Определение вирусной нагрузки вич методом пцр

ПЦР – основной метод контроля течения ВИЧ-инфекции. Иногда его используют для первичной диагностики этого заболевания.

Суть методики ПЦР при ВИЧ

Не вдаваясь в сложные технические детали исследования, суть его можно описать следующим образом:

1. У вируса есть генетический материал. Он закодирован в РНК (рибонуклеиновой кислоте) с помощью нуклеотидов (молекул четырех видов, которые располагаются в разной последовательности).

2. Ученые владеют информацией о некоторых участках РНК, знаю нуклеотидную последовательность.

3. В ходе ПЦР проводится многократное удвоение вирусной РНК и сравнение её с эталоном (известной последовательностью нуклеотидов).

Таким образом, исследование позволяет определить, есть ли в крови пациента специфические – уникальные только для вируса иммунодефицита – фрагменты РНК. Определяется не только факт их наличия, но и количество – концентрация копий РНК в 1 мл крови. Эта информация важна для планирования лечения и оценки эффективности терапии.

Кому проводится ПЦР?

Основные области применения ПЦР:

1. Тестирование донорской крови на ВИЧ. Её проверяют и с помощью серологических тестов. Но те могут дать ложноотрицательный результат, если инфицирование произошло недавно. Поэтому кровь дополнительно обследуется методом ПЦР для выявления вирусной РНК – самого раннего маркера инфекции.

2. Первичная диагностика ВИЧ у новорожденных. Обычно для первичной диагностики ВИЧ-инфекции используют серологические тесты. Но в случае обследования новорожденных они не будут эффективными. Раз пациенту назначены анализы, это означает, что он родился от ВИЧ-инфицированной матери. В её крови есть антитела к вирусу иммунодефицита. Это означает, что они будут обнаруживаться и в крови ребенка.

Таким образом, при обследовании всех детей, рожденных от ВИЧ-позитивных матерей, будут получены положительные результаты ИФА. Но это не означает, что передача инфекции произошла. Ведь организм ребенка вполне может и не продуцировать собственных антител.

Диагноз можно подтвердить и с помощью серологических методов. О ВИЧ-инфекции говорит более высокая концентрация антител в крови ребенка, чем у матери, а также возрастание титра в динамике (если это материнские антитела, то их уровень должен со временем снижаться, а не увеличиваться).

В качестве альтернативного теста используется ПЦР. Обнаружение вирусной РНК тоже считается подтверждением присутствия вируса иммунодефицита. Специфичность теста составляет 99% (риск ложноположительного результата не превышает 1%). Но чувствительность ниже – около 96%. Поэтому требуется два исследования: первое проводится через месяц после родов, а второе – через 3 месяца (в этом возрасте чувствительность ПЦР достигает 100%).

Даже при двух отрицательных результатах ПЦР, нужно подтвердить исчезновение из крови материнских антител при помощи ИФА. Поэтому анализы сдаются в возрасте 1 год. Если положительная реакция сохраняется, то контроль проводится в полтора года.

3. Слабоположительная реакция. ИФА на ВИЧ является скрининговым тестом. Его результаты подтверждаются при помощи иммуноблота. Но это исследование иногда дает сомнительные результаты. В таких ситуациях стандартный алгоритм диагностики предполагает дополнительное тестирование таких пациентов через несколько месяцев. Но бывает, что результаты снова оказываются сомнительными или слабоположительными.

Самой частой причиной сомнительных результатов является недавнее инфицирование пациента. Но он также может быть следствием другой инфекции. Чтобы точно узнать, имеется ли у человека ВИЧ, можно выполнить ПЦР. Этот метод покажет точный результат уже после первого случая получения слабоположительной реакции.

4. Острый ретровирусный синдром. В большинстве случаев по своим клиническим проявлениям ничем не отличается от гриппа или инфекционного мононуклеоза. Большинство пациентов проходят под диагнозом ОРВИ. Но внимательный врач может обратить внимание на длительную лихорадку, тяжелое течение инфекции, отсутствие насморка и увеличение сразу нескольких групп лимфоузлов.

Ретровирусный синдром начинается спустя месяц после заражения. В этот период антител в крови ещё может не быть. Но ПЦР уже становится положительной. Поэтому именно этот способ диагностики применяют, если есть подозрение, что больной мог заразиться совсем недавно.

5. Противоречивые результаты основных тестов. Основными тестами является ИФА и иммуноблот. Иногда они проводятся одновременно, иногда – последовательно. Положительная реакция ИФА становится поводом для проведения иммуноблота. Это подтверждающий тест. Если он положительный, ставится диагноз ВИЧ. Но бывает, что подтверждающий тест оказывается отрицательным. Причин тому может быть две:

• ложноположительный результат ИФА (бывает в 3-4% случаев);
• ложноотрицательный результат иммуноблота (обычно в ранний период после заражения).

Разрешить противоречие помогает ПЦР. При отрицательном результате ВИЧ исключают, а при положительном – подтверждают. В случае получения отрицательного результата желательно повторно сдать анализы через 3 месяца, чтобы на 100% удостовериться в отсутствии ВИЧ.

6. Определение показаний к экстренной профилактике ВИЧ у медработника. Профилактика антиретровирусными препаратами показана, только если медработник повредил свою кожу инфицированным материалом. Иногда неизвестно, инфицирован ли человек, с кровью которого произошел контакт. В таком случае для его обследования лучше провести ПЦР, чем серологические тесты, так как они дают ложные положительные результаты на раннем этапе развития заболевания.

Изредка необходимость в ПЦР возникает, если нужно отличить ВИЧ 1 и 2 типа. Второй тип встречается редко – у 1 из 200 инфицированных. Обычно иммуноблот позволяет провести дифференциальную диагностику. Но иногда наблюдаются случаи перекрестной реактивности, когда антитела к ВИЧ-1 взаимодействуют с антигенами ВИЧ-2. Более точным тестом, позволяющим точно определить тип вируса, является ПЦР.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Большинство производителей тест-систем указывают, что ПЦР может использоваться в качестве метода первичной диагностики ВИЧ. Однако в действительности в большинстве стран, в том числе в России, анализ на вирусную РНК не используют для этой цели, предпочитая ему серологические исследования. Это связано с некоторыми недостатками диагностического метода:

1. Большинство тестов, использующихся в рутинной врачебной практике, определяют только ВИЧ 1 типа. Но существует также ВИЧ 2 типа, вызывающий около 0,5% случаев заболевания.

2. Риск ложноотрицательного результата. Вирус быстро мутирует. Его генетический материал постоянно меняется. Поэтому участок РНК, на поиск которого направлена ПЦР, может оказаться измененным. Проблема решается путем проведения ПЦР с двойной мишенью. В этом случае реакция направлена на поиск сразу двух специфических фрагментов РНК. Вероятность, что оба они окажутся измененными в результате мутации, чрезвычайно мала. Но такое исследование стоит дороже.

3. Не выявляется ВИЧ у элитных контроллеров. Это группа людей – около 1% — организм которых способен сдерживать развитие вируса без помощи лекарств. У них не развивается синдром иммунодефицита. Вирусная нагрузка очень маленькая, поэтому ПЦР дает отрицательный результат. Но антитела в крови определяются, поэтому серологические тесты более эффективны. Существуют также люди с временным контролем ВИЧ-инфекции. У них способность контролировать вирус выражена слабее. Но на некоторое время достигается полное его подавление. И если в этот промежуток времени провести ПЦР, она покажет отрицательный результат.

4. Низкая эффективность после экстренной профилактики. Её выполняют после того как состоялось действие, которое могло послужить фактором передачи инфекции. Например, это может быть:

• ребенок, которого ВИЧ-инфицированная мать покормила грудным молоком;
• взрослый, вступивший в половую связь с ВИЧ-инфицированным человеком;
• медработник, уколовшийся зараженной иглой.

Но имеются и плюсы. ПЦР редко дает ложноположительные результаты. Кроме того, метод определяет количество вирусов в крови, что важно для выбора лечебной тактики.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где можно сдать?

Большинство лабораторий выдают результаты через 2 дня и более с момента взятия биоматериала. Сдать анализ ПЦР на ВИЧ в Москве по доступной цене вы можете в нашем медицинском центре.

Способ лечения болезни, вызванной вирусом иммунодефицита человека, не найден до сих пор. Зато диагностика достигла серьезных успехов. Анализ на ВИЧ, выполненный методом ПЦР, – один из вариантов выявления вируса в организме.

Суть методики ПЦР при ВИЧ

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР, – один из современных методов диагностики ВИЧ. В его основе лежит способность нуклеиновых кислот к саморепродукции. Клетка любого живого организма включает белок и нуклеиновые кислоты:

• РНК- рибонуклеиновую,
• ДНК- дезоксирибонуклеиновую.

Наиболее точный результат можно получить, используя для анализа венозную кровь. Перед тем как пройти обследование, за пару дней следует отказаться от жирной пищи и алкоголя. За 2 недели прекратить прием иммуностимулирующих препаратов.

Пробу биоматериала расщепляют в медицинском лабораторном реакторе. Затем фракции обрабатывают ферментами. Реактивы объединяются с ДНК вирусной молекулы и дублируют ее. Из одной клетки получается 2, из 2-х – 4, далее 8. Число растет в геометрической прогрессии. Цепная реакция позволяет в короткий срок увеличить количество вирусного компонента и сделать его заметным для лаборантов.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР имеет неоспоримые преимущества, но есть и существенные недостатки. К первым относятся:

• Высокая точность. Крайне мала вероятность получить ложноотрицательные результаты.
• Универсальность. Для исследования подходит не только кровь, но и другие биологические жидкости (влагалищные выделения, сперма). Слюна, моча также используются, но точность результата будет ниже. В этих средах концентрация вирусных клеток незначительна.
• Широкий спектр анализа. Один образец биоматериала можно исследовать на несколько заболеваний.
• Скорость выполнения. Полимеразная цепная реакция относится к срочным методам диагностики. Ответ можно узнать уже на следующий день.
• Достоверность составляет 80 %. С помощью метода ПЦР можно обнаружить вирусные частицы, даже если их концентрация невелика. Это позволяет диагностировать заболевание на ранних стадиях и своевременно начинать терапию.
• Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции. Время, когда ВИЧ обнаруживают в крови при помощи ПЦР, – 10-14 дней после предполагаемого заражения. Это стандартный отрезок для диагностики вируса иммунодефицита. Антитела на этом этапе еще не обнаруживаются; метод ИФА не работает.
• Нет возрастных ограничений. Можно проводить это тестирование ребенку с момента рождения.

Недостатки метода ПЦР при диагностике ВИЧ:

• Более высокая стоимость в сравнении с иммуноферментным анализом 3 поколения.
• Требуется сложное медицинское оборудование.
• Погрешность 20% в связи с высокой чувствительностью реакции. При аутоиммунных заболеваниях, злокачественных опухолях, хронических инфекциях ПЦР может дать ложноположительный результат.

Кому проводится ПЦР

Проведение этого анализа на ВИЧ рекомендовано в следующих случаях:

• Нужен ранний ответ для предварительного диагностирования. ПЦР помогает подтвердить или опровергнуть результаты ИФА.
• Иммуноблоттинг дал положительный результат. Если первым проводится ПЦР анализ, то обязательно подтверждение результата методом иммунного блоттинга. Исследования дополняют друг друга. Используя сразу 2 метода, медики исключают возможность ошибок.
• Когда позитивный ВИЧ-статус подтвержден, ПЦР помогает отследить эффективность проводимой терапии.
• Используется для исследования донорской крови на наличие антител к ВИЧ.
• Проводить ПЦР можно даже детям до года. Этот метод применяется, чтобы выяснить ВИЧ-статус новорожденных, мамы которых являются носительницами вируса. Тест, проведенный в первые дни жизни, покажет, произошло ли внутриутробное инфицирование. Заражение могло случиться, когда ребенок проходил по родовым путям. Положительный ВИЧ-статус, приобретенный младенцем в процессе родов, удастся выявить через 2 – 3 недели.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где можно сдать

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ и расшифровка результатов не требуют много времени. Забор крови занимает 5-7 минут. В стандартном случае лаборанту достаточно 24 часов, чтобы подготовить справку. Диагностирование занимает не более 8 часов, остальное время требуется на оформление. Пациент получает отчет на следующий рабочий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.

Исследования на ВИЧ указанным способом не проводят по полису ОМС. Получить эту услугу бесплатно в государственной поликлинике нельзя. Зато практически все коммерческие лаборатории обычно имеют необходимое оборудование и реагенты. Проведение анализа ПЦР часто входит в общий скрининг на ВИЧ. Цена комплексной диагностики составляет от 600 до 1000 руб.

Пройти процедуру можно анонимно. В регистратуре пациенту дают индивидуальный номер, по которому он узнает результат. Современные медицинские центры отображают все данные на своем сайте в личном кабинете клиента.

Что нас дурачат ВИЧ/СПИДом уже 30 лет, это медицинский факт, который давно уже не нуждается ни в каких доказательствах. Я никого не хочу обижать, но правда такова, что в настоящий момент, имея перед собой всю имеющуюся информацию об альтернативной точке зрения, то есть представленную ВИЧ-диссидентами, просто невозможно продолжать и далее наивно верить в искусственно созданную и навязанную с помощью циничной и лживой пропаганды ВИЧ/СПИД-теорию.

Если вы высказывали своё недоумение по поводу того, что диагностические тесты на ВИЧ определяют не сам вирус, а только антитела к нему, причём это относится не только к иммуноферментному анализу, но и к считающемуся более точным иммунному блотингу, то наверняка потом слышали уверения врачей или неких осведомлённых людей о том, что вот есть метод полимеразной цепной реакции, который не имеет отношения к антителам, а выявляет непосредственно сам вирус.
Слышали о методе ПЦР-диагностики, и в частности ВИЧ-инфекции? Наверняка. А пробовали хоть немного вникнуть и разобраться? Нет? Итак ясно, что нас дурачат? Хорошо. Но сейчас я покажу это наглядно, на пальцах.

Да, нас действительно нагло и цинично дурачат, когда заверяют, что ПЦР-тест на ВИЧ определяет наличие самого вируса или его концентрацию в крови, то есть вирусную нагрузку. И сразу скажу, что в этом отношении метод ПЦР не только ничем не отличается от ИФА и ИБ, но можно сказать прямо основан на точно таком же принципе.
Что это значит? Напомню, что диагностические ВИЧ-тесты ИФА и Иммуноблот основаны на реакции антител в исследуемом образце с помещёнными в сам тест антигенами вируса. Что там в тест-системах в качестве этих ВИЧ-белков - одному Богу известно, и то наверное далеко не всё. Соответственно, совершенно непонятно, какие антитела вступают в реакцию с этими якобы ВИЧ-белками, в результате чего приводится список в 62 пункта о заболеваниях и состояниях, вызывающих ложноположительную реакцию.

Что лежит в основе метода полимеразной цепной реакции, и каким образом происходит диагностирование на наличие инфекционных заболеваний? В случае с гепатитами и ВИЧ исследуется кровь пациента. Чтобы установить присутствие конкретного возбудителя заболевания в исследуемом образце крови, для ПЦР-тестирования используется праймер, то есть фрагмент ДНК самого возбудителя, комплементарный к специфическому участку его ДНК, то есть в сущности праймер присоединяется к участку ДНК точно так же, как соединяются между собой участки двойной спирали ДНК.
Улавливаете? Берётся ваша кровь, потом к ней добавляется нечто, что якобы несомненно является уникальной частью генома ВИЧ-вируса, добавляются другие необходимые ингредиенты, потом раз тридцать всё это то нагревается, то охлаждается, и в результате - вуаля! вы ВИЧ-положительны! ваша вирусная нагрузка 3 миллиона! срочно начинайте приём терапии!

Но подождите. Вы разве не видите, как с самого начала вас одурачили?
Вас уверяли, что метод ПЦР выявляет сам вирус. Но это абсолютная ложь! Метод ПЦР в этом отношении ничем не отличается от ИФА и ИБ! Как там под видом ВИЧ-антигенов в тест-системах используется неизвестно что, так и в ПЦР-тестах под видом праймеров, выдаваемых за часть ДНК самого ВИЧ, точно так же используется совершенно неизвестно какая субстанция. Вы же понимаете, что если ВИЧ не существует, то не может быть и речи ни о каком ДНК ВИЧ, или РНК ВИЧ, или об антителах к ВИЧ, в частности материнских, которыми нам трахают мозги, рассказывая, что они есть у всех детей от ВИЧ-положительных матерей, и сами собой исчезают на втором году жизни.

Вот так.
- Метод ПЦР выявляет сам вирус ВИЧ, тут не может быть никаких ошибок и сомнений! И этот точнейший метод показывает вирусную нагрузку, что очень важно для наблюдения динамики заболевания и его лечения!
- Ну-ну.. Сам вирус говоришь? А что там используется в качестве праймера? Тот же самый вирус? Тот самый, который Монтанье и Галло открыли 30 лет назад? Правда они его нашли? Правда очистили? Правда сфотографировали? Правда доказали, что он для репликации/воспроизводства использует Т-лимфоциты, в результате чего их общая численность истощается и наступает опасный иммунодефицит? Это всё правда?

И в сущности метод ПЦР в спидологии применяется не столько благодаря его изобретателю Кэри Муллису (скорее даже вопреки его мнению!), сколько благодаря Монтанье и Галло, которые высосали из пальца ВИЧ, и ДНК-праймеры которого используются при ПЦР-диагностике ВИЧ.

Так что вот так вот. Если вам сказали, что по результатам ПЦР-тестирования вы ВИЧ-положительны, и у вас высокая вирусная нагрузка, или речь идёт о вашем ребёнке - не волнуйтесь ни секунды! вас нагло обманывают! Сам изобретатель метода полимеразной цепной реакции, микробиолог Кэри Муллис, является ВИЧ-диссидентом, и он категорически против использования ПЦР в ВИЧ-диагностике, потому как хорошо понимает, что в случае с несуществующим ВИЧ-вирусом это просто наглый циничный обман.

Ещё момент. Вы слышали про неопределяемую вирусную нагрузку? Дело в том, что далеко не у всех ВИЧ-положительных при тестировании на количество вируса в крови выходит некий результат, который в зависимости от величины считается низкой либо высокой вирусной нагрузкой. Если бы таких людей было совсем мало, о них бы вообще не говорили. Но дело в том, что их видимо очень много, и поэтому и говорится о неопределяемой вирусной нагрузке при ВИЧ-инфекции. Я не буду упоминать про пиар терапии, которая якобы снижает ВН до неопределяемой. Нет, в том и дело, что без всякой терапии у очень многих людей она не определяется. Никогда.
То есть, пациенту поставлен диагноз ВИЧ-инфекция, но с помощью знаменитого сверхчувствительного космически точного метода ПЦР-диагностики в его организме невозможно найти ВИЧ-вирус. Как же так?

И тогда нам говорят, что метод конечно уникальнейший, но современные технические средства таки накладывают ограничения, и саааамые маааалые коооолиииичестваааа виииируууссааа не мооогууут быть обнаружены при ПЦР-диагностике.

То есть, ВИЧ у пациента несомненно есть. Вирус неизлечим, неистребим, хитёр, коварен, злокознен, чрезвычайно умён и изобретателен. И даже суперволшебный метод ПЦР не в состоянии обнаружить, где там хитрющий вирус прячется от учёных и врачей.
Получается, что с одной стороны нам рассказывают, какой чудесный и высокоточный метод ПЦР, он де по одной молекуле может угадать всего слона и даже кита - а с другой стороны потувши очи долу нам невнятно мямлят про неопределяемую вирусную нагрузку у тысяч пациентов, которые десятки лет живут с диагнозом ВИЧ-инфекция и не принимают антиретровирусное лечение.

Такие дела. Дурачат нас, как хотят. А вы не будьте непугаными идиотами. Не верьте на слово никаким врачам и учёным. Они вам трижды по семь коробов наговорят про космическую точность ПЦР-тестов, но всего одно замечание об используемых при этом ВИЧ-праймерах в момент и вдребезги разбивают всю великолепную картину. Потому что смеха ради можно сказать, что как Галло запатентовал первые ВИЧ-тесты, когда открыл фальшивый ВИЧ-вирус, точно так же он мог бы запатентовать и ВИЧ-праймеры для ПЦР-диагностики ВИЧ-инфекции, потому что праймеры в сущности то же самое, что и антигены ВИЧ - некие специфичные, присущие только этому вирусу биологические субстанции (фрагменты генома или специфические белки). 

Почему так страшен ВИЧ и СПИД, какие существуют методы диагностики. Углубленная информация про ПЦР-исследования.

Вирус иммунодефицита человека. Чума 20-го века.

По статистике, предоставленной Всемирной организацией здоровья совместно с организацией ООН ЮНЭЙДС, за последние сорок лет более 25 миллионов пациентов скончались от заболеваний ВИЧ и СПИД. Не зря эпидемиологи окрестили ВИЧ чумой 20-го века, так как урон, нанесенный этой инфекцией человечеству, имеет колоссальные масштабы. Наиболее сильно заражению подверглись страны африканского континента. Заражение сильно бьет по экономике и без того нестабильных государств, народ нищенствует.

При появившейся симптоматике чрезвычайно важна оперативная диагностика заражения организма ВИЧ-инфекцией, потому как вовремя пройденный курс терапии способен спасти или хотя бы увеличить срок жизни пациента. В нынешнее время технологический прогресс шагнул далеко: изобретены новейшие способы диагностики вируса ВИЧ и СПИДа, лечение доступно для любого человека планеты, достоверность анализов характеризуется малой долей погрешности, а терапия большим процентов эффективности.

Диагностика инфекции ВИЧ

В нашей стране выявление присутствия в организме пациента ВИЧ-инфекции представляет собой комплекс анализов:

• Иммуноферментный анализ
• Иммунный блоттинг
• Полимеразная цепная реакция
• Экспресс-тесты

Скрининг (тест ИФА) является первоначальной стадией определения заражения в организме. Он базируется на образованных в искусственных условиях белковых соединениях вируса, которые идентифицируют продуцируещиея иммунными клетками антитела как реакцию на заражение. Происходит химическая реакция между реактивами, вследствие чего индикаторный элемент меняет цвет. Значит, результат теста положительный. Информацию по такому способу можно получить через пару недель с момента инфицирования. Таковой способ выявляет не присутствие инфекции у пациента, а определяет вырабатывающиеся к этой инфекции антитела. Бывает, продуцирование антител стартует через 10-15 дней с момента инфицирования, но в подавляющем большинстве случаев позднее – через 1-1,5 месяца.

Информация по такому анализу обрабатывается от двух до десяти дней.

Достоверность диангоза на ВИЧ подкрепляется анализом ИБ. Исключительно положительный тест ИБ на вирус может служить веской причиной для утверждения инфицирования.

В лаборатории берут пробу венозной крови на анализ. Пробу дополнительно подготавливают, белковые соединения, которые в ней присутствуют, электризуются в испытательной камере, далее их распределяют в гелевой субстанции соответственно молекулярной массе. Бумажную полосу с напылением реактива несколько раз помещают в подготовленную пробу. При наличии в пробе антител к вирусу происходит химическая реакция и на тестовой полосе становятся видны черточки. Когда появляются 2 или 3 черточки p24, gp41, и gp120 или gp160, результат теста положительный.

При получении положительного результата по анализу ИБ с погрешностью в один процент можно сделать заключение о наличии инфекции ВИЧ в организме.

Новейшими технологиями для определения вируса иммунодефицита в организме являются экспресс-методы. Информацию по такому анализу можно получить через несколько минут после проведения. Наиболее высокая достоверность у иммунохромаграфических тестов – специальных тест-полос, на поверхности которых напыляется слой реагента. Антитела, содержащиеся в испытуемом материале, контактирует с реагентом, изменяя окраску индикатора. Через несколько минут проявляются две полоски, что указывает на наличие инфекции. Наличие единственной полосы означает отсутствие инфекции.

Такой тест можно использовать как дополнительный, информация по такому тесту обязательно подтверждается другими исследованиями.

Экспресс-тест на ВИЧ в среднем обойдется в 200-1000 рублей.

ПЦР - это один из основных методов диагностики инфекционных заболеваний. Применяется он и при определении ВИЧ инфекции.

Используется ПЦР для различных целей.

Это может быть:

• первичная диагностика инфекционного заболевания;
• оценка прогноза;
• определение вирусной нагрузки;
• подбор лечения;
• определение резистентности к антиретровирусным препаратам.

В ходе реакции ПЦР выявляют РНК вируса или ДНК провируса из клеток крови. Точность исследования достаточно высокая.

Наибольшая точность у метода, предполагающего обнаружение ДНК. Он позволяет выявить провирус при его концентрации от 1 до 5 копий ДНК на 1 миллион клеток. Исследование обладает высокой специфичностью. Она достигает 97%. Причем, если обнаруживается высокая вирусная нагрузка, то специфичность теста достигает 100%.

Ложноположительные результаты всегда дают низкий уровень вирусной нагрузки. Поэтому при обнаружении такого результата может потребоваться повторное определение ДНК провируса.

ПЦР имеет ограниченное применение. Этот анализ используется чаще всего не для первичной диагностики инфекции, а уже в процессе лечения. Тогда как первичная диагностика проводится с помощью серологических исследований. Это анализы, при которых в крови определяется уровень антител к ВИЧ. Они стоят гораздо дешевле.

ПЦР обходится пациенту в частных лабораториях в сумму 150-200 долларов США. Тем не менее, иногда этот способ бывает необходимым и при первичной диагностике инфекции. Он раньше всего становится информативным. С помощью анализа можно диагностировать ВИЧ уже в острый период. В это время человек страдает от повышенной температуры тела, боли в мышцах и суставах, тошноты высыпаний на коже и других симптомов. Хотя иногда они отсутствуют.

Острый период наступает сразу после инфекционного. В это время антитела методом ИФА еще могут не определяться. А ПЦР уже становится положительной. Однако оснований для назначения данного исследования при возникновении у больного ранних симптомов ВИЧ обычно не возникает. Потому что эти симптомы неспецифичны.

Человек просто идет к терапевту и лечится от острой респираторной вирусной инфекции.

Только если у него есть основания считать, что он заражен ВИЧ-инфекцией, может проводиться первичная диагностика методом ПЦР. Например, если человек имел половые контакты с ВИЧ-положительным партнером. А впоследствии у него проявились симптомы, вызывающие подозрение на инфицирование. Тогда ПЦР даст возможность раньше выявить заболевание и получить своевременную терапию. Ему будут назначены антиретровирусные препараты, которые блокируют размножение вируса и предотвращают нарушения иммунитета.

Антитела становятся положительными только в латентный период. Определение ДНК провируса может быть качественным или количественным. Качественный анализ означает, что результат выдается положительный или отрицательный. Вирусная нагрузка не определяется.

В диагностике ВИЧ вирусная нагрузка имеет большое прогностическое значение. Поэтому чаще используется количественный тест. ПЦР таким образом помогает выяснить, насколько много вирусов содержится в крови пациента. Исходя из этого, планируется необходимый объем терапевтических мероприятий.

Тест ПЦР ультрачувствительный. Он почти не дает ложноотрицательных анализов. Потому что благодаря ПЦР можно выявлять даже минимальные концентрации вируса в организме.

Этот метод часто используется для первичной диагностики ВИЧ инфекции у детей, которые рождены от больных матерей.

Анализ на антитела в детском возрасте не информативен. Потому что в их крови могут циркулировать антитела матери. Их наличие не говорит о том, что ребенок болен. Поэтому в первые 2 месяца жизни малыш должен сдать анализ на ВИЧ методом ПЦР. Через несколько месяцев его проводят повторно. Если оба анализа отрицательные, нет оснований полагать, что у ребенка инфекция. Скорее всего, он здоров. Но кормить грудью его нельзя. Потому что вирус передается через грудное молоко.

В возрасте 1 год при отрицательных результатах анализов ребенка снимают с учета. Показанием для обследования детей может быть только их рождение от ВИЧ-позитивных матерей. Потому что симптомов инфекции у них нет до возраста 5 лет и более. Очень редко клинические признаки появляются раньше.

В среднем риск передачи ВИЧ от матери к ребенку, если она больна, составляет 30%. Антитела в детском организме к этому возбудителю могут обнаруживаться в течение первых полутора лет жизни. К этому времени ребенок серопозитивный всегда, независимо от наличия у него заболевания. После 2 лет жизни диагностика может проводиться с помощью анализа крови на антитела.

Анализ нет смысла сдавать в первые дни жизни ребенка. Потому что в это время возможны ложноотрицательные результаты. Только у одного ребенка из трех в этот период может быть выявлено ДНК провируса в случае, если малыш инфицирован. А вот спустя месяц чувствительность теста достигает 93%.

Это меньше, чем у взрослых. Именно по этой причине требуется двукратное проведение теста с разрывом в 1-2 месяца. Проведение химиопрофилактики ВИЧ не снижает диагностической ценности исследования, что является одним из его преимуществ.

Помимо ДНК провируса, определяется также РНК вируса иммунодефицита человека. Это исследование проводится в основном не для первичной диагностики. Оно назначается пациентам с уже диагностированным заболеванием. Основная цель - это мониторинг эффективности терапии и прогноз патологии. Для определения РНК - это ранний маркер результативности лечения.

С помощью этого метода:

• решается вопрос о назначении антиретровирусной терапии;
• оценивается, насколько эффективным является проводимое лечение;
• проводится мониторинг клинического течения инфекции;
• у беременных с помощью данного теста на месяц до родов определяется риск передачи ВИЧ ребенку, соответственно, оценивается целесообразность кесарева сечения.

Кроме того, с помощью ПЦР тестируют донорскую кровь. Данный метод диагностики указан в соответствующем приказе РФ от 2008 года.

Разные тест-системы выявляют вирус в разных концентрациях. Минимальный порог отличается. Он может быть от 20 копий в мл, тогда как другие системы определяют только от 150 копий в мл.

Вместе с исследованием на РНК вируса иммунодефицита может быть проведена оценка чувствительности к антиретровирусным препаратам. Это возможно только в случае, если вирус определяется в количестве более 1 тысячи копий в мл.

Оценивается чувствительность к таким препаратам:

• ингибиторам протеазы;
• ненуклеозидным или нуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы.

Показания к исследованию:

• снижение эффективности проводимой терапии, если нет других видимых причин уменьшения эффекта от препаратов;
• острый период инфекции, до начала антиретровирусной терапии, если точно известно, что человек инфицирован от партнера, у которого лечение стало неэффективным (имеет место резистентность к препаратам).

Резистентность к антиретровирусной терапии может быть первичной или вторичной.

• Первичная - это когда человек изначально заражен устойчивым вирусом.
• Вторичная развивается в случае, когда человек неправильно лечился.

Например, не вовремя получал препараты, делал перерывы в лечении, получал неадекватные дозы и т.д.

Признаки резистентности:

• РНК вируса иммунодефицита не снижается в течение 6 недель лечения;
• рецидив заболевания (обнаружение высокой концентрации РНК на фоне непрекращающейся терапии, если ранее была достигнута супрессия).

При этом важно исключить другие возможные причины прогрессирования болезни, за исключением резистентности. Нужно убедиться, что лечение действительно было непрерывным. То есть, что больной не игнорировал рекомендации врача и не прекращал лечение. А также что он не имеет заболеваний, при которых может нарушиться усвоение лекарственного препарата в желудочно-кишечном тракте.

Определение резистентности к антиретровирусным лекарствам дает возможность пересмотреть схему терапии. В неё включают те препараты, к которым вирус чувствительный.

Такое лечение не приводит к полному излечению ВИЧ, но:

• продлевает жизнь;
• сохраняет трудоспособность пациента;
• уменьшает риск передачи инфекции;
• нормализует состояние иммунитета.
  

Через сколько можно

Часто пациенты спрашивают, через сколько времени можно делать анализ методом ПЦР на ВИЧ. Это исследование проводится гораздо раньше, чем ИФА. Патологию можно выявить в остром периоде, а иногда и в инкубационном периоде. Сдавать анализ можно через 2-4 недели. В то время как кровь на антитела сдают не раньше, чем через 6 недель.

ПЦР на ВИЧ может быть положительным уже спустя 14-21 день после возможного инфицирования.

Но если анализ отрицательный, это не гарантирует отсутствие инфекции.

Лучше провести подтверждающий тест медом ИФА через несколько недель. А вот если ПЦР положительный, то очень мало шансов, что результаты анализа неправильные. Сдать анализ на ВИЧ методом ПЦР можно в нашей клинике.

Наши преимущества:

• нет очередей - сдача анализов по записи на определенное время;
• быстрые сроки выполнения анализов;
• возможность анонимного исследования;
• никому кроме вас мы не сообщим результаты анализов.

У нас используются самые современные методы диагностики, включая определение РНК вируса или ДНК провируса. При необходимости можно оценить результаты терапии и провести оценку резистентности ВИЧ к лечению антиретровирусными препаратами. Результаты вы получите через несколько дней.