Гонококк окраска по леффлеру
Глава 17. Гонококки
Neisseria gonorrhoeae входят в семейство Neisseriaceae, род Neisseria. Гонококки обнаружены Нейссером в 1879 г. и в честь его названо все семейство.
Морфология. Гонококки - это диплококки, состоящие из двух бобовидных кокков, лежащих вогнутыми сторонами друг к другу (напоминают кофейные зерна). Размер гонококков 1,2-1,3 × 0,7-0,8 мкм. Они полиморфны, наряду с крупными встречаются очень мелкие, неправильной формы L-формы бактерий. Гонококки неподвижны, спор не имеют. В патологическом материале (гное) обнаруживают капсулообразное вещество. Грамотрицательны. Под влиянием лекарственных и других веществ быстро изменяются: появляются грамположительные формы. В патологическом материале располагаются внутриклеточно (в лейкоците), но могут быть вне клетки. Могут находиться в виде отдельных кокков (см. рис. 4).
Культивирование. Гонококки - аэробы. Очень требовательны к питательным средам. Растут на средах, содержащих нативный белок (человеческий) - кровь, сыворотку, при температуре 37° С и рН среды 7,2-7,4. Среды должны быть свежеприготовленными и влажными. Посев следует производить сразу после взятия материала. На сывороточной среде гонококки образуют мелкие колонии 1-2 мм, прозрачные, блестящие с ровными краями, напоминающие капельки росы. На кровяной среде гемолиза не дают. В сывороточном бульоне они дают слабое помутнение и пленку, которая оседает на дно пробирки. При скудном росте через 24 ч посевы оставляют в термостате на вторые сутки.
Ферментативные свойства. Сахаролитические свойства слабо выражены. Гонококки расщепляют только один сахар - глюкозу с образованием кислоты. Протеолитическими свойствами не обладают.
Токсинообразование. В клеточной стенке гонококков имеется токсическая субстанция - липополисахарид (мало изучен).
Антигенная структура. Антигенная структура неоднородна и легко изменяется под влиянием факторов внешней среды. Общепринятого деления гонококков на серовары и серотипы пока нет.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Во внешней среде гонококки мало устойчивы. При температуре 56-60° С они погибают. При температуре 40° С их жизнеспособность резко снижается. Низкие температуры и высушивание их быстро губят. Но в гное они сохраняются до 24 ч. Дезинфицирующие растворы - 1% раствор фенола, сулема 1:1000 убивают гонококки в течение нескольких минут. Особенно гонококки чувствительны к солям серебра - 1% раствор серебра нитрата губит их сразу. УФ-лучи убивают их в течение нескольких минут.
Восприимчивость животных. Животные не чувствительны к гонококку. Однако внутрибрюшинное введение белым мышам гонококкового токсина вызывает их гибель.
Источники инфекции. Больной гонореей человек.
Пути передачи. Контактно-бытовой (половой), реже через зараженные предметы (полотенце, губки и др.).
Заболевания у человека. Гонорея и бленнорея.
Патогенез. Естественным хозяином гонококков является больной человек. Гонококки проникают через слизистые оболочки уретры (у женщин - уретры и шейки матки). Фактором патогенности гонококков является наличие у них пилей, которые, соединяясь с микроворсинками цилиндрического эпителия, способствуют проникновению гонококка внутрь клетки эпителия, обусловливая в слизистой оболочке острый воспалительный процесс.
Клинически гонорея проявляется болями при мочеиспускании, выделениями гноя из уретры и влагалища. Заболевание протекает остро, но иногда переходит в хроническую форму. Гонококки могут вызвать гонорейный конъюнктивит - бленнорею (гнойное воспаление слизистой оболочки глаз у новорожденных). Гонококки редко проникают из уретры в другие органы, но иногда они могут быть причиной артритов, эндокардитов и т. д.
Иммунитет. Естественной резистентности к гонококкам нет. Перенесенное заболевание также не создает иммунитета. Наблюдающийся фагоцитоз носит незавершенный характер.
Профилактика. Санитарное просвещение. Повышение культурно-гигиенического уровня. Специфической профилактики нет. Для профилактики бленнореи детям сразу после рождения обязательно вводят в конъюнктивальный мешок 1-2 капли 30% раствора альбуцида.
Лечение. Антибиотики (пенициллин, бициллин, стрептомицин и др.). Применяют также сульфаниламидные препараты. При хронической форме используют гонококковую вакцину.
1. Опишите морфологические свойства гонококков.
2. Каковы ферментативная активность и токсинообразование гонококков?
3. Какова устойчивость гонококков. К какому препарату гонококки особенно чувствительны?
4. Какие заболевания вызывают гонококки и их патогенез.
Цель исследования: выявление гонококков и противогонококковых антител.
1. Отделяемое слизистой оболочки уретры у мужчин.
2. Отделяемое слизистой оболочки уретры и шейки матки у женщин.
3. Гнойные выделения из глаз.
4. Кровь для получения сыворотки.
Способы сбора материала
Примечание. Для бактериоскопического и бактериологического исследования материал берут: 1) до начала лечения антибиотиками: 2) не ранее чем через 10 дней после окончания лечения антибиотиками; 3) не ранее чем через 2 ч после последнего мочеиспускания; 4) не ранее чем через 2 ч после спринцевания.
1. Микроскопический (главным образом используется при острых формах).
Первый день исследования
Вынимают посевы из термостата и просматривают их. Изучают колонии. Делают мазки. При наличии подозрительных грамотрицательных диплококков колонии пересевают на скошенную среду в пробирках (среда должна быть свежеприготовленной и содержать достаточное количество конденсата) и ставят пробу на оксидазу. Для этого пипеткой на колонию наносят каплю 1% раствора диметилпарафенилендиамина, колонии изменяют цвет от темно-коричневого до черного.
Вынимают посевы из термостата, делают мазки со скошенного агара, окрашивают по Граму и микроскопируют. Засевают на среды Гисса (лактозу, глюкозу, маннит и мальтозу). Эти углеводы должны содержать 30% сыворотки крови. Засеянные пробирки ставят в термостат.
Вынимают пробирки из термостата, при отсутствии роста оставляют их в термостате еще на 1-2 дня. При наличии роста учитывают результаты (табл. 28).
Таблица 28. Дифференциация гонококков от других нейссерий
Третья неделя заболевания. При хроническом течении заболевания и в сомнительных случаях ставят РСК с сывороткой больного (см. главу 12). В качестве антигена используют убитую культуру гонококков, которую готовят в производственных условиях. Можно применить реакцию непрямой гемагглютинации (см. главу 12).
1. Какой материал служит для выявления гонококков и каким способом его получают?
2. Через сколько времени после мочеиспускания (или спринцевания у женщин) можно брать материал для исследования?
3. Какой метод исследования является основным при острой форме и какой - при хронической форме гонореи?
4. Когда и какую серологическую реакцию ставят при подозрении на гонорею?
5. От каких микроорганизмов необходимо дифференцировать гонококки?
Получите у преподавателя препарат. Изучите его и зарисуйте гонококки, расположенные внутри лейкоцита и вне его при окраске по Граму.
Желточная среда. К 100 мл МПА из кроличьего мяса добавляют 15 мл желтка (свежего куриного яйца), 6 мл индикатора фенолового красного, 1,5 мл сахара, растворенного в 1 мл стерильной дистиллированной воды.
Питательная среда асцит-агар. К фильтрату бульона, приготовленного из кроличьего мяса, добавляют 2% агар, 1% пептон и 0,5% хлорид натрия. Нагревают до растворения агара, устанавливают рН 7,4-7,5, подщелачивают 20% гидроксидом натрия. Среду доводят до кипения, фильтруют, разливают в стерильные флаконы и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 115° С.
Рецепты безасцитных питательных сред (МПА рН 7,4-7,5).
1) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл
гидролизата казеина - 2 мл
дрожжевого аутолизата - 2 мл
сыворотки крови крупного рогатого скота - 20 мл
2) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл
5% раствор гемогидролизата - 2 мл
дрожжевого аутолизата - 2 мл
сыворотки рогатого скота - 20 мл
3) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл
желтка куриного яйца - 10 мл
сыворотки крови рогатого скота - 20 мл
Рост гонококков на этих средах обильный. Колонии гонококка могут быть выявлены с помощью пробы на оксидазу, при которой они окрашиваются в красный цвет, переходящий в черный.
Сифилис, гонорея, урогенитальный хламидиоз
ГОНОРЕЯ
• Гонорея – венерическое заболевание, характеризующееся воспалением слизистых оболочек преимущественно урогенитальной системы и
склонностью к хроническому течению
Таксономическое положение возбудителя гонореи
• Вид Neisseria gonorrhoeae (N.gonorrhoeae )
Морфология N.gonorrhoeae
• Грамотрицательные диплококки бобовидной формы, их размеры
1,0-1,3 х 0,6-0,8 мкм , неподвижные,
спор не образуют, имеют пили, в организме образуют нежную капсулу
Гонококки в электронном микроскопе и в гное
Гонококк в гное, окраска по Леффлеру (метиленовым синим) и по Граму
Видны внутриклеточно расположенные диплококки в форме кофейныхзерен
Культуральные свойства
питательных средах с добавлением крови, сыворотки, асцитической жи д кости в
присутствие 5- 10% СО2
Факторы патогенности
• 1. Пили - основной фактор адгезии и колонизации. Пили повышают устойчивость возбудителей к фагоцитозу.
• 2. Р1(порин) - главный белковый компонент наружной мембраны способен встраиваться в мембрану эпителиальных клеток человека, формируя в ней каналы. Этот процесс, по- видимому, служит первым этапом эндоцитоза - проникновения возбудителя в эпителиальные клетки.
• 3. Ора-белки - обладают адгезивностью, участвуя во взаимодействии с фагоцитами.
• 4. Капсула - является антифагоцитарным фактором, защищает клеточную стенку возбудителя от непосредственного контакта с бактерицидными веществами крови, маскирует антигенные детерминанты гонококка.
• 5. IgA-протеазы - разрушают IgA-антитела, защищающие слизистые оболочки, тем самым облегчая адгезию гонококков на клетках эпителия. Одновременно понижается активность фагоцитоза, опосредованного антителами.
• 6. Эндотоксин (ЛПС)
Антигенные свойства
• Антигенными свойствами обладают все поверхностные белки
• Фимбрии состоят из множества одинаковых белковых субъединиц. Эта субъединица называется пилином и имеет молекулярную массу около 20000. В составе пилина есть консервативные и вариабельные участки. Перестройки хромосом, ведущие к экспрессии любого из множества неактивных генов пилина, сопровождаются изменениями антигенного состава фимбрий
• Другие перестройки хромосом приводят к тому, что обладающий фимбриями гонококк (Pil+) утрачивает их (то есть становится Pil-). Это явление известно как смена фаз роста . Исследования на добровольцах показали, что при введении в
мочеиспускательный канал уретрит вызывают только гонококки, обладающие фимбриями .
• Изменения антигенного состава фимбрий позволяют гонококкам прикрепляться к разным эпителиальным клеткам и уклоняться от иммунного ответа, смена фаз роста - отрываться от эпителиальных клеток и разноситься с кровью по всему организму.
Антигенные свойства
• В настоящее время выделенные штаммы Neisseria gonorrhoeae характеризуют по антигенным свойствам белка РI (серотипирование)
• В отличие от антигенных свойств фимбрий и Ора-белков , антигенные свойства белка PI постоянны у одного штамма и различаются у разных штаммов. Существуют две формы этого белка - белок РIA и белок PIB , каждый штамм содержит только одну из них. Гены, кодирующие белки PIA и PIB, - аллельные варианты одного гена.
• Моноклональные антитела к различным антигенным детерминантам этих белков позволяют разделить гонококков на серотипы: от IA1 до IA24 и от IВ1 до IВ32.
Глава 17. Гонококки
Neisseria gonorrhoeae входят в семейство Neisseriaceae, род Neisseria. Гонококки обнаружены Нейссером в 1879 г. и в честь его названо все семейство.
Морфология. Гонококки - это диплококки, состоящие из двух бобовидных кокков, лежащих вогнутыми сторонами друг к другу (напоминают кофейные зерна). Размер гонококков 1,2-1,3 × 0,7-0,8 мкм. Они полиморфны, наряду с крупными встречаются очень мелкие, неправильной формы L-формы бактерий. Гонококки неподвижны, спор не имеют. В патологическом материале (гное) обнаруживают капсулообразное вещество. Грамотрицательны. Под влиянием лекарственных и других веществ быстро изменяются: появляются грамположительные формы. В патологическом материале располагаются внутриклеточно (в лейкоците), но могут быть вне клетки. Могут находиться в виде отдельных кокков (см. рис. 4).
Культивирование. Гонококки - аэробы. Очень требовательны к питательным средам. Растут на средах, содержащих нативный белок (человеческий) - кровь, сыворотку, при температуре 37° С и рН среды 7,2-7,4. Среды должны быть свежеприготовленными и влажными. Посев следует производить сразу после взятия материала. На сывороточной среде гонококки образуют мелкие колонии 1-2 мм, прозрачные, блестящие с ровными краями, напоминающие капельки росы. На кровяной среде гемолиза не дают. В сывороточном бульоне они дают слабое помутнение и пленку, которая оседает на дно пробирки. При скудном росте через 24 ч посевы оставляют в термостате на вторые сутки.
Ферментативные свойства. Сахаролитические свойства слабо выражены. Гонококки расщепляют только один сахар - глюкозу с образованием кислоты. Протеолитическими свойствами не обладают.
Токсинообразование. В клеточной стенке гонококков имеется токсическая субстанция - липополисахарид (мало изучен).
Антигенная структура. Антигенная структура неоднородна и легко изменяется под влиянием факторов внешней среды. Общепринятого деления гонококков на серовары и серотипы пока нет.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Во внешней среде гонококки мало устойчивы. При температуре 56-60° С они погибают. При температуре 40° С их жизнеспособность резко снижается. Низкие температуры и высушивание их быстро губят. Но в гное они сохраняются до 24 ч. Дезинфицирующие растворы - 1% раствор фенола, сулема 1:1000 убивают гонококки в течение нескольких минут. Особенно гонококки чувствительны к солям серебра - 1% раствор серебра нитрата губит их сразу. УФ-лучи убивают их в течение нескольких минут.
Восприимчивость животных. Животные не чувствительны к гонококку. Однако внутрибрюшинное введение белым мышам гонококкового токсина вызывает их гибель.
Источники инфекции. Больной гонореей человек.
Пути передачи. Контактно-бытовой (половой), реже через зараженные предметы (полотенце, губки и др.).
Заболевания у человека. Гонорея и бленнорея.
Патогенез. Естественным хозяином гонококков является больной человек. Гонококки проникают через слизистые оболочки уретры (у женщин - уретры и шейки матки). Фактором патогенности гонококков является наличие у них пилей, которые, соединяясь с микроворсинками цилиндрического эпителия, способствуют проникновению гонококка внутрь клетки эпителия, обусловливая в слизистой оболочке острый воспалительный процесс.
Клинически гонорея проявляется болями при мочеиспускании, выделениями гноя из уретры и влагалища. Заболевание протекает остро, но иногда переходит в хроническую форму. Гонококки могут вызвать гонорейный конъюнктивит - бленнорею (гнойное воспаление слизистой оболочки глаз у новорожденных). Гонококки редко проникают из уретры в другие органы, но иногда они могут быть причиной артритов, эндокардитов и т. д.
Иммунитет. Естественной резистентности к гонококкам нет. Перенесенное заболевание также не создает иммунитета. Наблюдающийся фагоцитоз носит незавершенный характер.
Профилактика. Санитарное просвещение. Повышение культурно-гигиенического уровня. Специфической профилактики нет. Для профилактики бленнореи детям сразу после рождения обязательно вводят в конъюнктивальный мешок 1-2 капли 30% раствора альбуцида.
Лечение. Антибиотики (пенициллин, бициллин, стрептомицин и др.). Применяют также сульфаниламидные препараты. При хронической форме используют гонококковую вакцину.
1. Опишите морфологические свойства гонококков.
2. Каковы ферментативная активность и токсинообразование гонококков?
3. Какова устойчивость гонококков. К какому препарату гонококки особенно чувствительны?
4. Какие заболевания вызывают гонококки и их патогенез.
Цель исследования: выявление гонококков и противогонококковых антител.
1. Отделяемое слизистой оболочки уретры у мужчин.
2. Отделяемое слизистой оболочки уретры и шейки матки у женщин.
3. Гнойные выделения из глаз.
4. Кровь для получения сыворотки.
Способы сбора материала
Примечание. Для бактериоскопического и бактериологического исследования материал берут: 1) до начала лечения антибиотиками: 2) не ранее чем через 10 дней после окончания лечения антибиотиками; 3) не ранее чем через 2 ч после последнего мочеиспускания; 4) не ранее чем через 2 ч после спринцевания.
1. Микроскопический (главным образом используется при острых формах).
Первый день исследования
Вынимают посевы из термостата и просматривают их. Изучают колонии. Делают мазки. При наличии подозрительных грамотрицательных диплококков колонии пересевают на скошенную среду в пробирках (среда должна быть свежеприготовленной и содержать достаточное количество конденсата) и ставят пробу на оксидазу. Для этого пипеткой на колонию наносят каплю 1% раствора диметилпарафенилендиамина, колонии изменяют цвет от темно-коричневого до черного.
Вынимают посевы из термостата, делают мазки со скошенного агара, окрашивают по Граму и микроскопируют. Засевают на среды Гисса (лактозу, глюкозу, маннит и мальтозу). Эти углеводы должны содержать 30% сыворотки крови. Засеянные пробирки ставят в термостат.
Вынимают пробирки из термостата, при отсутствии роста оставляют их в термостате еще на 1-2 дня. При наличии роста учитывают результаты (табл. 28).
Таблица 28. Дифференциация гонококков от других нейссерий
Третья неделя заболевания. При хроническом течении заболевания и в сомнительных случаях ставят РСК с сывороткой больного (см. главу 12). В качестве антигена используют убитую культуру гонококков, которую готовят в производственных условиях. Можно применить реакцию непрямой гемагглютинации (см. главу 12).
1. Какой материал служит для выявления гонококков и каким способом его получают?
2. Через сколько времени после мочеиспускания (или спринцевания у женщин) можно брать материал для исследования?
3. Какой метод исследования является основным при острой форме и какой - при хронической форме гонореи?
4. Когда и какую серологическую реакцию ставят при подозрении на гонорею?
5. От каких микроорганизмов необходимо дифференцировать гонококки?
Получите у преподавателя препарат. Изучите его и зарисуйте гонококки, расположенные внутри лейкоцита и вне его при окраске по Граму.
Желточная среда. К 100 мл МПА из кроличьего мяса добавляют 15 мл желтка (свежего куриного яйца), 6 мл индикатора фенолового красного, 1,5 мл сахара, растворенного в 1 мл стерильной дистиллированной воды.
Питательная среда асцит-агар. К фильтрату бульона, приготовленного из кроличьего мяса, добавляют 2% агар, 1% пептон и 0,5% хлорид натрия. Нагревают до растворения агара, устанавливают рН 7,4-7,5, подщелачивают 20% гидроксидом натрия. Среду доводят до кипения, фильтруют, разливают в стерильные флаконы и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 115° С.
Рецепты безасцитных питательных сред (МПА рН 7,4-7,5).
1) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл
гидролизата казеина - 2 мл
дрожжевого аутолизата - 2 мл
сыворотки крови крупного рогатого скота - 20 мл
2) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл
5% раствор гемогидролизата - 2 мл
дрожжевого аутолизата - 2 мл
сыворотки рогатого скота - 20 мл
3) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл
желтка куриного яйца - 10 мл
сыворотки крови рогатого скота - 20 мл
Рост гонококков на этих средах обильный. Колонии гонококка могут быть выявлены с помощью пробы на оксидазу, при которой они окрашиваются в красный цвет, переходящий в черный.
Сайт СТУДОПЕДИЯ проводит ОПРОС! Прими участие :) - нам важно ваше мнение.
Способы окраски
Простой способ окраски. Использование одного вида красителя:
1. Растворы метиленового синего, время окраски 3-5 минут
2. Растворы фуксина, время окраски 1-2 минут
3. Растворы бриллиантового зеленого, время окраски 3-5 минут
Данный способ прост в работе, позволяет изучить форму клетки микроорганизмов, взаиморасположение.
Сложные способы окраски позволяют выявить определенные структуры микроорганизмов (капсулы, споры, жгутики, нуклеотид), провести дифференциацию видов микроорганизмов (Грам плюс и Грам минус кислотоустойчивые и некислотоустойчивые). При окраске сложным способом используют 2-3 красителя, протраву, дифференцирующее вещество.
Дифференциация микроорганизмов на Грам положительные и Грам отрицательные основано на различии строения клеточной стенки. У Грам положительных микроорганизмов в клеточную стенку входит многослойный пептидогликан, с которым связаны тейхоевые кислоты. Этот комплекс образует прочное соединение с генцианвиолетом, не разрушающееся при воздействии спирта 96º.
У Грам отрицательных микроорганизмов пептидогликан однослойный, тейхоевых кислот мало, больше фосфолипидов и липопротеидов, что создает непрочное соединение с генцианвиолетом, окрашиваясь дополнительным красителем — фуксином. Используемые красители: карболово-спиртовой генцианвиолет, фуксин Пфейффера. Протравка — раствор Люгеля. Дифференцирующее вещество — 96º этиловый спирт.
Грам положительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет — стафилококки, стрептококки, пневмококки.
Грам отрицательные окрашиваются в малиновый цвет — менингококки, гонококки.
1. На препарат кладут фиолетовую бумажку по Синёву и сверху наносят несколько капель физраствора. Окрашивают 1-2 мин.
2. Снять пинцетом бумажку с препарата, слить в лоток избыток краски
3. Не промывая препарат водой, нанести несколько капель раствора Люголя и держать до почернения препарата примерно 1 минуту.
4. Не промывая препарат водой, нанести сверху раствор 96º этилового спирта; держать до отхождения красителя
5. Промыть физраствором или стерильной дистиллированной водой
6. 
Докрасить фуксином Пфейффера — 3 минуты
7. Промыть физраствором или стерильной дистиллированной водой.
1. Приготовить 2 препарата из микробной культуры.
2. Окрасить простым способом (м/с) и сложным по Граму
3. Провести иммерсионную микроскопию, зарисовать.
1. Морфологические особенности шаровидных форм бактерий.
2. Тинкториальные свойства шаровидных форм бактерий
3. Окраска по Бурри-Гинсу и Ожешко
1. Морфологические структуры, размеры шаровидных форм бактерий
2. Микроскопию шаровидных форм
3. Методики окраски по Бурри-Гинсу и Ожешко
1. Провести микроскопию демонстрационных препаратов шаровидных форм бактерий, зарисовать
2. Приготовить препарат из капсульных бактерий, окрасить по Бурри-Гинсу
3. Провести микроскопию, зарисовать
4. Приготовить препарат из споровой кульуры, окрасить по Ожешко, провести микроскопию, зарисовать.
Шаровидные бактерии — кокки имеют средний диаметр около 1 мкм. В зависимости от их расположения в мазке, что определяется характером деления клеток, патогенные кокки подразделяются на локки (двойной), стрептококки (цепочечный) и стафилококки (виноградная гроздь). Диплококки и стрептококки делятся в одной плоскости, но остаются соединенными цитоплазматическими мостиками. К диплококкам относятся:
1. Пневмококки — диплококки ланцетовидной формы
2. Менингококки — диплококки бобовидной формы
3. Гонококки — диплококки бобовидной формы.
Стафилококки делятся в двух плоскостях и образуют скопления клеток, напоминающие грозди.
Непатогенные кокки располагаются беспорядочно (микрококки) тетрадами и пакетами по 8-16 особей (сарцины). Тетракокки и сарцины делятся в двух-трех плоскостях.
Спор и жгутиков патогенные кокки не образуют. Капсулы имеют только некоторые кокки, например пневмококки.
Гр +: стафилококки, стрептококки, пневмококки
Гр -: менингококки, гонококки
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
Презентация на тему: " Микробиологическая диагностика заболеваний, передающихся половым путем (ИППП) Сифилис, гонорея, урогенитальный хламидиоз." — Транскрипт:
1 Микробиологическая диагностика заболеваний, передающихся половым путем (ИППП) Сифилис, гонорея, урогенитальный хламидиоз
2 ГОНОРЕЯ Гонорея – венерическое заболевание, характеризующееся воспалением слизистых оболочек преимущественно урогенитальной системы и склонностью к хроническому течению
3 Таксономическое положение возбудителя гонореи Семейство Neisseriaceae Род Neisseria Вид Neisseria gonorrhoeae (N.gonorrhoeae )
4 Морфология N.gonorrhoeae Грамотрицательные диплококки бобовидной формы, их размеры 1,0-1,3 х 0,6-0,8 мкм, неподвижные, спор не образуют, имеют пили, в организме образуют нежную капсулу
5 Гонококки в электронном микроскопе и в гное
6 Гонококк в гное, окраска по Леффлеру (метиленовым синим) и по Граму Видны внутриклеточно расположенные диплококки в форме кофейныхзерен
7 Культуральные свойства гонококков Аэробы Растут на питательных средах с добавлением крови, сыворотки, асцитической жидкости в присутствие 5- 10% СО2
8 Факторы патогенности 1. Пили - основной фактор адгезии и колонизации. Пили повышают устойчивость возбудителей к фагоцитозу.1. Пили - основной фактор адгезии и колонизации. Пили повышают устойчивость возбудителей к фагоцитозу. 2. Р1(порин) - главный белковый компонент наружной мембраны способен встраиваться в мембрану эпителиальных клеток человека, формируя в ней каналы. Этот процесс, по- видимому, служит первым этапом эндоцитоза - проникновения возбудителя в эпителиальные клетки.2. Р1(порин) - главный белковый компонент наружной мембраны способен встраиваться в мембрану эпителиальных клеток человека, формируя в ней каналы. Этот процесс, по- видимому, служит первым этапом эндоцитоза - проникновения возбудителя в эпителиальные клетки. 3. Ора-белки - обладают адгезивностью, участвуя во взаимодействии с фагоцитами. 4. Капсула - является антифагоцитарным фактором, защищает клеточную стенку возбудителя от непосредственного контакта с бактерицидными веществами крови, маскирует антигенные детерминанты гонококка.4. Капсула - является антифагоцитарным фактором, защищает клеточную стенку возбудителя от непосредственного контакта с бактерицидными веществами крови, маскирует антигенные детерминанты гонококка. 5. IgA-протеазы - разрушают IgA-антитела, защищающие слизистые оболочки, тем самым облегчая адгезию гонококков на клетках эпителия. Одновременно понижается активность фагоцитоза, опосредованного антителами.5. IgA-протеазы - разрушают IgA-антитела, защищающие слизистые оболочки, тем самым облегчая адгезию гонококков на клетках эпителия. Одновременно понижается активность фагоцитоза, опосредованного антителами. 6. Эндотоксин (ЛПС)6. Эндотоксин (ЛПС)
9 Антигенные свойства Антигенными свойствами обладают все поверхностные белки Фимбрии состоят из множества одинаковых белковых субъединиц. Эта субъединица называется пилином и имеет молекулярную массу около В составе пилина есть консервативные и вариабельные участки. Перестройки хромосом, ведущие к экспрессии любого из множества неактивных генов пилина, сопровождаются изменениями антигенного состава фимбрийпилиномпилина Другие перестройки хромосом приводят к тому, что обладающий фимбриями гонококк (Pil+) утрачивает их (то есть становится Pil-). Это явление известно как смена фаз роста. Исследования на добровольцах показали, что при введении в мочеиспускательный канал уретрит вызывают только гонококки, обладающие фимбриями.смена фаз ростауретритфимбриями Изменения антигенного состава фимбрий позволяют гонококкам прикрепляться к разным эпителиальным клеткам и уклоняться от иммунного ответа, смена фаз роста - отрываться от эпителиальных клеток и разноситься с кровью по всему организму.смена фаз роста
10 Антигенные свойства В настоящее время выделенные штаммы Neisseria gonorrhoeae характеризуют по антигенным свойствам белка РI (серотипирование)белка РI В отличие от антигенных свойств фимбрий и Ора-белков, антигенные свойства белка PI постоянны у одного штамма и различаются у разных штаммов. Существуют две формы этого белка - белок РIA и белок PIB, каждый штамм содержит только одну из них. Гены, кодирующие белки PIA и PIB, - аллельные варианты одного гена.фимбрий Ора-белковбелка PIбелок РIAбелок PIB Моноклональные антитела к различным антигенным детерминантам этих белков позволяют разделить гонококков на серотипы: от IA1 до IA24 и от IВ1 до IВ32.
11 Гонококки на поверхности лимфоцита Гонококк может подавлять размножение и активность лимфоцитов, прикрепляясь к определенным белкам на их поверхности
12 Электронная микрофотография гранулоцита человека, распознавшего Neisseria gonorrhoeae (зеленые) в отсутствии специфических ат. Стимуляция клеточных рецепторов вызывает изменения в мембране клетки, способствующие захвату патогена.
13 Электронная микроскопия: микроколонии N. gonorrhoeae (голубые) атакуют эпителиальные клетки человека.
16 Входные ворота инфекции - цилиндрический эпителий уретры, цервикального канала, реже - прямой кишки, глотки и конъюнктивы глаза.Входные ворота инфекции - цилиндрический эпителий уретры, цервикального канала, реже - прямой кишки, глотки и конъюнктивы глаза. Гонококки прикрепляются к специализированным рецепторам эпителиального слоя и проникают в эпителиоциты путем активного эндоцитоза. Гонококки прикрепляются к специализированным рецепторам эпителиального слоя и проникают в эпителиоциты путем активного эндоцитоза. В эндосомах возбудители размножаются; часто несколько эндосом, находящихся в клетке, объединяются в одну большую вакуоль, где бактерии продолжают размножаться. Вакуоли сливаются с базальной мембраной и гонококки попадают в субэпителиальную соединительную ткань.В эндосомах возбудители размножаются; часто несколько эндосом, находящихся в клетке, объединяются в одну большую вакуоль, где бактерии продолжают размножаться. Вакуоли сливаются с базальной мембраной и гонококки попадают в субэпителиальную соединительную ткань. Развивается воспалительный процесс, который имеет гнойный характер, в зону инфекции мигрирует огромное количество нейтрофилов, фагоцитирующих возбудителей.Развивается воспалительный процесс, который имеет гнойный характер, в зону инфекции мигрирует огромное количество нейтрофилов, фагоцитирующих возбудителей. В результате цитотоксического действия возбудителей происходит гибель и слущивание эпителиальных клеток, гонококки распространяются, продвигаясь по слизистой оболочке мочеполовых путей и по лимфатическим сосудам.В результате цитотоксического действия возбудителей происходит гибель и слущивание эпителиальных клеток, гонококки распространяются, продвигаясь по слизистой оболочке мочеполовых путей и по лимфатическим сосудам. Первоначально инфекция поражает нижние отделы мочеполового тракта - область входных ворот и нередко прилежащие органы.Первоначально инфекция поражает нижние отделы мочеполового тракта - область входных ворот и нередко прилежащие органы. Далее развивается как восходящая инфекцияДалее развивается как восходящая инфекция Патогенез гонореи
17 При внегенитальных входных воротах наблюдается проктит, фарингит, конъюнктивит. Возможно проникновение возбудителей в кровоток и занос их в различные органы и ткани. У 1-2% больных развивается диссеминированная гонорейная инфекция, для которой характерны артриты и другие поражения костно-мышечной системы, эндокардит, менингит, сепсис и др.При внегенитальных входных воротах наблюдается проктит, фарингит, конъюнктивит. Возможно проникновение возбудителей в кровоток и занос их в различные органы и ткани. У 1-2% больных развивается диссеминированная гонорейная инфекция, для которой характерны артриты и другие поражения костно-мышечной системы, эндокардит, менингит, сепсис и др. Внегенитальные поражения
18 Фарингит Фарингит Бленнорея новорожденных Конъюктивит Внегенитальные поражения
19 Иммунитет При гонорее развиваются реакции гуморального и клеточного иммунитета. Противогонококковые антитела появляются в сыворотке крови на 5-7-й день болезни, пик титра антител наблюдается на 14-й день, затем титр постепенно уменьшается. Наибольшая роль в защите при инфицировании принадлежит факторам местного иммунитета, секреторным иммуноглобулинам sIgA, Стойкий постинфекционный иммунитет не развивается, возможны повторные заражения (реинфекция).
20 Эпидемиология Источник – больной человек, как правило, с бессимптомной формой инфекции Пути передачи: Основной – половой Поражение глаз у взрослых возникает вследствие заноса возбудителей руками с мочеполовых органов Инфицирование новорожденных при прохождении плода по родовым путям (бленнорея) Возможно также бытовое заражение девочек при нарушении гигиенических правил ("горшечная" инфекция, пользование общими предметами личной гигиены, например губками, и пр.).
21 Микробиологическая диагностика гонореи Исследуемые материалы: гной из уретры, слизь из шейки матки, отделяемое других пораженных слизистых оболочек, осадок мочи, пунктат из суставах (при артрите), кровь. Методы диагностики: 1. Микроскопический 2. Бактериологический. 3. Серологические тесты для выявления Аг гонококка в клиническом материале – МИФ, ИФА 4. Полимеразная цепная реакция - ПЦР
22 Микроскопическая диагностика острой гонореи Исследуемый материал (гной из уретры) красят по Граму и Леффлеру. При положительном результате в поле зрения препарата видны многочисленные лейкоциты и диплококки бобовидной формы, расположенные преимущественно внутри лейкоцитов. При свежей острой гонореи этот метод является окончательным.
23 Микроскопический метод диагностики Диплококки внутри лейкоцитов!
24 Бактериологический метод диагностики гонореи Исследуемый материал засевают на элективные питательными средами в чашки Петри, инкубируют при 37 С в атмосфере 10% СО2 2-5 суток. Выросшие колонии напоминают капли росы (вирулентные штаммы). Далее получают чистую культуру, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам, определяют чувствительность к антибиотикам.
25 Тест на оксидазу
26 Экспресс метод – прямой ИФ
27 Лечение Свежая острая гонорея хорошо поддается лечению антибиотиками. Применяют антибиотики группы пенициллина, тетрациклины, хинолоны. Проблема - в развитии резистентности гонококковСвежая острая гонорея хорошо поддается лечению антибиотиками. Применяют антибиотики группы пенициллина, тетрациклины, хинолоны. Проблема - в развитии резистентности гонококков Трихопол – назначается в связи со способностью гонококков размножаться в организмах простейшихТрихопол – назначается в связи со способностью гонококков размножаться в организмах простейших При непереносимости антибиотиков назначают комбинированные сульфаниламидные препараты.При непереносимости антибиотиков назначают комбинированные сульфаниламидные препараты. Следует учитывать, что в 30% случаев одновременно могут обнаруживаться хламидииСледует учитывать, что в 30% случаев одновременно могут обнаруживаться хламидии Одновременно с антибиотикотерапией для повышения резистентности организма применяют иммунотерапию. Проводят курс лечения гоновакциной (взвесь убитых гонококков), вводят различные иммуномодулирующие препараты.Одновременно с антибиотикотерапией для повышения резистентности организма применяют иммунотерапию. Проводят курс лечения гоновакциной (взвесь убитых гонококков), вводят различные иммуномодулирующие препараты.
Читайте также: