Комплексное обследование при сифилисе

Диагностика сифилиса по сей день считается достаточно сложной процедурой, не всегда гарантирующей быстрые и правильные результаты. Как провериться на сифилис и верно определить результаты всех проведенных исследований?

Что такое лабораторное подтверждение указанного диагноза, каким образом оно производится? Как диагностировать вторичный сифилис или латентную стадию заболевания? Рассмотрим эти вопросы в данной статье.

Методы диагностики

Прежде всего, при наличии подозрений на сифилис следует немедленно отправиться на консультацию к венерологу. Уже на стадии консультирования и осмотра врач может выставить предварительный анализ.

Для диагностики венерологу нужно собрать анамнез, т.е. всю необходимую информацию: об особенностях половой жизни пациента, наличии у него контактов с возможными сифилитиками, жалобах, были ли раньше венерические заболевания и пр.

Получив эту информацию, венеролог концентрируется на решении вопроса, какому заболеванию свойственна выявленная в ходе сбора анамнеза симптоматика. Далее с целью проверки на недуг проводится клинический осмотр пациента.

Наибольшее внимание врач уделяет осмотру и изучению кожи и слизистых оболочек половых органов, заднего прохода, а также слизистых полости рта. Тщательно ощупываются лимфатические узлы, выявляются очаги их некроза.

На этом этапе обследования можно с высокой точности распознать недуг, т.е. выставить первичный диагноз. Но чтобы удостовериться в этом на 100%, необходим целый ряд лабораторных исследований с положительными данными.

Этот вид диагностики делится на два отдельных исследования. В первом случае можно выявить возбудителя этого сложного заболевания, во втором – определить степень изменения иммунитета больного.

Выявление бледной трепонемы осуществляется с помощью известной медицинской технологии под названием темнопольная микроскопия бактерий. Науке известно, что бледная трепонема плохо окрашивается традиционными красителями.

Поэтому на темном поле специального микроскопа она немедленно становится видна в виде небольшой спирали. При этом исследуется материал, взятый из язвочки, похожей на сифилитическую, являющейся результатом первичной инфекции.

В этом случае биологический материал обрабатывается специальной сывороткой, в результате действия которой бледная трепонема начинает светиться, выглядит очень красиво и нарядно.

С помощью этой реакции врач обнаружит ДНК бледной трепонемы, т.е. посредством ПЦР можно окончательно доказать наличие в организме больного данного инфекционного агента.

Серологическая диагностика

Как диагностировать это заболевание по иммунологическим показателям? Их исследование в медицине именуется серологией. Серодиагностика обладает множеством современных методов, они широко применяются на практике.

Все эти методы основаны на исследовании крови пациента. Одна группа методов направлена на выделение в крови антител против бледной трепонемы, Вторая группа изучает изменения в иммунитете в связи с деятельностью этой вредоносной бактерии.

1) Микроскопическая реакция преципитации.

В ходе этого исследования в крови больного выявляются и проверяются антитела, которые были выработаны его иммунной системой против клеток организма, поврежденных в результате деятельности бледной трепонемы.

Этот вид тестирования имеет высокую достоверность, но может выявить не только сифилис, но и иные заболевания (например, гонорею, её возбудителями являются гонококки). Поэтому с помощью теста появляется только подозрение на инфекцию.

Преципитацию часто используют не для диагностики, но и изучения эффективности терапии. Если пациент благополучно излечился, то указанная выше реакция становится отрицательной.

Этим этот вид лабораторного исследования существенно отличается от других вариантов серологических исследований, которые после излечения долго могут давать положительную реакцию, фиксировать наличие болезни в организме человека.

2) Реакция Вассермана.

Что такое трепонемная серология?

1) Реакция иммунологической флюоресценции.

В ходе данного тестирования обнаруживаются антитела, которые вырабатывает иммунитет человека, зараженного трепонемой. В ходе исследования сыворотка крови человека взаимодействует с препаратом, имеющим в своем составе антитела.

После смешивания обоих компонентов: сыворотки и антител, помеченных специальным светящимся веществом, они связываются друг с другом, после чего исследуются посредством специального микроскопа.

2) Иммуноферментный анализ.

С помощью этого анализа эффективно выявляется большинство инфекционных болезней. В ходе него происходит реакция антигена с антителами самого различного класса. При этом легко определить их количество.

По типу антител и их количеству можно сделать выводы по поводу диагноза, длительности течения выявленного заболевания, развитию патологического процесса, активности трепонемы, силе иммунной системы больного.

Благодаря обилию показателей зарождения, развития и течения болезни, этот анализ просто не заменим при диагностике множества инфекционных болезней. А также в качестве контроля их развития и излечения.

3) Реакция гемагглютинации.

В результате этого теста склеиваются эритроциты. Суть ее в том, что после предварительной подготовки на поверхности эритроцитов, фиксируются белки трепонемы.

Эти материалы перемешиваются с сывороткой крови, в которой имеются антитела к этой вредоносной бактерии. После склеивания эритроцитов исследуемая кровь становится густой и зернистой.

Интересно, что даже после полного излечения от недуга описанная выше реакция может давать положительный результат и сбивать врачей, занимающихся диагностикой иных инфекционных болезней.

Изменения в иммунной системе сифилитика

Итак, диагностика недуга и контроль его эффективного излечения – сложная профессиональная задача. А больному без серьезного образования в области медицины разобраться в хитросплетениях анализов и реакций попросту невозможно.

Попробуем просто и доступно объяснить развитие изменений в иммунной системе больного, и по каким лабораторным показателям это можно быстро выявить, чтобы своевременно поставить правильный диагноз.

Сразу после попадания инфекции (бледной трепонемы) в организм человека она сталкивается с иммунными клетками. Они немедленно идентифицируют ее, как чужеродный и опасный микроорганизм, и начинают действовать.

В крови больного, спустя неделю или месяц, появляются антитела, оказывающие специфическое воздействие на бактерии бледной трепонемы. Их можно разделить на два класса антител.

Первые свидетельствуют, что инфицирование произошло совсем недавно (неделю назад). Вторые говорят о том, что организм уже среагировал должным образом и сформировал собственную защиту, устойчивый иммунитет от болезни.

Перед появлением клинических симптомов этой болезни в крови больного выявляются специфические антитела. В ходе лечения количество антител существенно снижается и постепенно нормализуется. Формируется стойкий иммунитет к трепонеме в будущем.

Как интерпретировать результаты серологии?

Сегодня большинство венерологов в своей профессиональной практике, чтобы диагностировать сифилис чаще всего используются три реакции:

Если все три исследования дали отрицательный результат, значит, инфицирование отсутствует, либо диагностика проведена ранее определенного срока. Делать это нужно через семь дней после заражения.

Если все три исследования дали положительный результат, значит, наличие недуга в организме пациента подтверждено, и следует немедленно начать его интенсивное лечение, чтобы болезнь не переросла в хроническую форму.

Если отрицательные показатели выдала только реакция преципитации, значит, у пациента поздняя стадия лечения болезни, или терапия уже завершена. Положительный результат свидетельствует о наличии антител в крови.

Если отрицательные данные только у реакции флюоресценции, следует пройти все исследования вновь, т.к. велика вероятность, что они проведены неправильно и дают ложные показатели.

Если положительные показатели дала только гемагглютинация, значит, она либо ложная (проведена с нарушением установленных правил), либо проведена после окончания терапии заболевания.

Если положительные показатели дала только реакция флюоресценции, это либо ранняя стадия недуга, либо проведена после эффективной терапии. Если положительную реакцию дала только преципитация, то результат исследований – ложен.

Следовательно, для качественной диагностики этого сложного инфекционного заболевания только серологии недостаточно. Для постановки правильного и окончательного диагноза обязателен весь комплекс клинических исследований и дифференциальная диагностика.

Статистика заболеваемости сифилисом в России улучшается год от года. Однако ежегодно на тестированиях выявляют тысячи заболевших людей. Обследования на эту болезнь проводят и перед беременностью, и перед любой плановой госпитализацией. Кроме того, ежегодно представители многих профессий проходят диспансеризацию, при которой, кроме всего прочего, нужно сдать анализы на сифилис. И, разумеется, без этого анализа для человека будет закрыта карьера государственного служащего, врача, да и просто вакансии вроде учителей, поваров, воспитателей.

Как диагностировать сифилис?

Современная медицина знает множество способов обнаружить бледную трепонему, которая является возбудителем болезни, в крови человека. Эти методы разделяют на несколько больших групп:

1. В первой группе исследований — тесты, при которых в биоматериале ищут присутствие трепонемы. Для этого на исследования забирают материал из язв или пораженных болезнью органов.
2. Вторая, серологическая группа методов позволяет выявить косвенные следы присутствия трепонемы в организме. Здесь подразумеваются антитела, активной выработкой которых организм реагирует на инфекцию.

Лабораторное исследование заключается в том, что в пробирке размножают участки ДНК трепонемы в условиях повторяющихся температурных циклов. На каждом этапе количество искусственно воспроизведенных копий возбудителя болезни удваивается. Специалисты называют это амплификацией фрагментов ДНК. Происходит разделение молекул по их весу, что и позволяет выявить трепонему.

Методика ПЦР-исследования позволит отыскать одну молекулу сифилиса даже в том случае, если она одна на тысячи других молекул. Генетический материал для ПЦР-тестирования могут забирать из непосредственно сифилитических язв, ликвора, плацентарной ткани, крови из пальца и даже семенной жидкости. Наиболее часто врачи используют именно тканевую жидкость из язв.

Эффективность ПЦР-исследования достигает 98,6%. При правильно подготовленном исследовании ложноположительные результаты при этом методе практически исключены. Также именно к данной методике врачи прибегают, если предполагают небольшое содержание трепонем в исследуемом материале. Именно этот фактор становится определяющим, если необходимо провести анализ при подозрении на врожденный сифилис.

Темнопольное микроскопическое исследование считается одним из самых дешевых, но вместе с тем эффективных методов выявления наличия бледной трепонемы, а также:

1. Для исследования используют специальный солевой раствор, в который помещают препарат. После этого на предметное стекло направляют узкий пучок яркого света. Из-за так называемого феномена Тиндаля возбудители болезни начинают светиться в темном поле раствора.
2. Лучшим материалом для подобного типа исследования также являются пробы тканевой жидкости, полученной из генитальных язв, расположенных, соответственно, на гениталиях. Это один из самых быстрых тестов, потому что результаты анализов будут готовы через несколько часов.

Однако стоит учитывать, что темнопольный метод годится для обнаружения еще живых трепонем. Соответственно, проходить такое исследование после начала наружного лечения практически не имеет смысла, так как будет почти невозможно обнаружить живые образцы возбудителя.

RIT-тест предполагает пересаживание материала от зараженного человека лабораторным кроликам. Чувствительность этих животных к инфекции сифилиса достигает 100%, так что если в биоматериале пациента содержались бледные трепонемы, то они поразят и кролика.

Однако на сегодняшний день этот метод практически не используют в силу дороговизны и временных затрат. При наличии более быстрых анализов врачи предпочитают не ждать, когда симптомы болезни проявятся у животного. Тем не менее этот метод продолжают использовать в исследовательских работах, а также для того, чтобы подтвердить или опровергнуть точность других типов анализов.

Серологические методы позволяют вычленить не сам возбудитель сифилиса в организме, а антитела, с помощью которых организм старается победить заболевание. Ученые подразделяют серологические методы на две группы, речь о которых пойдет ниже.

К нетрепонемным тестам относятся:

• РМП — реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой;
• RPR — тест быстрых плазменных реагинов.

Чаще всего специалисты прибегают к нетрепонемным тестам в том случае, если необходимо сделать массовый скрининг на сифилис. Это связано с тем, что такие тесты достаточно дешевы, не требуют специального лабораторного оборудования и отличаются сравнительно высокой точностью.

Также они не менее эффективны при оценке проводимого лечения. С их помощью можно оперативно следить за уровнем антител к сифилису в крови.

К трепонемным тестам относятся:

1. ИФА — иммуноферментный анализ;
2. РПГА — реакция пассивной гемагглютинации;
3. РИФ — реакция иммунофлюоресценции;
4. иммуноблоттинг;
5. ИХЛ — иммунохемилюминесценция;
6. РИБТ (РИТ) — реакция иммобилизации бледных трепонем.

Трепонемные тесты назначают в тех случаях, когда нужно убедиться, что результат нетрепонемного теста не был ложноположительным. К ним же прибегают в тех случаях, если результат скрининга при помощи трепонемного теста разошелся с результатом нетрепонемного.

Кроме того, трепонемные тесты отлично подходят для применения в том случае, если у болезни еще нет видимых проявлений, но присутствуют подозрения врача, основанные на анамнезе и результатах осмотра. К сожалению, нетрепонемные тесты в этот период малоэффективны и зачастую дают ложноотрицательные результаты.

Этот тип диагностики наиболее часто используется для определенных групп пациентов:

• Подобным тестом стоит воспользоваться каждой беременной женщине, чтобы обезопасить и себя, и будущего ребенка.
• Кроме того, воспользоваться таким методом могут люди, которые проживают в одном помещении с сифилитическими больными, не применяют контрацепцию и часто меняют половых партнеров. Также он подойдет тем, кто не может пройти полноценное обследование в больнице или клинике.

Принцип использования экспресс-теста на сифилис можно сравнить с использованием теста на беременность, однако в нем надо брать несколько капель крови.

Тест лучше всего проводить в первой половине дня натощак. За два дня до предполагаемого тестирования врачи рекомендуют не употреблять спиртное, а примерно за час до процедуры отказаться от сигарет.

Сам анализ занимает немного времени:

1. Палец необходимо продезинфицировать спиртовой салфеткой, после чего из пореза выдавить несколько капель крови на тест-устройство.
2. Затем добавить туда же идущий в комплекте реагент.
3. В среднем нужно подождать 15 минут до появления результата. Специалисты предупреждают, что если результат появился по истечении получаса, то он может быть ложным.

Стоит учитывать, что если человек заразился совсем недавно, то точность и достоверность подобного тестирования не превышает 80%. Так что приравнивать его к полноценному обследованию у специалиста точно не стоит.

Где можно сдать анализ на сифилис?

Заказать исследование биоматериала на сифилис можно:

Возбудителем сифилиса выступает патогенный микроорганизм Treponema pallidum (бледная трепонема), разрушающий кожные покровы, слизистые оболочки и лимфатическую систему человека. Заболевшие люди заразны. Более того, научно доказано, что возбудитель поражает не только организм больного, а легко передается по наследству. Медики объясняют это поражением хромосомного набора.

Течение сифилиса

Сифилис протекает в три фазы:

• образование сифилитических шанкров и воспаление лимфатических узлов;
• появление высыпаний на кожных покровах с высоким уровнем опасности инфицирования здоровых людей;
• отсутствие наглядной симптоматики при критической степени заразности.

Высокую угрозу зараженная сифилисом представляет беременная для своего эмбриона, который может родиться больным .

У 30% людей, обратившихся за консультацией впервые, диагностируют сифилис третьего этапа. В таких ситуациях наблюдаются необратимые разрушительные процессы в костях, мозговых оболочках и внутренних органах. Для диагностики сдают анализ крови на сифилис.

Исследование крови на сифилис?

Оба теста на сифилис проводятся при первичной диагностике. Доктор на основании полученных данных ведет наблюдение за реакциями трепонемы на терапию.

Помимо вышеперечисленных экспресс-тестов на сифилис, кровь также проверяют:

• реакцией Вассермана;
• полимеразной цепной реакцией (ПЦР-анализ) ;
• реакцией иммунофлюоресценции;
• реакцией пассивных агглютинаций;
• иммуноблотингом.

Когда проходить диагностику?

Анализ крови для подтверждения или опровержения наличия бледных трепонем назначается когда:

• есть подозрения на инфицирование, вызванные характерным высыпанием на наружных гениталиях;
• первый анализ крови выдал положительный результат;
• был сексуальный контакт с инфицированным человеком;
• планируется сдача крови или спермы в донорские банки;
• человек находился в местах заключения;
• при приеме на работу требуется прохождение медосмотра;
• имеется наркотическая зависимость;
• отмечается лихорадка неизвестного происхождения или набухание лимфатических узлов .

Беременных женщин обязывают сдавать развернутый анализ на выявление бледной трепонемы трижды на протяжении периода гестации. Первый сдается при постановке на учет, второй – на 31 неделе, а третий – накануне родоразрешения. Если у женщины все же диагностируют сифилис, то после появления младенца, ему назначают обследование для исключения врожденного инфицирования сифилисом.

Наименование анализов

Для определения трепонемы в организме кровь берут из вены. Хотя в некоторых случаях берут кровь из пальца или спинного мозга.

По времени для проведения анализа на сифилис требуются одни сутки, а иногда и несколько недель. В конкретном случае всё решает способ диагностики. Самое главное – получить достоверный результат.

Для получения достоверных результатов анализа пациенту нужно тщательно подготовиться накануне, и это может занять по времени несколько недель.

Придется придерживаться следующих условий:

• Исключить прием жирной пищи за сутки до сдачи анализа. Таким способом можно очистить кровь.
• За 7 часов до забора крови прием пищи запрещен. Анализ на сифилис считается достоверным только натощак.
• В течение суток перед забором крови следует полностью отказаться от курения и исключить алкогольные напитки во избежание влияния на оцениваемую реакцию.
• За неделю до забора крови не допускается прием антибиотиков.

Как только анализ подтверждает присутствие трепонемы в крови, назначается терапия от сифилиса. После проведения лечения придется повторно пройти анализ крови для выяснения, очищена ли кровь от патогенного возбудителя.

Поскольку сифилис часто протекает бессимптомно и наделен множеством клинических проявлений, для постановки точного диагноза придется пройти комплексные лабораторные обследования. Общий анализ крови на сифилис ничего не даст. Вряд ли он покажет истинную картину течения болезни.

Для окончательного опровержения или подтверждения диагноза необходимо сдать:

• кровь из пальца или вены;
• ликвор (спинномозговая жидкость);
• фрагмент из шанкра;
• фрагменты из региональных лимфатических узлов.

Выбор анализа крови основан доктором относительно периода течения болезни.

Расшифровка

При первичной стадии болезни кровь берут для проведения бактериоскопического исследования, где возбудитель виден под микроскопом. Сегодня набирает популярность серологическое тестирование, позволяющее выделить микробные антигены и антитела, продуцирующиеся организмом в тканях и органах.

В принципе, доктора не доверяют результатам общего анализа крови, поскольку в искусственных материалах возбудитель может не проявлять активности.

Существует два способа выявления бледной трепонемы в организме.

Непосредственный способ исследования ориентирован на выявление самого возбудителя при помощи:

• темнопольной микроскопии, дающей возможность разглядеть его на темном фоне;
• RIT-тестирования с введением материала в подопытное животное;
• полимеразной цепной реакции, позволяющей обнаружить фрагменты генетического материала возбудителя; на этот анализ уходит больше всего времени.

Непрямой способ исследования, серологический, заключен в детальном распознавании антител к возбудителю, продуцирующихся в ответной реакции организма на инфицирование.

Тест на сифилис

Соответственно, серологический способ делится на подгруппы:

• Нетрепонемную. Представлен реакцией на кардиолипиновый антиген, тестом быстрого плазменного реагина и пробой с толудиновым красным.
• Трепонемную. Объединяет в себе реакцию на комплимент с трепонемными антигенами, реакцию на иммобилизацию возбудителя, реакцию иммунофлюоресценций, реакцию на пассивную гемагглютинацию, выявление низкомолекулярных соединений, определение специфических белков.

В большинстве случаев доктора прибегают к диагностике сифилиса при помощи серологического способа.

Наиболее распространенной методикой при диагностике сифилиса считается тест Вассермана, позволяющий получить результаты анализов в кратчайшие сроки. Однако при получении отрицательного результата не стоит расслабляться. Часто бывает ложноположительный результат, искаженный приемом спиртного или несоблюдением пищевой диеты.

При получении положительного результата и проведении дополнительных необходимых исследований применяется специфический экспресс-анализ на сифилис. Точность результата подтвердит интенсивность реакции.

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — бледная трепонема. При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

Антитела к бледной трепонеме и серологическая диагностика

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после лечения раннего сифилиса, через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит признаком рецидива сифилиса или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Лабораторная диагностика сифилиса с применением серологических реакций

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Диагностика сифилиса с применением нетрепонемных тестов

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления твердого шанкра. Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, вторичным и рецидивным сифилисом. Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с третичным активным сифилисом, в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 19. Возбудитель сифилиса при многократном увеличении.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

ПЦР на сифилис

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.