В какие сроки делать пцр на вич

Способ лечения болезни, вызванной вирусом иммунодефицита человека, не найден до сих пор. Зато диагностика достигла серьезных успехов. Анализ на ВИЧ, выполненный методом ПЦР, – один из вариантов выявления вируса в организме.

Суть методики ПЦР при ВИЧ

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР, – один из современных методов диагностики ВИЧ. В его основе лежит способность нуклеиновых кислот к саморепродукции. Клетка любого живого организма включает белок и нуклеиновые кислоты:

• РНК- рибонуклеиновую,
• ДНК- дезоксирибонуклеиновую.

Наиболее точный результат можно получить, используя для анализа венозную кровь. Перед тем как пройти обследование, за пару дней следует отказаться от жирной пищи и алкоголя. За 2 недели прекратить прием иммуностимулирующих препаратов.

Пробу биоматериала расщепляют в медицинском лабораторном реакторе. Затем фракции обрабатывают ферментами. Реактивы объединяются с ДНК вирусной молекулы и дублируют ее. Из одной клетки получается 2, из 2-х – 4, далее 8. Число растет в геометрической прогрессии. Цепная реакция позволяет в короткий срок увеличить количество вирусного компонента и сделать его заметным для лаборантов.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР имеет неоспоримые преимущества, но есть и существенные недостатки. К первым относятся:

• Высокая точность. Крайне мала вероятность получить ложноотрицательные результаты.
• Универсальность. Для исследования подходит не только кровь, но и другие биологические жидкости (влагалищные выделения, сперма). Слюна, моча также используются, но точность результата будет ниже. В этих средах концентрация вирусных клеток незначительна.
• Широкий спектр анализа. Один образец биоматериала можно исследовать на несколько заболеваний.
• Скорость выполнения. Полимеразная цепная реакция относится к срочным методам диагностики. Ответ можно узнать уже на следующий день.
• Достоверность составляет 80 %. С помощью метода ПЦР можно обнаружить вирусные частицы, даже если их концентрация невелика. Это позволяет диагностировать заболевание на ранних стадиях и своевременно начинать терапию.
• Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции. Время, когда ВИЧ обнаруживают в крови при помощи ПЦР, – 10-14 дней после предполагаемого заражения. Это стандартный отрезок для диагностики вируса иммунодефицита. Антитела на этом этапе еще не обнаруживаются; метод ИФА не работает.
• Нет возрастных ограничений. Можно проводить это тестирование ребенку с момента рождения.

Недостатки метода ПЦР при диагностике ВИЧ:

• Более высокая стоимость в сравнении с иммуноферментным анализом 3 поколения.
• Требуется сложное медицинское оборудование.
• Погрешность 20% в связи с высокой чувствительностью реакции. При аутоиммунных заболеваниях, злокачественных опухолях, хронических инфекциях ПЦР может дать ложноположительный результат.

Кому проводится ПЦР

Проведение этого анализа на ВИЧ рекомендовано в следующих случаях:

• Нужен ранний ответ для предварительного диагностирования. ПЦР помогает подтвердить или опровергнуть результаты ИФА.
• Иммуноблоттинг дал положительный результат. Если первым проводится ПЦР анализ, то обязательно подтверждение результата методом иммунного блоттинга. Исследования дополняют друг друга. Используя сразу 2 метода, медики исключают возможность ошибок.
• Когда позитивный ВИЧ-статус подтвержден, ПЦР помогает отследить эффективность проводимой терапии.
• Используется для исследования донорской крови на наличие антител к ВИЧ.
• Проводить ПЦР можно даже детям до года. Этот метод применяется, чтобы выяснить ВИЧ-статус новорожденных, мамы которых являются носительницами вируса. Тест, проведенный в первые дни жизни, покажет, произошло ли внутриутробное инфицирование. Заражение могло случиться, когда ребенок проходил по родовым путям. Положительный ВИЧ-статус, приобретенный младенцем в процессе родов, удастся выявить через 2 – 3 недели.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где можно сдать

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ и расшифровка результатов не требуют много времени. Забор крови занимает 5-7 минут. В стандартном случае лаборанту достаточно 24 часов, чтобы подготовить справку. Диагностирование занимает не более 8 часов, остальное время требуется на оформление. Пациент получает отчет на следующий рабочий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.

Исследования на ВИЧ указанным способом не проводят по полису ОМС. Получить эту услугу бесплатно в государственной поликлинике нельзя. Зато практически все коммерческие лаборатории обычно имеют необходимое оборудование и реагенты. Проведение анализа ПЦР часто входит в общий скрининг на ВИЧ. Цена комплексной диагностики составляет от 600 до 1000 руб.

Пройти процедуру можно анонимно. В регистратуре пациенту дают индивидуальный номер, по которому он узнает результат. Современные медицинские центры отображают все данные на своем сайте в личном кабинете клиента.

Вирус иммунодефицита человека никак не проявляет себя на протяжении от двух до 15 лет. Вирус атакует иммунную систему, снижая защиту организма от болезней. Симптомы иммунодефицита проявляются только в стадии СПИДа. Найти возбудителя в крови на ранних стадиях позволяет анализ на ВИЧ.

Исследования проводятся во всех государственных медицинских учреждениях, многих коммерческих центрах. Люди группы риска регулярно проходят диагностику, другим исследуют сывороточные пробы при подозрении на заражение.

РНК-вирус из группы ретровирусов встраивается в хозяйские молекулы ДНК. Возбудитель распространяется несколькими путями: гематогенным, половым, вертикальным. Своевременное выявление вирусоносителей препятствует массовому заражению.

Навигация по статье

Выявление вируса иммунодефицита

На тестовое исследование пациенты традиционно сдают венозную кровь для анализа на ВИЧ и СПИД. Первичная диагностика заболевания заключается в определении антител к 1 и 2 типу вируса, антигена p24. По статистике порядка 15% больных СПИДом являются вирусоносителями гепатита С, В.

Анализ на anti-HIV1, 2/Ag p24, антитела при подозрении на инфицирование проводится совместно с тестом на гепатиты. Методы молекулярной диагностики вируса ВИЧ отличаются высокой точностью. Когда тест положительный, обязательно проводится повторное исследование сыворотки для подтверждения или опровержения первичного результата.

Тесты сыворотки определяют:

• РНК-вирус иммунодефицита;
• ДНК-геном вируса;
• антитела 1 и 2 типа.

Методом иммуноферментного исследования выявляется антиген Р24. ПЦР-анализом на ВИЧ возбудитель выявляется на ранних стадиях, через две недели после заражения. По общему анализу крови при ВИЧ судят о состоянии здоровья пациента, присутствие вируса по результатам не установить.

В опасной концентрации вирус присутствует в половом секрете, грудном молоке, кровяной сыворотке, раневом экссудате. Лабораторными методами выявить возбудитель можно в любых биологических жидкостях:

• моче;
• испражнениях;
• соскобах;
• слюне;
• тканях, извлеченных при биопсии;
• спинномозговой жидкости;
• плевральных скоплениях.

Тест делается пациентам с:

• половыми инфекциями;
• гепатитами, им каждые три месяца необходимо сдавать анализы на ВИЧ и гепатиты В, С.

В обязательном порядке обследуются:

• медицинские работники;
• доноры крови, биологического семенного материала (яйцеклеток, спермы);
• беременные женщины;
• поступающие на стационарное лечение больные;
• призывники в ряды вооруженных сил.

• инъекционным наркоманам;
• лицам, имеющим контакт с инфицированными;
• людям, подвергшимся половому насилию
• после случая повышенного риска заражения.

По общему анализу крови при ВИЧ судят о развитии иммунодефицита. Повышение уровня лейкоцитов и лимфоцитов характерно на начальных стадиях. Затем развивается лимфопения – организм уже не сопротивляется возбудителю. Снижается уровень гемоглобина, развивается анемия.

Кровь хуже сворачивается из-за снижения количества тромбоцитов. Еще один показатель – нейтрофилы, они продуцируются костным мозгом. Их тоже становится меньше. Через 12-14 дней после заражения концентрация вируса достигает уровня чувствительности прибора.

ПЦР-исследование крови на ДНК выявляет молекулу провируса, определяет вирусную нагрузку. ИФА методом, комбинированными тестами обнаруживают антитела к вирусу, антиген р24. Они появляются в сыворотке крови через две недели после инфицирования. Затем их концентрация растет до месяца. Потом их уровень остается неизменным на протяжении многих лет.

В течение 4-х дней перед сдачей анализа крови на ВИЧ и гепатиты В, С необходимо разгрузить организм:

• снизить пищевую и медикаментозную нагрузку;
• отказаться от алкоголя;
• убрать из рациона вредные продукты с химическими добавками, канцерогенами;
• воздержаться от половых контактов.

Для сдачи анализа на ВИЧ необходим пустой желудок, тогда снижается риск ложных результатов.

Для получения результата экспресс-анализа на ВИЧ необходимо меньше суток, срочное исследование крови в центрах проводится в течение двух часов. Для проведения иммуноблота (двойного исследования ИФА) требуется от трех до 10 дней. Такие исследования проводятся в референс-лабораториях или СПИД-центрах.

Если проводят полимеразную цепную реакцию на определение иммунных окончаний, для получения нужного числа копий требуется до трех дней. Сколько будет делаться анализ на ВИЧ, зависит от удаленности от лаборатории. С учетом хранения, транспортировки биоматериала срок исполнения может затянуться до 10 рабочих дней.

Расценки на тестирование указываются в прайсах клиник. Стоимость зависит от сложности теста, вида диагностического оборудования (от 350 рублей стоит иммуноблот, от 700рублей – ИФА, до 9 тысяч – количественный ПЦР).

Государственные учреждения проводят диагностику бесплатно. Но сдать кровь анонимно в этом случае не получится. Необходимо предъявить паспорт или другое удостоверение личности, миграционную карту.

Анонимное обследование на ВИЧ

Если возникли подозрения на заражение, сначала необходимо оценить общее состояние. Отклонения в общем анализе крови при ВИЧ – повод пройти дополнительное тестирование. Настораживает снижение уровень лейкоцитов, тромбоцитов, других показателей.

Анонимные анализы на ВИЧ проводятся в специализированных центрах. При необходимости для забора крови специалисты выезжают на дом. Пациенту присваивается регистрационный номер. Для граждан предусмотрено бесплатное обследование на ВИЧ анонимно в центрах СПИДа, приезжим придется платить. Экспресс-тесты проводят многие частные клиники.

Результаты анализа

Трактуются экспресс-анализы на ВИЧ по четырем показателям: положительный, отрицательный, ложноположительный, ложноотрицательный. Методом блоттинга определяются гликопротеины gp160, gp120, gp41. Метод ИФА выявляет антиген р24, антитела типа 1, 2. Два метода одновременно снижают процент ошибки до 0,1%.

При сомнительном результате проводится ПЦР. Он позволяет определить присутствие антител в крови, их концентрацию в пробе. Если повторное тестирование подтвердит факт инфицирования, необходимо начинать поддерживающую терапию, сохраняющую качество жизни больного.

Через полгода делается повторное исследование мочи, слюны, крови. Если результат по-прежнему положительный, необходимо продолжать лечение, соблюдать рекомендации врача. Человек возлагает на себя добровольные обязательства по сохранению мер безопасности, чтобы не стать распространителем возбудителя. Необходимо соблюдать сроки, когда сдавать кровь на очередное исследование.

Анализы на ВИЧ и гепатит В, С придется проходить повторно при ложных результатах. Основные причины ложноположительных оценок:

• беременность, в 23% случаев плод воспринимается организмом как чужеродный объект;
• гормональные изменения при приеме противозачаточных препаратов, менструация;
• недавние прививки;
• донорство;
• склеротические поражения;
• заболевания легких (туберкулез, саркома);
• печеночные патологии;
• раковые образования;
• герпес;
• лихорадочное состояние.

В этих случаях не стоит паниковать, необходимо повторно обследоваться.

У каждого есть ВИЧ-статус, только у одних он положительный, а у других — отрицательный. Однако знать его необходимо, особенно в российских реалиях, когда в стране эпидемия, и уже более одного процента населения живет с вирусом.

Для диагностики вируса иммунодефицита человека существует несколько видов тестов, причем их классификация сложна лишь на первый взгляд, на самом деле она весьма логична. Главное — помнить, что, несмотря на высокую точность анализов, ни один тест не найдет вирус сразу после заражения.

Скрининговые (поисковые) тесты

Они помогают заподозрить инфекцию, но их результаты надо подтверждать другими анализами. Для скрининга используют тесты либо на антитела, либо на антигены/антитела.

ИФА (иммуноферментый анализ).

Этот метод служит не для обнаружения самого вируса, а антител, которые наша иммунная система вырабатывает для борьбы с ним.

Делают его следующим образом: на очищенные части вируса (антигены), зафиксированные в специальной лунке, наносят кровь. Если в ней есть антитела, то образуются иммунные комплексы антиген/антитело, которые вступают в реакцию с красителем, приводя к изменению цвета. Это оценивается качественно (есть/нет реакции) и/или количественно при помощи дополнительной аппаратуры.

Существует несколько поколений ИФА:

• В первом поколении тестов использовался сам вирус, обработанный ультразвуком, при этом определялись антитела только ВИЧ-1. Анализ обладал невысокой чувствительностью и специфичностью.
• ИФА второго поколения научили определять антитела как к ВИЧ-1, так и к ВИЧ-2. Материалом служили синтезированные белки, аналогичные настоящим антигенам вируса. Впрочем, тесты первого и второго поколения давно не используются.
• Следом появились тесты третьего поколения, которые позволяют диагностировать длительно текущую (хроническую) ВИЧ-инфекцию с чувствительностью и специфичностью около 100 %. Однако при острой ВИЧ-инфекции (когда антител мало или совсем нет) их точность считается недостаточной.

Современный ИФА позволяет обнаружить антитела, появляющиеся в крови с 30-го (цифры согласно клиническим рекомендациям Минздрава) дня инфицирования (по данным Центра контроля и профилактики заболеваний в США CDC — c 23 по 90 день).

За счет своей простоты и дешевизны этот метод используется чаще всего, в том числе на его основе работают экспресс-тесты.

Если такой тест оказался положительным, результат перепроверяется на тест-системе другого производителя, и в случае положительного результата применяется иммуноблот (смотри ниже).

Примечательно, что антиген р24 появляется в крови уже через 15 дней (по данным CDC — с 18 по 45 день) после инфицирования ВИЧ, поэтому такой вид анализа позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию раньше.

Так, эксперты из CDC считают комбинированные тесты наиболее предпочтительными для массового клинического использования. А российский Минздрав рекомендует его применять в качестве скринингового в большинстве лабораторий страны. Однако после получения положительного результата его также нужно перепроверять иммуноблоттингом.

Существуют два вида вируса ВИЧ — 1 и 2. В мире наиболее распространен ВИЧ-1. Разновидности вируса различаются по генетическому материалу, по-разному взаимодействуют с иммунитетом и отвечают на лечение.

Подтверждающие тесты

Как следует из названия, они позволяют наверняка убедиться в наличии или отсутствии вируса иммунодефицита у человека. Их минус в сложности и дороговизне.

Иммуноблоттинг помогает проверить результаты скрининговых анализов и уточнить, каким видом вируса инфицирован человек: ВИЧ-1, ВИЧ-2 или обоими. Этот метод обладает высокой точностью, чувствительностью, но дорог и сложен в исполнении. Он является комбинацией ИФА и электрофореза, что позволяет определить антитела к специфическим антигенам ВИЧ-1 (gp160, gp120, gp41). Белки под действием электрического поля располагаются в виде полосок на нитроцеллюлозной мембране.

При положительной реакции антиген/антитело на полосках становится видно потемнение.

ПЦР (полимеразная цепная реакция). Тест способен находить генетический материал ВИЧ (ДНК/РНК), то есть проверяет, есть ли непосредственно вирус в крови. Нуклеиновые кислоты могут обнаруживаться уже на 7-й день после инфицирования (по данным CDC — c 10 по 33 день).

При этом методе в пробирке с помощью различных ферментов многократно дублируется участок ДНК или РНК вируса до таких объемов, что его можно увидеть глазом в виде полосок. Кроме того, ПЦР бывает качественным и количественным. В последнем случае можно отслеживать вирусную нагрузку (концентрацию вируса в крови и других биологических жидкостях) у людей с ВИЧ, оценивая эффект терапии.

А я могу сдать сразу иммуноблот или ПЦР, чтобы узнать свой ВИЧ-статус?

Иммуноблот используют специальные лаборатории центров по борьбе со СПИДом. Пробы крови направляются туда для перепроверки уже положительных первичных скрининговых анализов. Сразу сдать его не получится, даже в платных клиниках.

ПЦР, наоборот, можно сдать в любой момент, но только обратившись в коммерческую лабораторию. В СПИД-центрах его делают также для перепроверки ранее положительного теста. Да, ПЦР позволяет максимально быстро (в течение 7—10 дней после инфицирования) обнаружить ВИЧ, но и у него есть недостатки:

• высокая стоимость;
• может обнаружить только ВИЧ-1;
• в редких случаях выявление низких уровней РНК ВИЧ (например,

Кроме того, прием PrEP и PEP могут влиять на точность анализов, так как антиретровирусные препараты уменьшают количество вируса в крови и антител к нему.

В случае с PEP после окончания курса рекомендуется посоветоваться с врачом и подобрать оптимальные сроки проведения анализов. Первый тест обычно проводят через 4—6 недель после контакта с ВИЧ, затем через 3 месяца, при необходимости — через 6 месяцев.

Считается, что крайне важно сдать анализ на ВИЧ перед началом приема PrEP и затем проверяться каждые 3 месяца, уже находясь на PrEP.

На результаты теста не влияют прием пищи и алкоголя или курение. Специальной подготовки перед сдачей анализов на ВИЧ не требуется.

А что с экспресс-тестами?

Они позволяют провериться на ВИЧ, не посещая лабораторию или поликлинику. По сути, это тесты ИФА третьего поколения, которые определяют антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в слюне, моче или крови.

На рисунке показано, как быстро в крови появляются сам вирус (его генетический материал РНК) антитела и антигены, а также какие системы тестирования можно применить.

Точность большинства экспресс-тестов при хронической (длительно текущей) ВИЧ-инфекции достаточно высока (> 99 % чувствительности и специфичности), но все равно чуть ниже лабораторных анализов.

Сегодня среди них наиболее популярны тесты слюны (или околодесневой жидкости) и крови. Их можно либо купить самому, либо получить бесплатно в ВИЧ-сервисных организациях.

Если вы сделали экспресс-тест и он оказался положительным, необходимо его перепроверить более точным методом.

Где я могу сделать тест на ВИЧ анонимно и бесплатно?

ПЦР – основной метод контроля течения ВИЧ-инфекции. Иногда его используют для первичной диагностики этого заболевания.

Суть методики ПЦР при ВИЧ

Не вдаваясь в сложные технические детали исследования, суть его можно описать следующим образом:

1. У вируса есть генетический материал. Он закодирован в РНК (рибонуклеиновой кислоте) с помощью нуклеотидов (молекул четырех видов, которые располагаются в разной последовательности).

2. Ученые владеют информацией о некоторых участках РНК, знаю нуклеотидную последовательность.

3. В ходе ПЦР проводится многократное удвоение вирусной РНК и сравнение её с эталоном (известной последовательностью нуклеотидов).

Таким образом, исследование позволяет определить, есть ли в крови пациента специфические – уникальные только для вируса иммунодефицита – фрагменты РНК. Определяется не только факт их наличия, но и количество – концентрация копий РНК в 1 мл крови. Эта информация важна для планирования лечения и оценки эффективности терапии.

Кому проводится ПЦР?

Основные области применения ПЦР:

1. Тестирование донорской крови на ВИЧ. Её проверяют и с помощью серологических тестов. Но те могут дать ложноотрицательный результат, если инфицирование произошло недавно. Поэтому кровь дополнительно обследуется методом ПЦР для выявления вирусной РНК – самого раннего маркера инфекции.

2. Первичная диагностика ВИЧ у новорожденных. Обычно для первичной диагностики ВИЧ-инфекции используют серологические тесты. Но в случае обследования новорожденных они не будут эффективными. Раз пациенту назначены анализы, это означает, что он родился от ВИЧ-инфицированной матери. В её крови есть антитела к вирусу иммунодефицита. Это означает, что они будут обнаруживаться и в крови ребенка.

Таким образом, при обследовании всех детей, рожденных от ВИЧ-позитивных матерей, будут получены положительные результаты ИФА. Но это не означает, что передача инфекции произошла. Ведь организм ребенка вполне может и не продуцировать собственных антител.

Диагноз можно подтвердить и с помощью серологических методов. О ВИЧ-инфекции говорит более высокая концентрация антител в крови ребенка, чем у матери, а также возрастание титра в динамике (если это материнские антитела, то их уровень должен со временем снижаться, а не увеличиваться).

В качестве альтернативного теста используется ПЦР. Обнаружение вирусной РНК тоже считается подтверждением присутствия вируса иммунодефицита. Специфичность теста составляет 99% (риск ложноположительного результата не превышает 1%). Но чувствительность ниже – около 96%. Поэтому требуется два исследования: первое проводится через месяц после родов, а второе – через 3 месяца (в этом возрасте чувствительность ПЦР достигает 100%).

Даже при двух отрицательных результатах ПЦР, нужно подтвердить исчезновение из крови материнских антител при помощи ИФА. Поэтому анализы сдаются в возрасте 1 год. Если положительная реакция сохраняется, то контроль проводится в полтора года.

3. Слабоположительная реакция. ИФА на ВИЧ является скрининговым тестом. Его результаты подтверждаются при помощи иммуноблота. Но это исследование иногда дает сомнительные результаты. В таких ситуациях стандартный алгоритм диагностики предполагает дополнительное тестирование таких пациентов через несколько месяцев. Но бывает, что результаты снова оказываются сомнительными или слабоположительными.

Самой частой причиной сомнительных результатов является недавнее инфицирование пациента. Но он также может быть следствием другой инфекции. Чтобы точно узнать, имеется ли у человека ВИЧ, можно выполнить ПЦР. Этот метод покажет точный результат уже после первого случая получения слабоположительной реакции.

4. Острый ретровирусный синдром. В большинстве случаев по своим клиническим проявлениям ничем не отличается от гриппа или инфекционного мононуклеоза. Большинство пациентов проходят под диагнозом ОРВИ. Но внимательный врач может обратить внимание на длительную лихорадку, тяжелое течение инфекции, отсутствие насморка и увеличение сразу нескольких групп лимфоузлов.

Ретровирусный синдром начинается спустя месяц после заражения. В этот период антител в крови ещё может не быть. Но ПЦР уже становится положительной. Поэтому именно этот способ диагностики применяют, если есть подозрение, что больной мог заразиться совсем недавно.

5. Противоречивые результаты основных тестов. Основными тестами является ИФА и иммуноблот. Иногда они проводятся одновременно, иногда – последовательно. Положительная реакция ИФА становится поводом для проведения иммуноблота. Это подтверждающий тест. Если он положительный, ставится диагноз ВИЧ. Но бывает, что подтверждающий тест оказывается отрицательным. Причин тому может быть две:

• ложноположительный результат ИФА (бывает в 3-4% случаев);
• ложноотрицательный результат иммуноблота (обычно в ранний период после заражения).

Разрешить противоречие помогает ПЦР. При отрицательном результате ВИЧ исключают, а при положительном – подтверждают. В случае получения отрицательного результата желательно повторно сдать анализы через 3 месяца, чтобы на 100% удостовериться в отсутствии ВИЧ.

6. Определение показаний к экстренной профилактике ВИЧ у медработника. Профилактика антиретровирусными препаратами показана, только если медработник повредил свою кожу инфицированным материалом. Иногда неизвестно, инфицирован ли человек, с кровью которого произошел контакт. В таком случае для его обследования лучше провести ПЦР, чем серологические тесты, так как они дают ложные положительные результаты на раннем этапе развития заболевания.

Изредка необходимость в ПЦР возникает, если нужно отличить ВИЧ 1 и 2 типа. Второй тип встречается редко – у 1 из 200 инфицированных. Обычно иммуноблот позволяет провести дифференциальную диагностику. Но иногда наблюдаются случаи перекрестной реактивности, когда антитела к ВИЧ-1 взаимодействуют с антигенами ВИЧ-2. Более точным тестом, позволяющим точно определить тип вируса, является ПЦР.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Большинство производителей тест-систем указывают, что ПЦР может использоваться в качестве метода первичной диагностики ВИЧ. Однако в действительности в большинстве стран, в том числе в России, анализ на вирусную РНК не используют для этой цели, предпочитая ему серологические исследования. Это связано с некоторыми недостатками диагностического метода:

1. Большинство тестов, использующихся в рутинной врачебной практике, определяют только ВИЧ 1 типа. Но существует также ВИЧ 2 типа, вызывающий около 0,5% случаев заболевания.

2. Риск ложноотрицательного результата. Вирус быстро мутирует. Его генетический материал постоянно меняется. Поэтому участок РНК, на поиск которого направлена ПЦР, может оказаться измененным. Проблема решается путем проведения ПЦР с двойной мишенью. В этом случае реакция направлена на поиск сразу двух специфических фрагментов РНК. Вероятность, что оба они окажутся измененными в результате мутации, чрезвычайно мала. Но такое исследование стоит дороже.

3. Не выявляется ВИЧ у элитных контроллеров. Это группа людей – около 1% — организм которых способен сдерживать развитие вируса без помощи лекарств. У них не развивается синдром иммунодефицита. Вирусная нагрузка очень маленькая, поэтому ПЦР дает отрицательный результат. Но антитела в крови определяются, поэтому серологические тесты более эффективны. Существуют также люди с временным контролем ВИЧ-инфекции. У них способность контролировать вирус выражена слабее. Но на некоторое время достигается полное его подавление. И если в этот промежуток времени провести ПЦР, она покажет отрицательный результат.

4. Низкая эффективность после экстренной профилактики. Её выполняют после того как состоялось действие, которое могло послужить фактором передачи инфекции. Например, это может быть:

• ребенок, которого ВИЧ-инфицированная мать покормила грудным молоком;
• взрослый, вступивший в половую связь с ВИЧ-инфицированным человеком;
• медработник, уколовшийся зараженной иглой.

Но имеются и плюсы. ПЦР редко дает ложноположительные результаты. Кроме того, метод определяет количество вирусов в крови, что важно для выбора лечебной тактики.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где можно сдать?

Большинство лабораторий выдают результаты через 2 дня и более с момента взятия биоматериала. Сдать анализ ПЦР на ВИЧ в Москве по доступной цене вы можете в нашем медицинском центре.

Одно из самых серьезных заболеваний, которое до сих пор не научились излечивать, вызывается вирусом иммунодефицита человека.

Обнаружить возбудителя в организме непросто: в настоящее время для этого используется всего несколько исследовательских методов.

Один из таких тестов — полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Анализ ПЦР (Полимеразная цепная реакция) при ВИЧ

Чтобы понять суд метода полимеразной цепной реакции, нужно вспомнить особенность строения клеток еще из школьного курса.

Любая живая клетка содержит белок и два типа нуклеиновых кислот: ДНК и РНК. Они являются наиважнейшими клеточными структурами, поскольку содержат генетическую информацию, закодированную специальным образом.

ДНК-код представляет собой строгую последовательность микроструктур, которые образуют длинную цепочку.

Справка! В качестве основы ПЦР используется возможность нуклеиновой кислоты самостоятельно репродуцироваться.

Когда вирус проникает в здоровые клетки, он разрушает цепочки ДНК.

В этом случае клетка уже не будет содержать целостные цепочки, а лишь небольшие фрагменты — нуклеотиды. Кроме этого, даже малейшие частички вируса будут видны.

Именно на обнаружении поврежденных цепей ДНК и остаточных клеток и построен метод полимеразной цепной реакции.

При этом существует две разновидности ПЦР-диагностики:

• Качественная. Подходит тем, у кого диагноз не подтвержден: он просто показывает, присутствует ли вирус в клетках.
• Количественная. Пациент получает результат «,ДНК вируса не обнаружено»,, что означает отсутствие ВИЧ, или же информация о присутствии возбудителя, что означает ВИЧ-инфицирование человека.

Если подтвержденный диагноз имеется, назначается количественный анализ. С его помощью определяется количество копий РНК (ДНК) вируса в крови (клетках). Количественный анализ позволяет оценить эффективность лечения у ВИЧ-инфицированных, определить выраженность заболевания, его прогрессирование.

Какие методы диагностики позволяют выявить ВИЧ-инфекцию рассказывается на видео:

Преимущества и недостатки этого метода диагностики

Как и любое диагностическое мероприятие, ПЦР имеет свои плюсы и минусы.

К преимуществам метода относят:

• Высокая достоверность. При ПЦР удается обнаружить мельчайшие остатки вируса, вероятность обнаружения возбудителя достигает 80% через 4-5 дней после заражения, 100% — через 14 дней после заражения. Так, наибольшая точность достигается при изучении ДНК вируса в клетках крови: можно выявить вирус при его количестве 1-5 копий на 1 миллион клеток.
• Возможность использовать различный биоматериал (для ПЦР не подходит слюна, моча, пот и слезы, но может использоваться кровь, сперма и половые выделения у женщин).
• Возможность проведения анализа на разные заболевания по одной пробе. При помощи ПЦР можно обнаружить ВИЧ, хламидии, герпес, цитомегаловирус, уреаплазму, микоплазму, гонорею, трихомониаз, токсоплазмоз.
• Быстрая скорость получения результатов. Существует экспресс-обследование ПЦР, позволяющая узнать результаты диагностики уже через несколько часов.
• Высокая чувствительность: ПЦР, в отличие от, например, ИФА, помогает обнаружить вирус уже на первых неделях после заражения.
• Возможность получения результатов уже через несколько дней после заражения. При инфицировании определить вирус можно через 5-14 дней, тогда как ИФА целесообразно проводить только через 6 недель.
• Отсутствие возрастных ограничений. ПЦР допустимо проводить и у взрослых, и у детей с момента рождения.

Главной особенностью ПЦР-анализа является то, что он выявляет не антитела к вирусу, а сам вирус.

Против преимуществ выступает всего несколько недостатков:

• Дороговизна.
• Вероятность получения ложноположительных результатов — около 20%. Обычно это случается по вине персонала (ошибки при заборе или транспортировке биоматериала, при изучении биоматериала и расшифровке результатов).
• Необходимость применения передового высокого технологичного оборудования, которым снабжены лишь некоторые клиники.

Внимание! Очевидно, что достоинств у методики гораздо больше, чем недостатков. Особенно важно, что при помощи ПЦР можно выявить заболевание на начальном этапе развития и вовремя начать лечение.

Результат анализа ПЦР может быть положительным уже спустя 14-21 день после возможного инфицирования. Но если анализ отрицательный, это не гарантирует отсутствие инфекции. Лучше провести подтверждающий тест медом ИФА через 2 недели.

О том, как проводится анализ ПЦР на ВИЧ рассказывается на видео:

Кому назначается?

В первую очередь, ПЦР назначается при подозрении на ВИЧ. Методика также может быть показательной для выявления заболеваний, передаваемых половым путем, наследственных заболеваний.

Справка! ПЦР-диагностика часто проводится по инициативе человека, у которого не проявились симптомы заболевания, однако есть предположение и беспокойство о возможном заражении, например, после незащищенного полового акта, недавнего переливания крови, контакта с зараженным человеком.

Кому еще показано проведение обследования?

• Людям, у которых анализ ИФА дважды оказался положительным. ПЦР позволит установить окончательный диагноз.
• Донорам, планирующим сдать кровь.
• Людям, у которых иммуноблоттинг подтвердил диагноз. Иммунный блоттинг — метод диагностики СПИДа, и обычно его проводят совместно с ПЦР.
• Людям, находящимся на этапе лечения заболеваний, вызванных ВИЧ. ПЦР позволяет оценить эффективность терапии.
• Новорожденным, мать которых ВИЧ-положительна (передача вируса происходит примерно в 30% случаев). Уже через 2-3 недели после рождения можно определить, произошло ли заражение.

Некоторые люди проходят обследование в профилактических целях, однако это случается нечасто, поскольку стоимость ПЦР-исследования высока.

Сколько времени делается анализ и где можно его сдать?

Анализ ПЦР на ВИЧ проводится в лабораторных условиях.

Сам забор крови производится за 5-10 минут, а уже на следующий день результаты оказываются готовы.

При выборе экспресс-диагностики (например, в лабораториях «,Инвитро», или «,Гемотест»,) расшифровка результатов специалистом занимает всего 2 часа.

В частных клиниках диагностику, по желанию, можно пройти анонимно. Для этого нужно сообщить об этом при личном визите: каждому пациенту присваивается порядковый номер и дается доступ к личному кабинету. Тогда человек может узнать результаты даже без повторного визита в лабораторию.

О достоверности результатов ПЦР исследования рассказывается на видео:

Стоимость исследования

ПЦР-диагностика не из дешевых, поскольку требует наличие определенного передового оборудования, а также особых знаний специалиста.

Оборудование есть лишь в некоторых медицинских лабораториях, что позволяет устанавливать высокую стоимость анализа.

Средняя цена исследования — 3000-5000 рублей. В некоторых регионах стоимость не превышает 1500-2000 рублей.

Поскольку существует вероятность ложноположительных и ложноотрицательных результатов, или же человек обратился с запросом слишком рано (вирус еще не нарушил структуру ДНК, но уже присутствует в организме), может потребоваться повторное исследование.

Высокая стоимость обусловлена и тем, что для диагностики требуется ряд компонентов:

1. Отрезок ДНК (матрица), предназначенный для амплификации,
2. Два праймера,
3. Полимераза — химически активный компонент, который ускоряет увеличение количества вирусных частиц в геометрической прогрессии,
4. Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты,
5. Заряженные частицы двухвалентного магния,
6. Специальный раствор, в котором осуществляется процесс полимеризации. Этот раствор предназначен для поддержания подходящего уровня кислотности, концентрации солей, количества магния в жидкости.

Также при исследовании требуется небольшое количество вазелина: он содержит жиры и при высокой температуре закипает, что защищает изучаемый образец от перегрева.

Проведение анализа

Для проведения анализа подходит кровь, сперма и влагалищные выделения. Как правило, чаще используют венозную кровь.

Забор крови производится утром натощак.

Кроме этого, к анализу нужно подготовиться:

• За 2-3 дня до диагностики следует исключить из рациона жирные продукты.
• За 1-2 суток до анализа исключается алкоголь.
• За 2 недели до анализа нужно прекратить прием иммуностимулирующих препаратов.
• Последний прием пищи должен произойти не позднее, чем за 8 часов до сдачи крови.

При заборе крови из вены внутренний сгиб локтя обрабатывается специальным раствором, после чего специалист прокалывает кожу, помещает иглу шприца вены и забирает нужное количество крови. Затем игла изымается, место снова обрабатывается спиртовым средством, пациенту выдается ватка.

Пациент должен на время согнуть руку, чтобы кровь остановилась. Если человек чувствует себя хорошо, он сразу может идти домой. При головокружении, тошноте и обмороке ему оказывают первую помощь.

Полученный биоматериал лаборант помещает в стерильную колбу и отправляет на диагностику. Специалист смешивает расщепленный биологический материал в особом реакторе с ферментами, синтезирующими различные инфекции.

Если в крови присутствует очень мало частиц вируса, при взаимодействии с ферментами их количество резко возрастает: реактивы объединяются с ДНК вируса и дублируют ее.

Анализ производится в несколько этапов, поскольку деление молекул происходит в геометрической прогрессии. Из одной клетки получается 2, из 2 — 4 и так далее.

Анализируя мнение и отзывы докторов, можно с уверенностью сказать: в настоящее время ПЦР-диагностика является наиболее точным методом исследования на ВИЧ-инфекцию.

Справка! С помощью анализа можно установить присутствие вируса в организме уже через несколько дней после заражения, даже если количество вирусных структур составляет всего 1-5 единиц на миллион клеток. Однако не стоит забывать о недостатках метода, например, вероятности получения ложноположительных результатов.

Тем не менее, ПЦР остается одним из немногих анализов, которые позволяют вовремя диагностировать заболевание и приступить к лечению.