Иммуноблот на сифилис в инвитро

Анализ на сифилис давно стал частью рутинного медицинского обследования. Его обязательно назначают при беременности, перед госпитализацией. Результаты анализа часто требуют при приеме на работу или в ходе диспансеризации. Сегодня диагностика сифилиса находится на высоком уровне развития, но искоренить болезнь окончательно не удается — каждый год выявляют тысячи новых случаев заболевания.

Так ли страшен сифилис, как о нем говорят?

Сифилис вызывает бактерия Treponema pallidum, или бледная трепонема. Попадая в организм, она постепенно поражает все органы. Причем вне организма трепонема быстро погибает. Дезинфицирующие, моющие средства и даже обычный солнечный свет губительно воздействуют на нее. Эта бактерия может долго сохраняться только во влажных условиях и при замораживании.

Первый симптом сифилиса — сифилома. Уплотнение на коже, на котором появляется эрозия или язвочка. Она возникает в том месте, где трепонема проникла в организм. Чаще всего это кожа половых органов и промежности.

Через некоторое время язвочка бесследно проходит и человек часто думает, что полностью излечился. Но примерно через 1,5 месяца на коже появляется сыпь в виде розовых небольших пятен. Это стадия вторичного сифилиса, которая может длиться несколько лет.

Если и на этой стадии человек не проходит лечение, развивается третичный сифилис. Болезнь поражает все органы и ткани, появляются гуммы — плотные узлы, которые разрушаются и оставляют грубые рубцы.

Самые серьезные осложнения сифилиса — нейросифилис, поражение внутренних органов, воспаление суставов. Особенно тяжело протекает врожденный сифилис. Если во время беременности женщина переносит это заболевание, то примерно в 25% случаев ребенок погибает на 6–7 месяце беременности, еще в 14% — сразу после рождения [2] . А у выжившего младенца развиваются тяжелые поражения кожи, легких, печени и внутренних органов.

На рубеже XX–XXI веков Россия пережила вспышку сифилиса. За 2000 год было выявлено более 239 тысяч новых заболевших. После этого заболеваемость начала снижаться. В 2005 году новых заболевших было 97,9 тысяч, в 2010 — 63,7 тысяч, а в 2015 — только 34,4 тысячи. В феврале 2017 года за один месяц в России выявлено 2300 новых случаев сифилиса [3] . Но, к сожалению, как говорят специалисты, реальное количество заболевших примерно в 3–4 раза больше.

Сифилис до сих пор является распространенной болезнью в том числе и из-за проблем диагностики. Первичная сифилома не вызывает боли и самостоятельно бесследно заживает, поэтому далеко не все обращаются к врачу. Сыпь во вторичном периоде не вызывает боли, зуда и шелушения, проходит сама и не оставляет следов. В третичном периоде количество антител против этой инфекции может снижаться настолько, что не обнаруживается серологическими тестами. Есть проблемы и с обследованием половых партнеров — далеко не все готовы раскрыть врачу историю своих любовных похождений и пригласить своих партнеров на обследование.

Стоит помнить, что любые высыпания, особенно возникшие на половых органах — повод обратиться к дерматовенерологу и пройти обследование.

Для беременных и доноров анализ на сифилис обязателен. Для некоторых работающих (госслужащие, военнослужащие, медицинские работники, повара) предоставление результатов данного исследования обязательно при поступлении на работу и затем каждый год при диспансеризации.

Анализ также сдают перед плановой операцией, при поступлении в стационар или при обращении к врачу с симптомами, характерными для этого заболевания.

Основная часть методов диагностики предполагает анализ сыворотки крови. Из нее выделяют антитела к трепонеме и ДНК возбудителя. Сами трепонемы чаще обнаруживают в соскобах с высыпаний, которые появляются при сифилисе.

Для выявления ДНК трепонемы также могут проводить исследование мочи, эякулята, соскоба со слизистых оболочек, спинномозговой жидкости, клеток кожи или конъюнктивы глаза. То есть биоматериала из тех органов, которые могут быть поражены сифилисом.

В зависимости от вида исследования кровь могут брать из вены или из пальца. Некоторые исследования желательно проводить натощак, для других достаточно не есть 4 часа до забора биоматериала.

Материал для выявления ДНК трепонемы лучше собирать до начала антибактериальной терапии. Спинномозговую жидкость забирают только в стационаре в стерильную емкость. Соскоб со слизистых оболочек, с поверхности кожи или глаза не требует особой подготовки. Его может взять врач или специалист лаборатории.

Женщинам, перед тем как сдавать анализ на сифилис из влагалища, желательно воздержаться от спринцевания, половых контактов, диагностических гинекологических манипуляций хотя бы в течение двух суток.

Исследования на сифилис разделяют на две группы — выявление трепонемы или косвенных следов ее присутствия. Для выявления возбудителя заболевания исследуют материал с язвы или из пораженных органов. Эти методы эффективны уже при первых признаках болезни.

Серологические исследования можно проводить примерно через 8–9 дней после появления первичной язвы. То есть сдавать анализ на сифилис сразу после полового контакта бесполезно.

К прямым методам относят темнопольную микроскопию, ПЦР и RIT-тест. Темнопольная микроскопия — это быстрое исследование, которое занимает один рабочий день. Его достоверность — 100%. Но при выраженном воспалении, кровоточивости, при травме элемента или после начала наружного лечения обнаружить живые трепонемы становится почти невозможно.

Микроскопия практически полностью уступила место ПЦР-диагностике. Метод ПЦР позволяет выделить участки ДНК трепонемы в соскобах с кожи и слизистых, из другого биологического материала.

Специфичность ПЦР диагностики приравнивается к 100%. Чувствительность зависит от расходных материалов, которые используются в лаборатории.

RIT-тест — это биологический метод, при котором материал от заболевшего человека прививают лабораторным кроликам. Этот метод очень точен, но сейчас используется только в исследовательских целях. Во-первых, это дорого. Во-вторых, ждать, пока у животного появятся признаки заболевания, слишком долго. Поэтому рассматривать его как реальную альтернативу другим методам диагностики нет смысла.

Непрямые методы позволяют выявить в крови признаки присутствия трепонемы — различные виды антител. Они разделяются на специфические и неспецифические.

РПР-тест (RPR) , или тест с быстрыми плазменными реагинами — это современный зарубежный аналог реакции микропреципитации. К этой же группе относится исследование с толуидиновым красным.

Все эти методы обладают хорошей чувствительностью, но могут давать положительные результаты при отсутствии заболевания. Поэтому если одна из этих проб оказалась положительной, проводятся подтверждающие тесты. К ним относят РСКт, РИТ, ИФА, РИФ, РПГА и иммуноблот.

ИФА и РПГА — это специфичные (100%), чувствительные (95%) и незатратные методы. Эти реакции иногда дают ложный положительный результат при воспалении и некоторых нарушениях обменных процессов. Поэтому чтобы поставить диагноз, нужны результаты минимум двух тестов.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и иммобилизации бледных трепонем (РИТ) — это специфичные, но достаточно дорогие методы. На практике они почти не используются.

Реакция связывания комплимента с трепонемным антигеном (РСКт) является более точным аналогом реакции Вассермана. В ней анализируется антиген, характерный только для бледной трепонемы.

Еще одним подтверждающим тестом является иммуноблот . Этот метод используется для углубленной диагностики в сомнительных случаях. В отличие от других анализов, которые могут быть готовы за 1–2 рабочих дня, результата иммуноблота придется ждать около недели.

Цена анализа на сифилис зависит от его вида. Скрининговые реакции, такие как РМП или RPR, обойдутся примерно в 320–380 рублей. Определение ДНК в различных субстратах от соскобов со слизистых оболочек до спинномозговой жидкости стоит около 350–450 рублей. Стоимость зависит от ценовой политики лаборатории и используемых расходных материалов. Чем более чувствителен тест, тем больше будет его цена.

ИФА анализ на сифилис стоит приблизительно 500–800 рублей в зависимости от модификации метода. За иммуноблот придется отдать около 1600–1700 рублей. Другие методы исследования практически не используются в реальной практике.

Кровь для исследования на сифилис можно сдать в любой поликлинике или лаборатории. Преимущество поликлиники в том, что биоматериал на анализ по направлению можно сдать бесплатно. Это актуально при обследовании перед плановой госпитализацией, при диспансеризации или если человек устраивается на работу. Минус — время ожидания, в некоторых случаях отсутствие современного оборудования и относительная открытость информации.

Если результат нужен быстро, точно и строго конфиденциально, возможно, стоит обратиться в частные лаборатории. За такой анализ придется заплатить, но при этом есть возможность выбрать метод исследования, а результат в большинстве случаев будет готов уже через 1–2 дня. Для особенно нетерпеливых есть возможность заказать экстренное проведение исследования и получить результаты уже через 2 часа.

Некоторые лаборатории проводят такие исследования на условиях анонимности: личные данные пациента не фигурируют даже в бланке направления. Результат такого анализа нельзя предъявить в больницу или работодателю, но зато можно не беспокоиться за раскрытие личных данных.

Обязательно обратите внимание на метод исследования. Вместо морально устаревшей RW желательно выбирать более современные тесты — РМП или RPR и их аналоги. При ПЦР исследовании обратите внимание на чувствительность метода, количество копий ДНК в образце, при котором тест сработает как положительный.

Сифилис — заболевание, которое может вызвать многочисленные осложнения. Но оно развивается достаточно медленно. Это значит, что у человека есть время, чтобы сдать биоматериал на анализы и пройти лечение до того, как последствия станут необратимыми.

Исследование, направленное на диагностику антител к Treponema pallidum класса IgG методом иммуноблотинга в целях диагностики или подтверждения сифилиса, а также для дифференциальной диагностики свежеприобретенного и давнего инфицирования T. рallidum.

Антитела класса IgG к возбудителю сифилиса; иммуноглобулины класса G к антигенам Тreponema pallidum.

Синонимы английские

Syphilis IgG; anti-Treponema pallidum, IgG; anti-TP IgG; antibodies to Т. pallidum, IgG; immunoblotting.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Сифилис является одним из наиболее распространенных инфекционных заболеваний, передающимся преимущественно половым путем при непосредственном контакте с сифилитической язвой (твердым шанкром). Возможен и вертикальный путь передачи от инфицированной матери к плоду, а также через кровь и реже при контакте с контаминированными предметами. Источником инфекции является больной человек, возбудитель инфекции – Treponema pallidum (T. pallidum), семейство Spirochaetaceae, род Treponema.

Соответственно клиническому течению заболевания, классифицируют несколько стадий сифилиса: первичную, вторичную, латентную и третичную. Первичный сифилис возникает на 14-21-й день заражения и проявляется возникновением твердого шанкра в месте контакта и проникновения возбудителя. Твердый шанкр представляет собой одну или несколько безболезненных язв, исчезающих в течение 2-6 недель без лечения. Возможно также увеличение регионарных лимфатических узлов. Вторичный сифилис диагностируется на 4-8-й неделе от момента появления твердого шанкра или на 2-3-й месяц после заражения. Для него характерны следующие клинические проявления: розеолезно-папулезная сыпь преимущественно на ладонях и стопах, энантема на слизистых оболочках, слабость, лихорадка, головная боль, генерализованная лимфоаденопатия, тонзиллит, фарингит. Далее симптомы исчезают и инфекция переходит в латентную форму, возможно с возникновением рецидивов. При нелеченном заболевании развивается третичный сифилис, проявляющийся поражением нервной системы, сердечно-сосудистой системы, костно-суставного аппарата.

Клиническая лабораторная диагностика играет важную роль в диагностике сифилиса в сочетании с эпидемиологической и клинической картинами заболевания. Чаще всего используются серологические методы лабораторной диагностики, основанные на выявлении антител.

Различают нетрепонемные и трепонемные тесты. Нетрепонемные тесты направлены на выявление антител к кардиолипину, фосфолипиду, компоненту клеточной и митохондриальной мембран бактерий. Трепонемные тесты выявляют антитела, направленные конкретно против антигенов, компонентов бактерий T. pallidum. К ним относятся реакция пассивной гемагглютинации, реакция иммунофлуоресценции, метод иммуноферментного анализа и метод иммуноблотинга.

Метод иммуноблотинга используется в качестве теста второй линии для подтверждения скрининговых методов исследования или в качестве дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований. Он основан на определении антител классов IgM и IgG к молекулам-антигенам, разделенным с помощью метода электрофореза в соответствии с их молекулярной массой. Диагностическая чувствительность метода составляет 99 %, диагностическая специфичность – 100 %.

Известно несколько липопротеинов-антигенов наружной клеточной мембраны T. рallidum, которые обладают наибольшей иммуногенностью и играют важную роль в серологической диагностике сифилиса методом иммуноблотинга. К ним относятся следующие специфичные мембранные белки: Tp15 (15 кДа), Tp17 (17 кДа), Tp45 (45 кДа), Tp47 (47 кДа). Иммуноглобулины класса G к T. pallidum появляются в крови через 3-4 недели после инфицирования. Их количество постепенно увеличивается, начиная преобладать на шестой неделе заболевания над уровнем иммуноглобулинов IgM. Антитрепонемные антитела класса IgG могут сохраняться на определённом уровне в течение месяцев и лет. Уровень данных антител нарастает в зависимости от длительности заболевания.

Антитела к антигенам трепонем класса IgG играют важную роль в диагностике первичного, вторичного, третичного и латентного сифилиса. Для подтверждения ранее диагностированного инфицирования T. pallidum рекомендуется определение антител класса IgG через один-два месяца после обнаружения антител класса IgM, но обязательно в свежем образце крови. По некоторым данным, антитела класса IgGк Tp17, Tp45 и Tp47 обнаруживаются при первичном сифилисе на его более поздних стадиях. Анти-Tp45 и анти-Tp47 IgG чаще встречаются при латентной форме сифилиса. Через 24 месяца после проведенной патогенетической терапии у пациентов с первичным и вторичным сифилисом антитела класса IgGметодом иммуноблотинга не детектируются.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики сифилиса;
• для подтверждения скрининговых методов исследования;
• для дополнительной диагностики сифилиса при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
• для дифференциальной диагностики свежеприобретенного и давнего инфицирования T. рallidum;
• для диагностики первичного, вторичного, латентного и третичного сифилиса;
• для профилактического обследования беременных женщин;
• для оценки проведенной патогенетической терапии сифилиса.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на сифилис и при симптомах данного заболевания: наличие твердого шанкра, генитальных язв, лимфоаденопатии, слабости, лихорадки, розеолезно-папулезной сыпи преимущественно на ладонях и стопах, энантемы на слизистых оболочках;
• при подтверждении скрининговых методов исследования и для дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
• при наличии полового партнера, больного сифилисом;
• при ведении беременностив целях профилактического обследования беременных женщин желательно на первом приеме гинеколога, при постановке на учет в женской консультации;
• при лечении от другого заболевания, передающегося половым путем;
• при определении точной причины заболевания, при наличии неспецифических симптомов, схожих с признаками сифилиса;
• если пациент был инфицирован, он должен повторить анализы на сифилис через 3, 6, 12 и 24 месяца для оценки проведенной патогенетической терапии против сифилиса.

Что означают результаты?

Мембранный белок TpN47: отрицательный.

Мембранный белок TpN17: отрицательный.

Мембранный белок TpN15: отрицательный.

• первичный, вторичный, третичный сифилис;
• латентный сифилис.

• отсутствие сифилиса;
• проведение диагностики на раннем сроке, когда не сформировался иммунный ответ против возбудителя T. рallidum;
• поскольку антитела IgG к T. pallidum могут свободно проникать через плаценту, положительный результат у младенцев не является основанием для постановки диагноза "врождённый сифилис";
• отсутствие антител класса IgG у младенца, родившегося от инфицированной матери, не исключает наличия врождённого заболевания, поскольку на момент исследования антитела могут ещё не сформироваться.

Что может влиять на результат?

• Возможно получение ложноположительного результата при наличии ВИЧ-инфекции, болезни Лайма, малярии, аутоиммунных заболеваний, в частности системной красной волчанки, при атипичной пневмонии, у людей, употребляющих наркотики внутривенно, у пожилых.



• Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, с учетом анамнеза, клинических данных, результатов лабораторного обследования.
• Для подтверждения ранее диагностированного инфицирования T. pallidum рекомендуется определение антител класса IgG через один-два месяца после обнаружения антител класса IgM, но обязательно в свежем образце крови.
• Отрицательный результат иммуноблотинга не исключает наличие сифилиса.
• Если у пациента выявлено инфицирование, ему необходимо поставить в известность и своего сексуального партнера (партнершу), чтобы он (она) тоже прошел обследование и при необходимости лечение.

39 Treponema pallidum, IgG, титр

23 Treponema pallidum, IgM, титр

31 Treponema pallidum, антитела

56 Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр

42 Treponema pallidum, IgG в ликворе

9 Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр

99 anti-Treponema pallidum, IgM (иммуноблот)

Кто назначает исследование?

Дерматолог, дерматовенеролог, гинеколог, уролог, инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр.

В онлайн-лаборатории Lab4U мы хотим, чтобы каждый из вас мог заботиться о своем здоровье. Для этого мы просто и понятно рассказываем о показателях организма.

Что такое антитела? И как расшифровать результаты анализа?

Антитела — это белки, которые иммунная система вырабатывает в ответ на проникновение инфекции. В лабораторной диагностике именно антитела служат маркером проникновения инфекции. Общим правилом подготовки к анализу на антитела является сдавать кровь из вены натощак (после приема пищи должно пройти не менее четырех часов). В современной лаборатории сыворотку крови исследуют на автоматическом анализаторе с использованием соответствующих реагентов. Иногда серологический анализ на антитела является единственным способом диагностики инфекционных заболеваний.

Анализы на инфекции могут быть качественными (дают ответ, есть ли инфекция в крови) и количественными (показывают уровень содержания антител в крови). Норма антител для каждой инфекции своя (для некоторых их не должно быть совсем). Референсные значения (показатели нормы) антител можно получить с результатом анализа.
В онлайн-лаборатории Lab4U можно сдатькомплекс анализов на все TORCH-инфекции за один раз и со скидкой 50%!

Различные классы антител IgG, IgM, IgA

Иммуноферментный анализ определяет антитела инфекций относящиеся к различным классам Ig (G, A, M). Антитела к вирусу, при наличии инфекции, определяются на очень ранней стадии, что обеспечивает эффективную диагностику и контроль течения заболеваний. Самые распространенные методы диагностики инфекций — это тесты на антитела класса IgM (острая фаза течения инфекции) и антитела класса IgG (устойчивый иммунитет к инфекции). Эти антитела определяют для большинства инфекций.

Однако, один из самых распространенных анализов — госпитальный скрининг (анализы на ВИЧ, сифилис и гепатиты B и С) не дифференцирует тип антител, поскольку наличие антител к вирусам данных инфекций автоматически предполагает хроническое течение заболеваний и является противопоказанием, например, для серьезных хирургических вмешательств. Поэтому важно опровергнуть или подтвердить диагноз.

Детальную диагностику типа и количества антител при диагностированном заболевании можно сделать, сдав анализ на каждую конкретную инфекцию и тип антител. Первичная инфекция выявляется при обнаружении диагностически значимого уровня антител IgM в образце крови или значимым ростом числа антител IgA или IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом 1-4 недели.

Реинфекция, или повторная инфекция, выявляется быстрым подъемом уровня антител IgA или IgG. Антитела IgA имеют более высокую концентрацию у пациентов старшего возраста и более точно диагностируют текущую инфекцию у взрослых.

Перенесенная инфекция в крови определяется как повышенные антитела IgG без роста их концентрации в парных образцах, взятых с интервалом 2 недели. При этом отсутствуют антитела классов IgM и А.

Антитела IgM

Их концентрация повышается вскоре после заболевания. Антитела IgM определяются уже через 5 дней после его начала и достигают пика в промежутке от одной до четырех недель, затем снижаются до диагностически незначительных уровней в течение нескольких месяцев даже без проведенного лечения. Однако, для полной диагностики недостаточно определения только антител класса М: отсутствие этого класса антител еще не говорит об отсутствии заболевания. Острой формы заболевания нет, но может быть хроническая.

Антитела IgM имеют большое значение в диагностике гепатита А и детских инфекций (краснуха, коклюш, ветрянка), легко передающихся воздушно-капельным путем, так как важно как можно раньше выявить заболевание и изолировать заболевшего.

Антитела IgG

Основная роль антител IgG — это длительная защита организма от большинства бактерий и вирусов — хотя их выработка происходит более медленно, но ответ на антигенный раздражитель сохраняется более устойчивым, чем у антител класса IgM.

Уровни антител IgG повышаются медленнее (через 15-20 дней после начала заболевания), чем IgM, но остаются повышенными дольше, поэтому могут показывать давно текущую инфекцию при отсутствии IgM АТ. IgG могут находиться на низком уровне в течение многих лет, но, при повторном воздействии того же антигена, уровень антител IgG быстро повышается.

Для полной диагностической картины необходимо определить антитела IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA, подтверждение осуществляется определением IgM. В случае положительного результата и для точной диагностики второй анализ, сделанный через 8-14 дней после первого, должен быть проверен параллельно для определения роста концентрации IgG. Результаты анализа должны интерпретироваться в комплексе с информацией, полученной в других диагностических процедурах.

Антитела IgG, в частности, используются для диагностики Helicobacter pylori — одной из причин язвы и гастрита.

Антитела IgA

В сыворотке появляются через 10-14 дней после начала заболевания, и вначале их даже можно обнаружить в семенной и вагинальной жидкостях. Уровень антител IgA обычно снижается к 2-4 месяцу после инфицирования в случае успешного лечения. При повторном инфицировании уровень антител IgA вновь возрастает. Если уровень IgA не падает после проведенного лечения, то это — признак хронической формы инфекции.

Анализ на антитела в диагностике TORCH-инфекций

Аббревиатура TORCH появилась в 70-х годах прошлого столетия, и состоит из заглавных букв латинских названий группы инфекций, отличительной особенностью которых является то, что при относительной безопасности для детей и взрослых, TORCH инфекции при беременности представляют чрезвычайную опасность.

Анализ крови на TORCH инфекции является комплексным исследованием, в его состав входит 8 тестов:

Нередко, заражение женщины инфекциями TORCH-комплекса во время беременности (наличие в крови только антител IgM) является показанием для ее прерывания.

В заключение

Иногда, обнаружив в результатах анализа антитела IgG, например, токсоплазмоза или герпеса, пациенты приходят в панику, не посмотрев на то, что антитела IgM, которые показывают наличие текущей инфекции, могут отсутствовать вовсе. В этом случае анализ говорит о перенесенной ранее инфекции, к которой выработался иммунитет.

В любом случае, интерпретацию результатов анализа лучше доверить врачу, и с ним же в случае необходимости определиться с тактикой лечения. А сдать анализы вы можете доверить нам.

Почему быстрее, удобнее и выгоднее сдавать анализы в Lab4U?

Вам не нужно долго ждать в регистратуре

Все оформление и оплата заказа происходит онлайн за 2 минуты.

Путь до медцентра не займет более 20 минут

Наша сеть вторая по величине в Москве, а еще мы есть в 23 городах России.

Сумма чека не шокирует вас

Постоянная скидка в 50% действует на большинство наших анализов.

Вам не придется приходить минута-в-минуту или ждать в очереди

Сдача анализа происходит по записи в удобный промежуток времени, например с 19 до 20.

Вам не придется долго ждать результатов или ходить за ними в лабораторию

Мы пришлем их на эл. почту в момент готовности.

Иммуноблот на сифилис – относительно новый метод серологического исследования крови. В последние годы получил развитие и активное применение с целью эффективной и надежной диагностики сифилиса.

Иммуноблот — современный высокоточный безопасный диагностический тест, позволяющий с точностью подтвердить или опровергнуть диагноз сифилитической инфекции. С помощью данного метода в плазме крови определяется наличие и уровень антител (Ig М и Ig G), которые иммунная система человека продуцирует в ответ на внедрение инфекции.

Кроме того, анализ отличает высокая чувствительность и специфичность при стертом бессимптомном течении сифилиса. Иммуноблот используется только с диагностической целью и не подходит для контролирования процесса лечения.

Описание метода

В ходе линейного иммуноблоттинга бледную трепонему (выделенную из инактивированных штаммов или при помощи генной инженерии) способом гелевого электрофореза разделяют на специфические растворимые антигены (белки), глико- и липопротеины согласно их молекулярным размерам. Затем разделенные белки (антигены) транспортируют на специальную нитроцеллюлозную мембрану, где происходит обработка точек исследуемой сывороткой крови и иммуноглобулинами.

Если антитела присутствуют в крови больного, на тесте образуются полоски. Учитывая визуально их расположение и интенсивность, судят о результатах.

• Отрицательный: для антител класса IgG и IgМ – полос нет;
• Неопределенный: для антител класса IgМ – одна нечеткая полоса, для IgG – четкая;
• Положительный: для антител класса IgМ – одна и более четкая полоса, для IgG – две и более четкие полосы.

Положительный результат свидетельствует о недавнем инфицировании. Последующий положительный анализ на определение IgG, проведенный на 1-1,5 месяца позже, подтверждает данный факт.

Наличие IgM у новорожденных детей указывает на диагноз сифилитической инфекции, так как передача материнских IgM через плаценту во время беременности исключена.

Отрицательный ответ говорит о том, что заражение сифилисом пациента не произошло или же тест был проведен ранее, чем успела отреагировать иммунная система.

Вероятность развития ложноположительных реакций сравнительно низка.

В анализе можно выявить реакцию антител с более, чем одним антигеном, что в сложных диагностических ситуациях имеет большую ценность. Также метод прост в исполнении и позволяет определить IgG и IgМ отдельно, если это необходимо.

Иммуноблот показывает высокую эффективность по выявлению иммунного ответа организма, как при получении антибактериальной терапии, так и без нее.

Для проведения тестирования применяют 5 основных антигенов:

• 47 кДа мембранный белок (TpN47) – специфичный;

• 45 кДа (TmpA) – специфичный;
• 22 кДа (Р 22) – неспецифичный;
• 17 кДа мембранный белок (TpN17) – специфичный;
• 15 кДа мембранный белок (TpN15) – специфичный.

Считается, что выявление антител к протеинам именно с такой молекулярной массой является диагностически значимым для сифилиса.

Один из антигенов Р 22 является неспецифичным для бледной трепонемы, именно поэтому появление полосы на этом белке может обусловить ложноположительный результат обследования.

Состояния, при каких показано обследование методом иммуноблота

• Наличие клинических признаков заболевания;
• Положительные или сомнительные результаты предыдущих серологических исследований, особенно при следующих заболеваниях и состояниях: туберкулез, онкологический процесс, болезнь Лайма, сахарный диабет, вакцинация, наркозависимость, хронический алкоголизм, гиперлипидемия, беременность, возраст старше 70 лет и т.д.
• Подозрение на первичный и вторичный сифилис при отрицательных ответах других тестирований;
• Подозрение на сифилис на фоне приема антибиотиков, других антисептических препаратов;
• Подозрение на скрытый сифилис;
• Все язвенные поражения органов половой системы;
• Половой контакт с больным сифилисом в анамнезе;
• Наличие сопутствующего венерического заболевания;
• Врожденная форма сифилиса;
• Нейросифилис;
• Сифилис внутреннего уха;
• ВИЧ-инфекция;
• Сопутствующие аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, узелковый периартериит, системная склеродермия, сахарный диабет и т.д.)

Сроки определения противотрепонемных антител

Специфические антитела против возбудителя сифилитической инфекции (Ig M) появляются в организме спустя 7-14 дней после инфицирования с максимальным уровнем на 6-9 неделе. Исчезают — через 12-18 месяцев у лиц, не получавших антибактериальную терапию, и через 3-6 месяцев – после проведения полноценного курса лечения. Их можно обнаружить у пациентов, как с первичным, так и с вторичным сифилисом, что позволяет уточнить старая это инфекция или свежая. Однако при стертом течении заболевания IgM не идентифицируются.

Противотрепонемные антитела класса Ig G появляются позже, примерно к концу первого месяца инфекционного заболевания и обычно сохраняются на протяжении долгого времени или всей жизни. Их концентрация постоянно растет и максимально фиксируется через 1-2 года после первой встречи организма с бледной трепонемой.

К моменту появления первых признаков болезни в крови больного можно выявить оба класса антител.

Появление IgM снова в крови больного свидетельствуют о повторном заражении сифилисом, его рецидиве или неэффективной лечебной тактике.

Подготовка к правильной сдаче анализа

Определенной подготовки к проведению теста не требуется. Среди общих рекомендаций – взятие образца крови не ранее чем через 24 часа после употребления алкоголя, воздержание от курения.