Морфология палочки инфлюэнзы. Культуральные свойства палочки инфлюэнзы. Биохимические свойства палочки инфлюэнзы.

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 21.12.2024

Примечание. В данной подрубрике кодируются только острые бронхиты, вызванные Haemophilus influenzae (палочка инфлюэнцы, палочка Пфейффера-Афанасьева), которая может выступать возбудителем острого воспаления верхних дыхательных путей, отита, менингита у человека.

Этиология и патогенез

Источник и резервуар инфекции - только человек. Заболевание распространяется воздушно-капельным путем, но у маленьких детей может передаваться и контактным путем. Возбудитель локализуется на слизистой оболочке верхних дыхательных путей.

Эпидемиология

H.influenzae можно выделить из носоглотки 90% здоровых людей, при этом на более вирулентный тип b приходится около 5% всех выделенных штаммов. Здоровое (бессимптомное) носительство может продолжаться от нескольких дней до нескольких месяцев. Оно сохраняется даже при высоком титре специфических антител или при назначении высоких доз антибиотиков.
У детей авирулентные штаммы H.influenzae могут выделяться из носоглотки в 30-50% случаев. При этом носителями вирулентных штаммов являются от 1 до 33% детей. Наиболее часто заболевают дети в возрасте от 6 месяцев до 4 лет; реже болеют новорожденные, дети более старшего возраста и взрослые.

У взрослых гемофильная палочка вызывает острый гнойный трахеобронхит в 50% случаев (Лукьянов С.В., 2005).

Факторы и группы риска

1. Дети до 2-х лет.
2. Пожилые люди.
3. Дети, посещающие дошкольные учреждения (по данным одного из исследований, до 50% инвазивных форм можно отнести на счет посещения детских учреждений).
4. Лица с низким социально-экономическим статусом, при скученном проживании риск заболевания возрастает.
5. Лица с различными видами иммунодефицита.
6. Ослабленные, страдающие алкоголизмом.
7. Курящие.
8. Дети на грудном вскармливании. Данный фактор отчасти является гипотетическим, поскольку механизм воздействия на защиту от гемофильной инфекции до конце не выяснен. Здесь могут играть роль как питательные, так и иммунные факторы, находящиеся в грудном молоке. После иммунизации женщин полисахаридной вакциной на 36-39 неделях беременности было отмечено 20-кратное возрастание выделения специфических антител с грудным молоком в послеродовом периоде.
9. Представители неевропейских рас - достаточно спорный фактор риска, но, по данным исследований, отмечается более высокая заболеваемость среди детей неевропейских рас.
10. Лимфогранулематоз (болезнь Ходжкина), серповидно-клеточная анемия.
11. Лица, подвергшиеся спленэктомии Спленэктомия - хирургическая операция: удаление селезенки
.

Клиническая картина

Cимптомы, течение

Инкубационный период достоверно не выяснен, так как инфекция может манифестировать после бессимптомного носительства неопределенной длительности (вторичная гемофильная инфекция).
Клиника практически неотличима от клиники других острых бронхитов за исключением постепенного начала и развития гнойного острого бронхита. Возможны ассоциированные гемофильные поражения - отит, менингит, пневмония, артрит, целлюлит (при инфицировании штаммом Hib).

Диагностика

Анамнез. Учитываются эпидемиологическая обстановка, возрастная группа, курение, факты рецидивов бронхита, наличие или отсутствие вакцинации и сопутствующих поражений вероятной гемофильной этиологии у контактных лиц (конъюктивит, отит, синусит - для штаммов NTHi и менингита, артрита, пневмонии, эпиглоттита Эпиглоттит - воспаление слизистой оболочки надгортанника (подвижный хрящ в виде лепестка; играет роль клапана между трахеей и глоткой), которое может привести к резкому нарушению проходимости дыхательных путей
Подробно - для Hib).
Клиника. Как правило, катарально-гнойный рецидивирующий острый или хронический бронхит.
Рентгенологическое исследование может выявить склонность процесса к распространению (пневмония) или показать только признаки бронхита.

Лабораторная диагностика

Общий анализ крови демонстрирует неспецифические признаки общевоспалительной реакции. В тяжелых случаях могут отмечаться как тромбоцитоз, так и тромбоцитопения. Выраженные признаки воспаления, включая значительное при выделенном возбудителе, свидетельствуют о распространении инфекции. Значительное повышение СОЭ может быть признаком развития артрита.

Бактериоскопическое исследование мокроты, мазков из зева и носоглотки показывает небольшие, грамотрицательные, плеоморфные коккобациллы с большим количеством полиморфноядерных клеток. Это считается надежным диагностическим признаком факта носительства гемофильной палочки.

Исследование культуры является более надежным способом диагностики возбудителя. Реакция агглютинации культуры с определенным типом сыворотки позволяет провести серотипирование.
Б актериологические методы остаются важными и для обнаружения инфекции с целью установления биотипа бактерии (различают биотипы I - VIII, наиболее распространены биотипы I, II, III) и определения чувствительности к антибиотикам. Необходимость данных исследований обусловлена тем, что палочка приобретает устойчивость к антибиотикам (например, к ампициллину, эритромицину). При выделении Haemophilus influenzae типа B у детей, данный штамм в 44 % случаев оказывался устойчивым к ампициллину.

Серологические тесты выбора - латекс-агглютинация и реакция преципитации. Особенно важны они для диагностики в тех случаях, когда антимикробная терапия была начата до посева культуры.

Широкое носительство в верхних дыхательных путях данной палочки среди населения (может достигать 90% среди здоровых лиц) обуславливает тот факт, что ее выделение из носоглотки и проведение бактериологического посева не всегда имеет важное диагностическое значение. В связи с этим для диагностики (и дифференциальной диагностики) заболеваний, ассоциированных с гемофильной палочкой, ее выявление целесообразно проводить в крови, мокроте, плевральной и суставной жидкости, моче при помощи бактериологических методов и ПЦР -диагностики.

Дифференциальный диагноз

Осложнения

Лечение

Лечение представляет существенные сложности в связи с формированием устойчивости возбудителя к большинству антибиотиков.

Этиотропная терапия
В идеале должна осуществляться с учетом чувствительности выделенной культуры к антибиотикам. В силу очевидных причин это условие невозможно выполнить сразу же.

Для клинически предполагаемых NTHi (поражение только слизистых) и в случае нетяжелого течения:
1. Устойчивость к ампициллину и амоксициллину достигает 50%. Однако с учетом институциональных особенностей эти препараты могут быть использованы в качестве "стартовой" терапии вследствие относительной безопасности и низкой стоимости. Ампициллин вводят парентерально в суточной дозе 200-400 мг/кг/сутки - детям и 6 г/сутки - взрослым. Амоксициллин возможно назначать перорально в дозе 80-90 мг/кг/сутки. При неэффективности возможно использовать амоксициллин-клавуланат или цефалоспорины устойчивые к бета-лактамазам, продуцируемым бактерией.
2. При аллергии на пенициллин рекомендуются макролиды (кларитромицин, азитромицин), левомицетин, фторхинолы, бисептол.

Для клинически предполагаемого штамма Hib или тяжелого течения:
1. Парентеральное введение антибиотиков.
2. Комбинация двух антибитиков различных групп. Например, цефалоспорины+левомицетин.

Длительность курса составляет 10-14 дней.
Существуют отдельные работы, показывающие эффективность терапии нетяжелых форм короткими курсами (7 дней) макролидов или амоксиклава. Смена антибиотика в отсутствие клинического эффекта при эмпирической антибактериальной терапии не должна производиться ранее чем через 5 дней после ее начала. Рекомендуется проведение полного минимального курса в 10 дней с последующей клинической и лабораторной оценкой эффективности. Однако признаки распространения инфекции, утяжеление состояния пациента или появление лабораторных данных о резистентности штамма диктуют немедленную смену антибиотика и/или применение комбинации антибиотиков.

Патогенетическая терапия:
- бронхолитики;
- муколитики;
- оксигенация;
- респираторная поддержка при необходимости;
- ингаляции солевых растворов.

Симптоматическая терапия: противокашлевые.

Прогноз

При остром бронхите, вызванном гемофильной палочкой, имеется риск формирования хронического бронхита.

Haemophilus influenzae

Материалы предназначены исключительно для врачей и специалистов с высшим медицинским образованием. Статьи носят информационно-образовательный характер. Самолечение и самодиагностика крайне опасны для здоровья. Автор статей не дает медицинских консультаций: клинический фармаколог — это врач только и исключительно для врачей.

Автор: Трубачева Е.С., врач – клинический фармаколог

Сегодняшняя тема касается очередного представителя нормальной микрофлоры, который в определенных условиях способен вызывать тяжелейшие заболевания, как в детском, так и во взрослом возрасте. Речь пойдет о Haemophilus influenzae, проще говоря, о гемофиле.

Начнем традиционно с микробиологических аспектов

Откуда взялось название микроорганизма? Дело в том, что этим маленьким бактериям необходимы факторы, присутствующие в крови (факторы X – гемин и V – никотинамид-аденин-динуклеотид) для роста на шоколадном агаре, поэтому они называются гемоглобинофильными бактериями или гемофилами.

H.influenzae является грамм-отрицательной коккоподобной бактерией, колонизирующей верхние дыхательные пути. Выделяют шесть типов гемофил, обозначаемых буквами от a до f, которые различаются по наличию или отсутствию наружной капсулы. У H.influenzae типа b (Hib) капсула имеется и представляет собой полимерную структуру, состоящую из рибозы и рибитола, скрепленных фосфорной кислотой. Эта капсула является основным фактором патогенности, так как благодаря ей микроорганизм способен эффективно обороняться от фагоцитоза и активации системы комплемента, тем самым обеспечивая свою выживаемость. Поэтому H.influenzae типа b являются самыми инвазивными из всех типов гемофил.

H.influenzae способны к образованию биопленок, которые способствуют выживанию целых колоний, а не только отдельных микроорганизмов, так как еще активнее противодействуют факторам иммунитета. О том, что такое биопленки, мы рассказывали здесь.

При всем вышеописанном гемофилы, в том числе и типа b, являются компонентами нормальной микрофлоры носоглотки. После рождения носоглотка колонизируется бескапсульными H.influenzae, и далеко не всегда эта колонизация ведет к развитию заболеваний. Затем при встрече с носителем Hib подселяются еще и они. Дальнейшее развитие событий будет зависеть от состояния слизистой носоглотки.

Эпидемиологические аспекты

H.influenzae крайне нестойки во внешней среде, любой дезинфектант убивает их мгновенно, поэтому источником заболеваний является только человек – больной или носитель, а механизм передачи исключительно воздушно-капельный, так как возбудители в больших количествах концентрируются в секретах верхних дыхательных путей. И если больных не изолировать (или как минимум не надеть на них маску), то довольно быстро перезаражаются все вокруг.

Особенно много возбудителей скапливается в слюне и слизистом отделяемом больных детей, что указывает на острую их заразность (ничего не напоминает?). А учитывая моду последних лет приводить больных детей (ну подумаешь, сопли и кашляет) в организованные коллективы и отсутствие обязательной Hib-вакцинации, можно получить массовую вспышку в детском саду. Литературные источники говорят о том, что в России до 40% менингитов у детей в возрасте до 5 лет вызваны Hib при летальности в районе 5-10% и тяжелых осложнениях в пределах 40%. При этом носительство H.influenzae типа b среди детей разного возраста для России составляет 35-78%. Помимо этого на первом году жизни могут выделяться нетипируемые штаммы гемофил, способствующие высокому риску развития острого среднего отита. И так как, по понятным причинам, мы не можем рекомендовать расформирование детсадовских групп для уменьшения частоты носительства гемофил, то остается только один выход – вакцинация, которая у нас до сих пор необязательна, а при наличии Hib-компонента в вакцинах, он порой вводится только под нажимом родителей, так как медсестра о его наличии в коробочке может просто не догадываться (этот вопрос очень ярко обсудил в своем блоге врач – педиатр Сергей Бутрий, и не смотря на то, что пост написан для родителей, врачам тоже не мешает помнить, что их назначения могут быть прочитаны, мягко говоря, неоднозначно). И не пора ли энергию, затрачиваемую на борьбу с золотистым стафилококком в носах и кале детей, переключить на выявление и санацию гемофил типа b в этом же возрасте? И дело полезное будет сделано, и от неповинного стафилококка отстанем.

Отдельно стоит отметить, что в странах с преобладающим чернокожим населением (мы уже даже представить не можем, где нас еще могут читать) предрасположенность к носительству и развитию заболеваний, вызванных H.influenzae, а также к смертности детей от гемофильного менингита, еще выше ввиду вероятной генетической предрасположенности.

Клинические аспекты

Все заболевания, вызванные H.influenzae, можно разделить на инвазивные и неинвазивные. Инвазивные заболевания вызываются капсульными H.influenzae типа b, и к ним относятся пневмонии, менингиты, сепсисы, артриты, эпиглотиты и целлюлиты. Важно запомнить, что сдерживающим фактором для капсульных H.influenzae является наличие слизи на поверхности дыхательных путей, и как только она, по каким либо причинам, исчезает, гемофилы тут же закрепляются на эпителии, а так как они не подвергаются процессу фагоцитоза из-за наличия капсулы, то довольно быстро проникают под эпителий, минуют лимфоидный барьер и попадают в кровь, вызывая вышеперечисленные заболевания.

Неинвазивные заболевания, вызванные H.influenzae, возникают как следствие распространения по слизистым оболочкам дыхательных путей нетипируемых бескапсульных гемофил и являются осложнениями ОРВИ, которые смогли понизить местный иммунный ответ. Внимание педиатрам – не стафилококк, с которым некоторые отчаянно воюют, а гемофила вызывает вторичные бактериальные осложнения, если они вдруг возникают.

Когда мы должны подумать о H.influenzae?

При поражении легких – остром или обострении хронического бронхита (особенно у курильщиков), внебольничных пневмониях (у детей до 10% случаев)
Поражении ЛОР-органов: в детском возрасте это будут эпиглотиты, синуситы, средние отиты (и у детей, и у взрослых), периорбитальные целлюлиты
При бактериемиях в детстве и, возможно, но редко, бактериальных эндокардитах
При поражении ЦНС у детей – менингитах (у взрослых крайне редко, у детей, иммунизированных Hib вакциной, – почти никогда)
При поражении опорно-двигательного аппарата – септических артритах, остеомиелитах (у взрослых)
Поражениях глаз – конъюнктивитах

Наиболее предрасположены к развитию гемофильных инфекций:

Дети, ослабленные рахитом и гипотрофией
Онкологические пациенты
Пациенты с иммунодефицитами различной этиологии
Больные с серповидно-клеточной анемией
Многолетние курильщики
Дети, часто болеющие ОРВИ

После перенесенной гемофильной инфекции, вызванной Hib, формируется очень стойкий иммунитет с высоким содержанием антител. При этом дети до двух месяцев редко болеют, так как в этот момент имеют материнские антитела.

Гемофильные менингиты в возрасте до 5 лет в 90% случаев вызваны H.influenzae типа b, при этом 60% случаев приходится на возраст до 2 лет, и протекают в виде сепсиса с поражением не только мозговых оболочек, но и суставов, среднего уха, легких и т. д.

Вторым крайне грозным детским гемофильным заболеванием, которое в течение нескольких часов может привести к летальному исходу, является острый эпиглотит, он же «круп», способный вызвать полную обструкцию дыхательных путей. Причиной оного так же является H.influenzae типа b.

Острый средний отит, как у детей, так и у взрослых, в большинстве случаев также вызывается H.influenzae – в основном, нетипируемыми штаммами.

У часто болеющих острыми респираторными заболеваниями детей причиной вторичных бактериальных осложнений чаще всего выступает бескапсульная H.influenzae.

Кроме того, не стоит забывать и о внутрибольничном инфицировании и развитии гемофильных вентилятор-ассоциированных пневмоний у пациентов, имеющих свои колонии в носоглотке, либо заражение путем немытых рук и носов сотрудников реанимационной бригады. В этом случае разовьется ранняя (в пределах 2-4 суток) вентилятор-ассоциированная пневмония.

Диагностические аспекты

Микробиологическая диагностика играет основную роль в терапии заболеваний, вызванных H.influenzae. Какими методами и средствами мы можем воспользоваться?

Средствами экспресс-диагностики – обнаружение капсульного Hib-антигена в спинномозговой жидкости, крови, плевральной жидкости и моче
Средствами микробиологической диагностики, а для этого до назначения антибиотиков нужно собрать весь необходимый биологический материал – кровь, мочу, бронхоальвеолярный лаваж (плевание мокроты не информативно), спинномозговую жидкость и т. д.
Серология клинического значения не имеет, но если хочется написать научную работу и есть доступ к лаборатории, то можно и ее
Неожиданное предложение – если обладаете острым обонянием, а от пациента отчетливо пахнет мышами, это может стать подсказкой в раннем, долабораторном поиске. Правда пациент не должен производить впечатления, будто он с этими мышами живет.

Чем лечить?

Главную роль в лечении играют возраст пациента и локализация процесса. Кроме того, необходимо помнить о том, что гемофилы, как и пневмококки, умеют вырабатывать пенициллиназы, чем почти полностью исключают из использования незащищенные формы природных и синтетических пенициллинов, если пациент использовал оные в течение ближайшего полугодия.

Неопасные для жизни инфекции у взрослых, такие как острый средний отит, обострение хронического бронхита или синусит можно лечить по следующим схемам:

Если нет данных по лечению антибиотиками в течение предыдущего полугода, можно использовать амоксициллин 500 мг три раза в день.
Иностранные источники рекомендуют использование ко-тримоксазола, но автор совершенно не желает им уподобляться. 250-500 мг перорально дважды в день. 400 мг один раз в день или левофлоксацин 500 мг один раз в день. (который автор искренне не любит из-за профиля безопасности) нам рекомендуют использовать по 500 мг единожды и далее по 250 мг один раз в день 4 дня – дикая схема, вызванная проблемами с профилем безопасности, и если уж очень хочется макролидов, то лучше использовать намного более безопасный кларитромицин – 500 мг дважды в день.

Длительность лечения составляет:

При остром отите 10-14 дней;
синусите 10-14 дней;
обострении хронического бронхита – 5 дней для фторхинолонов или 14 дней для всех остальных.

Менингиты у взрослых (только антибактериальная терапия)

Если есть данные о наличии чувствительности, то можно использовать ампициллин в дозе 2 г каждые 4 часа внутривенно
Как альтернативу беталактамам можно использовать фторхинолоны

Менингиты у детей (схемы для недоношенных смотрим в соответствующей литературе, либо в инструкции к использованию упомянутых препаратов)

Длительность лечения 10-24 дней

Тяжелые жизнеугрожающие инфекции у взрослых, такие как пневмония, тяжелый целлюлит, септический артрит:

Цефотаким 2 г в/в каждые 6 часов
При наличии чувствительности – ампициллин 2 г в/в каждые 6 часов
Как альтернатива бета-лактамов – фторхинолоны

В заключение нашего разговора хотелось бы еще раз отметить, что основой профилактики тяжелых и жизнеугрожающих гемофильных инфекций первых лет жизни является использование H.influenzae тип b – вакцин и введение оных в национальный календарь прививок, а пока этого нет – проведение разъяснительной работы с родителями (вместо запугивания страшным золотистым стафилококком).

Вопрос 58. Палочка инфлюэнцы

2. Морфология, биология, культуральные и антигенные свойства

3. Лабораторная диагностика

1. Бактерии инфлюэнцы Haemophilus influenza (б. Афанасьева-Пфейффера), встречаясь довольно часто на слизистой оболочке верхних дыхательных путей человека, при ослаблении устойчивости организма к инфекции могут вызвать менингит (особенно у ослабленных детей), острые воспаления дыхательных путей:

• острый и хронический отит и др.

2. Морфология: маленькая палочка почти кокковидной формы. Очень полиморфны, могут образовывать нити. Неподвижны, спор не образуют, грамотрицательны. Бактерии медленно окрашиваются анилиновыми красками; окраску мазка карболовым фуксином, разведенным в 10 раз, нужно производить в течение 5—15 мин.

Биология, культуральные свойства: большую роль при выращивании на питательных средах играют ростовые витамины — кровь различных животных или водный раствор хлористого гематина и дрожжевой экстракт.

Антигенное строение: серотипы — капсулы отдельных штаммов отличаются по антигенным свойствам в связи с присутствием в них 6 различных полисахаридов.

По капсульным антигенам бактерии инфлюэнцы разделяются на 6 типов: а, Ь, с, d, e, f. У людей чаще выделяется тип Ь. С помощью капсульных антигенов можно получить специфические антисыворотки с высоким титром, применение которых дает возможность быстро и точно определить серологические типы палочки инфлюэнцы.

3. При воспалении дыхательных путей и среднего уха берут слизь и гной с помощью тампона, при пневмонии собирают мокроту в чашку Петри; при эмпиеме плевры исследуют экссудат, а при менингите — спинномозговую жидкость.

Микроскопия и бактериоскопическое исследование: посев делают на кровяной (шоколадный) агар Левинталя и одновременно на свежий кровяной агар с 10% крови кролика или лошади. Палочка инфлюэнцы очень неустойчива во внешней среде, быстро погибает при высыхании слизи, мокроты, гноя, поэтому посев необходимо делать немедленно после взятия материала. На среде Левинталя колонии бактерий вырастают довольно больших размеров, слепки беловатые с гладкой поверхностью, ровные, круглые (у капсульных бактерий). У некапсульных штаммов колонии меньше с неровными краями и выпуклым центром. С колоний делают мазки на предметном стекле, окрашивают фуксином Циля и микроскопируют.

Вопрос 59. Возбудители кокковых пневмоний и их лабораторная диагностика

/. Возбудители пневмоний

2. Микроскопическое исследование

3. Бактериологическое исследование

4. Особенности лабораторной диагностики стафилококковых пневмоний

1. Возбудителями пневмонии могут быть различные микроорганизмы, проникающие в дыхательные пути человека из окружающей среды, — кокковые (пневмококки, стрептококки, стафилококки) и бациллярные (диплобациллы Флидлендера, палочки Пфейффера). Одним из наиболее частых возбудителей пневмонии, особенно крупозной, является пневмококк. В последнее время часты стафилококковые пневмонии.

2. Материалом для исследования служат: мокрота, слизь, взятая стерильным тампоном из носоглотки больного, гной, различные выпоты, пунктаты, кровь. Исследованию подвергают преимущественно мокроту или носоглоточную слизь.

Микроскопическое исследование: делают мазки на 2 предметных стеклах; один из мазков окрашивают по Граму, а другой — разведенным карболовым фуксином (краска Пфейффера). При нахождении в мазках ланцетовидных диплококков, окруженных светлой зоной неокрасившейся капсулы, ориентировочно устанавливают пневмококковую этиологию. Обнаружение расположенных цепочкой грамположительных кокков позволяет подавить предварительный диагноз стрептококковой инфекции.

Характерная морфология расположения группами в виде гроздей винограда и положительной окраски по Граму позволяет установить наличие стрептококков. Обнаружение в мазках мелких грамотрицательных палочек, часто образующих гнезд-ные скопления и нередко полярно окрашенных, указывает на палочку Пфейффера. Грамотрицательные диплобациллы различной величины, окруженные капсулой в виде светлого ореола, говорят о наличии диплобациллы Фридлендера. Микроскопический диагноз ориентировочный и предварительный.

3. Точное представление о микробном пейзаже дает:

• изучение посевов на кровяном агаре и других средах;

• выделение чистых культур из изолированных колоний;

Пневмококковые пневмонии: для бактериологического исследования материал засевают на чашки Петри, содержащие агар с добавлением 5—7% дефибринированой кроличьей крови. Посевы на кровяном агаре исследуют через 1—2 суток содержания в термостате при 37 °С.

Одновременно с изучением внешнего вида колоний производят отсев их в жидкие среды и микроскопирование. Колонии пневмококков на кровяном агаре имеют вид мелких полупрозрачных образований зеленовато-серого цвета, особенно заметного в тонком слое агара, в центре имеют небольшой плотный бугорок и более светлую периферию. Нередко колонии окружены как бы отсвечивающим ореолом. В жидких средах пневмококки вызывают равномерное помутнение без образования пленок и осадка.

Микроскопирование обнаруживает грамположительные парные кокки несколько удлиненной формы с заостренными наружными концами, напоминающими ланцет — ланцетивидные диплококки. Размеры их колеблются в пределах 0,5 х 0,75 до 1 х 1,5 мкм, располагаются одиночно, но могут образовывать короткие цепочки по 3—4 пары кокков. Пневмококки образуют капсулу, которая светлым ободком окружает оба кокка вместе, так как обычными методами окраски капсула не прокрашивается. Пневмококки легко лизируются в присутствии бычьей желчи и желчнокислых солей. Обнаруженные при исследовании культуры пневмококка подвергают дополнительному исследованию - определяют тип пневмококка, вирулентность для белых мышей и устойчивость к действию антибиотиков, а также производят серологические исследования (реакции агглютинации и преципитации — берется материал от больного и типовые пневмококковые сыворотки). Одновременно с посевом на агар исследуемый материал вводят внутрибрюшинно 2 белым мышам весом 18—20 г по 0,5 мл, т. е. ставят биологическую пробу.

Морфология палочки инфлюэнзы. Культуральные свойства палочки инфлюэнзы. Биохимические свойства палочки инфлюэнзы.

Клинические проявления поражений палочки инфлюэнзы. Микробиологическая диагностика палочки инфлюэнзы. Лечение поражений палочки инфлюэнзы. Профилактика заражения палочкой инфлюэнзы.

Клиническая картина поражений палочки инфлюэнзы зависит от локализации воспалительного процесса (типичны пневмонии). Наибольшую опасность представляют острый эпиглоттит и менингит. При воспалении надгортанника часто возникает необходимость в наложении трахеостомы. Менингит обычно развивается при бессимптомном носительстве вследствие диссеминирования возбудителя по лимфатическим путям. Нередко у детей после излечения остаются стойкие неврологические изменения.

Микробиологическая диагностика палочки инфлюэнзы.

Основу диагностики палочки инфлюэнзы составляют выделение и идентификация возбудителя. Материалом служит слизь из зева, СМЖ, гнойное отделяемое, мокрота и др. Посевы обычно проводят на ША и среду с сердечно-мозговой вытяжкой. Типичные колонии пересевают, выявляют наличие капсул (в реакции иммунного набухания Найфельда) и исследуют биохимические свойства. Аг бактерий выявляют при помощи РП в агаре. Для быстрой идентификации в СМЖ используют методы прямой иммунофлюоресценции и встречного иммуноэлектрофореза. Важную информацию может дать анализ потребности в факторах X и V.

• Прямой метод диагностики палочки инфлюэнзы. Выполняют газонный посев культуры на твёрдую питательную среду. Полоски бумаги, пропитанные факторами X и V, накладывают на поверхность агара. Рост бактерий вокруг полосок, а не на других участках среды, подтверждает предположение об их принадлежности к виду палочки инфлюэнзы.

• Для идентификации палочки инфлюэнзы также применяют тест сателлитных колоний («бактериальная кормилка»). На КА засевают исследуемую культуру, а через центр чашки (по диаметру — штрихом) засевают золотистый стафилококк. Последний синтезирует фактор V, а также высвобождает фактор X, разрушая эритроциты. Около зоны роста стафилококка палочка инфлюэнзы образует более крупные колонии.

Лечение поражений палочки инфлюэнзы. Профилактика заражения палочкой инфлюэнзы.

Основу лечения составляет адекватная антимикробная терапия (препараты выбора — ампициллин, аминогликозиды). Детям, контактировавшим с больным, назначают рифампицин. Антимикробную терапию следует сочетать с симптоматическим лечением. Для специфической иммунопрофилактики созданы вакцины на основе капсульных полисахаридов, но они не приводят к образованию AT в необходимом количестве у детей младше 2 лет, составляющих группу наибольшего риска.

За рубежом для активной иммунизации от палочки инфлюэнзы наиболее часто используют конъюгаты основного капсульного Аг — фосфата рибитола — с различными белковыми анатоксинами (например, дифтерийным или столбнячным).

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

1.3.2. Гемофильные бактерии

Впервые гемофильные бактерии были выделены Р. Кохом в начале 80-х годов XIX века из конъюнктивального экссудата. Позднее М.И. Афанасьев (1891 г.) и Р. Пфейффер (1892 г.) похожего возбудителя выделили из трупа больного, погибшего от гриппа; отсюда его длительное время считали причиной гриппа, что получило отражение в видовом названии.

Классификация

Гемофильные бактерии относятся к семейству Pasteurellaceae, роду Haemophilus. Кроме него в семейство входят роды Pasteurella и Aggregatibacter. Род Haemophilus включает около 20 видов, среди них есть сапрофиты и патогенные микроорганизмы.

Наибольшую роль в патологии играет H. influenzae, вызывающий воспалительные процессы в респираторном тракте, а также менингиты, бактериемию и другие инвазивные инфекции.

По свойствам с ним сходны H. parainfluenzae, H. haemolyticus and H. parahaemolyticus (последние 2 вида проявляют гемолитическую активность).

H. ducreyi является возбудителем мягкого шанкра – заболевания, передаваемого половым путем.

Родственные микроорганизмы вида Аggregatibacter aprophilus могут вызывать подострый эндокардит.

Являются мелкими коккобактериями с выраженным полиморфизмом. Образуют капсулу, не имеют спор и жгутиков, по Граму окрашиваются отрицательно.

Культуральные свойства

Весьма прихотливы к питательным средам. Нуждаются в наличии факторов роста в среде.

Этими факторами являются факторы Х или V, которые содержатся в эритроцитах: Фактор V – термолабильный кофермент (НАД или НАДФ), содержится в дрожжах, в тканях растений и животных, участвует в энергетическом метаболизме; фактор Х – гемин, термостабилен, входит в состав железосодержащих пигментов. Гемофильные бактерии не способны к его синтезу.

Отсюда лучшими средами для культивирования являются кроличий или лошадиный кровяной агар и шоколадный агар. На этих средах чаще вырастают S- или М- (слизистые) формы колоний. Непатогенные, бескапсульные штаммы образуют R-формы колоний.

Оптимальная температура роста 37 0 С. Длительность роста – 36-48 часов. На кровяном агаре с добавлением сердечно-мозгового экстракта через 24 часа появляется рост мелких колоний с радужными переливами, гемолиз отсутствует. У беcкапсульных вариантов радужная расцветка не выявляется. На жидких средах с кровью рост чаще диффузный, реже – придонный.

Биохимические свойства

Факультативные анаэробы. Метаболизм смешанный.

H. influenzae разлагает глюкозу, обладает каталазой, оксидазой, нуждается в X-, V-факторах.

Часть штаммов образует индол и разлагает мочевину, по этим признакам проводится биотипирование H. influenzae.

H.ducreyi не обладает сахаролитической активностью, нуждается в X-факторе, имеет каталазу и оксидазу.

Дифференциация гемофильных бактерий по биохимическим свойствам представлена в таблице.

Антигенная структура

О – соматический (ЛПС) и К – капсульный полисахаридный антиген; по К-антигену выделяют в реакции агглютинации или преципитации с монорецепторными сыворотками 6 серовариантов (a, b, c, d, e, f). Бескапсульные штаммы обозначаются как нетипируемые.

Белковый антиген М имеется у непатогенных штаммов.

Факторы патогенности

Основным фактором вирулентности является капсула.

Большинство инвазивных инфекций вызывается капсульными штаммами Н. influenzae типа b (Hib).

Капсула Hib состоит из полирибозилрибитолфосфата (ПРРФ), то есть содержит в качестве мономера пентозу (рибозу) в отличие от других типов, содержащих гексозу, что и определяет более высокую вирулентность. ПРРФ является Т-независимым АГ.

Бактерии имеют многочисленные адгезины в составе пилей.

Обладают IgА-протеазами, разрушающими секреторный IgА, что подавляет местный иммунитет слизистых.

ЛПС клеточной стенки является эндотоксином.

Возбудитель может продуцировать β-лактамазы, что обусловливает устойчивость к антибиотикам данной группы.

Резистентность

Патогенез и характеристика заболевания

Наибольшую роль в патологии человека играет H. influenzae, а также H. ducreyi – возбудитель мягкого шанкра. A. aphrophilus иногда способен вызывать подострый эндокардит.

Н. influenzae является патогеном исключительно человека (антропонозная инфекция). Гемофильные палочки, преимущественно нетипируемые их штаммы, часто входят в состав нормальной микрофлоры слизистых оболочек верхних дыхательных путей у здоровых взрослых и детей.

Однако на фоне сопутствующих заболеваний и при снижении местного иммунитета H. influenzae размножается на слизистых оболочках внутри- и внеклеточно, попадает в кровь. При этом через гематоэнцефалический барьер возбудитель может проникать в мозговые оболочки, что приводит к менингиту.

H. influenzae вызывают большое количество различных инфекций. В целом все инфекции, обусловленные гемофильной палочкой, можно подразделить на 2 типа: неинвазивные и инвазивные.

Неинвазивные инфекции связаны с распространением и колонизацией бактериями слизистой оболочки верхних дыхательных путей. При этом страдает мукоцилиарный клиренс.

Гемофилы могут вызывать острый синусит, острый средний отит и обострение хронического бронхита. Обычно эти заболевания являются осложнениями вирусных и других респираторных инфекций.

Инвазивные инфекции вызываются главным образом штаммами варианта Hib и связаны с гематогенным распространением возбудителей.

К ним относятся тяжелые заболевания – менингит, эпиглоттит (острое воспаление надгортанника), пневмония, бактериемия и сепсис.

Основные виды инфекций H. influenzae представлены в таблице

Источники инфекции – больной человек и носители, в носоглотке которых локализуется возбудитель.

Пути передачи – воздушно-капельный, в меньшей степени контактный.

В первую очередь инфекции, вызванные H. influenzae, поражают детей младшего возраста до 4-5 лет. Для них эти возбудители представляют наибольшую опасность.

Низкая частота развития инвазивных инфекций у детей первых двух месяцев жизни обусловлена наличием материнских антител. После этого срока уровень антигемофильных АТ падает, и ребенок становится восприимчивым к инфекции.

Защитный уровень АТ постепенно приобретается к 5-6 годам, что обусловливает снижение частоты и тяжести заболеваний.

Основным факторов вирулентности является полисахаридная капсула типа b, состоящая из полирибозилрибитолфосфата. Она защищает микроорганизм от фагоцитоза, опсонизации и комплемент-опосредованного лизиса. С ростом популяции людей, обладающих антителами к полирибозилрибитолфосфату, уменьшается и частота инвазивных инфекций.

Наиболее тяжелым заболеванием, вызванным H. influenzae, является гнойный менингит. Возбудитель проникает в клетки эпителия носоглотки, далее инвазирует субэпителиальные слои и попадает в кровь. При низком уровне АТ капсула обеспечивает выживание бактерий в крови, и они проникают в сосудистые сплетения головного мозга. Возбудитель активирует острое пиогенное воспаление в ЦНС. Эндотоксин стимулирует воспалительный процесс и поражает сосуды микроциркуляции с развитием тромбофлебитов. Это приводит к некрозу мозговой ткани.

Заболевание стремительно прогрессирует, и без лечения летальность может превысить 90%. После болезни у 10% детей остаются неврологические осложнения (глухота, гидроцефалия, ментальные расстройства).

Вариантом местной пиогенной инвазии является гемофильный эпиглоттит. Он представляет собой острое гнойное воспаление надгортанника с некрозом, что в тяжелых случаях приводит к смерти от асфиксии.

У рожениц и новорожденных может развиваться гемофильный сепсис. Наиболее частой причиной его являются нетипируемые штаммы возбудителя.

У взрослых гемофильная инфекция чаще всего возникает вторично как осложнение после вирусных или бактериальных респираторных инфекций. В составе микробных ассоциаций возбудитель вызывает пневмонию или обострение бронхита

Иммунитет после заболевания стойкий, в основном гуморальный; естественный пассивный иммунитет от матери сохраняется до 2-3 месяцев.

Лабораторная диагностика

В связи с тем, что гемофильная палочка вызывает широкий спектр инфекций, для микробиологической диагностики может направляться различный клинический материал.

Наибольшую диагностическую значимость представляет исследование в норме стерильных биологических жидкостей: крови, плевральной, перикардиальной, синовиальной и спинномозговой жидкости (СМЖ).

Бактериоскопический метод носит ориентировочный характер, при окраске по Грамму выявляют грамотрицательные полиморфные бактерии, чаще с капсулой.

В качестве экспресс-методов выявляют антигены возбудителя в исследуемом материале.

Для быстрой диагностики инфекций, вызванных Н. influenzae типа b, используются серологические методы обнаружения капсульного антигена в СМЖ, крови, плевральной жидкости и моче: латекс-агглютинация, реакция коагглютинации со стафилококковым протеином А и иммуноферментный анализ.

Более простыми методами являются реакции латекс- и коагглютинации с образцами СМЖ. В настоящее время наиболее широко применяется иммуноферментный анализ.

При исследовании образца спинномозговой жидкости необходимо немедленно начать исследование или хранить материал в термостате при температуре 35-37°С (при невозможности – при комнатной температуре не более 30 мин). Образцы СМЖ не должны помещаться в холодильник. Длительной хранение образцов может привести к гибели бактерий и ложноотрицательным результатам (за исключением теста на определение антигенов).

Для обогащения материала проводят центрифугирование СМЖ. Проводят окрашивание осадка по Граму. Далее определяют антиген Hib в надосадочной жидкости.

Затем проводят бактериологическое исследование осадка. Выполняют посев нескольких капель осадка СМЖ на поверхность чашек с шоколадным и кровяным агаром. Чашки инкубируют при температуре 35-37°С в атмосфере с 5-10% СО₂.

Другие биологические жидкости (синовиальная, перикардиальная, плевральная) также должны окрашиваться по Граму и исследоваться культурально.

Делают посев на среды с кровью, шоколадный агар. Идентификацию проводят по культуральным, биохимическим и антигенным свойствам с использованием специфических монорецепторных сывороток.

Параллельно проверяют потребность в X и V-факторах. Исследуемую культуру сеют сплошным газоном на плотную питательную среду. На посев накладывают два бумажных диска, смоченных, соответственно X и V-факторами. Если рост выявляется вокруг дисков, то подтверждают зависимость культуры от этих факторов.

Можно использовать тест сателлитных культур. На чашку с посевом культуры на кровяном агаре наносят в нескольких местах культуру S. aureus. При этом за счет выделяемого ими гемолизина вокруг колоний стафилококка наблюдается обильный рост исследуемой культуры. Аналогичные результаты можно получить при использовании диска с сапонином, который также лизирует эритроциты кровяного агара, высвобождая факторы X и V.

Гемофильный менингит требует немедленного назначения антибиотикотерапии. С учетом вероятной устойчивости возбудителя к ампициллину препаратами выбора являются цефалоспорины III поколения. Также назначают хлорамфеникол, фторхинолоны.

При лечении эпиглоттита применяют цефалоспорины III поколения, возможно назначение ингибитор-защищенных β-лактамов (амоксициллин-клавулановая кислота). Данные антибиотики используют также при отитах и синуситах.

Специфическая профилактика

Для предотвращения тяжелых, угрожающих жизни инфекций, вызываемых штаммами варианта Hib, разработаны химические комбинированные вакцины, отличающиеся высокой эффективностью и безопасностью, в том числе у детей младше 18 мес.

Они представляют собой очищенный капсульный полисахарид Hib, конъюгированный с другими АГ (например, столбнячным анатоксином или вакциной АКДС), что обеспечивает необходимую иммуногенность.

В настоящее время конъюгированная Hib вакцина внесена в расширенный календарь прививок в Республике Беларусь. Детей прививают четырехкратно в 3, 4, 5 и 18 месяцев.

Неспецифическая профилактика – изоляция и лечение больных, дезинфекция в очагах.

Читайте также: