Миелограмма в норме - цитология исследования костного мозга

Добавил пользователь Morpheus
Обновлено: 06.11.2024

Подсчет абсолютного количества миелокариоцитов и мегакариоцитов с разведением костного мозга проводится не во всех лабораториях, поэтому часто исследование костного мозга ограничивается только исследованием мазков с подсчетом миелограммы. Миелограмма - процентное содержание различных миелокариоцитов.

Фиксированные и окрашенные препараты костного мозга исследуют сначала под малым увеличением. При этом оценивают:

клеточность костного мозга - соответствует норме или отличается от таковой (гиперклеточный, богатый, гипоклеточный, скудный костный мозг). В лабораториях, где не проводится подсчет миелокариоцитов в камере Горяева, иногда возникают трудности в оценке клеточности костного мозга. При этом удобно иметь под рукой окрашенные мазки периферической крови с уровнем лейкоцитов, соответствующим верхней и нижней границам нормы ядерных элементов костного мозга - для сравнения. Это может помочь дать ориентировочное заключение о клеточности костного мозга (например, около верхней или нижней границы нормы);
мономорфность или полиморфность костного мозга;
количество мегакариоцитов, если подсчет их в данной лаборатории проводится в мазке (см. подсчет мегакариоцитов);
наличие гнезд раковых клеток (метастазы) или выявление гигантских клеток (Гоше, Нимана-Пика и др.);
участки препарата, подходящие для подсчета миелограммы на большом увеличении (тонкая зона мазка с расположением эритроцитов отдельно друг от друга и достаточным количеством исследуемых клеток).

Затем препараты исследует с иммерсионным объективом. При этом проводят дифференцированный подсчет миелокариоцитов (морфологические характеристики ретикулярных клеток и морфологические характеристики клеток миелоцитарного ростка описаны в соответствующих статьях). Считают подряд все попадающиеся клетки в разных участках мазка (если мазков несколько - считают клетки в разных мазках) общим количеством не менее 500, а затем выводят процентное соотношение клеток.

В результат подсчета миелограммы должны входить следующие виды клеток:

недифференцированные бласты;
все клетки гранулоцитарного ростка (при этом считают отдельно все клетки нейтрофильного и эозинофильного рядов, а также суммарное количество клеток каждого ряда, базофилы обычно считаются общим числом);
все клетки моноцитарного ростка;
все клетки лимфоидного ростка;
все клетки эритроидного ростка и их сумма (мегалобласты, в случае их присутствия, считают отдельно от нормобластов); (все их считают одним числом).

Отдельно на бумаге подсчитывают количество митозов. Выражают их на 100 клеток в каждом ряду.

Костно-мозговые индексы.

Клеточный состав костного мозга подвержен значительным количественным и качественным колебаниям, поэтому для объективной оценки пунктата костного мозга помимо подсчета миелограммы необходимо определение соответствующих костно-мозговых индексов.

Лейко-эритробластическое отношение

Лейко-эритробластическое отношение (Л/Э) вычисляется как отношение суммы процентного содержания всех лейкоцитов (сюда относят и гранулоциты, и агранулоциты - моноциты, лимфоциты, плазматические клетки) к общему содержанию всех ядерных элементов эритроидного ряда - от пронормобласта до зрелых форм. У здоровых взрослых людей лейко-эритробластическое отношение равно 2,1 - 4,5.

Повышение лейко-эритробластического отношения при богатом костном мозге свидетельствует о гиперплазии клеток лейкопоэза (что характерно для лейкозов (ХМЛ, ХЛЛ), инфекций, интоксикаций и др. состояний), а при бедном костном мозге - о подавлении красного ростка (гипопластическая анемия).

Снижение лейко-эритробластического отношения при богатом костном мозге наблюдается при гемолитической анемии, начале железодефицитной анемии, постгеморрагической и мегалобластной анемиях, при бедном костном мозге - при агранулоцитозе.

Следует отметить, что при гипоплазии и аплазии костного мозга, когда снижено количество клеток и лейкопоэза, и эритропоэза, лейко-эритробластическое отношение может быть в пределах нормы.

Индекс созревания нейтрофилов

Индекс созревания нейтрофилов (ИСН) выражает отношение молодых нейтрофильных гранулоцитов к зрелым и вычисляется по формуле:

(промиелоциты + миелоциты + метамиелоциты) / (палочкоядерные нейтрофилы + сегментоядерные нейтрофилы).

В норме этот индекс равен 0,5 - 0,9.

Снижение индекса созревания нейтрофилов может быть обусловлено значительной примесью периферической крови.

Повышение индекса созревания нейтрофилов при богатом костном мозге может наблюдаться при ХМЛ, лекарственной интоксикации, при бедном костном мозге - встречается редко (при быстрой элиминации зрелых форм).

Индекс созревания эритрокариоцитов

Индекс созревания эритрокариоцитов (ИСЭ) - отношение количества гемоглобинсодержащих нормобластов (а в патологических случаях - мегалобластов) к количеству всех клеток эритроидного ростка:

(полихроматофильные + оксифильные нормобласты) / (эритробласты + пронормобласты + все нормобласты).

В норме ИСЭ равен 0,7 - 0,9.

Снижение индекса созревания эритрокариоцитов наблюдается при железодефицитной и свинцовой анемиях, талассемии, гемоглобинопатиях и др. состояниях (когда идет нарушение синтеза гемоглобина).

Результаты исследования костного мозга оформляются в виде бланка. В зависимости от требований, предъявляемых лаборатории клиницистами, от "местных" лабораторных условий форма бланка и последовательность его заполнения может значительно варьировать в разных лабораториях, но обычно бланк состоит из двух частей: цифровой и описательной. Результаты подсчета миелограммы составляют цифровую часть бланка. Здесь помимо результатов исследования должны быть приведены нормальные величины всех показателей.

Под цифровой частью бланка следует описательная часть с выводами. Прежде чем сделать окончательное заключение о состоянии костного мозга, необходимо соотнести полученные данные с нормой и с результатами исследования периферической крови. В ряде случаев необходимо решить, не разведен ли костный мозг кровью, так как по препарату, сильно разведенному периферической кровью, невозможно достоверно оценить костно-мозговое кроветворение. В таких случаях рекомендуется повторная пункция.

Признаки разведения костного мозга периферической кровью:

пунктат бедный;
пунктат представлен преимущественно зрелыми клетками периферической крови, соотношение нейтрофилов и лимфоцитов приближается к периферической крови;
в пунктате присутствуют единичные эритрокариоциты, а периферическая кровь анемию не показывает;
лейко-эритробластическое отношение повышено, индекс созревания нейтрофилов снижен;
единичные мегакариоциты в препарате или полное их отсутствие, а количество тромбоцитов в периферической крови в норме.

В описательной части обращают внимание на следующие моменты:

клеточность костно-мозгового пунктата
клеточный состав - мономорфный или полиморфный; если мономорфный, то какими клетками представлен в основном (бластными, лимфоидными, плазматическими и пр.) или отмечается тотальная метаплазия;
тип кроветворения (нормобластический, мегалобластический, смешанный), если имеются мегалобластические элементы, указать в процентах;
значение лейко-эритробластического индекса, в случае отклонения от нормы - пояснить, за счет каких элементов.

Затем необходимо охарактеризовать ростки кроветворения:

миелоидный росток:

размеры ростка (а пределах нормы, ряд хорошо выражен, сужен, редуцирован, представлен единичными клетками, гиперплазирован, раздражен и т. д.);
особенности созревания ( с нормальным созреванием, с задержкой созревания на молодых формах, с асинхронным созреванием ядра и цитоплазмы, с преобладанием зрелых форм нейтрофилов);
наличие дегенеративных изменений (токсическая зернистость нейтрофилов, вакуолизация, гиперсегментация, цитолиз, кариорексис и др.)
наличие конституциональных аномалий гранулоцитов;
количество митозов на 100 клеток;

эритроидный росток:

размеры ростка (в пределах нормы, ряд хорошо выражен, сужен, редуцирован, представлен единичными клетками, гиперплазирован, раздражен и т. д.);
особенности созревания (с нормальным созреванием, с незначительной задержкой созревания, с умеренной задержкой созревания, с резкой задержкой созревания, с асинхронным созреванием ядра и цитоплазмы, с преобладанием оксифильных нормобластов);
наличие патологических форм эритрокариоцитов (мегалобластов)
наличие патологических форм эритроцитов (анизоцитоз, анизохромия, пойкилоцитоз, патологические включения в эритроцитах);
количество митозов на 100 клеток;

мегакариоцитарный росток:

особенности созревания (с нормальным созреванием, с задержкой созревания (увеличение или преобладание базофильных форм), с асинхронным созреванием ядра и цитоплазмы, с преобладанием оксифильных форм);
наличие дегенеративных изменений;
наличие или отсутствие зернистости в цитоплазме;
степень отшнуровки тромбоцитов (умеренная, отсутствует, сниженная, повышенная, чрезмерная);
количество и характер свободно лежащих тромбоцитов (отсутствуют, единичные, небольшое количество, умеренное количество, значительное количество, расположены отдельными пластинками, группами или скоплениями);
особенности морфологии тромбоцитов (увеличение количества юных, старых или дегенеративных форм, форм раздражения, наличие гигантских, агранулярных тромбоцитов, анизоцитоз тромбоцитов).

Если количество бластов в пунктате превышает норму, необходимо описать их - форма и размер клеток, характер цитоплазмы (количество, цвет, наличие зернистости или палочек Ауэра, вакуолей), ядро (размеры, форма, окраска, структура хроматина), ядрышки (наличие, количество, размер, форма, окраска). При проведении цитохимических исследований бластов, в бланке приводятся их результаты.

При повышении содержания плазматических клеток в мазках следует указать

расположение (равномерно по препарату, группами или отдельными скоплениями),
размеры клеток (преимущественно крупные, средние или мелкие, полиморфные);
контуры цитоплазмы (фестончатые, ровные);
окраску цитоплазмы (слабая, умеренная, резко базофильная);
наличие включений или зернистости в цитоплазме (скудная, умеренная, обильная);
расположение ядра (центральное, эксцентричное);
структуру хроматина (мелкогранулированная или крупногранулированная, глыбчатая и т. п.);
наличие многоядерных и пламенеющих клеток.

Описать нехарактерные для костного мозга клетки (в случае их присутствия):

клетки Березовского-Штернберга;
клетки Ланганса;
клетки Гоше;
клетки Нимана-Пика;
клетки Ходжкина;
клетки неидентифицируемого вида (клетки метастазов злокачественных опухолей).

При обнаружении в костно-мозговом пунктате неидентифицируемого вида клеток необходимо описать их по следующим признакам:

размер и форма клеток, тип генерации - микро-, мезо-, макрогенерации, смешанные типы и др.;
ядерно-цитоплазматическое соотношение (высокое, среднее, низкое или сдвиг его в пользу ядра или цитоплазмы);
цитоплазма - объем (обильная, умеренная, скудная, почти не определяется - "голоядерная клетка"), четкость границ (четкие, нечеткие, имеются разрывы, прослеживается не на всем протяжении), контуры (ровные, фестончатые и т. п.), цвет (голубой, серо-голубой, розовый, розово-фиолетовый, базофильный), как окрашена (равномерно, неравномерно, стекловидная, наличие перинуклеарного просветления), наличие зернистости (обильная, скудная, покрывающая ядро, крупная, пылевидная, однокалиберная и т. п.), включений, вакуолей;
ядро - количество (одно- или многоядерные клетки), расположение (в центре, эксцентрично, занимает почти всю клетку), размер (мелкие, средние, крупные, гигантские), форма (округлая, овальная, полигональная, вытянутая, бобовидная, булавовидная, расщепленная, в виде перекрученного жгута и др.), окрашиваемость (гипохромия, гиперхромия, анизохромия, равномерно окрашенное), наличие фигур деления;
структура хроматина - тонкодисперсная, гомогенная, нежнопетлистая, мелко- или крупнозернистая, глыбчатая, конденсация хроматина по краю ядерной мембраны и т. д.;
ядрышки - наличие (есть, нет), количество, форма (округлая, неправильная), размеры, цвет, четкость границ, выраженность перинуклеарного валика.

В конце описательной части, если позволяют данные, ставится предполагаемый лабораторный диагноз. Мазки костного мозга маркируют и хранят в архиве.

Миелограмма в норме - цитология исследования костного мозга

На основании общеклинического анализа крови сложно дать оценку состояния гемопоэза. Более полное представление дает изучение костного мозга (цитологическое, цитохимическое и др.).

Цитологический анализ костного мозга играет большую роль в диагностике заболеваний кроветворной системы. Подсчет миелограммы дает представление о характере эритропоэза (нормобластический или мегалобластический), позволяет обнаружить клетки, характерные для различных заболеваний системы крови (множественной миеломы, острых лейкозов, хронического миелолейкоза, хронического лимфолейкоза, лейкемизированных неходжкинских лимфом, болезни Гоше, Ниманна-Пика, метастазов рака в костном мозге и др.).

Данные миелограммы необходимы для проведения дифференциального диагноза с лейкемоидными реакциями. Сопоставление данных костномозгового кроветворения с картиной периферической крови и клинической симптоматикой позволяет уточнить причину анемии.

Имеются абсолютные и относительные показания к стернальной пункции.
Абсолютные показания: все анемии (кроме типичной железодефицитной), различные цитопении (одноростковая, двуростковая, панцитопения), острые лейкозы, хронические лейкозы в начальной стадии (для подтверждения диагноза и исключения лейкемоидных реакций), выраженное изолированное увеличение СОЭ (для исключения множественной миеломы и макроглобулинемии Вальденстрема), подозрение на метастазы злокачественной опухоли в костном мозге.
Относительные показания: железодефицитные анемии, хронические лейкозы в развернутой стадии.

Аспирационная биопсия костного мозга является технически простым, безопасным и легкодоступным методом. Наиболее часто используется стернальная пункция, предложенная в 1927 г. М. И. Аринкиным и впервые выполненная на кафедре факультетской терапии Военно-медицинской академии. При необходимости можно пунктировать гребень или бугристость подвздошной кости, у детей — пяточную кость. Пункция грудины выполняется иглой И. А. Кассирского с предохранительным щитком. После взятия аспирата костного мозга производят подсчет количества миелокариоцитов, мегакариоцитов, ретикулоцитов, готовят мазки для подсчета миелограммы.

Миелокариоциты миелограммы. У здоровых людей количество миелокариоцитов (всех ядросодержащих клеток костного мозга) в камере Горяева составляет 50-250•10 9 /л.

Мегакариоциты миелограммы. Нормальное количество мегакариоцитов в камере Фукса-Розенталя составляет 0,05-0,1•10 6 /л. Необходимо также определять количество мегакариоцитов в окрашенных мазках в 250 полях зрения под малым увеличением и при подсчете миелограммы в процентах.

Следует помнить, что снижение уровня миелокариоцитов и мегакариоцитов в миелограмме отмечается также при разведении аспирата периферической кровью (технические погрешности при выполнении стернальной пункции).

Ретикулоциты миелограммы. Нормальное количество ретикулоцитов в костном мозге составляет 20-30%о. Увеличение их числа наблюдается при гемолитических и постгеморрагических анемиях.

Морфологический анализ клеток костного мозга (подсчет миелограммы) производят на 500 клеток костного мозга, после чего вычисляют процентное содержание каждого вида клеток.

При анализе миелограммы необходимо оценить клеточность костного мозга (нормо-, гипо- или гиперклеточный), дать качественную характеристику всех клеточных рядов с определением индексов созревания, лейкоэритробластического соотношения, характера эритропоэза (нормобластический, мегалобластический или с мегалобластоидными чертами) и количества митозов. Отдельно следует оценить мегакариоцитопоэз (количество и функция мегакариоцитов).

Костномозговой индекс созревания нейтрофилов определяется по формуле: (промиелоциты + миелоциты + метамиелоциты)/ (палочкоядерные + сегментоядерные нейтрофилы)
В норме костномозговой индекс созревания нейтрофилов равен 0,6-0,8.

Уменьшение индекса свидетельствует о задержке гемоглобинизации и/или преобладании молодых базофильных нормоцитов, дает возможность ориентировочно оценить запасы и обмен железа в организме.

Лейкоэритробластическое соотношение определяется по формуле: (гранулоциты): (ядросодержащие клетки эритроидного ряда) и в норме составляет 3-4:1.

Количество митозов в норме составляет 3,5 на 1000 для клеток гранулоцитарного ряда и 5 на 1000 — для клеток эритроидного ряда.

Заключение по миелограмме не должно быть категоричным, поскольку для постановки диагноза необходимо учитывать клинические данные и показатели периферической крови.

Для более полной характеристики гемопоэза, особенно мегакариоцитопоэза, в ряде случаев требуется гистологическое исследование костного мозга методом трепанобиопсии.

Определение сидеробластов и сидероцитов в миелограмме

При железодефицитных и сидеробластных анемиях важно определять количество сидероцитов и сидеробластов — эритроцитов и эритробластов, содержащих в цитоплазме железо в виде гемосидерина и ферритина (зернышки синего цвета при окраске по Перлсу диаметром 0,2-1,5 мкм). У здоровых людей в периферической крови содержится 1,1-3,0% (в среднем 1,6%) сидероцитов. Содержание сидеробластов в костном мозге составляет 15-40% от всех клеток эритроидного ряда; количество гранул в них обычно 1-2 (не более 4).

Клиническое значение. При хронических железодефицитных анемиях отмечается снижение количества сидероцитов и сидеробластов в костном мозге, гранулы железа в них практически выявить не удается.

Увеличение количества сидеробластов с большим количеством гранул железа в каждом из них, появление кольцевых форм сидеробластов наблюдается при наследственных и приобретенных сидеробластных анемиях (интоксикация свинцом, один из вариантов миелодиспластического синдрома — рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами).

Наряду с исследованием крови и костного мозга для диагностики специфических поражений и осложнений проводимой терапии в ряде случаев необходим анализ биологических жидкостей (мочи, кала, мокроты, экссудатов, ликвора).

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Гистологические исследования в гематологии. Показания к трепанобиопсии

Из гистологических методов исследования в гематологии наиболее часто используются трепанобиопсия костного мозга и биопсия лимфатических узлов.

Основные показания к трепанобиопсии:
1) диагностика хронических миелопролиферативных заболеваний (истинная полицитемия, сублейкемический миелоз, эссенциальная тромбоцитемия), кроме хронического миелолейкоза;
2) диагностика апластической анемии;
3) определение стадии лимфогранулематоза и неходжкинских лимфом (поражение костного мозга — признак IV стадии);
4) спленомегалия неясного генеза (для исключения хронических миелопролиферативных заболеваний).

По показаниям трепанобиопсия может использоваться и в других случаях (определение полноты ремиссии острого лейкоза, диагностика множественной миеломы, выявление характера поражения костного мозга при хроническом лимфолейкозе и др.).

Трепанобиопсия проводится с помощью игл (трепанов) Jamshidi. Биопсию проводят в области задневерхнего бугра правой и/или левой подвздошных костей. Размеры биоптата должны позволить получить гистологические срезы площадью не менее 40 мм2 (2x20 или 3x15 мм). Для гистологического заключения необходим просмотр не менее 5 неповрежденных костномозговых ячеек.

Если большую часть препарата занимает надкостница, кортикальная пластинка губчатой кости и субкортикальные костномозговые ячейки, трепанобиопсию необходимо повторить.

Лучшие результаты обеспечивает фиксация столбика ткани в фиксаторах, содержащих сулему (ценкерформол, В5). Для декальцинации костной ткани применяют насыщенный раствор хелатирующего соединения или кислоты. Возможно использование заливки недекальцинированных трепанобиоптатов в полимеризующиеся смолы.

Обязательна окраска срезов гематоксилин-эозином, азур II-эозином, по Перлсу; для дифференциальной диагностики хронических миелопролиферативных заболеваний необходимо выявление ретикулиновых волокон с помощью импрегнации срезов серебром (по Футу, Гордону-Свиту и др.).

Результаты гистологического исследования костного мозга (трепанобиоптата) должны характеризовать:
1) клеточность;
2) соотношение миелоидного и эритроидного ростков;
3) созревание клеток миелоидного ряда;
4) созревание клеток эритроидного ряда;
5) состояние эозинофильных гранулоцитов и наличие тучных клеток;
6) состояние мегакариоцитарного ростка;
7) присутствие других клеток (лимфоцитов, плазмоцитов, гистиоцитов);
8) стромальные реакции (гранулемы, фиброз, некроз, серозная атрофия жира, отек);
9) наличие и количество гемосидерина;
10) сосудистые нарушения (амилоидоз и др.);
11) изменения костной ткани (остеопороз, болезнь Педжета и др.);
12) наличие метастазов.

Биопсия. Для биопсии пригодны практически все органы и ткани. Проведение операционной биопсии лимфатического узла показано при любой лимфоаденопатии (кроме типичных случаев реактивного лимфаденита). В ряде случаев необходимо проведение пункции внутренних органов (обычно печени, значительно реже — селезенки), которая чаще всего проводится в условиях хирургического стационара.

При диффузном процессе возможна неприцельная биопсия, при очаговом поражении целесообразно ее проведение под контролем УЗИ или компьютерной томографии. В некоторых случаях (изолированное увеличение висцеральных лимфатических узлов, очаговое поражение ребер, позвоночника и др.) получение материала, необходимого для морфологического исследования, возможно только при хирургическом вмешательстве.

Наиболее часто применяется биопсия лимфатических узлов с последующим цитологическим и гистологическим исследованием. Аспирационная биопсия позволяет получить материал, необходимый для диагностики инфекционных поражений лимфатических узлов (методами классической бактериологии) и обнаружения метастазов солидных опухолей.

Для диагностики лимфопролиферативных заболеваний необходима операционная биопсия лимфатического узла с последующим гистологическим и иммуногистохимическим исследованием. Частичное иссечение лимфатического узла (инцизионная биопсия) используется в ситуациях, когда у пациента имеется конгломерат лимфатических узлов. Во всех остальных случаях иссекают лимфатический узел целиком (эксцизионная биопсия).

Биопсию лимфатических узлов головы и шеи при отсутствии противопоказаний проводят под общей анестезией. При генерализованной лимфоаденопатии используют биопсию шейных, надключичных, подмышечных лимфатических узлов. Биопсия паховых лимфатических узлов нежелательна (они нередко несут следы массивной антигенной стимуляции, что затрудняет интерпретацию гистологических изменений).

Для иссечения выбирают наиболее измененный, крупный, глубоко лежащий лимфоузел. Во время операции стараются браншами пинцета захватывать лимфатический узел только за капсулу.

До погружения лимфоузла в фиксирующую жидкость его необходимо острым лезвием рассечь на две части через ворота по малому диаметру. Со свежей поверхности среза каждой части делают мазки-отпечатки для цитологического исследования. Для проводки и заливки кусочки вырезают после того, как рассеченный лимфатический узел профиксируется в течение нескольких часов. Плохая фиксация сильно влияет на размеры ядер клеток и строение гетерохроматина (ядра клеток имеют большие размеры).
Обязательна окраска срезов гематоксилин-эозином, азур II-эозином и применение иммуногистохимических реакций.

Исследование костного мозга - миелограмма

Первым вопросом, на который должно ответить исследование костного мозга является количественный аспект клеток. Хорошо известно, что в отношении периферической крови можно определить ряд цифровых значений количества и процента разных видов клеток, поскольку они находятся в свободном состоянии и относительно однородно распространены во взвеси сосудистой крови. Совершенно иное можно сказать о костном мозге: состав кроветворной ткани весьма разнородный и распределение костномозговых клеток неодинаково. Так, прямое счисление миелокариоцитов в камере колеблется в очень широких пределах, как при нормальном состоянии, так и в рамках той же болезни. Выявленные нами значения у лиц в норме колебались от 27 000 до 112 000 ядерных элементов на мм3 (Урся). Литературные данные колеблятся в еще более широких пределах, их лимиты составляют 12 000 и 300 000 на мм3 (Cartwright, Page).

После центрифугирования в трубке гематокрита обнаруживаются следующие 4 слоя:
1) верхний жирный желтый слой;
2) плазма;
3) серо-белесый слой, образованный из ядерных клеток;
4) красный слой, составленный из эритроцитов.

Измерение серо-белесового слоя из ядерных клеток (миелокрит) представляет ограниченное значение или даже вводит в заблуждение, поскольку выявленные значения у лиц в норме также дают значительные колебания.

К тому же ядерные клетки обнаруживаются не только в этом слое, но также в жировом и эритроцитном слоях.

Но из серобелесового слоя можно приготовить мазки костномозгового концентрата после устранения надосадочной плазмы. Они доказали свою пользу в процессе диагностирования в тех случаях, когда прямые мазки бедны клетками.

Учитывая, что счисление в камере миелокариоцитов и определение миелокрита дают лишь приблизительные результаты с ограниченным воспроизведением, эти методы количественного определения не удовлетворительны. Извлекаемый при отсасывающей пункции материал составляет образец костного мозга, смешанного с кровью в различной пропорции. Степень разбавления костного мозга кровью зависит от ряда факторов. Мечение 32Р доказало, что разбавление отсасываемого костного мозга кровью колеблется от 40% до 100%.

Впрочем следует отметить, что исследование костного мозга в целях постановки диагноза основывается, в первую очередь, на качественное исследование клеточного содержимого, а лишь второстепенно на количественные значения этого содержимого. Вот почему количественные методы определения костномозговых клеток состоят из полуколичеставенной оценки клеточного состава костного мозга, по сравнению с нормальными пробами, на: а) мазках с размозженными комочками; б) гистологических срезах.

Исследование мазка проводится, в основном, сухим объективом, на нескольких мазках, при этом намечаются следующие цели:
а) полуколичественная оценка костномозговой клеточной массы;
б) определение наличия и плотности мегакариоцитов;
в) выявление гигантских клеток или гнезд ненормальных клеток;
г) отождествление наиболее подходящих участков для проведения исследования путем погружения.

На мазках, полученных путем размозжения частиц костного мозга различаются следующие три концентрические зоны: а) центральная; б) внешняя; в) промежуточная.

Центральную зону образуют жировые вакуоли, клетки стромы, гранулоциты и многочисленные разрушенные клетки. Внешняя зона содержит большое количество крови, которая разжижает костномозговые клетки. Подобно тонким мазкам она способствует лишь исследованию морфологических подробностей миелоидных клеток и эритроцитов. В промежуточной зоне находится наиболее плотная клеточная масса, что допускает оптимальное исследование, которое может выяснить все намечаемые вопросы. Здесь костномозговые клетки хорошо сохранены и расположены островками или гнездами, именно так, как наблюдается в костном мозге. Сохраняя костномозговую топографию получаемые результаты исследования этой зоны однороднее и соответствуют фактическому состоянию костного мозга, что подтверждается сопоставлением с его гистологическими изображениями.

Полуколичественное определение клеточной плотности выражается в виде:
а) нормального,
б) богатого или
в) скудного по сравнению с нормой костного мозга.

Выявление нормальной или обильной клеточной массы представляет ценный результат, в то время как скудный костный мозг следует рассматривать с предосторожностью. Чтобы доказать наличие фактической гипоплазии следует рассмотреть несколько пластинок, сделать пункцию в нескольких костных территориях и/или биопсию костей. Наиболее точные сведения о костномозговой клеточной массе получаются исследованием гистологических срезов. У взрослого человека в норме отношение пространства, занимаемого жиром и активной клеточной паренхимой составляет 1 : 1 или 2:1. Некоторыми авторами костный мозг рассматривается гипоклеточным когда кроветворные клетки занимают менее четверти костномозговых комочков.

Качественное исследование костного мозга существенно для постановки диагноза. Оно проводится, с помощью погружения, как на тонких мазках, так и, в частности, на мазках с размозженными комочками из промежуточной зоны. Рекомендуется отбор наилучших правильно растянутых и окрашенных мазков с четко выделяющимися и морфологически хорошо законсервированными клетками. Это исследование намечает:
а) выявление различных видов миелоидных клеток;
б) определение степени созревания каждого клеточного ряда;
в) уточнение отношения между гранулоцитами и эритробластами(Г/Э);:
г) отождествление клеток на фазе митоза;
д) описание встречающихся атипических клеток.

После исследования нескольких мазков составляется либо подробная описательная «миелограмма» (содержащая сделанные, после расшифровки мазков, заключения), либо миелограмма в процентном отношении, установленная по не менее 300—500 элементам. Существуют два способа составления процентной миелограммы:
1) отнесение остальных клеточных рядов к 100 гранулоцитам;
2) процентное отображение каждого вида клеток из всего количества костномозговых клеток. Со статистической точки зрения последний способ представляется более правильным и видимо отражает реальную картину клеточного состава костного мозга. Установленные отдельными авторами формулы значительно разнятся, поскольку трудно определить реальныесредние величины в столь разнородном ткани, как костный мозг.

В таблице приведены, по Wintrobe, результаты исследованияотобранных костномозговых проб от 12 лиц в норме.

По нашим исследованиям на здоровых людях результаты следующие: ряд гранулоцитов 56—70%, эритробластический ряд 23—30%, лимфоплазмоцитный ряд 5—10%, моноцитомакрофаговый ряд 1—2% и мегакариоцитный ряд 0,1—0,8% (Урся). Изменение пропорции нормальных миелоидных рядов или их замена аномальными клетками нередко подсказывает вид болезни. Ретикулярные клетки появляются реже и притом в небольшом количестве. Совершенно случайно на мазках (или на отпечатках костного мозга) попадаются остеобласты и/или остеокласты, которые не следует принимать за неопластические клетки. Их наличие чаще отмечается у детей, реже у взрослых при первичном миелофиброзе или вторично, после карциноматозного метастаза, при острой лейкемии, остеопорозе и пр.

Отношение Г/Э получается делением гранулоцитов на число эритробластов. У взрослого в норме это отношение составляет в среднем 3/1 или 4/1, при этом пределы оцениваются в 2/1 (когда включены лишь незрелые гранулоциты) и 5/1 (когда касается всех гранулоцитов — зрелых и незрелых).

Отношение Г/Э колеблется с возрастом: при рождении невелик (1,8/1), в 2-недельном возрасте повышается до 11/1, затем постепенно понижается, а у годовалых детей достигает значений взрослого человека.

Отношение Г/Э нормальное в случаях глобальной костномозговой гипо- или гиперплазии, равно как и при пролиферации отдельных клеток, не входящих в расчет этого отношения, например при плазмоцитоме. При лейкемиях, лейкомеподобных реакциях и эритробластопениях отношение высокое, в то время как при анемиях с эритробластической гиперплазией оно низкое или обратное (мегалобластическая, гемолитическая анемии).

До выдачи данных миелограммы, полученных после исследования мазков, необходимо уточнить:
а) место пункции;
б) плотность кости;
в) условия, в которых протекало отсасывание;
г) макроскопический аспект отобранного материала.

Исследование костного мозга комплексный процесс, основывающийся на интеграцию многочисленных и разнообразных данных. Его результат должен отражать выводы общего характера, основывающиеся больше на умозаключение, чем на механическую регистрацию отдельных цифр, которые, к тому же, колеблятся. Заключение любой миелограммы должно уточнить либо диагноз, либо указания для дополнительных исследований, вытекающих из исследования костного мозга.

При заболеваниях крови отсасывающая пункция способствует уточнению диагноза с помощью мазков и срезов с комочками в 80% случаях. В остальных случаях показана костная биопсия и гистологическое исследование костного мозга.

Биоптический отбор и гистологическое исследование представляются необходимыми при:
а) первичном или вторичном миелофиброзе;
б) костномозговой аплазии или гипоплазии;
в) заболеваниях, протекающих с поражениями грануломатозного типа (напр., болезнь Годжкина, саркоидоз, туберкулез и пр.);
г) карциноматозном метастазе;
д) во всех случаях, когда отобранный с помощью пункции материал оказывается неудовлетворительным или аспект костного мозга не убедительный.

После биоптического отбора пробы приготовляются отиски для проведения цитологического исследования, поскольку гистологические срезы предоставляют мало сведений о структурных подробностях кроветворных клеток, находящихся в скученном, не рассеянном и неэталированном виде. К тому же закрепление вызывает ретракцию клеток и гистологическая окраска менее селективна, чем цитологическая.

Вот почему полное исследование костного мозга предполагает, как цитологическое — на мазках или оттисках, так и гистологическое — на срезах исследования. Необходимо помнить, что цитологические и гистологические методы исследования костного мозга не исключаются а, наоборот, взаимодополняются: биопсия — количественный и архитектурный метод, в то время как миелограмма — качественный и цитологический.

Миелограмма костного мозга

Костный мозг (КМ) — это важнейшая кроветворная (миелоидная) ткань человеческого организма. В ней размножаются и созревают стволовые клетки — клетки-предшественницы всех кровяных клеток: эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Они являются основным компонентом костного мозга. Костный мозг есть внутри всех костей человеческого организма. Кости имеют пористую структуру, густо пронизаную проницаемыми сосудами, в которые легко попадают молодые кровяные клетки.

Различают два типа КМ: красный и желтый. Масса КМ составляет около 4,6% от общего веса человека. При этом вес красного и желтого его типов в костях приблизительно одинаков. Красный костный мозг дислоцируется в костях таза, плоских костях, концах трубчатых костей и позвонках. Именно в нем происходят процессы кроветворения.

Желтый тип локализуется в полостях трубчатых костей и представляет собой жировую ткань, которая служит резервом для красного типа КМ. В условиях острой нехватки молодых клеток крови желтый мозг трансформируется в красный и в нем начинается гемопоэз.

Миелограммой называется результат прижизненного качественного и количественного исследования тканевого и клеточного состава костного мозга. Термин происходит от слов греческого происхождения и буквально переводится как «запись костного мозга». Расшифровка результатов исследования мазка или пунктата КМ оформляется в виде таблицы, в которой представлено процентное соотношение разных клеток.

В отличие от крови, порцию которой можно легко взять для проведения анализа из периферических сосудов, КМ недоступен для простого отбора образцов. Чтобы выполнить его исследование, необходимо провести пункцию или биопсию кости. Эта манипуляция для гематолога не является сложной, но требует специальных инструментов и соответствующей квалификации врача, поэтому ее не проводят в обычных клинических лабораториях.

Взятие биоматериала

Для проведения миелограммы необходим красный КМ. Получить его образец можно путем пункции грудины (стернальная пункция), биопсии подвздошной (трепанобиопсия), пяточной, бедренной или большеберцовой костей.

Первые две процедуры для взятия образца биоматериала в гематологии используются чаще всего. Трепанобиопсия позволяет получить большой объем биоматериала для исследования. Взятие образцов КМ из пяточной и других костей ног применяют у новорожденных и маленьких детей.

Показания и противопоказания

Целью исследования КМ является выявление нарушений гемопоэза. Исследование миелограммы показано при:

анемиях (кроме железодефицитной) и цитопениях;
беспричинном увеличении СОЭ в общем анализе крови;
острых и хронических лейкозах;
эритремии;
миеломе;
лимфогранулематозе и неходжкинских лимфомах;
метастазировании злокачественных опухолей в кости;
наследственных заболеваниях (болезнях Ниммана-Пика, Гоше, Урбаха-Вите);
спленомегалии неясного происхождения.

Пункцию костного мозга проводят для установления стадии и фазы лейкозов, их дифференциальной диагностики с лейкемоидными реакциями. Исследование миелограммы показано для определения гистосовместимости костного мозга донора и реципиента.

Стернальная пункция или трепанобиопсия противопоказаны больным с острым инфарктом миокарда, инсультом, в момент приступа стенокардии, удушья, при гипертоническом кризе.

Подготовка к процедуре

Процедура взятия КМ является обычной для гематологии. Какой-либо специальной подготовки пациента к стернальной пункции или трепанобиопсии не требуется.

Подготовка к манипуляции мало отличается от подготовки к другим малоинвазивным процедурам:

больной перед манипуляцией должен быть обследован (общий анализ крови, коагулограмма);
за несколько дней отменяют антикоагулянты и антиагреганты, а также все другие лекарства, кроме жизненно необходимых;
за несколько часов пациенту нельзя кушать и пить (если процедура назначена на вторую половину дня, пациенту с утра необходим легкий завтрак);
за 2 часа до манипуляции нужно опорожнить кишечник, а непосредственно перед ней — мочевой пузырь;
если в месте будущего прокола кожи имеются волосы, их сбривают.

О наличии у обследуемого какой-либо аллергии необходимо уведомить врача, особенно если это аллергическая реакция на местные анестетики.

В день забора биоматериала больному нельзя назначать другие процедуры и оперативные вмешательства. При сильном чувстве страха больному следует принять седативные препараты за полчаса до процедуры, о чем нужно сообщить врачу. Стернальная пункция и трепанобиопсия не являются приятными манипуляциями, но и к болезненным их отнести сложно.

Место прокола кожи и надкостницы обрабатывается местным анестетиком, поэтому боль в этом месте не ощущается.

Непосредственно перед процедурой у пациента берут информированное согласие на манипуляцию: ему объясняют ход ее проведения, а также возможные осложнения после нее. Если пункция предстоит несовершеннолетним детям, информированное согласие берут у их родителей или других законных представителей.

Проведение костномозговой пункции

Больного укладывают на кушетку: при стернальной пункции — на спину (между лопатками укладывают валик), при трепанобиопсии — на правый бок или живот. Место пункции обрабатывают спиртовым раствором йода и проводят обезболивание с помощью местноанестезирующих препаратов.

Для проведения манипуляции нужен специальный инструментарий: игла Кассирского (для стернальной пункции) или игла-троакар с мандреном (для трепанобиопсии). На свободном конце троакара имеются насечки, играющие роль своеобразной «фрезы». С помощью этой «фрезы» вкручивающими движениями «просверливают» наружный слой кости.

Игла при стернальной пункции вводится между третьим и четвертым ребрами по срединной линии. Прокол кожи и подвздошной кости при проведении трепанобиопсии делают в районе локализации гребня кости, чаще слева от позвоночника: так врачу легче проводить манипуляцию.

У маленьких детей грудина слишком тонкая и мягкая, поэтому имеется вероятность ее сквозного прокола, что является неблагоприятным осложнением. По этой причине взятие образца костного мозга у детей проводят из бедренной или большеберцовой кости, а у новорожденных — из пяточной. Другие кости вместо грудины выбирают также для взятия биоптата у пожилых людей с выраженным остеопорозом и у лиц, длительно принимающих кортикостероиды (из-за риска перелома грудины).

Взятый пунктат (биоптат) извлекают из иглы и помещают на предметное стекло (для цитологического исследования) или во флакон с формалином (для гистологического обследования). Чтобы не произошло свертывания жидкой части костного мозга на предметном стекле, в пунктат добавляют фиксаторы.

Размеры взятого биоптата должны позволять получить срезы для исследования площадью не менее 2×20 мм или 3×15. Очень важно при проведении пункции (биопсии) взять костный мозг из костномозговой полости. Если в препарате большая часть будет занята надкостницей или субкортикальными костномозговыми ячейками, полноценное гистологическое исследование проведено не будет: для заключения необходим просмотр 5 и более костномозговых ячеек.

После взятия биоматериала иглу извлекают из кости, место прокола обрабатывают антисептиком, накладывают стерильную салфетку и заклеивают пластырем.

Возможные осложнения

Взятие пунктата (биоптата) костного мозга считается безопасной процедурой. Если она выполняется опытным врачом и с соблюдением всех правил, осложнения после нее возникают очень редко. К таким редким последствиям относятся:

инфицирование места прокола;
кровотечения;
сквозной прокол или перелом грудины;
обморочные и шоковые состояния у истероидных пациентов.

Чтобы избежать возможных последствий, врачу необходимо строго соблюдать все этапы процедуры, а перед ней — провести доверительную беседу с пациентом.

Восстановление после манипуляции

Сама процедура длится не более 15 минут. После взятия образцов, больной в течение часа находится под медицинским наблюдением: контролируют пульс, артериальное давление, температуру. Если никаких осложнений в течение часа не обнаружилось, пациента отпускают домой. При болевых ощущениях больные могут принимать обезболивающие препараты.

Поскольку после процедуры возможны головокружения и обмороки, обследованным пациентам запрещено в этот день вести автомобиль. Риск возникновения кровотечения из места прокола кожи является причиной запрета выполнять тяжелые работы, заниматься спортом или употреблять алкогольные напитки в течение нескольких дней после процедуры.

Чтобы недопустить инфицирования места прокола кожи, необходимо своевременно менять салфетки и обрабатывать ранку антисептиками. До заживления раны запрещается посещать общественные бассейны, сауны, купаться в реке.

Цитологическое и гистологическое исследование

Мазки костного мозга готовят сразу после взятия пункции. Биоптат для гистологического исследования консервируют в специальных растворах. В лаборатории из биоптата готовят гистологические срезы, окрашивают их и оценивают. При этом стараются приготовить как можно больше микропрепаратов КМ, особенно при гипопластических процессах, когда взятые образцы очень бедны клеточными элементами. Цитологическое исследование проводится в день отбора образцов, на гистологию требуется до 10 дней.

При цитологическом исследовании миелограммы оценивают:

количество и соотношение разных видов клеток;
патологические изменения формы, размеров и структуры клеточных элементов;
тип кроветворения;
цитоз;
костномозговые индексы;
наличие специфических клеток.

Результат цитологического исследования имеет вид таблицы из трех колонок: в первой указаны названия клеточных элементов, во второй — показатели, определенные в образцах КМ, в третьей — референсные (нормальные) количественные или процентные показатели.

Нормальная миелограмма

В образце костного мозга здорового человека присутствует не более 2% клеток стромы: фибро- и остеобластов, адипоцитов, эндотелиальных клеток. Среди клеточных элементов паренхимы обнаруживаются недифференцируемые стволовые, бластные (молодые) и зрелые клетки. Количество бластов не превышает 1,7%.

В КМ обнаруживаются пять клеточных ростков:

Эритроидный (представлен эритробластами, пронормоцитами, нормоцитами, ретикулоцитами и эритроцитами).
Тромбоцитарный (к нему относятся мегакариобласты, промегакариоциты, мегакариоциты и тромбициты).
Гранулоцитарный (представлен миелобластами, промиелоцитами, миелоцитами, метамиелоцитами, палочкоядерными и сегментоядерными нейтрофилами, базофилами и эозинофилами).
Лимфоидный (к нему относятся лимфобласты, пролимфоциты и лимфоциты).
Моноцитарный (состоит из монобластов, пронормоцитов и моноцитов).

Клетки разных ростков имеет свои особенности строения и свойства, например, чувствительность к кислотам, щелочам или другим химическим соединениям. Эти отличительные особенности используют при исследовании образцов КМ, применяя различные красители для обработки мазков и срезов.

Кроме цитологического состава КМ важен также темп их созревания. Он определяется путем определения соотношений (индексов) между созревающими и зрелыми клетками:

При исследовании трепанобиоптата определяют также соотношение между паренхимой КМ, жировой и костной тканью в срезах. Нормальным считается их соотношение 1:0,75:0,45. Нарушение этих соотношений свидетельствует о патологии костного мозга. Гистологическое исследование диагностически более значимо, чем цитологическое, при гипоплазиях КМ, лейкозах и раковых метастазах в кости.

Патологическая миелограмма

Увеличение, уменьшение пула отдельных ростков клеток костного мозга и нарушение их соотношений указывает на патологию. Увеличение количества мегакариоцитов в КМ говорит о наличии ракового метастазирования в кости. Повышение количества бластных клеток на 20% и более наблюдается при остром лейкозе. Увеличение соотношения белого ростка к красному может свидетельствовать о хроническом миелолейкозе, сублейкемическом миелозе или лейкемоидных реакциях. При бластном кризе или хроническом миелолейкозе возрастает индекс созревания нейтрофилов.

Повышение количества эозинофилов указывает на аллергические реакции, глистные инвазии, онкологические заболевания, острый лейкоз, лимфогранулематоз. Базофилы растут при эритремии, базофильном лейкозе, хроническом миелолейкозе. Увеличение концентрации лимфоцитов характерно для апластической анемии или хронического лимфолейкоза.

Эритробласты увеличиваются при анемиях и остром эритромиелозе, моноциты — при сепсисе, туберкулезе, лейкозе, хроническом миелолейкозе, плазматические клетки — при миеломной болезни, агранулоцитозе, апластической анемии.

Понижение количества мегакариоцитов свидетельствует о гипо- и апластических аутоиммунных процессах, угнетении КМ после лучевой терапии и приема цитостатиков. Соотношение белого и красного ростков падает после обильных кровотечений, гемолиза, при остром эритромиелозе и эритремии. Снижение индекса созревания эритробластов характерно для В12-дефицитной анемии. Количество эритробластов снижается при апластической анемии, красноклеточной аплазии КМ, после лучевой и химиотерапии.

Стоимость проведения процедуры взятия образцов костного мозга путем стернальной пункции или трепанобиопсии с последующей миелограммой колеблется от 1 до 3 тысяч рублей. Цена зависит от формы собственности специализированной лаборатории, метода отбора образцов и объема исследований КМ (цитология, гистология).

Читайте также: