Внешний контроль качества по сифилису

Методология проведения внутрилабораторного и внешнего контроля качества серологических исследований, направленных на диагностику сифилитической инфекции. Программа добровольного контроля качества наборов реагентов для диагностики половых инфекций.

Рубрика	Медицина
Вид	автореферат
Язык	русский
Дата добавления	09.01.2018
Размер файла	998,3 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Для обеспечения возможности проведения мероприятий ВКК с использованием более разнообразного состава КМ для серологических исследований на сифилис, а также для оценки качества производственных серий наборов реагентов, предназначенных для диагностики сифилиса регламентированными методами, была дополнительно разработана расширенная квалификационная панель КМ. Панель включает 24 образца сыворотки крови; в том числе: 8 КМ с высоким уровнем трепонемоспецифических и реагиновых антител, 8 КМ - с низким уровнем антител и 8 КМ, не содержащих антител, ассоциированных с сифилисом. КМ расширенной квалификационной панели также получали на основе неразведенной сыворотки крови больных манифестными и скрытыми формами сифилиса, а также лиц, состоявших под клинико-серологическим наблюдением по поводу перенесенного сифилиса, и здоровых доноров.

Объем КМ в индивидуальной фасовке составляет не менее 0,5 мл, что обеспечивает возможность исследования образца с использованием различных серологических методов или нескольких производственных серий наборов реагентов.

При создании расширенной квалификационной панели КМ была разработана консервирующая добавка (включавшая консервант ProСline-300, ингибитор протеаз альфа-1-антитрипсин и дисахарид трегалозу), которая обеспечивала сохранение специфической активности контрольных сывороток на уровне 90-93% от исходного уровня в течение 13 месяцев хранения при температуре +4-8оС. Показано преимущество применения разработанной консервирующей добавки по сравнению с применением стабилизатора ProCline-300 в чистом виде (рис. 4).

Рис. 4 Исследование стабильности КМ с добавлением различных консервантов в условиях хранения при температуре +4-8о С

7. Разработка Программы добровольного контроля качества наборов реагентов, применяемых для диагностики инфекций, передаваемых половым путем, в Российской Федерации

В целях оптимизации проведения диагностических исследований на сифилис и улучшения качества применяемых реагентов и расходных материалов была разработана Программа добровольного контроля качества наборов реагентов, применяемых в Российской Федерации для диагностики ИППП, в том числе сифилиса.

В период 2007-2009 годов с использованием разработанной Программы ежегодно проводилось изучение от 30 до 31 производственных серий изделий медицинского назначения на их соответствие требованиям спецификаций технических условий производства. Всего было изучено 76 производственных серий наборов реагентов для проведения серологических исследований для диагностики сифилиса. Проведенный контроль позволил выявить нарушения, связанные с несоблюдением требований действующих нормативных документов по показателям клинической эффективности (чувствительности и специфичности), а также с несанкционированным изменением текста инструкций по применению наборов реагентов, правилами фасовки и маркировки отдельных компонентов.

Установленные нарушения технологии производства наборов реагентов своевременно и оперативно доводились до сведения ОБТК предприятий-производителей для принятия мер по их устранению. Проведенная работа позволила осуществлять внешний контроль над качеством наборов реагентов, применяемых в лабораториях ДВУ субъектов Российской Федерации при проведении серологических исследований на сифилис.

8. Оценка эффективности применения разработанной Системы контроля качества современных серологических исследований для диагностики сифилиса

Контрольные материалы в перешифрованном виде рассылались по почте в лаборатории, участвовавшие в выполнении мероприятий Программы. В контролируемых лабораториях контрольные материалы тестировались в серологических реакциях на сифилис - РМП, RPR, ИФА, РПГА, РИФ (не менее чем в трех реакциях). В установленные сроки протоколы с результатами тестирования доставлялись в ГНЦД и проводился их анализ. Результат тестирования оценивался по формальным и неформальным (существенным) признакам. Результат ВККСИФИЛИС признавался неудовлетворительным по формальным признакам, если исследование проводилось в неустановленные сроки (дольше 7-и дней с момента получения КМ в лаборатории) и если исследование КМ проводилось менее чем в трех серологических реакциях из числа регламентированных тестов, рекомендованных для проведения ВККСИФИЛИС (РМП, RPR, ИФА, РПГА, РИФ). Результат признавался неудовлетворительным по существенным (неформальным) признакам при несовпадении результатов исследования контрольных материалов в контролируемой и контролирующей лаборатории.

По итогам проведения циклов внешнего контроля качества серологических исследований, применяемых для диагностики сифилиса, проведенным в лабораториях в 2004 - 2009 годы (таблица 2), число неудовлетворительных результатов тестирования составило: по нетрепонемным тестам (РМП) - от 27,3 до 10,9%; по трепонемным: в РПГА - от 9,3 до 1,1%; в ИФА - от 15,4 до 0,8%; в РИФ - от 21,7 до 0,9%. Наиболее значимые различия были выявлены при исследовании контрольных материалов с низким содержанием антител (слабоположительных).

Количество неудовлетворительных результатов серологических тестов

при исследовании КМ в циклах ВККСИФИЛИС в 2004-2009 годах

Содержание

Дерматология в России

Сайт зарегистрирован как СМИ, электронное периодическое издание на русском и английском языке, ISSN 2077-3544

Основатель и главный редактор проекта - проф. А.Ю. Сергеев
Посещаемость сайта свыше 1500 человек в сутки (статистика). Среди более 15000 наших врачей-подписчиков 223 доктора и 1229 кандидатов медицинских наук, заведующие кафедрами, директора институтов и научных центров, руководители здравоохранения. Издание распространяется бесплатно, для использования профессиональных и интерактивных материалов необходима регистрация
Дерматология в России выходит и обновляется практически ежедневно. Сайт предоставляет возможности коммуникации для практикующих врачей, ученых, преподавателей, представителей общественных организаций и фармацевтической индустрии

Развитие системы внешнего контроля качества серодиагностики сифилиса в 2004-2006 годах

ФГУ ЦНИКВИ Росмедтехнологий, г. Москва

Цель: изучение показателей, характеризующих развитие Системы BKK, при проведении циклов ВКК в дерматовенерологи ческих учреждениях (ДВУ) субъектов Российской Федерации (РФ) за период 2004-2006 годов. Материалы и методы: материалом исследования служили протоколы с результатами исследований КМ, выполненных в серологических лабораториях ДВУ субъектов РФ в циклах 2004-2006 годов. Участникам BKK предлагалось в течение 7 дней после получения образцов КМ провести их изучение в трех реакциях из числа наиболее стандартизуемых лабораторных методик (РМП, РПР, РПГА, РИФабс/200 и ИФА). Результаты исследований оценивали на основании критериев, в числе которых важное место было отведено формальному соблюдению условий контрольного цикла: полноте проведения контрольных исследований (не менее 3 контролируемых реакций) и оперативности предоставления протоколов. Результаты: развитие Системы BKK осуществлялось путем постепенного привлечения новых участников. В контрольных мероприятиях в 2004 году приняли участие 31 (83,8%) из 37; в 2005 году — 59 (81,9%) из 72, а в 2006 году — 70 (87,5%) из 80 серологических лабораторий ДВУ субъектов РФ, в чей адрес были направлены посылки с КМ. Число контролируемых лабораторий за указанный период времени увеличилось в 2,25 раза. К 2006 году Система BKK охватывала подавляющее большинство — 70 (82,4%) из 85 специализированных ДВУ субъектов РФ, функционировавших на момент проведения работ. На фоне постоянного пополнения числа контролируемых лабораторий при проведении контрольных циклов была установлена положительная динамика показателей, характеризующих выполнение формальных требований BKK. Так, в 2004 году формальные условия контрольного цикла успешно выполнили 23 (74%) из 31, в 2005 году — 43 (73%) из 59, в 2006 году — 58 (83%) из 70 серологических лабораторий. В то же время в 8 (26%), 16 (27%) и 12 (17%) серологических лабораториях КВД субъектов РФ за те же годы соответственно не было обеспечено своевременного исследования предоставленных КМ (материалы исследованы спустя 10 и более дней после их получения) или не был выполнен необходимый объем исследований на сифилис (менее трех контролируемых методик).

За истекший период времени прослежена динамика изменения набора серологических методик, включенных во внешний контроль качества. Так, в 2004 году РМП применили в 31 (100%), РПР — в 7 (22,5%), РПГА — в 24 (77,4%), ИФА — в 26 (83,9%), РИФабс — в 23 (74,2%) и РИФ200 в 13 (41,9%) из 31 лаборатории, принявшей участие в цикле BKK. При исследовании панели КМ в рамках цикла BKK 2005 года РМП использовали 58 (98,3% лабораторий), РПР — 11 (18,6%), РПГА — 51 (86,4%), ИФА — 55 (93,2%), РИФабс — 37 (62,7%) и РИФ200 — 24 (40,6%) из 59 участников мероприятия. В контроль качества серологических методов диагностики сифилиса 2006 года большинство из 70 лабораторий-участниц включило: РМП — 68 (97,1%), РПГА — 61 (87,1%), ИФА — 59 (84,3%) и РИФабс — 37 (52,8%) лабораторий; другие реакции были использованы в небольшом числе лабораторий: РИФ200 — в 25 (35,7%) и PПР — в 13 (18,6%). Выводы: разработка и практическая реализация мероприятий Системы BKK за период 2004-2006 годов позволили привлечь к участию во внешнем контроле качества до 82,4% серологических лабораторий специализированных ДВУ субъектов РФ. Осуществление контрольных циклов за указанный период времени увеличило число лабораторий, которые выполнили формальные условия контроля, с 74% до 83%. Кроме того, в лабораториях были выявлены тенденции к увеличению использования современных медицинских диагностических технологий: число учреждений, внедривших в рутинную практику лабораторных исследований РПГА увеличилось на 9,7%, ИФА — на 0,5%. Одновременно уменьшилось число лабораторий, применявших для диагностики сифилиса трудоемкие лабораторные методики с низким уровнем автоматизации: РИФабс (на 21,4%) и РИФ200 (на 6,2%).

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2

Н. И. ИВАНОВА, О. Ю. ПЕКШЕВА, Н. В. ЧЕПУРЧЕНКО, А. П. ОБРЯДИНА, Н. В. ЗАЛЕССКИХ

ФГУН ННИИЭМ им. акад. ,

СОЗДАНИЕ РЕГИОНАЛЬНОЙ ПРОГРАММЫ ВНЕШНЕЙ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА В ПРИВОЛЖСКОМ ФЕДЕРАЛЬНОМ ОКРУГЕ

In 2004, the authors first developed and implemented a regional external quality assessment program (REQAP) for the diagnosis of syphilis in the Volga Federal District (VFD). Its objective is to improve the quality of studies in the clinical laboratories of AIDS prevention and control centers (AIDS PCC) using a cardiolipin antigen precipitation microtest and/or enzyme immunoassay (EIA) for the diagnosis of syphilis and to compare the reproducibility of results at the laboratories. The program includes a theoretical stage - the issues concerning different aspects of the diagnosis of syphilis and the variants of replies to them; a practical stage - to solve enciphered problems, to draw up protocols; and a final stage - to sum up the results of two former stages and to organize a seminar. Twenty laboratories (16 laboratories of VFD AIDS centers and 4 laboratories of other therapeutic-and-prophylactic institutions) implemented REQAP for the diagnosis of syphilis. This resulted in the creation of a normative base regulating the techniques of diagnostic studies and appropriate test systems; revealed the sources of errors in the interpretation of the results obtained by the Lewis test; showed the correct interpretation of the results of EIA; indicated shortcoming when working with guide materials. Intralaboratory monitoring could reveal the incomplete realization of the stated sensitivity of test systems in considerable numbers of laboratories of the district, and well as no skills in statistical data processing. It is concluded that the normative base of diagnostic studies should be additionally worked over, that the laboratories should obligatorily participate in the Federal external quality assessment system, and that intralaboratory monitoring should be done. Most participants of REQAP for the diagnosis of syphilis are ready to use a precipitation microtest and EIA.

В последние годы повсеместно на административных территориях Приволжского федерального округа (ПФО) и России в целом отмечается рост числа инфицированных ВИЧ гетеросексуальным путем. В 2000 г. доля гетеросексуального пути в общей структуре путей передачи ВИЧ-инфекции в ПФО составляла 3,7%, а в 2005 г. — 31,8% [1, 6].

Половой путь передачи является основным не только для ВИЧ-инфекции, но и для большого числа других инфекций. Несмотря на современные достижения в области диагностики и лечения таких заболеваний, сифилис остается наиболее распространенным среди них. Заболеваемость сифилисом в ПФО, начиная с 2000 г. регистрируется на уровне общероссийских показателей (рис. 1), в то же время на отдельных территориях ПФО она значительно их превосходит. Так, в 2004 г. заболеваемость сифилисом составила в ПФО 81,4 на населения, в РФ — 79,2, а в Коми-Пермяцком АО — 194,2, в Пермской области — 131,9, Республике Марий Эл — 142,0, в Удмуртской Республике — 117,4. Общий путь передачи ВИЧ-инфекции и сифилиса может способствовать увеличению числа заболевших микст-инфекцией [2—4].

Рис.1. Заболеваемость сифилисом населения РФ и ПФО

в гг. (на 100 000 населения)

Сложившаяся эпидемическая ситуация и замена в соответствии с приказом Минздравсоцразвития РФ № 87 от 26.03.01 "О совершенствовании серологической диагностики сифилиса" комплекса серологических реакций (КСР) для диагностики сифилиса на методы ИФА или РПГА до 2006 г. в качестве отборочных и подтверждающих тестов определяют необходимость внедрения контроля качества этих исследований.

В Российской Федерации существует единственная программа, созданная для оказания помощи клинико-диагностическим лабораториям в обеспечении качества выполняемых исследований, — Федеральная система внешней оценки качества (ФСВОК) [5]. В перечне исследований, качество которых может быть оценено, ФСВОК предлагает серодиагностику сифилиса методами ИФА, КСР, РИТ, РИФ, РПГА. К сожалению, в ряде лабораторий центров СПИДа округа данные исследования проводятся в течение многих лет без использования надежных показателей качества. В некоторых лабораториях центров по профилактике и борьбе со СПИДом (ПБ СПИД) диагностика сифилиса не осуществляется.

Наличие высокочувствительных диагностических тест-систем для выявления антител классов IgM и IgG к Treponema pallidum методом ИФА позволяет при необходимости ввести в спектр лабораторных исследований всех центров ПБ СПИД исследование сыворотки крови ВИЧ-инфицированных на сифилис.

В 2004 г. нами впервые была разработана и проведена региональная программа внешней оценки качества диагностики сифилиса, целью которой являются улучшение качества исследований в клинических лабораториях, использующих микрореакцию преципитации с кардиолипиновым антигеном и (или) ИФА для диагностики сифилиса, и сопоставление воспроизводимости результатов в лабораториях округа.

Материалы и методы. Специально разработанная региональная программа внешнего контроля качества по ПФО, включающая внешнюю оценку качества диагностики сифилиса и заключительный семинар "Итоги внешней оценки качества диагностики сифилиса", была направлена на решение следующих задач:

— внедрение рационального подхода в диагностике сифилиса с использованием тест-систем

— повышение качества работы и технологического уровня исследований;

— выявление систематических и случайных ошибок при проведении контрольных тестовых заданий;

— оценку уровня квалификации сотрудников лабораторий.

В региональной программе внешней оценки качества диагностики сифилиса приняли участие 20 лабораторий: 16 лабораторий центров ПБ СПИД ПФО (Приволжский окружной центр по ПБ СПИД, Нижний Новгород; Республиканский центр ПБ СПИД и ИЗ Республики Башкортостан; Республиканский центр ПБ СПИД Минздрава Республики Марий Эл; Мордовский Республиканский центр ПБ СПИД и ИЗ; Республиканский центр ПБ СПИД и ИЗ Минздрава Республики Татарстан; Республиканский центр ПБ СПИД и ИЗ Республики Удмуртия; Республиканский центр ПБ СПИД и ИЗ Минздрава Чувашской Республики; Окружной консультативно-диагностический центр ПБ СПИД Коми-Пермяцкого АО; Кировский областной СПИД-ЦЕНТР; Областной центр ПБ СПИД и ИЗ, Нижний Новгород; Оренбургский областной центр ПБ СПИД и ИЗ; Центр ПБ СПИД и ИЗ, Пенза; Пермский областной центр ПБ СПИД и ИЗ; Областной центр ПБ СПИД и ИЗ, Самара; Саратовский областной центр ПБ СПИД и ИЗ; Ульяновский центр ПБ СПИД и ИЗ и 4 лаборатории других ЛПУ (Окружной КВД, Кудымкар; клиническая инфекционная больница № 2, Нижний Новгород; Нижегородский областной центр переливания крови; Областная больница для осужденных ИЗ 52/1 ГУИН Министерства юстиции РФ по Нижегородской области).

I. Теоретический этап. Проведение тест-контроля, включающего 22 вопроса и варианты ответов к ним. Для выбора правильных вариантов необходимо знание приказа Минздравсоцразвития РФ № 87 и инструкций к тест-системам. Вопросы были разделены тематически на три группы: 1) № 1—3 — общая характеристика выполняемых в лаборатории исследований; 2) № 4—14 — вопросы по кардиолипиновому тесту; 3) № 15-22 — вопросы по ИФА (Приложение 1).

1) контрольную панель, состоящую из 8 лиофильно высушенных образцов сыворотки крови, содержащих и не содержащих антитела классов IgM и IgG к Т. pallidum;

2) тест-систему "ЛЮИС-ТЕСТ";

3) тест-систему "ИФА-АНТИ-ЛЮИС", выявляющую антитела классов IgM и IgG к Т. pallidum;

4) ВЛК — образец для контроля воспроизводимости исследований;

5) протокол проведения контрольных тестов.

Тест-системы каждого наименования принадлежали к одной серии.

Контрольная панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела к антигенам Т. pallidum

Характеристика источников получения образцов сыворотки

Коэффициент позитивности (ОПобр/ОПкрит) в

ИФА с тест-системой

Лаборатория ПОЦ СПИД

Результаты исследований контрольных тестов по сифилису заносились участниками в протокол и высылались по факсу или по почте.

При составлении сводных таблиц каждой лаборатории присваивался индивидуальный порядковый номер, который для соблюдения конфиденциальности сообщался только непосредственно данному ЛПУ — участнику программы.

III. Заключительный этап. Для участников программы и других заинтересованных специалистов был организован однодневный семинар, на котором рассматривались актуальные вопросы диагностики инфекционных заболеваний, подводились итоги проведения двух предыдущих этапов, давались рекомендации по устранению выявленных недочетов.

Собранные данные и их обсуждение. Теоретический этап

Тест-контроль, представляющий собой перечень вопросов, является документом, характеризующим теоретическую подготовку сотрудников лабораторий центров СПИД ПФО по сифилису. На вопросы тест-контроля прислали ответы все 20 участников программы. Вопросы тест-контроля были составлены таким образом, чтобы рассмотреть все наиболее важные моменты в диагностике сифилиса.

Первая группа (№ 1—3) охватывала вопросы по общей характеристике выполняемых в лабораториях исследований. Анализ знаний нормативной базы, необходимой для грамотной диагностики сифилиса, показал, что все участники программы руководствуются приказом Минздравсоцразвития РФ № 87 от 26.03.01 "О совершенствовании серологической диагностики сифилиса", однако 10% указали параллельно и утративший силу предыдущий приказ Минздрава СССР № 000 от 02.09.85.

Только 45% участников посчитали действующим приказ Минздравсоцразвития РФ № 45 от 01.01.2001 "О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения РФ". Именно в этом приказе вменяется в обязанность участие в мероприятиях ФСВОК для лабораторий учреждений здравоохранения всех форм собственности. Допускается участие лабораторий в других программах внешней оценки качества (в международных, коммерческих и региональных). В этом же приказе указывается и на обязательность проведения внутрилабораторного контроля. Полученные от участников программы данные показывают, что 40% лабораторий не участвуют в ФСВОК, а в 25% лабораторий не проводится и внутрилабораторный контроль.

Анализ раздела, посвященного методам исследований, используемым в лабораториях, позволяет отметить, что большинство участников программы готовы к работе методами, определенными приказом Минздравсоцразвития РФ № 87 взамен КСР: микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном в сочетании с ИФА или РПГА в качестве отборочных и подтверждающих тестов. Из 3 лабораторий, в практике которых еще используется сегодня КСР, 2 применяют и метод ИФА, 1 — РПГА.

Вторая группа состояла из вопросов, касающихся особенностей проведения микрореакции преципитации с кардиолипиновым антигеном (№ 4—14). Вопросы № 4, 5 и 12 особых затруднений не вызывали, о чем свидетельствует количество верных ответов (90—100%). Наибольшее количество неполных ответов (15%) получено на вопросы № 6 и 13 о причинах ложноположительных реакций и источниках ошибок. В качестве правильных необходимо было отметить все перечисленные варианты. О том, что документация недостаточно внимательно изучается, свидетельствует анализ ответов на вопросы № 8, 10 и 11. В приведенных вариантах ответов к вопросу № 8 присутствует такой: "Перед анализом исследуемых образцов нужно провести контроль кардиолипинового реагента с положительным контрольным образцом и физиологическим раствором", что и является верным. Тем не менее, в качестве верного ответа 25% участников отмечают контроль только с положительным или только с отрицательным образцом. В ответах на вопрос № 10 о требованиях к контрольным и исследуемым сывороткам крови 25% респондентов не отметили необходимость выдержать их перед проведением анализа в течение 20—30 мин при температуре 22,0 ± 2,0°С. В вопросе № 11 об оптимальном температурном режиме при проведении микрореакции три возможных варианта ответов указывали на комнатную температуру, принятую в физике (18—20°С), определенную в инструкции к тест-системе (20—24°С) и указанную в приказе №—28°С). В данном контексте оценивался как верный ответ выбор температуры, указанной в инструкции к тест-системе. К сожалению, многие руководствовались только приказом № 87. Такие ответы мы считали частично верными, поскольку температурный диапазон в приказе не исключает полностью таковой в инструкции.

Наибольшее количество ответов, расцененных нами как верные наполовину (80%), получено к вопросу № 7: "Что необходимо сделать перед использованием кардиолипинового реагента". Варианты ответов содержали информацию, данную в инструкции к тест-системе "Luis-test" в разделе "Способ применения" (п. 2) и в приказе № 87. Большинство респондентов отметили инструктивные указания и не отметили пункт, взятый из приказа (при выпадении кристаллов растворить их нагреванием в термостате или водяной бане до 56°С). При пользовании набором "Luis-test" разводить кардиолипиновый реагент не требуется.

Неожиданно много затруднений вызвал выбор правильных ответов на вопрос № 14 о противосвертывающих средствах при получении плазмы. Только 20% участников анкетирования дали правильный и полный ответ: такими средствами являются ЭДТА и трехзамещенный цитрат натрия. Физиологический раствор, гепарин, двухзамещенный цитрат натрия использовать нельзя.

расценивалось как неверный ответ. Не все участники тест-контроля правильно поняли смысл вопроса № 16 о повторном исследовании сыворотки для определения титра антител. Речь шла не о динамическом слежении изменения титра антител с использованием "парных сывороток", а о повторном исследовании исходного образца, давшего положительный результат, для определения титра антител в нем. Для этого используются тот же исходный образец и та же тест-система. Это четко обозначено в приказе № 87.

В вопросе № 18 мы подразумевали в качестве правильного ответа два варианта: "ОП находится в пределах серой зоны" и "Значение коэффициента позитивности находится в интервале 0,9—1,1". Оба варианта ответа отметили 60% участников. Однако мы расценили как верный ответ и выбор одного из возможных вариантов. На вопрос № 21 единичные участники опроса отметили лишь один из двух показателей, каковыми являются чувствительность и специфичность.

Протокол № 1 с данными по результатам исследования контрольных сывороток и образцов для внутрилабораторного контроля двумя методами (ИФА и микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном) прислали 18 участников программы (табл. 2—4).

Результаты исследования контрольных сывороток с помощью

Область применения изобретения

Настоящее изобретение относится к области медицины (дерматовенерологии и клинической лабораторной диагностике), в частности к иммунологическим (серологическим) исследованиям, применяемым при обследовании населения с целью диагностики сифилитической инфекции.

Предшествующий уровень техники

Важным фактором, влияющим на распространение сифилитической инфекции, является активное выявление больных при проведении профилактических осмотров и обследовании населения с применением иммунологических (серологических) методов исследования (выявление антител к антигенам Т.pallidum в образцах биологического материала, полученного от пациентов: сыворотка или плазма крови, ликвор).

Эффективными методами обеспечения надлежащего качества клинических лабораторных исследований является регулярное проведение мероприятий внутрилабораторного и внешнего контроля качества [Гаранина Е.Н., 1997; Приказы Минздрава РФ №45 от 07.02.2000 и №220 от 26.05.2003; Потемкина Е.Е., Манукян М.М., 2002; Меньшиков В.В., 2002, 2004, 2005; Михайлова B.C. и др., 2002; Заикин Е.В., 2004; Мошкин А.В., Долгов В.В., 2004; Кубанова А.А. и др., 2006; Кишкун А.А., Миколаускас В.П., 2006; Anderson M.А., 2002].

При внутрилабораторном контроле качества иммунологических (серологических) исследований на сифилис в каждую аналитическую серию (постановку реакции) наряду с образцами клинических материалов, полученных от пациентов, дополнительно включают образцы аттестованных контрольных материалов. После окончания лабораторного теста результаты исследования контрольных материалов сопоставляют с их аттестованными характеристиками, что позволяет врачу клинической лабораторной диагностики оценить правильность и качество проведения процедуры исследования и приемлемость полученных во всей аналитической серии данных [Павлова Е.С. и др., 2002; Меньшиков В.В., 2003; Мошкин А.В., 2002; Шибанов А.Н., 2008; EQAS, 2006; ISO 5725-1; ISO 15189: 2003].

Мероприятия внешнего контроля качества позволяют обеспечивать качество и единство измерений в клинических лабораториях определенного административного или территориального региона. Внешний контроль качества осуществляется путем направления аттестованных контрольных образцов в зашифрованном виде для исследования в контролируемые лаборатории и последующей оценки результатов, полученных в этих лабораториях, в соответствии с разработанными критериями оценки качества [Баллок Д.Г., 1993; Малахов В.Н., 1995, 1996, 1998, 2002; Кубанова А.А. и др., 2006].

Внутрилабораторный и внешний контроль качества представляют собою два взаимно дополняемых способа контроля, выявляющих различные виды аналитических ошибок в клинических диагностических лабораториях [Арефьева И.А. и др., 2005; Фриго Н.В. и др., 2007]. Внутрилабораторный контроль качества предназначен для поддержания стабильности аналитической системы в лаборатории, своевременного определения и устранения недопустимых случайных и систематических погрешностей аналитического измерения; это мероприятия текущего контроля качества. Внешняя оценка качества направлена на обнаружение систематических ошибок лабораторных методов, не определяемых при осуществлении внутрилабораторного контроля качества, и по своему характеру является последующим контролем, непосредственно не оказывающим влияние на результаты исследования в аналитической серии [Малахов В.Н., 1995, 1996, 1998, 2002; Кубанова А.А. и др., 2005, 2006; Фриго Н.В. и др., 2007; Chaloner-Larsson G. et al., 1997; EQAS, 2006; ISO 5725-1; ISO 15189: 2003].

Таким образом, мероприятия внутрилабораторного и внешнего контроля качества диагностических методов исследования основаны на использовании в качестве необходимых средств измерения аттестованных различными методами образцов биологического материала - контрольных материалов. В соответствии с требованиями нормативных документов контрольные материалы для оценки качества диагностических исследований должны быть разрешены к медицинскому применению в установленном порядке [ОСТ 91500.13.0001-2003; Петухов В.Г., 2003; Садовой М.А., Бедорева И.Ю., 2008; Jeffcoate S.L., 1992; WHO Technical Report Series, 2004].

В Российской Федерации для контроля качества серологических исследований при диагностике сифилитической инфекции длительное время выпускали лиофилизованные контрольные сыворотки (не содержавшие и содержавшие антитела, ассоциированные с сифилитической инфекцией), полученные из крови здоровых и зараженных сифилисом лабораторных животных (кроликов) [Овчинников Н.М. и др., 1987; Приказ Минздрава Российской Федерации №87 от 26.03.2001]. Однако в ряде современных методов исследований на сифилис применяются технологии, основанные на использовании видоспецифических конъюгатов, вступающих во взаимодействие с иммуноглобулинами человека, что исключает применение кроличьих сывороток в качестве адекватных контрольных материалов.

Разработка и производство стандартов, калибраторов и контрольных материалов для клинических лабораторных исследований является важным разделом исследований многих научных центров. Требования и рекомендации по производству, аттестации и внедрению международных биологических стандартов разрабатываются Комитетом по стандартизации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) [WHO Technical Report Series, 2004; ISO 15194], а также национальными органами здравоохранения [СП 3.3.2.1288-03, утв. Гл. государственным санитарным врачом РФ от 17.04.2003].

В зависимости от назначения контрольные материалы биологического происхождения могут выпускаться в виде отдельных стандартов, представленных ограниченным количеством не возобновляемых доз-аликвот, или панелей контрольных сывороток, регулярно выпускаемых промышленным способом.

В соответствии с международными рекомендациями при разработке панелей контрольных материалов в настоящее время отдают предпочтение неразведенным сывороткам крови человека, содержащим разные сочетания антител к возбудителю заболевания, выпускаемым в жидкой (нативной) форме, так как они по своим свойствам наиболее приближены к образцам пациентов, с которыми проводятся диагностические исследования в клинических лабораториях [СП 3.3.2.1288-03, утв. Гл. госуд. санитарным врачом РФ от 17.04.2003; Курбатова Е.А., 2000; Ricós С. et al., 1999].

Степень активности содержащихся в контрольных материалах антител должна находиться в области значений, соответствующих клиническим образцам, и не ниже порога аналитической чувствительности используемых в практическом здравоохранении лабораторных методов [Канев А.Н. и др., 1998; Приказ Минздрава РФ №45 от 07.02.2000 г.].

Необходимым условием создания биологических стандартов и контрольных материалов является обеспечение их стабильности способности сохранять свои специфические характеристики (уровень активности антител и воспроизводимые результаты лабораторного исследования) при их хранении в течение длительного периода времени (не менее 1-2 лет) [СП 3.3.2.1288-03; Jeffcoate S.L., 1992; WHO Technical Report Series, 2004; ISO 15194].

Технической задачей изобретения являлась разработка состава расширенной квалификационной панели контрольных материалов с различным вариационным уровнем антител к возбудителю сифилиса, позволяющим осуществлять внутрилабораторный и внешний контроль качества серологических методов исследования при диагностике сифилитической инфекции в течение длительного времени.

Эта задача решается за счет того, что в состав расширенной квалификационной панели включены 24 контрольные сыворотки с разным уровнем антител к антигенам возбудителя сифилиса. Состав панели контрольных материалов включает 16 образцов, приготовленных на основе матрицы сыворотки крови больных сифилисом и содержащих антитела к антигенам T.pallidum: в том числе 8 образцов с высоким уровнем антитрепонемных антител и титром антител к кардиолипиновому антигену от 1:16 до 1:128; 8 образцов с более низким содержанием антитрепонемных антител и титром антител к кардиолипину от 1:1 до 1:8. Расширенная панель контрольных материалов также включает 8 образцов, приготовленных на основе сыворотки крови здоровых доноров, не содержащей антитрепонемные антитела. Для обеспечения вариационного разнообразия по составу антител к отдельным антигенным детерминантам возбудителя сифилитической инфекции образцы контрольных материалов в комплекте расширенной панели не повторяются.

Техническим результатом изобретения является получение расширенной квалификационной панели контрольных материалов для осуществления мероприятий внутрилабораторного и внешнего контроля качества серологических исследований на сифилис, содержащих разные оттитрованные уровни антител к антигенам T.pallidum, соответствующие клиническим значениям, наблюдаемым у больных с сифилитической инфекцией, и не содержащих указанные антитела, что соответствует клиническим показателям, определяемым у здоровых людей.

Образцы панели контрольных материалов, содержащие антитрепонемные антитела, позволяют изучать показатели аналитической и клинической чувствительности наборов реагентов для диагностических методов исследования; в то время как образцы панели контрольных материалов, не содержащих антитрепонемные антитела, предназначены для оценки клинической специфичности диагностических тестов.

Расширенный состав неповторяющихся контрольных материалов квалификационной панели, содержащих различные уровни антитрепонемных антител, обеспечивает репрезентативный уровень проведения исследований как с использованием только образцов указанной панели, так и в сочетании их с другими контрольными материалами или аттестованными образцами.

Раскрытие настоящего изобретения

Сущность настоящего изобретения заключается в том, что в состав расширенной квалификационной панели контрольных материалов для внешнего и внутрилабораторного контроля качества серологических исследований для диагностики сифилиса входят 24 неповторяющиеся образца контрольных материалов с разным уровнем антител к возбудителю сифилиса, в том числе: 8 образцов - с высоким содержанием антител - титр антител к кардиолипину в образцах варьирует от 1:16 до 1:128, 8 образцов - с низким - титр антител к кардиолипину от 1:1 до 1:8, и 8 образцов, которые не содержат антитрепонемные антитела; для повышения аналитических свойств контрольные материалы выпускаются на основе матрицы сыворотки крови человека в готовой к использованию нативной жидкой форме, они содержат консервирующие добавки, не оказывающие влияния на проведение исследования.

Варианты применения настоящего изобретения

Пример №1. Применение контрольных материалов для внутрилабораторного контроля качества серологических исследований для диагностики сифилиса

Врач клинической лабораторной диагностики, осуществляющий серологические исследования на сифилис, отбирает из состава расширенной панели 3 или более образца контрольных материалов и включает их в аналитическую серию исследования наряду с образцами биологических материалов, предоставленных из лечебных отделений медицинских организаций. Результаты проведенного исследования контрольных материалов врач сопоставляет с аттестационными характеристиками каждого образца, содержащимися в аналитическом паспорте на серию панели контрольных материалов, или полученными в этой же лаборатории с этими контрольными материалами в серии предварительно проведенных установочных испытаний. В соответствии с технологией статистической обработки аналитических данных, используемой в лаборатории, врач клинической лабораторной диагностики принимает решение о допустимости (приемлемости) полученных отклонений в результатах исследования каждого контрольного материала от аттестованных или установочных значений анализируемого параметра. Принятое решение позволяет оценить качество проведения процедуры исследования всей аналитической серии и возможность выдачи результатов исследования клинических образцов, предоставленных от пациентов, в соответствующие лечебные подразделения.

При удовлетворительном качестве исследования контрольных материалов врач принимает решение о представлении результатов исследования образцов биологических материалов, полученных от пациентов, в соответствующие лечебные отделения медицинских организаций.

При неудовлетворительном качестве исследования контрольных материалов специалистом клинической лабораторной диагностики осуществляется поиск причин возможной ошибки, их устранение и повторное исследование всей аналитической серии.

Пример №2. Применение контрольных материалов для внешнего контроля качества выполнения серологических исследования для диагностики сифилиса

Мероприятия внешнего контроля качества включают в себя несколько последовательных этапов:

- разработка в контролирующей медицинской организации списка организаций и методов лабораторных исследований, подлежащих контролю, графика и условий проведения мероприятий внешнего контроля качества, критериев оценки качества исследований в контролируемых лабораториях;

- разработка контрольных заданий в виде нескольких образцов контрольных материалов (от 3 до 8), содержащих и не содержащих антитела к возбудителю сифилитической инфекции, выбранных из состава расширенной квалификационной панели; образцы контрольных материалов в составе контрольного задания могут повторяться (оценка воспроизводимости результатов исследования);

- предоставление контрольного задания, сроков его выполнения и протокола предоставления полученных результатов в контролируемые лаборатории;

- исследование контрольных образцов в условиях контролируемых лабораторий с применением контролируемых методов исследования и предоставление полученных результатов в контролирующую организацию;

- оценка представленных из контролируемых лабораторий результатов в соответствии с разработанными критериями оценки качества.

По результатам проведения мероприятий внешнего контроля качества контролирующая организация направляет руководителю контролируемой лаборатории заключение с оценкой качества проведенных в этой лаборатории исследований и рекомендациями по устранению выявленных нарушений. Неудовлетворительное качество лабораторных исследований, установленное в последовательных циклах внешнего контроля качества серодиагностики сифилиса, может служить основанием для руководителя соответствующей медицинской организации или клинической диагностической лаборатории для принятия административного решения о временном приостановлении выполнения соответствующего вида исследований, досрочном направлении специалистов клинической лабораторной диагностики на циклы тематического усовершенствования или обучения на рабочих местах в медицинских организациях последипломного обучения.

Читайте также: