплекс антибиотиков и лиофилизируют до содержания массовой доли влаги не более 4%, затем расфасовывают по 1,0 см 3 в ампулы вместимостью 5,0 см 3 .

При титровании вирус-вакцины в монослойной культуре клеток ПС активность по сериям составила: серия №1 - 5,5 lg ТЦД 50 /см 3 и серия №2 - 4,75lgТЦД 50 /см 3 .

При введении препарата ягнятам и кроликам по 1,0 см 3 (по 3 головы на серию) все животные остались клинически здоровыми в течение 21 сут наблюдения.

Иммуногенную активность вирус-вакцины 1 и 2 серий проверяли по титру ВН-антител.

Оптимальной температурой хранения вирус-вакцины является температура 4,0°С и минус 40°С, при которых препарат сохраняет исходные свойства в течение 12 и 24 мес соответственно.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает получение по разработанной высокопроизводительной технологии безвредную, высокоиммуногенную, стабильную при хранении вирусвакцину против чумы мелких жвачных животных сухую культуральную. Он прост в исполнении, доступен и может быть реализован в промышленном масштабе.

1. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. 1993 г.

2. Manual of standards for diagnostic tests and vaccines: list A and В discases of mammals, birds and bees. Office international des Epizooties (OIE) world organization for Animal health. 2000. P.114-122.

3. Балышев В.М., Жестерев В.И., Луницин А.В. и др. Изучение иммунобиологических свойств вирус-вакцины против чумы мелких жвачных животных // Проблемы экотоксикологического, радиационного и эпизоотологического мониторинга. Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 45-летию ФГНУ ВНИВИ. Казань, 14-15 апреля 2005 г., стр.255-259.

4. Патент RU 2284193 С1 от 27.09.2006 г. Сухая культуральная вирус-вакцина против чумы мелких жвачных животных.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что получают целевой продукт следующего состава, мас.%:

Чума мелких жвачных (псевдочума крупного рогатого скота; Peste des Petits Ruminants —франц.) - вирусная болезнь овец и коз, протекает остро и подостро, характеризуется некротическим стоматитом и катарально-геморрагическими поражениями кишечника и лимфоидной системы.

Распространенность. Болезнь известна с 40-х годов (вероятно, с 1942 г.) и впервые была зарегистрирована среди овец и коз на территории Западной Африки. Возбудитель выделен в 1956 г. и вначале идентифицирован как штамм вируса чумы крупного рогатого скота. В естественных условиях он адаптировался к организму коз и овец и приобрел для них вирулентность, почти аналогичную для вируса чумы крупного рогатого скота. Позже эпизоотии чумы мелких жвачных наблюдали (1958—1960) в Нигерии (местечко Ката) с высокой летальностью среди овец и коз (до 20—40%). Затем эпизоотии болезни вновь были зарегистрированы в 1965 и 1968 гг. в Нигерии среди коз, но широко не распространились.
В настоящее время считают, что чума мелких жвачных — самостоятельная болезнь, протекает энзоотически, обычно в таких странах, как Нигерия, Сенегал, Берег Слоновой Кости.

Возбудитель — вирус, по морфологии, антигенному составу и иммунобиологическим свойствам близок к вирусу чумы крупного рогатого скота и по этим критериям отнесен к семейству парамиксовирусов, род морбиливирус.

Эпизоотологические данные. К вирусу восприимчивы овцы и козы. Возбудитель может передаваться респираторным или алиментарным путем при прямом контакте или через загрязненные корма и предметы ухода за животными, инфицированные экскретами и секретами больных животных, как правило, содержащими вирус в течение всего острого периода болезни.

Клинические признаки. Чума у овец и коз протекает остро и подостро. Инкубационный период — от 6 до 15 дней, в зависимости от дозы и вирулентности вируса.

При остром течении болезнь начинается повышением температуры тела до 41—41,5°С , беспокойством животных. Затем отмечают угнетение общего состояния, ухудшение или отсутствие аппетита. Носовое зеркальце становится сухим, шерсть тускнеет, слизистые оболочки воспалены. В зоне воспаления слизистых оболочек ротовой и носовой полостей вначале появляются зоны гиперемии, затем очаги некроза, на месте которых образуются язвы. Истечение из носа и ротовой полости сначала слизисто-серозное, затем гнойное с гнилостным ихорозным запахом.

Дыхание затруднено, появляются признаки пневмонии. На 5 - 10-й день болезни животные, как правило, погибают.

При подостром течении болезнь развивается медленнее и первые признаки появляются только на 5-10-е сутки в виде интермитирующей лихорадки, легкого угнетения и серозного истечения из носовой и ротовой полостей. На 15—18-й день лихорадка достигает апогея, появляются признаки пневмонии (в результате осложнения секундарной микрофлорой) и поражения желудочно-кишечного тракта (диарея). При летальном исходе эти признаки прогрессируют, наступает обезвоживание организма, и животное погибает через 2-3 недели от начала болезни. При благоприятном исходе признаки постепенно затухают, происходит заживление язв и животные выздоравливают.

Патологоанатомические изменения. В основном их регистрируют в желудочно-кишечном тракте. Слизистая оболочка ротовой полости воспалена и изъязвлена. Язвы с неровными краями с некрозом в центре и покрыты гнилостным налетом. Резкие изменения с изъязвлением слизистых оболочек наблюдают в двенадцатиперстной кишке и при входе в отдел толстых кишок в области пейеровых бляшек. В отдельных случаях отмечают бронхопневмонию, воспаление слизистых оболочек верхних дыхательных путей. В лимфатических узлах (портальных, заглоточных, интерстициальных и т. д.) поражения наблюдают в виде кровоизлияний и очаговых некрозов. При гистологическом исследовании в клетках эпителия ротовой полости, кишечника и лимфатических узлов обнаруживают внутриядерные и цитоплазматические включения (A. Rowland, P. Bourdin, 1970).

Диагностика. При типичном течении болезни диагноз ставят на основании клинических симптомов и патоморфологических изменений. Для лабораторных исследований берут пробы органов и тканей больных животных или сыворотки от переболевших. Содержание специфических антигенов или антител в исследуемых материалах устанавливают с помощью РСК, РДП и МФА. В сомнительных случаях ставят биопробу на козлятах 2—4-месячного возраста.

Профилактика и меры борьбы. В неблагополучных зонах по чуме мелких жвачных восприимчивым животным прививают живую культуральную вакцину против чумы крупного рогатого скота (штамм TCRV) или аттенуированный вирус чумы мелких жвачных (51 пассаж в культуре клеток эмбриона овец). Препараты создают иммунитет продолжительностью более одного года.

При появлении болезни в новых очагах уничтожают всех больных и подозреваемых в заражении животных. В угрожаемой зоне крупному рогатому скоту, овцам и козам прививают одну из указанных вакцин и накладывают карантин. Он предусматривает ограничение вывоза животных (овец и коз) из неблагополучной зоны в течение 2 месяцев.

Ввоз животных разрешается через 14 дней после прививки. Все продукты животноводства обеззараживают и используют на месте.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ ВЛАДЕЛЬЦАМ ЖИВОТНЫХ!

Для недопущения этого опасного заболевания необходимо:

– не допускать приобретения животных без ветеринарных сопроводительных документов, подтверждающих их здоровье;

– приобретать животных только из благополучных хозяйств.

– карантинировать в течение 30 дней ввезённых животных для проведения необходимых исследований и обработок;

– регистрировать животных в сельских администрациях и государственной ветеринарной службе для получения идентификационного номера;

– оборот, перемещение, сдачу на убой, выгон, размещение на пастбище, перегруппировки животных, реализацию животноводческой продукции производить только с ведома и под контролем госветслужбы;

– обо всех случаях подозрения по заболеванию или падежа животных своевременно информировать ветеринарную службу.

Владельцы патента RU 2284193:

Изобретение относится к области ветеринарии. Целью изобретения является сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных, обладающая высокой иммуногенностью, безвредностью, ареактогенностью для овец и коз и низкой себестоимостью. Вирусвакцина включает лиофилизированный вируссодержащий материал, полученный на основе штамма "45G37/35-K" и защитную среду в объемном соотношении 1:1. В качестве защитной среды вирусвакцина содержит среду следующего состава, мас.%: ферментативный пептон - 9,8-10,2; лактоза - 1,8-2,2; дистиллированная вода - остальное. Вакцина безвредна, высокоиммуногенна, стабильна при хранении. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к разработке вирусвакцины, предназначенной для специфической профилактики чумы мелких жвачных животных.

В неблагополучных по чуме мелких жвачных животных странах для специфической профилактики болезни применяют вирусвакцины, полученные на основе аттенуированных штаммов вирусов чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) и чумы крупного рогатого скота (ЧКРС), которые имеют между собой антигенное родство и генетическое сходство [4, 7, 8, 9, 10].

Имеются также сообщения о разработке инактивированных и рекомбинантных вакцин, которые, однако, не нашли широкого применения в ветеринарной практике [1, 2].

Гетерологичные вакцины, полученные на основе вакцинного вируса ЧКРС, защищают овец и коз от клинического проявления ЧМЖЖ, но не предотвращают размножение в организме вирулентного вируса. В связи с этим авторы не рекомендуют использовать такие препараты для вакцинации мелких жвачных животных [3, 6].

Для специфической профилактики болезни в неблагополучных зонах широко применяют вирусвакцины, которые получают на основе аттенуированного штамма "Nigeria 75/1" вируса ЧМЖЖ и его вариантов [2, 5, 10].

Неблагоприятная эпизоотическая ситуация по ЧМЖЖ в 1990-2003 гг.на территории ряда государств (Индия, Турция, Иран, Ирак, Израиль и др.), имеющих торгово-экономические связи с Россией, и отсутствие в стране вакцины против этой болезни указывали на необходимость разработки средств специфической профилактики против чумы мелких жвачных животных.

Наиболее близкой к предлагаемому изобретению (прототип) является вирусвакцина из штамма "75/1 LK6 ВК2 Vero70", создающая напряженный иммунитет у животных через 21 день после прививки длительностью более одного года [10]. Однако недостатком указанной вирусвакцины является то, что вакцинный вирус культивируют в перевиваемой культуре клеток VERO, которую выращивают на питательной среде Игла MEM с фетальной сывороткой теленка, имеющей высокую стоимость.

Целью изобретения является сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных, обладающая высокой иммуногенностью, безвредностью, ареактогенностью для овец и коз и низкой себестоимостью.

Поставленная цель достигается использованием при конструировании вирусвакцины нового вакцинного штамма "45G37/35-К" вируса ЧМЖЖ, выращенного в первичной культуре клеток почки или тестикул ягненка на питательной среде культивирования Игла MEM или ГЛА с сывороткой крови КРС.Ее используют вместо фетальной сыворотки теленка, которая не производится в России и странах СНГ, это значительно снижает себестоимость вакцины.

Вакцинный штамм селекционирован пассированием аттенуированого штамма "45g" в первичных культурах клеток почки и тестикул ягненка и перевиваемой - почки сайги. Штамм безвреден и ареактогенен для овец и коз, обладает высокой иммуногенностью и накапливается в этих культурах клеток в титре 5,0-6,0 lg ТЦД₅₀/см 3 . Указанный штамм депонирован 14.12.04 г. в качестве производственного в Государственной коллекции штаммов микроорганизмов ФГУ Всероссийского государственного центра качества и стандартизации лекарственных средств и кормов (ФГУ ВГНКИ), имеет регистрационый шифр "45G37/35-K".

Сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных, включающая вируссодержащий культуральный материал из аттенуированного штамма вируса чумы мелких жвачных животных и защитную среду, при этом в качестве вируссодержащего культурального материала вакцина содержит вируссодержащий культуральный материал аттенуированного штамма "45G37/35-К" с титром инфекционной активности 5,0-6,0 lg ТЦД₅₀/см 3 и защитную среду при содержании компонентов 1:1. В качестве защитной среды она содержит среду следующего состава, мас.%: ферментативный пептон 9,8-10,2; лактоза 1,8-2,2; дистиллированная вода - остальное.

Авторами разработаны требования к сухой культуральной вирусвакцине против чумы мелких жвачных животных, которые включают следующие характеристики: титр вакцинного вируса в сухом препарате составляет не менее 4,5 lg ТЦД₅₀/см 3 ; прививная доза вакцины - не менее 1000 ТЦД₅₀; длительность иммунитета - не менее 12 месяцев; срок хранения вакцины при температуре 4±4°С и -40±1°С и ниже - 12 и 24 месяцев соответственно; остаточная влажность 1-4%; в ампулах (флаконах) с вакциной должен быть вакуум.

В примерах конкретного исполнения приведены сведения по изготовлению 2-х опытных серий вирусвакцины и их физико-химические и иммунобиологические характеристики.

Пример 1. Изготовление вирусвакцины

Для приготовления двух серий вирусвакцины используют вируссодержащее сырье, полученное в стационарном монослое первичной культуры клеток почки ягненка на основе штамма "45G37/35-K". Культуру клеток выращивают в питательной среде Игла MEM с 10% сыворотки КРС. Через 72 часа матрасы с культурой клеток (по 10 матрасов на каждую серию вакцины) заражают вирусом в дозе 0,01 ТЦД₅₀/кл и культивируют в течение 7 суток до появления характерного цитопатогенного действия. Через 3-е суток культивирования проводят смену поддерживающей питательной среды. Активность полученного культурального вируса серии 1 составляет 5,7 lg ТЦД₅₀/см 3 серии 2-5,5 lg ТЦД₅₀/см 3 .

Каждую серию вируссодержащего культурального материала (1000 мл) объединяют с таким же количеством (1000 мл) защитной среды, содержащей (мас.%): ферментативного пептона - 10; лактозы - 2; дистиллированной воды - остальное.

Приготовленную технологическую жидкость тщательно перемешивают и расфасовывают в ампулы по 1 см 3 . Сушку вакцины проводят на сублимационном аппарате ТГ-50, предварительно заморозив смесь до -50°С. Время сушки вакцины серий 1 и 2 составляет 34 и 37 часов соответственно, ампулы с вакциной подвергают вакуумной обработке. Остаточная влажность в вакцине серии №1 и №2 составила 3,0 и 3,2% соответственно. Рост бактериальной и грибной микрофлоры в вакцине не выявлен.

Пример 2. Контроль биологических показателей вакцины.

Полученные серии вирусвакцины изучают по следующим показателям: биологическая активность, безвредность и иммуногенная активность.

Титрование вирусвакцины проводят в монослойной пробирочной культуре клеток почки сайги в 3-х повторностях по общепринятой методике. Активность вирусвакцины серии №1 составляла 5,25 ТЦД₅₀/см 3 , серии №2-5,0 lg ТЦД₅₀/см 3 .

Безвредность каждой серии вирусвакцины изучают на 2-х ягнятах трехмесячного возраста, которым вводят подкожно с внутренней поверхности бедра неразведенную вакцину в объеме 1,0 см 3 . Все животные оставались клинически здоровыми в течение 21 суток наблюдения.

Иммуногенную активность вакцины определяют на овцах и кроликах (по 3 головы на каждую серию) по уровню накопления ВН-антител через 14 суток после прививки и по результатам контрольного заражения овец. У привитых вирусвакциной в дозе 1000 ТЦД₅₀ овец не наблюдали повышения температуры тела и признаков болезни, т.е. штамм не был реактогенным. В указанные сроки титр ВН-антител в сыворотках крови животных составил 1:8-1:16.

Привитые овцы не заболели после заражения вирулентным вирусом в дозе 1000 ИД₅₀, тогда как контрольные животные (2 головы) заболели чумой мелких жвачных с проявлением характерных клинических признаков болезни на 5-10 сутки после инфицирования.

Пример 3. Изучение стабильности физико-химических свойств и биологической активности вакцины при хранении.

Сохраняемость сухой вирусвакцины серий №1 и №2 изучают в течение 12 и 24 месяцев хранения при температурах 4±4°С и -40±1°С соответственно. Через указанное время вакцина сохраняла исходную активность, которая для серий №1 и №2 составляла 5,25 lg ТЦД₅₀/см 3 и 5,0 lg ТЦД₅₀/см 3 соответственно.

Остаточная влажность оставалась на исходном уровне в вакцине серии №1 - 3,0%, серии №2 - 3,2%, в ампулах сохранялся вакуум.

Таким образом, по иммунобиологическим и физико-химическим показателям испытуемые серии вирусвакцины против чумы мелких жвачных животных соответствовали разработанным требованиям.

Сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных с положительным результатом прошла межведомственные комиссионные испытания (с участием ФГУ ВГНКИ) и признана безвредным, высокоиммуногенным и стабильным при хранении препаратом.

1. Abegunde A., Ada F.D. // Bull Anim. Hith. Prod. In Africa, 1977, Vol 25, 3.

2. Berhe G. et al. // Journal of Virology, 2003, Vol.77, 2.

3. Burdin P. // Rev. Elev. Med. Vet. Paes. Trop, 1973, Vol.26, 3.

4. Diallo. A. // Dev Biol (Basel), 2003,114:113-9.

5. Diallo A. et al. // Rev. Elev. Med. Vet. Pays. Trop, 1989, Vol.42.

6. Gibbs E. P. J. et al. Intervirology, 1979, 11.

7. M.H.V. van Regenmortel et al. // Academic Press, 2000, San Diego.

8. Sarkar J. et al. // Vaccine, 2003, Dec 1;21(32).

9. Wosu L.O.I I Studies Res. Vet. Med., 1994, Vol.2

10. Manual of standards for diagnostic tests and vaccines: list A and В discases of mammals, birds and bees. Office International des Epizooties (OIE) world organisation for Animal health. 2000. P. 114-122.

1. Сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных, включающая вируссодержащий культуральный материал из аттенуированного штамма вируса чумы мелких жвачных и защитную среду, отличающаяся тем, что в качестве вируссодержащего культурального материала вакцина содержит вируссодержащий культуральный материал аттенуированного штамма "45G37/35-K" с титром инфекционной активности 5,0-6,0 lg ТЦД₅₀/см 3 и защитную среду при содержании компонентов 1:1.

2. Сухая культуральная вирусвакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит защитную среду следующего состава, мас.%: