Проводка и изготовление срезов лимфатических узлов. Окрашивание срезов лимфатических узлов.

Добавил пользователь Алексей Ф.
Обновлено: 30.12.2024

Для обеспечения соответствующих требований проводки, изготовления срезов, их окраски и иммуно-гистохимических исследований лаборатории обязательно должны постоянно проводить контроль качества своих реактивов и оборудования. Важным в гематопатологии является определение морфологической структуры клетки, а из-за плохих фиксации, проводки и изготовления срезов она достаточно легко может быть искажена и, таким образом, более трудна для понимания.

Значительное влияние на цитологические и гистологические характеристики оказывает толщина срезов; оптимальной является толщина 3—5 мкм.
Наиболее широко используемой окраской в гистопатологии и зачастую единственной в диагностике лимфатических узлов является гематоксилин и эозин (ГЭ). Окраска по Гимза дополняет другие гематопатологические характеристики и на большей части Европейского континента является окраской выбора. Она выявляет базофилию и эозинофилию, что помогает в идентификации бластных клеток, плазмоцитов, эозииофилов и тучных клеток. При использовании этой методики необходимо обращать внимание на качество окраски и учитывать рН реактивов; иначе может появиться однообразное бледно-голубое окрашивание среза с малой диагностической информативностью.

Информативным в гематопатологии является и окрашивание по методу ШИК. Оно выявляет включения внутриядерного IgM (тельца Дотчера), базальпую мембрану и основное вещество, аналогичное таковому вокруг кровеносных сосудов в ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфоме. Окраска ретикулина может представлять ценность при определении обшей структуры лимфатического узла, выявлении фолликулярное™, структуры синусов и кровеносных сосудов.

В ряде лабораторий все описанные выше окраски используются в наборе для исследования лимфатических узлов в обязательном порядке. Однако в настоящее время наблюдается тенденция перехода непосредственно от окраски срезов гематоксилином и эозином к иммуногистохимическому исследованию, тогда как дополнительное использование одной или более окрасок могло бы иметь большую диагностическую ценность.

Опыт работы и хорошее качество гистологических препаратов позволяют диагностировать многие из простых лимфом уже на морфологическом уровне. Однако в практической деятельности в большинстве случаев трудно отнести выявлямыс изменения к какой-либо категории без помощи иммуногистохимического исследования. Даже в биопсиях, которые диагностируются с определенной уверенностью морфологически (такие как диффузная крупноклеточная лимфома), иммуногистохимические данные зачастую дают дополнительную прогностическую информацию.

Поэтому во многих лабораториях установилась практика выполнять подтверждающее иммуногистохимическое исследование при всех биопсиях лимфом. Цена этого оказывается незначительной, если сопоставить помошь в постановке точного диагноза и стоимость лечения. К сожалению, в развивающихся странах, где приобретение и хранение антител оказывается зачастую проблематичным, а цены немалыми, иммуногистохимическое исследование с диагностической целью практически не выполняется.

В практической деятельности к нам нередко поступают биопсии от патологов, поставивших приемлемый морфологический диагноз, но смущенных последующим иммуногистохимическим исследованием. Во избежание этого патологам следует знать характеристики антител и специфичность их реактивности. Лаборатория должна быть предметом постоянного контроля качества. Для большинства антител, используемых в гемопатологии, в подлежащих исследованию тканях существуют внутренние контроли (реактивные В- и Т-клегки, гистиоциты и т.д.).

Для антигенов, обычно не экспрессируемых в нормальных и реактивных тканях, таких как анапластическая крупноклеточная киназа 1 (ALK-1), необходимо исследование внешних контрольных тканей. Следует быть осторожными со срезами, которые выглядят однообразно голубыми; обычно это указывает на технические недостатки.

В последнее десятилетие иммуногистохимические методы значительно усовершенствованы в связи с промышленным изготовлением больших количеств «сильных» антител и развитием методик по антигенному восстановлению.

-