Определение липопротеидов крови. Определение глюкопротеидов крови

Добавил пользователь Morpheus
Обновлено: 21.12.2024

Липопротеиды крови в норме. Что значат отклонения ЛПНП, ЛПВП?

Ни для кого не секрет, что кровь выполняет одну из важнейших функций в нашем организме - выполняет доставку различных питательных и регуляторных веществ во все уголки тела. И если доставка таких веществ, как глюкоза, водорастворимые белки достаточно проста - они находятся в растворенном состоянии в плазме крови - то транспортировка жиров и жироподобных соединений таким же образом невозможна по причине практически полной их нерастворимости в воде. А между тем они играют важную роль в нашем обмене веществ, поэтому их доставка осуществляется с помощью специальных белков-переносчиков. Они образуют с липидами особые комплексы - липопротеиды, которые в виде дисперсионного раствора находятся в плазме крови во взвешенном состоянии и способны переноситься с током жидкости.

В данных комплексах может наблюдаться различное соотношение липидов и белков, что сильно влияет на плотность всего комплекса - чем больше в них жироподобных веществ, тем меньше плотность липопротеидов. На этой основе принята классификация липопротеидов по плотности:

- Липопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП) - норма содержания находится в пределах 0,2-0,5 ммоль/л. Содержат в основном холестерин и триглицериды (нейтральные жиры) с небольшим количеством белков.
- Липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) - норма содержания - 2,1-4,7 ммоль/л. Также содержат холестерин, но кроме него транспортируют также фосфолипиды (основной компонент клеточных мембран всех клеток). Наряду с ЛПОНП считаются главным атерогенным фактором - данные липопротеиды способны осаждаться и накапливаться на стенках сосудов, приводя к развитию атеросклероза. Поэтому при профилактике сердечно-сосудистых заболеваний всячески избегают повышения содержания этих компонентов липидного обмена.

- Липопротеиды промежуточной плотности (ЛППП) - норма 0,21-0,45 ммоль/л. Переносят холестерин, фосфолипиды и нейтральные жиры. Особого диагностического значения не имеют.
- Липопротеиды высокой плотности (ЛПВП) - транспортируют холестерин, норма содержания находиться в пределах 0,7-1,7 ммоль/л. Имеют важное значение как противовес вредному влиянию других фракций липопротеидов.

Интерпретация анализа крови на содержание и структуру липопротеидов тесно связано с уровнем холестерина в крови. Это и не удивительно, ведь почти весь холестерин находиться в составе различных липопротеидов. Из-за особенностей их строения и возникло понятие о "хорошем" и "плохом" холестерине - вещество, входящие в состав ЛПОНП и ЛПНП может считаться "плохим", так как именно эти компоненты липидного профиля крови принимают важное участие в развитии атеросклероза, тогда как холестерин из липопротеидов высокой плотности является "хорошим", поскольку не способствует изменению стенок кровеносных сосудов. Холестерин же, входящий в состав всех фракций липопротеидов составляет такой биохимический показатель как общий холестерин, норма которого - 3,5-7,5 ммоль/л. На основе всех этих данных была разработана формула, названная "коэффициент атерогенности", показывающая склонность человека к развитию атеросклероза:
Коэффициент атерогенности = (Общий холестерин-ЛПВП)/ЛПВП.

Нормальное значение этого коэффициента не должно превышать 3, в противном случае риск развития сердечно-сосудистой патологии значительно увеличивается. Из этой же формулы следует, что при значительном увеличении фракции липопротеидов с низкой плотностью относительно высокой повышается вероятность развития атеросклероза.

Показатели нормы холестрина крови

По какой же причине возможно увеличение количества липопротеидов низкой плотности? В первую очередь в наше время частой причиной этого выступать несбалансированность питания - при увеличении удельного количества жиров в пище и одновременном снижении полноценных белков неизбежно возникает дисбаланс и в составе липопротеидов, которые представляют собой комплекс липидов и белков. Таким образом, в повышении уровня ЛПНП и развитии атеросклероза важную роль играет не повышение абсолютного количества жиров в пище, а их соотношение с белками.

Другой немаловажной причиной повышения уровня ЛПНП выступает нарушение транспортных систем липидов. При различных обменных заболеваниях или наследственной предрасположенности может уменьшаться количество рецепторов к ЛПНП (которые служат для липопротеидов "посадочной площадкой") и за счет этого липопротеиды низкой плотности не могут проникнуть из крови в ткани. Накапливаясь в крови, их концентрация достигает того критического значения, когда они начинают пропитывать стенку кровеносного сосуда с развитием атеросклеротической бляшки.

При биохимическом анализе крови и выяснении липидного профиля человека всегда важно определять соотношения различных фракций липопротеидов между собой. Например, даже значительное повышение общего холестерина или жиров крови, но образованное за счет липопротеидов высокой плотности не представляет угрозы здоровью, но может быть признаком различных заболеваний печени (цирроз, гепатит), почек (гломерулонефрит), поджелудочной железы, эндокринной системы. С другой стороны даже при нормальном общем содержании липидов крови, но нарушенном балансе липопротеидных фракций и высоком коэффициенте атерогенности повышается вероятность развития атеросклероза, гипертонии и других заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Учебное видео расшифровки биохимического анализа крови

- Рекомендуем посетить наш раздел с интересными материалами на аналогичные тематики "Профилактика заболеваний"

Определение липопротеидов крови. Определение глюкопротеидов крови

Для определения липопротеидов используется тот же буфер, что и для электрофореза. Ленты готовят так же, как и для белковых фракций.
В качестве красителя применяется судан черный: 25 мг судана черного на 10 мл абсолютного спирта. Срок годности такого раствора 1 месяц, хранят его в холодильнике.

Электрофорез липопротеидов производят заранее окрашенной сывороткой. Для этого к 0,5 мл свежей, негемолизированной сыворотки добавляют 0,1 мл Судана черного. Смесь перед нанесением на бумагу 1 час взбалтывают, затем наносят на 0,1 мл смеси. Ленты помещают в камеру на 3 часа при напряжении 300 в, пока происходит разделение фракций. Ленты вынимают и сушат в горизонтальном положении при температуре 80°. Затем разрезают фракции для количественного определения. Разрезанную по фракции ленту помещают в пробирку и заливают 20% уксусным спиртом по 5 мл в каждую (20 мл уксусной кислоты и 80 мл спирта). Закрывают пробирки пробками и ставят в темное место на 2 часа. Раствор колориметрируют в ФЭК с синим светофильтром в 5-миллиметровой кювете. Полученные цифры суммируют и принимают за 100%. Вычисляют процентное содержание каждой фракции. В норме получают 30% (26—35%) альфа-липопротеидов и 70% (74—65%) бета-липопротеидов.

Определение глюкопротеидов крови

Электрофорез производят так же, как при разделении белков. Для определения глюкопротеидов необходимы следующие реактивы.
Реактивы: I. 1% раствор HJO4 (йодная кислота) хранить в холодильнике одну неделю.

II. Восстанавливающий раствор готовят по методу Грина: 50 кг KJ (йодистый калий) и 50 г гипосульфита растворяют в 1 л Н20 (раствор А), 35 мл IN раствора доводят до 1 л дистиллированной Н20 (раствор В). Перед употреблением сливают две части раствора А и 3 части раствора В.

III. Реактив Шиффа. 4г основного фуксина (специальный сорт для реактива Шиффа) растворяют в 1 л дистиллированной воды, нагретой до 90—95°. Раствор тщательно перемешивают до тех пор, пока его температура не достигнет 40°. После этого к раствору фуксина прибавляют 8 г метабисульфита К и 10 мл концентрированной соляной кислоты. Раствор оставляют в плотно закрытой склянке на 16—18 часов, затем к нему прибавляют 2 г активированного угля, тщательно перемешивают и отфильтровывают на воронке Бюхнера. Раствор должен быть абсолютно прозрачным и бесцветным. Хранить его следует в холодильнике и использовать не более одного месяца.

IV. Раствор для промывания электрофореграмм. 16 г метабисульфита К растворяют в 2 л Н20. К 500 мл этого основного раствора прибавляют 10 мл концентрированной соляной кислоты (раствора А). К остающемуся 1,5 л основного раствора прибавляют 15 мл концентрированной соляной кислоты (раствор В). Раствор готовят непосредственно перед употреблением. Наилучшие результаты были получены при окислении в течение 10 минут 1% раствором йодной кислоты. В этих условиях получается яркая окраска фракций глюкопротеидов и бесцветный фон.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Белковые фракции сыворотки крови. Техника выделения фракций белков крови

В настоящее время наиболее распространено определение белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на бумаге (Р. С. Колесникова, 1959; П. А. Веселова, 1961; В. К. Гостищев, 1965; К. А. Цыбырнэ, 1965, и др.).

Этим способом разделяются 5 фракций белка: альбумины, альфа-1, альфа-2, бета- и гамма-глобулины. Для обнаружения белковых фракций используют свойство белков связывать некоторые красители. Содержание белковой фракции определяют по количеству связанного с ней красителя.

1. Раствор для отмывания электрофоре грамм от несвязавшейся с белком краски: 2% раствор уксусной к-ислоты для бромфенолового синего.
2. Для элюирования бромфенолового синего применяют 0,01 едкий натр.
3. Бумага. Хроматографическая быстро впитывающая бумага марки «Б» или медленно впитывающая марки «М» Ленинградской бумажной фабрики им. Володарского. Следует все время работать с одним выбранным сортом бумаги. Для электрофореза на бумаге необходимы камера и источник постоянного тока, а для количественной расшифровки — ФЭК-Ж.

Камера ПЭФ состоит из ванны, в которой помещены две кюветы, разделенные перегородкой. В наружной части кюветы погружено по два угольных электрода. Электрическая связь между внутренними кюветами осуществляется при помощи полос хроматографической бумаги, подвешенных на перегородке кювет. Кюветы заливают доверху буферным раствором. Регулировочными винтами устанавливают камеру в горизонтальное положение по уровню. Хроматографическую бумагу нарезают полосами шириной 3 см и длиной 26 см. Бумагу следует аккуратно нарезать лезвием, без складок и изъянов, лучше вдоль листа.

Отмечают черным карандашом середину полосы и место нанесения сыворотки — 3 см от катода. После этого ленты помещают в камеру, причем концы их должны быть опущены во внутреннее отделение кювет. Камеру закрывают двускатной крышкой, подключают к источнику питания на 1/2 часа. После этого выключают ток, снимают крышку и при помощи пипетки наносят на отмеченное на полосе место ровным слоем сыворотку в количестве 0,015 мл, затем закрывают камеру и включают ток. Электрофорез проводят при комнатной температуре, при напряжении 175—200 в в продолжение 5 часов. По окончании электрофореза ток выключают.

Сушат электрофорез в сушильном шкафу в горизонтальном положении в течение 15 минут при 105°, после этого ленты окрашивают в эмалированных кюветах, погружая их на 20—30 минут в раствор бромфенола синего. Затем раствор сливают, а не связавшийся с белками краситель удаляют, промывая отдельными порциями 2% уксусной кислоты до тех пор, пока последняя порция уксусной кислоты не останется бесцветной. Ленты сушат при комнатной температуре. Для элюирования участки ленты, содержащие каждую фракцию, вырезают и помещают в пробирку, а альбумины — в стаканчик. Встряхивают и оставляют на 1/2 часа, а затем колориметрируют в ФЭК с зеленым светофильтром в 5-миллиметровой кювете. Если нужно получить более интенсивную окраску фракции, то высушенные ленты проводят над открытой бутылкой с аммиаком.

После колориметрирования складывают экстинкции всей фракции (экстинкцию альбуминов утраивают). Для получения хороших электрофореграмм необходимо соблюдать все правила, указанные в методике, и внимательно следить за буфером, рН которого должно быть постоянно. Угольные электроды очень загрязняют буфер, поэтому его необходимо часто менять.

Липопротеины высокой плотности

Липопротеины высокой плотности (общепринятые аббревиатуры: ЛПВП или ЛВП; англ. high-density lipoprotein, HDL) — класс липопротеинов (также называемых липопротеидами), сложных белков, состоящий из аполипопротеинов и липидов. Иногда называются альфа-липопротеинами. Плотность ЛПВП — 1,063-1,210 г/мл.

ЛПВП осуществляют транспорт холестерина от клеток периферических органов, таких как сосуды сердца, артерии мозга и другие в печень, где холестерин превращается в желчные кислоты и выводится из организма. В среднем, у мужчин содержание холестерина ЛПВП в крови ниже, чем у женщин.

Липопротеины высокой плотности имеют наименьший размер среди липопротеинов крови человека (5-12 нм), они легко проникают в стенки артерий и легко их покидают. И, поэтому, они не увеличивают риск развития атеросклероза. Более того, в общем случае, существует обратная зависимость содержания холестерина (ХС) ЛПВП и риском развития ишемической болезни сердца (ИБС) — чем выше в крови содержание холестерина ЛПВП, тем ниже риск развития ИБС.

Одновременно, существуют серьёзные исследования, доказывающие, что терапия, направленная на повышение уровня ХС ЛПВП, не приводит к достоверному снижению заболеваемости и смертности от ИБС. В целом повышение ХС ЛПВП сопровождается снижением частоты сердечно-сосудистых заболеваний и смертности, однако этот эффект обусловлен в основном сопутствующими изменениями уровней ХС липопротеинов низкой плотности (ЛПНП). При снижении ХС ЛПНП на каждые 0,26 ммоль/л смертность от ИБС снижается на 7,2%, риск событий ИБС – на 7,1% и риск смерти от всех причин – на 4,4%. А увеличение ХС ЛПВП не всегда сопровождается положительными эффектами в отношении смертности от ССЗ. Поэтому в рекомендациях Европейского общества кардиологов, Американской диетологической ассоциации и Всероссийского научного общества кардиологов указаны в основном целевые уровни общего ХС и ХС ЛПНП (Еганян Р.А.).

Классификация уровней и референсные значения ХС ЛПВП сыворотки крови

Рекомендации третьего доклада экспертной группы Национальной образовательной программы по холестерину в США National Cholesterol Education Program, NCEP (Adult Treatment Panel III, ATP III):

Уровень ХС ЛПВП	мг/дл	ммоль/л
низкий	< 40	< 1,0
высокий	≥ 60	≥ 1,56

Примечание. Перевод значений в мг/дл в значения в ммоль/л: Y(в мг/дл) = Y (в ммоль/л) х 0,0259.

Референсные значения холестерина ЛПВП (по данным лаборатории ИНВИТРО):

Возраст, лет	Пол	Уровень холестерина ЛПВП, ммоль/л
5-10	М	0,98 - 1,94
5-10	Ж	0,93 - 1,89
10-15	М	0,96 - 1,91
10-15	Ж	0,96 - 1,81
15-20	М	0,78 - 1,63
15-20	Ж	0,91 - 1,91
20-25	М	0,78 - 1,63
20-25	Ж	0,85 - 2,04
25-30	М	0,80 - 1,63
25-30	Ж	0,96 - 2,15
30-35	М	0,72 - 1,63
30-35	Ж	0,93 - 1,99
35-40	М	0,75 - 1,60
35-40	Ж	0,88 - 2,12
40-45	М	0,70 - 1,73
40-45	Ж	0,88 - 2,28
45-50	М	0,78 - 1,66
45-50	Ж	0,88 - 2,25
50-55	М	0,72 - 1,63
50-55	Ж	0,96 - 2,38
55-60	М	0,72 - 1,84
55-60	Ж	0,96 - 2,35
60-65	М	0,78 -1,91
60-65	Ж	0,98 - 2,38
65-70	М	0,78 - 1,94
65-70	Ж	0,91 - 2,48
> 70	М	0,80 - 1,94
> 70	Ж	0,85 - 2,38

МКБ-10 и недостаточность липопротеинов высокой плотности

Медицинская услуга, связанные с определением уровня липопротеинов высокой плотности в крови человека

Приказом Минздравсоцразвития России № 1664н от 27.12.2011 г. утверждена Номенклатура медицинских услуг. В Разделе 9 Номенклатуры предусмотрена медицинская услуга, связанных с определением уровня липопротеинов высокой плотности в крови человека: «Исследование уровня альфа-липопротеинов (высокой плотности) в крови», код услуги A09.05.004.

Результаты исследований уровня липопротеинов высокой плотности в крови дают важную информацию для лечащего врача, но диагнозом не являются!

Липопротеины низкой плотности

Липопротеины низкой плотности относятся к бета-липопротеинам, которые являются так называемыми «плохими» липопротеинам. ЛПНП достаточно малы, чтобы проникнуть в стенку артерий. После окисления они легко задерживаются в стенках артерий, участвуя, таким образом в образовании атеросклеротических бляшек, которые сужают просвет сосудов и способствуют тромбообразованию.

Классификация уровней и референсные значения ХС ЛПНП сыворотки крови

Значение целевого уровня ХС ЛПНП в сыворотке крови в настоящее время дискутируется. Европейское общество кардиологов (ESC) в настоящее время рекомендует использовать при лечении статинами пациентов с ишемической болезнью сердца целевой уровень ХС ЛПНП менее 70 мг/дл (=1,8 ммоль/л), однако существуют исследования* утверждающие, что целевой уровень ХС ЛПНП <100 мг/дл обеспечивает такую же степень снижения сердечно-сосудистого риска, как и более агрессивные целевые уровни и уменьшает риск нежелательных явлений от приёма гиполиподемическими препаратов.

Уровень ХС ЛПНП	мг/дл	ммоль/л
оптимальный
выше оптимального	100-129	2,6-3,35
погранично высокий	130-159	3,36-4,13
высокий	160-189	4,14-4,94
очень высокий	≥190	>4,95

Примечание. Перевод значений в мг/дл в значения в ммоль/л: Y(в мг/дл) = Y (в ммоль/л) х 0,0259.

Референсные значения ЛПНП в плазме крови по данным лаборатории ИНВИТРО:

Возраст, лет	Пол	Уровень холестерина ЛПНП, ммоль/л
5-10	М	1,63 - 3,34
5-10	Ж	1,76 - 3,63
10-15	М	1,66 - 3,44
10-15	Ж	1,76 - 3,52
15-20	М	1,61 - 3,37
15-20	Ж	1,53 - 3,55
20-25	М	1,71 - 3,81
20-25	Ж	1,48 - 4,12
25-30	М	1,81 - 4,27
25-30	Ж	1,84 - 4,25
30-35	М	2,02 - 4,79
30-35	Ж	1,81 - 4,04
35-40	М	2,10 - 4,90
35-40	Ж	1,94 - 4,45
40-45	М	2,25 - 4,82
40-45	Ж	1,92 - 4,51
45-50	М	2,51 - 5,23
45-50	Ж	2,05 - 4,82
50-55	М	2,31 - 5,10
50-55	Ж	2,28 - 5,21
55-60	М	2,28 - 5,26
55-60	Ж	2,31 - 5,44
60-65	М	2,15 - 5,44
60-65	Ж	2,59 - 5,80
65-70	М	2,54 - 5,44
65-70	Ж	2,38 - 5,72
> 70	М	2,28 - 4,82
> 70	Ж	2,49 - 5,34

* Leibowitz M. et al. Association Between Achieved Low-Density Lipoprotein Levels and Major Adverse Cardiac Events in Patients With Stable Ischemic Heart Disease Taking Statin Treatment // JAMA Intern Med. doi:10.1001/jamainternmed.2016.2751 .

Методы снижения объёма ЛПНП в крови

Для снижения уровня ЛПНП может быть рекомендована диета, направленная на уменьшение потребления холестерина и насыщенных жиров и увеличение потребления высокобелковых продуктов, полиненасыщенных и мононенасыщенных жиров, клетчатки а также терапия гиполиподемическими препаратами.

В настоящее время основными гиполиподемическими препаратами, применяемыми для снижения концентрации «плохих» липопротеинов в крови, считаются структурные ингибиторы фермента 3-гидрокси-3-метилглютарил-ацетил-коэнзим А редуктазы, кратко «статины» (аторвастатин, церивастатин, розувастатин, питавастатин и др.), код АТХ C10AA. Терапия статинами среди всех возможных методов коррекции нарушений липидного обмена остается единственным эффективным способом первичной профилактики ишемического инсульта. Главной мишенью гиполипидемической терапии является достижение целевых значений ХС ЛПНП либо степень снижения его уровня.

Если пациент не отвечает на терапию статинами, могут назначаться секвестранты желчных кислот (холестирамин и др.) код АТХ C10AC. Кроме того, могут применяться фибраты (код АТХ C10AB), никотиновая кислота и её производные (код АТХ C10AD), а также другие средства, такие как омега-3 триглицериды, поликозанол, эзетимиб и иные. Эти препараты назначаются в составе комбинированной или в виде монотерапии.

Длительная терапия статинами снижает уровень ЛПНП, но не продлевает жизнь пожилым пациентам?

Имеются исследования, доказывающие, что при терапии статинами (правастатином, 40 мг в день) в течение 6 лет у большой группы пожилых пациентов с дислипидемией и гипертензией, но без клинических проявлений сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ), несмотря на снижение уровня ЛПНП, не наблюдалось ни достоверного снижения уровня смертности, по сравнению с пациентами, не принимавших статины, ни уменьшения числа летальных и нелетальных случаев ишемической болезни сердца. И, более того, наблюдалась тенденция к повышению показателей смертности от всех причин при применении статинов в самой старшей возрастной группе. Данное исследование не опровергает факта, что статины уменьшают риск ИБС.**

** Han BH, et al. Effect of Statin Treatment vs Usual Care on Primary Cardiovascular Prevention Among Older Adults // JAMA Internal Medicine, 2017, doi:10.1001/jamainternmed.2017.1442.

МКБ-10 и высокий уровень липопротеинов низкой плотности

Медицинская услуга, связанные с определением уровня липопротеинов низкой плотности в крови человека

Приказом Минздравсоцразвития России № 1664н от 27.12.2011 г. утверждена Номенклатура медицинских услуг. В Разделе 9 Номенклатуры предусмотрена медицинская услуга, связанных с определением уровня липопротеинов низкой плотности в крови человека: «Исследование уровня липопротеинов низкой плотности», код услуги A09.05.028.

Результаты исследований уровня липопротеинов низкой плотности в крови дают важную информацию для лечащего врача, но диагнозом не являются!

Читайте также: