Образцы сыворотки крови для исследования на вич тест

Все инфекционные заболевания нуждаются в своевременной точной диагностике. ВИЧ и СПИД — не исключение. Поставленный вовремя диагноз позволяет принять необходимые терапевтические меры и продлить пациенту жизнь. Как же определить наличие или отсутствие заболевания с максимальной точностью?

Диагностика ВИЧ-инфекции и СПИДа

Сегодня, наверное, каждый человек слышал о ВИЧ и СПИДе и знает, что эти заболевания очень опасны, что передаются они в основном во время незащищенного барьерным способом полового акта. А между тем, первые случаи инфицирования были зафиксированы не так давно — в 1978 году (у нескольких мужчин-гомосексуалов из США и Швеции). Сам вирус был открыт в 1983 году.

В первую очередь ВИЧ атакует и разрушает лимфоциты (Т-лимфоциты, или хелперы). Они отвечают за иммунный ответ организма, распознавание и уничтожение инфицированных клеток. В результате заболевший теряет способность противостоять инфекциям.

У здорового человека количество Т-лейкоцитов составляет 1200–3000 клеток/мкл. После ВИЧ-инфицирования число клеток снижается. При этом заболевший продолжает чувствовать себя нормально. Данный период болезни может длиться на протяжении многих лет. Но наступает момент, кода количество клеток-хелперов достигает критической отметки. Это может проявиться следующими проблемами:

• кандидоз полости рта и ЖКТ;
• опоясывающий лишай (герпес);
• неделями не спадающая высокая температура;
• ночная потливость;
• диарея;
• частые ОРЗ и ОРВИ и др.

Если число Т-лимфоцитов снижается до 200 клеток/мкл, то диагностируют СПИД. Организм больного в таком состоянии не может сопротивляться даже простейшим микроорганизмам — от дрожжей до вирусов. У здорового человека к ним развивается резистентность, тогда как страдающего СПИДом они могут довести до летального исхода. Чаще всего возбудителями смертельных заболеваний становятся токсоплазма, криптоспоридии, цитомегаловирус. Кроме того, снижение лимфоцитов провоцирует образование злокачественных опухолей.

При отсутствии должного лечения пациенты с ВИЧ-инфекцией не переступают порог выживаемости в 10 лет. Грамотно и своевременно назначенная терапия затормаживает развитие болезни, в разы увеличивая продолжительности жизни больного. ВИЧ-положительный человек в таком случае может дожить до преклонных лет.

Основной метод диагностики инфекции — анализ крови. С момента заражения до появления антител в крови проходит 1–3 месяца.

Разные виды лабораторных анализов венозной крови, взятой натощак, позволяют обнаружить наличие или отсутствие ВИЧ-инфекции в крови. Рассмотрим виды этих исследований.

• Скрининговое исследование иммуноферментными (ИФА) методами представляет собой выявление антител к антигенам ВИЧ-типов: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Уже со второй недели после инфицирования могут появиться антитела, хотя они способны обнаружиться и позже — через несколько месяцев. В последующее время количество антител растет и сохраняется в крови пациента. При наличии антител в большинстве случаев клинические признаки ВИЧ не проявляются 2–10 лет.
  Отметим, что данный тест не всегда точен, возможен ложноположительный результат. В любом случае при положительном результате назначается повторный анализ через 2-3 недели.
• Верификационное исследование методом иммуноблота проводится, если описанный выше анализ дважды дал положительный результат. Данное исследование сочетает анализ ИФА и метод электрофореза, который позволяет разделить по молекулярному весу входящие в состав вируса антигены. Данное исследование имеет максимальную точность.

• Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени дает возможность определить концентрацию вирусной РНК в плазме крови. Тест проводят в целях ранней диагностики возможного инфицирования после случая повышенного риска (на 7–10 день после предположительного инфицирования).
  Также данный анализ назначается для оценки эффективности применяемой терапии, для решения вопроса о начале антиретровирусной терапии, о проведении кесарева сечения у инфицированных беременных за 4 недели до родов.
  Такое исследование крови проводят новорожденным детям инфицированных матерей. Полученный дважды положительный ответ говорит о заражении ребенка.

Поводом пройти исследование на ВИЧ-инфекцию может стать множество причин. Тест необходим перед оперативным вмешательством, в случае планирования беременности, риск приобретения данной инфекции несут случайные половые контакты. Отдельная категория граждан (врачи, педагоги, работники пищевых производств, продавцы пищевой продукции и др.) обязана проходить тест в рамках оформления медицинской книжки, являющейся обязательным условием допуска к работе.

Что касается тревожных симптомов, то обычно врачи назначают анализ на ВИЧ при следующих состояниях:

• Резкая потеря веса.
• Диарея, длящаяся более трех недель.
• Лихорадка неясного происхождения.
• Увеличение лимфатических узлов в разных областях.
• Лейкопения и лимфопения.
• Тяжелые инфекционные заболевания: пневмония, кандидоз внутренних органов, туберкулез, манифестный токсоплазмоз, частые случаи обострения герпесвирусной инфекции и другие.

Специальной подготовки перед сдачей венозной крови не требуется. Единственное — это воздержание от приема пищи в течение 8–10 часов. Также накануне рекомендуется избегать физических и эмоциональных нагрузок, отказаться от употребления алкоголя.

Вся процедура забора венозной крови занимает не более пяти минут. После взятия материала место укола дезинфицируют и заклеивают специальным пластырем. Так как анализ берется натощак, во избежание головокружения после забора крови следует выпить сладкий чай или съесть кусочек шоколада.

В государственных поликлиниках, чтобы получить направление на анализ, придется сначала посетить участкового терапевта. В частных же медицинских центрах нужно просто заполнить заявку на анализ. Для этого в клинике попросят предъявить паспорт или какой-либо другой документ, удостоверяющий личность (миграционная карта, водительские права, военный билет и т. д.). Документ позволит идентифицировать результаты анализа. Впрочем, тест на ВИЧ можно сделать и анонимно. В этом случае заявке и образцу крови, который отправляется на анализ в лабораторию, присваивается номер, известный лишь пациенту и медицинскому персоналу. Однако результаты анонимных исследований не могут быть представлены для госпитализации, в женские консультации и не могут быть зарегистрированы в ОРУИБ (Отдел регистрации и учета инфекционных болезней).

Следует помнить, что интерпретировать результаты исследования и поставить точный диагноз способен только врач. Полученный результат ни в коем случае не может быть поводом для самолечения, к тому же одни и те же результаты у разных пациентов могут говорить о противоположной клинической картине.

Показывает объем выявленной РНК вируса иммунодефицита человека, выраженный в C/ml (копии/мл). Интерпретировать результаты следует следующим образом:

1. РНК не выявлена, либо значение ниже предела чувствительности метода (20 копий/мл).
2. Меньше 20 копий/мл — РНК выявлена в концентрации на пределе чувствительности метода, характеристика с удовлетворительной точностью невозможна.
3. От 20 до 10 6 копий/мл — полученное значение находится в пределах линейного диапазона, результат достоверен.
4. Больше 10 6 копий/мл — РНК выявлена в указанной концентрации, выходящей за верхний предел линейного диапазона.

Анализы на ВИЧ можно сдать в частных клиниках. В этом случае стоимость скринингового исследования иммуноферментными методами в среднем составит от 400 до 800 рублей. Срок выполнения исследования — один рабочий день, хотя возможна и срочная диагностика, в таком случае ответ будет получен через 2 часа.

Верификационное исследование методом иммуноблота обойдется в 3000–5000 рублей. Результаты станут известны через 3–7 рабочих дней.

Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени представляет собой более сложный анализ, поэтому его стоимость намного выше — она составляет 10 000–12 000 рублей. Результаты исследования готовятся в среднем 10–14 рабочих дней.

Согласно законодательству все иммунные анализы в государственных медицинских учреждениях проводятся бесплатно. В обязательном порядке проверку на ВИЧ-инфекцию проходят беременные женщины, пациенты, готовящиеся к оперативному вмешательству и госпитализации. В остальных случаях направление на данное исследование назначается по усмотрению врача.

Пройти анализ на ВИЧ-инфекцию сегодня не составляет сложности. Сама процедура практически безболезненна и занимает считанные минуты. Современное оборудование и методики проведения теста позволяют получить максимально точные результаты.

Во­пре­ки не­ко­то­рым мне­ни­ям, ВИЧ не яв­ля­ет­ся при­го­во­ром. Ин­фи­ци­ро­ван­ные лю­ди спо­соб­ны про­жить дол­гую, пол­но­цен­ную жизнь. Они мо­гут иметь семью, де­тей, без опа­се­ний об­щать­ся с окру­жа­ю­щи­ми. Глав­ное при этом вы­пол­нять осо­бые пра­ви­ла ги­ги­е­ны и бы­то­во­го по­ве­де­ния, знать, как свес­ти к ми­ни­му­му риск за­ра­же­ния до­мо­чад­цев. А в слу­чае воз­ник­но­ве­ния со­мни­тель­ных или спор­ных си­ту­а­ций — об­ра­щать­ся к спе­ци­а­лис­там: вра­чам, пси­хо­ло­гам. Но ни в ко­ем слу­чае не за­мы­кать­ся и не ста­вить на жиз­ни крест.

1. Мужчина 42 лет, хочет стать донором. После обследования у него выявлены абсолютные противопоказания к донорству. Какие заболевания не относятся к абсолютным противопоказаниям
Ответ: хронический холецистит

2. Медицинской сестре на семинаре по проблемам ВИЧ/СПИДа был задан вопрос, какое из перечисленных заболеваний не относится к оппортунистическим, сопровождающим ВИЧ инфекцию
Ответ: панкреатит

3. Выберите путь передачи ВИЧ-инфекции
Ответ: парентеральный

4. СПИД относится к
Ответ: инфекционным заболеваниям

5. Какие системы организма человека поражает ВИЧ
Ответ: иммунную

6. Размножение ВИЧ происходит в клетках крови
Ответ: лимфоцитах

7. Возбудителями ВИЧ инфекции являются
Ответ: вирусы

8. Источником ВИЧ являются
Ответ: человек

9. Для диагностики ВИЧ инфекции применяют методы исследования крови
Ответ: иммунно-ферменнтный анализ

10. Из перечисленных заболеваний передается парентеральным путем
Ответ: ВИЧ-инфекция

11. Выберите режим дезинфекции для ВИЧ-инфекции
Ответ: парентеральные гепатиты В и С

12. Из перечисленного выберите средство для дезинфекции медицинского инструментария зараженного ВИЧ
Ответ: 3% раствор хлорамина

13. Выберите физический метод дезинфекции медицинского инструментария инфицированного ВИЧ
Ответ: паром под давлением 2 атм. 1 час

14. При положительной пробе на скрытую кровь инструментарий необходимо вновь
Ответ: предстерилизовать

15. В бланке направления на проведение исследования на ВИЧ не указываются данные
Ответ: семейное положение

16. Медицинская сестра кабинетов по забору крови на ВИЧ, процедурных кабинетов должна мыть руки
Ответ: после каждой манипуляции

17. Смена рабочей одежды медицинского персонала лечебных отделов, лабораторий центров СПИД проводится
Ответ: один раз в неделю

18. Для обеззараживания пробирок с ВИЧ инфицированной кровью используют
Ответ: хлорамин 3 % раствор

19. Осложнения, связанные с нарушением асептики
Ответ: абсцесс

20. В какой из перечисленных биологических жидкостей содержится наибольшая концентрация ВИЧ
Ответ: в сперме

21. Чтобы исключить парентеральный путь передачи ВИЧ необходимо
Ответ: использовать в работе одноразовый инструментарий

22. Наибольшему риску заражения ВИЧ подвергаются
Ответ: лица, имеющие беспорядочные незащищенные половые контакты

23. При проведении инъекций применяют барьерные средства защиты
Ответ: перчатки хирургические, маску

24. Наиболее опасными для передачи ВИЧ являются инъекции
Ответ: внутривенные

25. Выберите одно из свойств ВИЧ
Ответ: не устойчив к дезинфицирующим средствам, содержащим хлор

26. Одним из главных направлений в профилактике ВИЧ/СПИДа является
Ответ: информированность населения о ВИЧ/СПИД

27. Образцы сыворотки крови для исследования на ВИЧ можно хранить в холодильнике при температуре 4-6 ° С не более
Ответ: 1 недели

28. Доставка пробирок с образцами крови для исследований на ВИЧ в лабораторию осуществляется
Ответ: в контейнерах из прочного материала

29. При аварии на центрифуге необходимо
Ответ: после полной остановки центрифуги

30. Образцы крови для исследования на ВИЧ хранят в холодильнике при температуре 4-6С не более
Ответ: 24 часов

31. Ваши действия при попадании ВИЧ инфицированной крови на кожу
Ответ: промыть водой с мылом

32. К симптомам ВИЧ инфекции:не относятся
Ответ: сердечно-сосудистая недостаточность

33. Из перечисленных инфекций не относятся к оппортунистическим заболеваниям
Ответ: ревматизм

34. Обязательному тестированию на ВИЧ подлежат лица
Ответ: доноры крови, плазмы, органов и тканей

35. Наибольшему риску заражения ВИЧ в медицинских учреждениях подвержены
Ответ: медицинские сестры процедурных кабинетов, лаборанты биохимических лабораторий

36. Бессимптомная стадия ВИЧ инфекции может длится
Ответ: несколько месяцев или лет

37. Антитела к ВИЧ отсутствуют
Ответ: в инкубационном периоде

38. Причиной смерти при ВИЧ инфекции являются
Ответ: оппортунистические инфекции

39. Выберите препараты для лечения ВИЧ инфекции
Ответ: азидотимидин, ламивудин, невирапин

40. Профилактическое антиретровирусное лечение ВИЧ инфицированным беременным назначают
Ответ: начиная с 28 недель беременности

41. Лечение противовирусными препаратами ВИЧ инфицированным назначают с количеством Т-лимфоцитов хелперов в 1мкл крови
Ответ: менее 200

42. Для профилактики и лечения оппортунистических заболеваний при ВИЧ/СПИДе применяют
Ответ: химиопрепараты для лечения вторичных заболеваний

43. Содержание Т-лимфоцитов в 1мл3 крови в норме
Ответ: от 1200 до 500

44. Одноразовый инструментарий и шприцы после использования
Ответ: утилизируют

45. Перед проведением фиброгастороскопии ВИЧ инфицированному следует
Ответ: проводить обследование на голодный желудок

46. При проведении люмбальной пункции больному с ВИЧ-инфекцией берут для исследования
Ответ: спинномозговую жидкость

47. Перед проведением компьютерной томографии головного мозга ВИЧ инфицированному пациенту назначают
Ответ: просят пациента убрать предметы, содержащие металл (кольца, серьги и пр.)

48. Окончательный диагноз ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ инфицированных матерей, выставляется
Ответ: в 1 год

49. Дезинфекцию изделий медицинского назначения при ВИЧ проводят в 3% растворе хлорамина в течение
Ответ: 60 мин

50. Твердые отходы при ВИЧ (перевязочный материал, тампоны, гигиенические пакеты и т.д.) необходимо
Ответ: сжечь

51. Паллиативную помощь больному СПИДом начинают в случае
Ответ: если жизненно важные органы перестают работать и больной отказывается от специфического лечения

52. При тошноте и рвоте больному СПИДом назначается
Ответ: противорвотные средства за 30 мин. до еды, щадящая диета, употребление жидкости по мере переносимости

53. При гипертермии больным с ВИЧ-инфекцией рекомендовано
Ответ: влажные обертывания, прием жаропонижающих средств, достаточное количество жидкости

54. Больным с диареей назначают
Ответ: антидиарейные средства, достаточное количество жидкости, пищу не содержащую волокона

55. К СПИД индикаторным заболеваниям относятся
Ответ: кандидоз

56. Диспансерное наблюдение детей, родившихся от ВИЧ инфицированных матерей проводят
Ответ: до 1 года

57. Контрольные серологические исследования на ВИЧ, гепатиты В, С сотрудникам центров СПИД проводится
Ответ: один раз в год

58. Чаще всего причиной одышки у больных СПИДом могут быть
Ответ: туберкулез, пневмоцистная пневмония

59. Причиной диареи у ВИЧ-инфицированых являются
Ответ: криптоспридии, изоспоры

60. При случайном уколе инфицированной иглой необходимо
Ответ: промыть травмированный участок водой с мылом

61. К средствам индивидуальной защиты не относятся
Ответ: кварцевая лампа

62. О положительном результате теста на ВИЧ медицинский работник без согласия пациента может сообщить
Ответ: не должен никому сообщать

63. Как можно трактовать наличие антител ВИЧ в сыворотке крови пациента
Ответ: пациент инфицирован вирусом иммунодефицита

64. При выявлении ВИЧ-инфекции у больного, лечившегося в терапевтическом стационаре по поводу инфаркта миокарда, его
Ответ: продолжают назначенное лечение инфаркта

65. При профессиональном контакте с ВИЧ инфицированной кровью к лечебно - профилактическим мероприятиям не относятся
Ответ: обеспечение профилактики оппортунистических инфекций

66. При проведении антиретровирусной терапии к побочным реакциям на прием препаратов не относятся
Ответ: остеопороз

67. Профессиональный риск инфицирования ВИЧ-инфекцией существует у перечисленных работников кроме
Ответ: сотрудников общепита

68. Найдите неправильный совет по соблюдению приверженности ВИЧ инфицированного при проведении антиретровиручной терапии
Ответ: после одного месяца приема можно сделать 2х недельный перерыв

69. Тестирование на ВИЧ пациенту проводят
Ответ: после проведения предтестового консультирования и добровольного согласия пациента на проведение теста

70. При проведении имуноферментного исследования на ВИЧ в крови определяют
Ответ: антитела к ВИЧ

71. После незащищенного полового контакта с ВИЧ позитивным партнером пациент должен обследоваться на ВИЧ
Ответ: через 2 недели, 3 месяца и 6 месяцев после контакта

72. Какие из перечисленных симптомов позволяют думать о ВИЧ инфекции
Ответ: длительная диарея более месяца, потеря веса, необъяснимая лихорадка более месяца, слабость, лимфаденопатия

73. К профилактическим мероприятиям при ВИЧ инфекции не относятся
Ответ: иммунизация населения

74. Профилактическое лечение ребенку, родившемуся от ВИЧ позитивной матери проводят
Ответ: сразу после рождения

75. У ребенка, рожденного ВИЧ инфицированной женщиной, материнские антитела к ВИЧ должны исчезнуть после рождения через
Ответ: через 18 месяцев

76. Одним из определяющих показателей для назначения антиретровирусной терапии является
Ответ: вирусная нагрузка более 50 000 в 1 мкл крови, количество CD4 клеток менее 200

77. Вирусная нагрузка при ВИЧ инфекции - это количество вирусных частиц
Ответ: в 1 мкл крови

78. Через 2 недели после начала приема антиретровирусных препаратов у ВИЧ инфицированного больного появилась легкая сыпь на коже, в этом случае больному рекомендуют
Ответ: продолжить прием препаратов в назначенных дозах

79. Антиретровирусную терапию назначают больному ВИЧ инфекцией не зависимо от количества Т-лимфоцитов СD4 противовирусными препаратами
А. двумя
Б. одним
В. тремя препаратами
в клинических стадиях
1. в бессимптомном периоде
2. в фазе сероконверсии
3. в острой фазе
4. в 3 клинической стадии
5. в стадии СПИДа
Ответ: В 5

80. Во время приема антиретровирусных препаратов у ВИЧ инфицированного через 2-3 недели появилась тошнота, слабость, головная боль . Что предпримите в этой ситуации
Ответ: продолжить прием препаратов, поставить в известность врача

81. При глубоком ранении острым предметом инфицированным кровью, ВИЧ позитивного пациента постконтактную профилактику проводят режимами
А. основным
Б. расширенным
применяя антиретровирусные препараты
1 2 препарата
2 3 препарата
3 4 препарата
4 не проводят
5 1 препарат
Ответ: Б 3

82. ВИЧ инфицированному назначено определение вирусной нагрузки. Каким методом ее определяют
Ответ: цепной полимеразной реакции

83. После случайного полового контакта пациент обратился с жалобами на частые болезненные мочеиспускания, выделения из половых органов. Что можно предположить
Ответ: инфекцию, вызванную гонококками

84. ВИЧ инфицированному пациенту назначено биохимическое исследование крови. С целью выявления какого заболевания, назначают этот анализ
Ответ: гепатита

85. Медицинская сестра проводит беседу в старших классах гимназии. Ей заданы вопросы
К каким заболеваниям относится СПИД
А хирургическим
Б инфекционным
И какими возбудителями вызывается данное заболевание
1 грибами
2 вирусами
3 простейшими
4 бактериями
5 паразитами
Ответ: Б 2

86. Медицинская сестра сдает семинар по проблемам ВИЧ/СПИДа. Ей заданы вопросы
Какие клетки крови поражает вирус
А Т- лимфоциты
Б тромбоциты
Что возникает в результате их поражения
1. анемия
2. нарушение свертывания крови
3. гломерулонефрит
4. иммунодефицит
5. лейкоз
Ответ: А 4

87. Стоматологу во время работы с ВИЧ инфицированным пациентом на слизистую глаз попала слюна с элементами крови.
Постконтактное профилактическое лечение назначают
А не позднее 72 часов от произошедшего контакта
Б через 7 дней после контакта
в течение
1. 3 недель
2. 6 недель
3. 4 недель не более
4. 24 часов
5. 1 года
Ответ: А 3

88. У ВИЧ инфицированного пациента выставлен диагноз: IV клиническая стадия ВИЧ инфекции, ему назначена антиретровирусная терапия. Каким количеством препаратов она будет проводиться
Ответ: тремя антиретровирусными препаратами

89. Больному СПИДом назначена антиретровирусная терапия. В течение, какого времени ее следует проводить
Ответ: всей жизни непрерывно

90. Больному СПИДом назначена специфическая терапия. Какие препараты используются для лечения ВИЧ инфекции
Ответ: антиретровирусные средства

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Доктор Роберто Жиральдо (Dr Roberto Giraldo) - доктор медицины, специалист по внутренним болезням, инфекционным, иммунологическим и тропическим болезням из университетов Антиокия (Колумбия), Канзаса и Лондона. Независимый исследователь СПИДа с 1981 года. Работал с так называемыми тестами на ВИЧ в течение 13 лет в Нью-Йорке в больнице Медицинского центра Корнелл. Автор ряда критических статей и книг по проблемам СПИДа. Бывший президент общества по переосмыслению СПИДа. В настоящее время является директором департамента психосоматической медицины Международного общества аналитической трилогии в Сан-Паулу, Бразилия. В мае 2008 года принимал участие в международной конференции СПИД-диссидентов, проходившей в Екатеринбурге.

КАЖДЫЙ ПОЗИТИВЕН ПРИ ELISA (ИФА) – ТЕСТИРОВАНИИ НА ВИЧ.

1. Разбавление сыворотки при использовании теcта ELISA.

ELISA является тестом для определения антител, которые, как полагают, вырабатываются против Вируса Иммунодефицита Человека (ВИЧ). Для проведения этого теста, сыворотка пациента должна быть разбавлена специальным раствором в соотношении 1:400. В соответствии с заявленными производителем параметрами, этот раствоитель содержит: 0,1% тринитротолуола Х-100, коровью и козью сыворотки (минимальная концентрация – 5%), человеческие лизаты Т-лимфоцитов (минимальный титр 1:7500), консервант – азид натрия – 0,1%.

Необходимость такого необычно большого растворения сыворотки пациента [400 раз] удивила меня. В большинстве серологических тестов, выявляющих присутствие антител к микробам используется чистая сыворотка [неразбавленная]. Например, в тестах, выявляющих антитела к вирусам гепатита А и В, вирусу коревой краснухи, сифилису, гистоплазме и криптококу, используется обычная сыворотка [неразбавленная]. Однако, во избежание ложноположительных реакций, в некоторых из серологических тестах используется разбавленная сыворотка; например в случае проведенных мною тестов на определение антител к вирусам кори, ветряной оспы и свинки использовалось разбавление в соотношении 1:16, к цитомегаловирусу – 1:20 и к вирусу Эпштейна-Барра – 1:10.

Возникают очевидные вопросы: что делает ВИЧ столь уникальным, что тестируемую сыворотку необходимо разбавить в соотношении 1:400 и что произойдёт, если сыворотка не будет разбавлена?

2. Испытание теcта ELISA без разбавления сыворотки.

Для того, чтобы ответить на эти вопросы, я произвёл эксперимент в медицинской лаборатории Йорктаун Хайтс (Yorktown Heights), находящейся в Нью-Йорке. При проведении этого эксперимента я использовал те же реагенты тест-систем, которые обычно используются при постановке теста ELISA в большинстве клинических лабораторий по всему миру.

Сначала, я взял образцы крови, которые при разбавлении в соотношении 1:400 дали отрицательный результат на антитела к ВИЧ. Затем, используя точно те же образцы сыворотки, я произвёл ещё одно тестирование, но на этот раз не разбавляя их. Неразбавленные, они все были положительными.

Я протестировал около 100 образцов, и всё время получал такой же результат. Я протестировал даже собственную кровь, которая при разбавлении 1:400 была негативной, но в соотношении 1:1 [неразбавленная] показывала положительную реакцию. Я должен упомянуть, что за исключенем моей собственной крови, все остальные образцы [крови пациентов] были получены от врачей, запрашивавших ВИЧ-тестирование. Таким образом, наиболее вероятно, что большинство образцов крови протестированных мною принадлежали лицам, подверженным риску СПИДа.

Что я заметил, это то, что степени оптической плотности образцов дававших отрицательный результат при разбавлении [1:400], но позитивных при тестировании неразбавленными [1:1], имели более низкие значения, чем те образцы, которые при разбавлении были положительны по ELISA и Western Blot. Это, вероятно, должно означать, что кровь, негативная при разбавлении, но позитивная, будучи неразбавленной, имеет более низкий уровень антител, чем разбавленная кровь, положительно реагирующая в обоих случаях и, таким образом, можеть быть негативна по Western Blot [если разбавлена]. Однако, у меня не было возможности проверить эту гипотезу.

3. Дискуссия.

Возможны три объяснения того факта, что неразбавленный образец крови всегда реагирует положительно при тестировании ELISA:

3.1. Антитела присутствуют у каждого из нас.

Это могло бы означать что все мы подвержены воздействию вируса, который, как верят, является причиной СПИДа. Люди, реакция которых положительна даже при растворении [сыворотки] в соотношении 1:400, были бы теми, кто подвергся наибольшему риску воздействия ВИЧ-антигенов. Остальные, – те, кто чья реакция проявлялась при нерастворённой сыворотке, – были бы теми, кто имел более низкий риск подвержености ВИЧ.

3.2. Каждый из нас имеет различный уровень антител к ВИЧ.

3.3. Тест не является специфичным для ВИЧ.

Результаты, представленные здесь могут, также, означать, что тесты, используемые для определения антител к ВИЧ не являются специфичными для ВИЧ, как было изложено выше. В этом случае, должны быть причины, отличные от ВИЧ-инфекции, в настоящем или прошлом, которые бы объясняли почему данное лицо реагирует позитивно на этот тест. Этот тест показывает положительную реакцию, также, при отсутствии ВИЧ.

В научной литературе задокументировано более чем 70 причин, отличных от инфицирования ВИЧ в прошлом или настоящем, при наличии которых возможна положительная реакция. Все эти причины имеют одно общее – полиантигеннуую стимуляцию.

Интересен тот факт, что в некоторых странах, – например в Великобритании, – диагностика ВИЧ-статуса проводится только лишь на основании [результатов] теста ELISA. Для этой цели не производится тестирование Western Blot или какие-либо иные тесты.

В связи с тем, что не существует научного доказательчтва факта специфичности теста ELISA к ВИЧ-антителам, реактивный тест может означать наличие неспецифичных или полиспецифичных антител. Эти антитела могут присутствовать во всех образцах крови. Они, наиболее вероятно, являются результатом стрессовой реакции и не имеют никакого отношения к каким бы то ни было ретровирусам, не говоя уже о ВИЧ. В этом случае, реактивный тест может быть мерилом уровня подверженности стрессогенному фактору или оксидативным агентам.

Неизбежный вывод состоит в том, что все положительные реакции на наличие антител к ВИЧ являются просто ложно положительными. Если никто не является ВИЧ-положительным, то те, кто люди, чья реакция позитивна при тестировании ELISA, имеют какю-либо иные, отличные от ВИЧ, причины для такой реакции.

Результаты этого эксперимента могли бы показать имеют ли данные тесты отношение к определению подверженности индивидуума стресс-факторам или оксидативным агентам. Если данное предположение получит своё подтверждение, то тестирование могло бы быть сохранено как инструмент для измерения уровня интоксикации индивидуума.

После выхода известного фильма Дудя большинство ВИЧ-сервисных НКО захлестнула волна желающих провериться. В том числе и СПИД.ЦЕНТР — поток клиентов увеличился почти втрое, а на тестирование пришли люди, раньше никогда не посещавшие открытого пространства фонда на Artplay.

Ввиду большого интереса публики, в том числе и клиентов, дошедших до нашего лофта на Нижней Сыромятнической, сегодня мы рассказываем, как устроены эти и другие тесты на ВИЧ. Почему на ручке тестера появляются полоски, насколько такое тестирование достоверно и надежно, а главное — какие альтернативы ему существуют.

Все, что вы хотели узнать о технологии тестирования на ВИЧ-инфекцию, — в одном материале.

Все анализы на ВИЧ предназначены для того, чтобы либо разыскать части вируса, либо зафиксировать реакцию организма на его присутствие. Поэтому, чтобы понять, как работают тесты на ВИЧ, нужно примерно представлять, как устроен вирус и как он себя ведет, оказавшись в клетке.

Вирус ВИЧ — член семейства ретровирусов (Retroviridae). Представители этого семейства выглядят как крохотные круглые частицы, у которых есть оболочка, усеянная особыми белками. При помощи этих белков вирус распознает клетку-жертву и прикрепляется к ней.

Тестов на ВИЧ очень много, но их можно разделить на несколько больших типов. Те экспресс-тесты, которыми пользуются большинство ВИЧ-сервисных НКО, устроены по принципу иммуноферментного анализа, или ИФА.

Их задача — определить антитела к ВИЧ, которые организм вырабатывает в ответ на проникновение в него вируса.

Как это работает? Когда вирус ВИЧ попадает в организм, иммунная система человека не сидит без дела. Она начинает продуцировать антитела — иммунные белки, которые помогают организму бороться с инфекцией. Эти белки можно обнаружить во многих биологических жидкостях.

Способов обнаружения таких антител существует много. Но наиболее популярным считается именно иммуноферментный анализ (ИФА). За рубежом этот тест называется enzyme-linked immunosorbent assay, сокращенно — ELISA.

В экспресс-тестах, которые используются фондом СПИД.ЦЕНТР и многими другими нашими коллегами для бесплатного и анонимного тестирования, антитела тонкой линией нанесены на специальную поверхность, спрятанную под пластмассовым корпусом тестера.

Сначала клиент промокает десневую жидкость лопаточкой, установленной на конце тестера. А как только жидкость собрана, лаборант опускает лопаточку в реагент, который в течение 15 минут поднимается по тестеру, достигая в итоге полоски с антигенами.

Если антитела в десневой жидкости, смешанной с реагентом, были — полоска краснеет.

Как правило, на ручке тестера имеется и вторая полоса — контрольная, она окрашивается в красный всегда. Так что, как правило, отрицательный результат (вируса в организме нет) маркируется одной полоской на рукоятке тестера, а положительный (вирус в организме есть) — двумя.

Две полоски на тестере — это верный признак того, что человек некоторое время назад получил ВИЧ-инфекцию. А стало быть, клиенту срочно нужно обратиться к врачу за терапией — в областной или городской центр СПИД. Там ему будут назначены подтверждающие анализы и прописана антиретровирусная терапия.

Точно такой же тест (ИФА), только лабораторный, можно сделать и во многих коммерческих клиниках — но за деньги. Технология его в целом выглядит так же, а точность отличается незначительно.

Какие бывают тесты ИФА?

● Лабораторный ИФА-тест — анализ на ВИЧ по форме 50. В нашей стране его применяют в качестве стандартной процедуры лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. Материал для анализа — кровь из вены, которую нужно сдавать в лаборатории. Результаты приходят через 1—5 дней.

Что важно знать об ИФА-тестах?

Подтверждающие тесты: вестерн-блоттинг (WB)

Цель этого теста — подтвердить результаты первичного анализа.

Чтобы провести анализ, у человека берут кровь и добывают из нее сыворотку. Это все та же кровь, только без эритроцитов, иммунных клеток и всего остального, что может образовывать сгустки крови. Потом эту сыворотку наносят на полоску из нитроцеллюлозы, на которой в строгом порядке размещены различные антигены ВИЧ — белки из оболочки и нуклеокапсида вируса. Если в сыворотке крови уже успели появиться антитела, они свяжутся с антигенами, размещенными на полоске.

Какие бывают тесты этого типа? Разные. Некоторые позволяют подтвердить наличие вируса ВИЧ-1, некоторые — ВИЧ-2, а некоторые — обоих вариантов вируса сразу.

Пример: российская тест-система ИФА-Лайн-Блот-ВИЧ-1,2. Эта тест-система участвует в тендерах — закупках в государственные лаборатории, которые действуют при СПИД-центрах.

Что важно знать о вестерн-блоте?

В России вестерн-блоттинг считается золотым стандартом подтверждения ВИЧ-инфекции. Проблема заключается в следующем.

1. Вестерн-блоттинг все равно иногда дает неопределенный результат. В этой ситуации тест придется пересдать, причем только через три недели.

2. Вестерн-блоттинг дорогой и долгий. Тест требует сложного оборудования, кропотливой работы и квалифицированного персонала. А чтобы разобраться с результатами, нужна помощь эксперта.

В чем проблема с российскими анализами на ВИЧ?

В нашей стране для подтверждения ВИЧ-статуса используют лабораторный ИФА-тест и вестерн-блоттинг — это стандартная процедура. Однако Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) отмечает: в странах, где действует эта схема, на определение ВИЧ-статуса тратится очень много времени и средств. Причем ожидание результата настолько изматывает, что некоторые пациенты даже жалеют о решении узнать свой ВИЧ-статус.

Эксперты ВОЗ советуют отказаться от лабораторных ИФА-тестов и вестерн-блоттинга в пользу комбинированных экспресс-тестов, которые дают быстрый и более надежный результат. И это действительно работает.

Комбинированные тесты

Цель комбинированных тестов, как и вестерн-блоттинга, — определить ВИЧ-статус человека.

● Пример лабораторного комбинированного теста — HIV Ag/Ab Combo, который делают в частных лабораториях за деньги.

Что важно знать об этом тесте? Этот анализ относится к четвертому поколению. На сегодняшний день во всем мире именно он считается оптимальным способом выявления инфекции, потому что недорог и позволяет относительно рано узнать ВИЧ-статус клиента.

Если речь идет об определении ВИЧ-статуса, то в Европе и США чаще всего прибегают именно к комбинированным тестам. Если тест дает положительный результат, нет необходимости проводить подтверждающий анализ, его просто через некоторое время сдают повторно — и это считается достаточно надежным.

Дело в том, что антиген — вирусный белок р24 — появляется в крови уже в первую неделю после заражения, то есть задолго до того, как вырабатываются антитела. Поскольку комбинированный тест определяет антиген, шанс узнать свой статус есть уже через 21—28 дней после предполагаемого инфицирования.

После того как начинают вырабатываться антитела, вирусный белок р24 из крови пропадает. Иногда это происходит уже на вторую неделю, но у 90—95 % инфицированных людей антитела появляются в крови в первые три месяца после заражения.

Предсказать, когда именно появятся антитела, невозможно, ведь организм каждого человека по-своему реагирует на вирус ВИЧ. Но даже если антиген р24 из крови успеет исчезнуть, комбинированный тест найдет если не р24, то как минимум антитела, и все равно даст верный ответ.

ПЦР: самый сложный анализ

Тесты, позволяющие определить непосредственно генетический материал вируса ВИЧ, называются полимеразной цепной реакцией с обратной транскрипцией (ПЦР-ОТ).

Методов полимеразной цепной реакции (ПЦР), при помощи которой можно определять вирус ВИЧ, существует много. Но понять, что именно происходит в пробирке, проще всего на примере ПЦР с обратной транскрипцией (ПЦР-ОТ).

Реакцию ПЦР-ОТ можно провести в режиме реального времени. Это помогает достаточно точно понять, сколько вирусных частиц находится в организме. Обычно для этого в реакционную смесь добавляют кусочек ДНК, помеченный химическим веществом, которое начинает светиться, когда кусок ДНК встраивается в молекулу. Так как этот кусочек ДНК подходит только к одному участку вирусной ДНК, можно подсчитать количество вспышек и понять, сколько же вирусной РНК первоначально было в образце.

Видео: как работает ПЦР-тест

Но тест этот очень дорогой и сложный. Впрочем, это не единственная причина, по которой его не используют для определения ВИЧ-статуса для всех, хотя и это можно сделать в частной лаборатории за деньги. Дело в том, что тест подходит для определения только одного типа вируса — ВИЧ-1. ВИЧ-2 он не находит. Поэтому анализы ПЦР на ВИЧ обычно используют только для контроля лечения человека, который уже знает свой ВИЧ-статус.