Агар для salmonella shigella spp

Сальмонелла-шигелла агар также известный как агар SS, является умеренно селективной и дифференциальной средой, специально разработанной для выделения энтеропатогенных бактерий родов Salmonella и Shigella, как из окружающей среды, так и из клинических образцов..

Агар СС имеет сложный состав; Он состоит из мясного экстракта, пептона, лактозы, желчных солей, цитрата натрия, тиосульфата натрия, цитрата железа, агара, нейтрально-красного, ярко-зеленого и дистиллированной воды. Учитывая его высокую селективность, можно высаживать образцы с обильной смешанной флорой..

В микробиологических лабораториях среда Salmonella-Shigella широко используется для исследования присутствия Salmonella и Shigella в образцах диарейных фекалий, сточных вод, питьевой воды и продуктов питания..

Иногда необходимо использовать бульоны для предварительного обогащения (бульон из лактозы) и обогащение (бульон из селенита и цистина) для восстановления штаммов сальмонеллы.

Эти шаги требуются, когда существует подозрение на существование сальмонеллы в очень низком количестве, или когда штамм может подвергаться жестокому обращению с помощью процессов, типичных для промышленного производства, в основном, обработанных пищевых продуктов. Желательно также обогатить образцы кала у пациентов, которых лечили антибиотиками..

Впоследствии обогащенный бульон можно посеять на агаре Salmonella-Shigella и других подобных средах, таких как ксилозный агар, дезоксисилоксан-лизин (XLD) и энтеросолюбильный гектоен-агар (HE)..

• 1 фундамент
  • 1.1 Пищевая ценность
  • 1.2 Согласованность
  • 1.3 Селективный
  • 1.4 Дифференциал
• 2 Подготовка
• 3 Использование
• 4 ограничения
• 5 Контроль качества
• 6 Ссылки

фундамент

Каждый компонент культуральной среды сальмонеллы-шигеллы имеет определенную функцию, и смесь в целом придает ей свойства, которые ее характеризуют.

Мясной экстракт и пептон (расщепленный казеин и ткани животных) обеспечивают необходимые питательные вещества (азот, углерод и витамины) для развития микроорганизмов, способных переносить остальные компоненты..

Агар-агар отвечает за обеспечение твердой консистенции среды.

Эта среда очень селективна, поскольку содержит соли желчных кислот, цитрат натрия и ярко-зеленый цвет. Следовательно, он подавляет рост всех грамположительных бактерий и большинства грамотрицательных бактерий, включая некоторые кишечные палочки..

В то время как бактерии рода Salmonella и некоторые штаммы шигеллы действительно поддерживают эти соединения.

В основном, род Salmonella очень устойчив к солям желчи, настолько, что они могут жить в желчном пузыре некоторых пациентов-носителей, которые постоянно выводят бактерии через кал..

Лактоза является ферментируемым углеводом, который помогает дифференцировать ферментирующие лактозу штаммы от неферментирующих штаммов. Об этом свойстве свидетельствует наличие индикатора pH, который в этой среде является феноловым красным.

Штаммы, ферментирующие лактозу, дают красные колонии, тогда как неферментирующие штаммы бесцветны. Эта характеристика важна, так как сальмонелла и шигелла не сбраживают лактозу.

С другой стороны, эта среда содержит тиосульфат натрия в качестве источника серы и цитрат трехвалентного железа в качестве источника железа. Оба соединения способны дифференцировать бактерии, способные продуцировать сероводород. Они реагируют с образованием черного осадка нерастворимого и видимого сульфида железа.

Это свойство имеет некоторые штаммы рода Salmonella. Обычно их колонии имеют бесцветную плоскость с черной точкой в ​​центре. Остальные сальмонеллы не производят H₂S и развиваться как бесцветные колонии.

С другой стороны, колонии рода Shigella являются бесцветными плоскими без почернения.

подготовка

Это означает, что очень просто приготовить.

Взвесьте 63 г обезвоженной коммерческой среды и растворите в одном литре дистиллированной воды. Разогрейте раствор и перемешайте. Смесь может достигать кипения до минут.

Эта среда не должна автоклавировать. После растворения его подают непосредственно на одинарные или двойные стерильные тарелки..

При затвердевании они располагаются в перевернутом виде в машинах для изготовления зубного налета и хранятся в холодильнике (2-8 ° C) до использования..

Среда после приготовления должна иметь рН 7,2 ± 0,2 и оранжевый красный.

Важно разрешить темперирование перед посевом образцов. Вы можете непосредственно посеять исходный образец, выгружая материал на часть агара, а затем отфильтровывать от истощения..

В случае использования обогащенных бульонов, передать часть селенитового бульона и посеять с помощью шпателя Дригальски.

Инкубировать при 37 ° С в течение 24 часов при аэробиозе.

Имейте в виду, что количество граммов для взвешивания и конечный pH среды могут варьироваться от одного коммерческого дома к другому. Опорная плита носителя всегда приносит показания к его приготовлению.

использование

Он часто используется при анализе культур кала и в микробиологическом исследовании проб остаточной воды, питьевой воды и пищи.

Часто готовят двойные пластины, с одной стороны помещают агар Salmonella-Shigella, а с другой - агар XLD..

ограничения

-Некоторые штаммы шигеллы не растут в этой среде. Поэтому не рекомендуется для первичной изоляции этого рода.

-Не каждая чистая колония с черным центром указывает на сальмонеллу; биохимические тесты должны быть выполнены, чтобы сделать правильную идентификацию, так как колонии некоторых штаммов Proteus неотличимы от колоний сальмонеллы.

-Обезвоженная среда должна быть осторожна при воздействии окружающей среды, так как она очень гигроскопична. Поэтому его следует хранить в сухом и хорошо закрытом помещении. Открыто на очень короткие периоды.

-Со временем желчные соли в среде могут выпадать в осадок, образуя изображение, похожее на матовое вещество в агаре, но это не влияет на результаты..

-Некоторые штаммы шигеллы могут медленно сбраживать лактозу.

Контроль качества

Чтобы доказать, что среда работает правильно, рекомендуется посадить известные или сертифицированные контрольные штаммы и наблюдать, соответствует ли рост ожидаемым характеристикам..

Для этого используются штаммы Кишечная палочка, Enterobacter sp., Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium или Enterococcus faecalis.

Кишечная палочка --розовые выпуклые колонии.

Энтеробактер и Клебсиелла- большие колонии и красная или розовая слизистая.

Шигелла флекснери --прозрачные или бесцветные плоские колонии.

Salmonella typhimurium - бесцветные колонии с черным центром.

Enterococcus faecalis-- полное торможение.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, наиболее эффективно может быть использовано для бактериологической диагностики шигеллезов, брюшного тифа, паратифов, сальмонеллезов. Питательная среда данного целевого назначения содержит панкреатический гидролизат рыбы, натрия хлорид, натрия тиосульфат, лактозу, лимоннокислую соль натрия, желчь очищенную сухую, железо окисного цитрат, бриллиантовый зеленый, нейтральный красный, трис(гидрооксиметил) аминометан, натрия карбонат, агар микробиологический, а также экстракт кормовых дрожжей, гидроцитрат (вместо цитрата) натрия, пептон ферментативный, трис(гидрооксиметил) аминометан, натрия карбонат, натрия хлорид. Изобретение позволяет в значительной степени подавлять рост эшерихий и с высокой точностью дифференциации выделять лактозоотрицательные и лактозоположительные энтеробактерии при сохранении высоких ростовых (в отношении шигелл и сальмонелл) свойств среды. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики шигеллезов, брюшного тифа, паратифов, сальмонеллезов.

В настоящее время для данного целевого назначения используется Бактоагар Плоскирева производства НПО “Питательные среды” (1).

К основным недостаткам данной среды следует отнести слабую ингибицию кишечной палочки, затрудненную дифференциацию из-за эффекта обесцвечивания колоний лактозоположительной кишечной палочки при посеве высоких концентраций и характерного ползучего роста (“роения”) протея.

Среди питательных сред для выделения шигелл и сальмонелл, выпускаемых ведущими зарубежными фирмами, наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению является SS- агар, содержащий в качестве азотистого питания пептон, стимулятор роста, а также лактозу, желчные соли, лимоннокислую соль натрия, натрия тиосульфат, железа окисного цитрат, бриллиантовый зеленый, нейтральный красный, агар (2).

Отечественный вариант SS-агара разработан в ГНЦ прикладной микробиологии (п.Оболенск) и содержит в качестве питательной основы панкреатический гидролизат рыбной муки, в качестве стимулятора роста - экстракт пекарских дрожжей, желчь очищенную сухую (вместо желчных солей) и все остальные ингредиенты импортного аналога (3).

К причинам, препятствующим достижению нижеуказанного технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, относится то, что на отечественном варианте SS-агара затруднена дифференциация лактозоотрицательных (шигеллы, сальмонеллы) и лактозоположительных (кишечная палочка) энтеробактерий из-за незначительного различия в окраске колоний микробных клеток. Кроме того, на среде наблюдается недостаточно высокая ингибиция роста кишечной палочки и “роения” протея.

Задача предлагаемого изобретения - повышение ингибирующих и улучшение дифференцирующих свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что питательная среда, включающая панкреатический гидролизат рыбы, стимулятор роста, лимоннокисную соль натрия, лактозу, тиосульфат натрия, желчь очищенную сухую, железа окисного цитрат, бриллиантовый зеленый, нейтральный красный, агар микробиологический, содержит в качестве стимулятора роста - экстракт кормовых дрожжей, в качестве лимоннокислой соли - натрия гидроцитрат (вместо цитрата), дополнительно содержит пептон ферментативный, натрия хлорид, натрия карбонат и трис(гидрооксиметил) аминометан при следующем соотношении компонентов, г/л:

Панкреатический гидролизат рыбы 6,6-6,8

Пептон ферментативный 2,9-3,1

Экстракт кормовых дрожжей 4,9-5,1

Натрия хлорид 3,2-3,4

Натрия гидроцитрат 9,9-10,1

Желчь очищенная сухая 8,4-8,6

Железа окисного цитрат 0,9-1,1

Натрия тиосульфат 8,4-8,6

Натрия карбонат 1,9-2,1

Трис (гидрооксиметил) аминометан 2,4-2,6

Бриллиантовый зеленый 0,00049-0,00051

Нейтральный красный 0,049-0,050

Агар микробиологический 9,9-10,1

Вода дистиллированная До 1 л

Содержание в данной среде гидроцитрата и тиосульфата натрия, желчи, бриллиантового зеленого полностью подавляет рост сопутствующей флоры (грамположительные кокки), “роение” протея, значительно ингибирует рост эшерихий. Среда обладает высокой чувствительностью (отмечается рост единичных колоний шигелл и сальмонелл при посеве из разведения 10 -7 ), а также высокой точностью дифференциации лактозоотрицательных (шигеллы, сальмонеллы) и лактозоположительных (кишечная палочка) энтеробактерий. Микроорганизмы рода шигелл и сальмонелл образуют на среде бесцветные колонии диаметром 2,0-2,5 мм. Сероводообразующие штаммы сальмонелл имеют характерный черный центр. Колонии кишечной палочки ярко-красного цвета. Бактерии рода Proteus образуют на среде крупные бесцветные колонии в 0-форме с четко очерченными краями.

Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов на основе сухого питательного бульона, имеющего промышленный выпуск на предприятии НПО “Питательные среды” (4).

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В колбу с 0,6 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, взятые в количестве: панкреатический гидролизат рыбы - 6,6 г, пептон ферментативный - 2,9 г, экстракт кормовых дрожжей - 4,9 г, натрия хлорид - 3,2 г, натрия гидроцитрат - 9,9 г, желчь очищенная сухая - 8,4 г, лактоза - 9,9 г, железа окисного цитрат - 0,9 г, натрия тиосульфат - 8,4 г, натрия карбонат - 1,9 г, трис(гидрооксиметил) аминометан - 0,049 г, бриллиантовый зеленый - 0,00049 г, агар микробиологический - 9,9 г.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют панкреатический гидролизат рыбы - 6,7 г, пептон ферментативный - 3,0 г, экстракт кормовых дрожжей - 5,0 г, натрия хлорид - 3,3 г, натрия гидроцитрат - 10,0 г, желчь очищенная сухая - 8,5 г, лактоза - 10,0 г, железа окисного цитрат - 1,0 г, натрия тиосульфат - 8,5 г, натрия карбонат - 2,0 г, трис(гидрооксиметил) аминометан - 2,5 г, бриллиантовый зеленый - 0,0005 г, нейтральный красный - 0,05 г, агар микробиологический -10,0 г.

Пример 3. Отличается от примера 1 и 2 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют панкреатический гидролизат рыбы - 6,8 г, пептон ферментативный - 3,1 г экстракт кормовых дрожжей - 5,1 г, натрия хлорид - 3,4 г, натрия гидроцитрат - 10,1 г, желчь очищенная сухая - 8,6 г, лактоза - 10,1 г, железа окисного цитрат - 1,1 г, натрия тиосульфат - 8,6 г, натрия карбонат - 2,1 г, трис(гидрооксиметил) аминометан - 2,6 г, бриллиантовый зеленый - 0,00051 г, нейтральный красный - 0,051 г, агар микробиологический - 10,1 г.

Биологические показатели предлагаемой и известных сред для выделения шигелл и сальмонелл представлены в таблице.

Из табличных данных видно, что по степени ингибиции роста эшерихий (кишечная палочка) разработанная среда превосходит Бактоагар Плоскирева и SS-агар (п.Оболенск). При посеве 100 микробных клеток тест-штамма кишечной палочки на Бактоагаре Плоскирева формируются 25-30 колоний, на SS-агара (п.Оболенск) - 5-10 колоний на предлагаемой питательной среде, при этом наблюдается полная ингибиция роста. Ингибирующие свойства разработанной среды Бактоагара Плоскирева и SS-агара (п.Оболенск) в отношение бактерий рода Proteus заметно отличаются. При посеве 100 мк штамма Р. vulgaris на разработанной питательной среде формируются единичные колонии в О-форме с четко очерченными краями, в то время как на Бактоагаре Плоскирева при той же посевной концентрации микробных клеток наблюдается характерный ползучий рост (“роение”) протейного штамма. На среде-прототипе SS-агаре отмечается частичное “очаговое” роение штамма Р. vulgaris HX-19 при аналогичных условиях посева.

Из данных, приведенных в таблице, также видно, что разработанная среда обладает более четкими дифференцирующими свойствами: колонии кишечной палочки ярко-красного цвета, колонии шигелл и сальмонелл - бесцветные и прозрачные. На Бактоагаре Плоскирева наблюдается эффект обесцвечивания колоний лактозоположительной кишечной палочки при посеве высоких концентраций, что затрудняет дифференциацию. На SS-агаре (п.Оболенск) дифференциация затруднена за счет устойчивого ярко-розового окрашивания колоний лактозоотрицательных энтеробактерий, в особенности шигелл.

1. ФС 42-3672-98 Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл (Бактоагар Плоскирева).

2. SSA Salmonella Shigella Agar. Microbiology Manual Merck 1990, p.188. (Каталог фирмы “Merck”).

3. Шепелин А.П., Марчихина И.И. Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл. А.С. №930540 25/13.

4. ФС42-224 ВС-88 Питательный бульон для культивирования микроорганизмов, сухой.

Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл, содержащая панкреатический гидролизат рыбы, стимулятор роста, натрия тиосульфат, лимоннокислую соль натрия, лактозу, желчь очищенную сухую, железа окисного цитрат, бриллиантовый зеленый, нейтральный красный, агар микробиологический, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве стимулятора роста она содержит экстракт кормовых дрожжей, в качестве лимоннокислой соли - натрия гидроцитрат, дополнительно содержит пептон ферментативный, натрия хлорид, натрия карбонат и трис(гидрооксиметил) аминометан при следующем соотношении компонентов, г/л:

Читайте также:

• Прививка от полиомиелита при запоре
• Как промывать нос фурацилином при стафилококке
• Лекарство от тифа кто изобрел
• Справка о сделанной прививке от полиомиелита
• Сохранить в тиф в лайтрум