Бактериологическое исследование кормов на листериоз

федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору

В данном разделе размещаются актуальные версии нормативно-правовых актов (законы, приказы, указы, решения Верховного суда РФ и др.), представляющие интерес для специалистов в области ветеринарии и фитосанитарии.

Дополнительную информацию Вы можете получить, задав вопрос в разделе "Электронная приемная".

Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Листериоз

1. Раздел I. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Листериоз
   1. Часть 1. Область применения
   2. Часть 2. Нормативные ссылки
   3. Часть 3. Общие сведения о листериозе
   4. Часть 4. Профилактика листериоза у животных
   5. Часть 5. Оздоровление неблагополучных хозяйст
   6. Часть 6. Профилактика листериоза у людей

УТВЕРЖДАЮ Начальник Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации - Главный государственный ветеринарный инспектор Российской Федерации В.М.АВИЛОВ от 18 июня 1996 г. N 23

УТВЕРЖДАЮ Первый заместитель Председателя Госкомсанэпиднадзора России - Заместитель Главного государственного санитарного врача Российской Федерации С.В.СЕМЕНОВ от 31 мая 1996 г. N 11

Дата введения - с момента опубликования

1. Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии Госкомсанэпиднадзора РФ (Черкасский Б.Л., Ладный В.И., Минаева Н.З.);
2. Московским Городским Центром Санэпиднадзора (Маненкова Г.М.);
3. Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной вирусологии и микробиологии РАСХН (Бакулов И.А., Котляров В.М.).

2. Утверждены и введены в действие Заместителем Председателя Госкомсанэпиднадзора России от 31 мая 1996 г. N 11 и начальником Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России от 18 июня 1996 г. N 23.

3. Взамен инструкции "О мероприятиях по профилактике и борьбе с листериозом животных" от 13.02.1987 г.

Санитарные правила обязательны для соблюдения всеми государственными органами и общественными объединениями, предприятиями и иными хозяйствующими субъектами, организациями и учреждениями, независимо от их подчиненности и форм собственности, должностными лицами и гражданами" (статья 3).

"Санитарным правонарушением признается посягающее на права граждан и интересы общества противоправное, виновное (умышленное или неосторожное) деяние (действие или бездействие), связанное с несоблюдением санитарного законодательства РСФСР, в том числе действующих санитарных правил.

Должностные лица и граждане РСФСР, допустившие санитарное правонарушение, могут быть привлечены к дисциплинарной, административной и уголовной ответственности" (статья 27).

"Ветеринарное законодательство Российской Федерации регулирует отношения в области ветеринарии в целях защиты животных от болезней, выпуска безопасных в ветеринарном отношении продуктов животноводства и защиты населения от болезней, общих для человека и животных" (статья 2).

"Должностные лица и граждане, виновные в нарушении ветеринарного законодательства Российской Федерации, несут дисциплинарную, административную, уголовную и иную ответственность в соответствии с настоящим Законом и другими актами законодательства Российской федерации" (статья 23).

1.1. Настоящие Правила обязательны для выполнения на всей территории Российской Федерации государственными органами, предприятиями и иными хозяйственными субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их принадлежности и форм собственности, должностными лицами и гражданами в области профилактики и борьбы с кампилобактериозом человека и животных.

2.1. Закон РСФСР "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2.2. Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан.

2.3. Закон Российской Федерации "О ветеринарии".

2.4. Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования Российской Федерации.

2.5. Санитарно-эпидемиологические и ветеринарные правила по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных.

2.6. Методические рекомендации: "Лабораторная диагностика листериоза животных и людей" (Москва, 1987).

2.7. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов (Москва, 1988).

2.8. Ветеринарно-санитарные правила внутрихозяйственного убоя скота на мясо.

2.9. Инструкция по проведению ветеринарной дезинфекции объектов животноводства (Москва, 1988).

2.10. Инструкция по технологическому консервированию и дезинфекции при неспорообразующих инфекциях и дерматомикозах кожевенного сырья композиционными составами на основе солей органических кислот (Москва, 1994).

2.11. Санитарные правила для предприятий торговли (Москва, 1986).

2.12. Санитарные правила для предприятий общественного питания (Москва, 1977).

2.13. О совершенствовании системы медицинских осмотров трудящихся и водителей индивидуальных транспортных средств (Приказ N 555 от 29.09.89 г., Минздрав, Москва).

3.1. Листериоз - инфекционная болезнь человека и животных.

3.2. Возбудитель листериоза - Listeria monocytogenes - подвижная, полиморфная, грамположительная мелкая палочка (длиной 0,5-2,0 нм; шириной 0,3-0,5 нм) с закругленными концами.

3.3. Листерии обладают сравнительно высокой устойчивостью, широко распространены во внешней среде, при низких температурах (+4 - +6 град. С) длительное время (до нескольких лет) сохраняются в почве, воде, соломе, зерне. Размножаются в почве, воде, молоке, мясе, силосе. а также в органах трупов.

3.4. Основным резервуаром возбудителя в природе являются многие виды диких и синантропных грызунов. Листерии обнаружены у лисиц, норок, енотов, песцов, диких копытных, птиц. Листериоз поражает домашних и сельскохозяйственных животных (свиней, мелкий и крупный рогатый скот, лошадей, кроликов, реже кошек и собак), а также домашнюю и декоративную птицу (гусей, кур, уток, индюшек, голубей, попугаев и канареек). Листерии обнаружены также в рыбе и продуктах моря (креветки).

3.5. При листериозе имеет место многообразие механизмов передачи возбудителя инфекции (фекально-оральный, контактный, аспирационный, трансплацентарный). Основным из которых является фекально-оральный.

4.1. Необходимо комплектовать фермы животными из благополучных по листериозу хозяйств.

4.2. Не допускать ввода вновь поступивших животных в общее стадо без предварительного карантинирования их в течение 30 дней.

4.3. Во время карантина при формировании новых групп в животноводческих комплексах необходимо проводить клиническое обследование животных и при необходимости (при выявлении признаков поражения нервной системы, абортов, повышенной температуры тела) - бактериологические и серологические исследования на листериоз.

4.4. Систематически проводить уничтожение грызунов, кровососущих насекомых и клещей.

4.5. Для профилактики инфицирования кормов периодически проводить отлов грызунов в животноводческих помещениях, на прилегающей территории и в хранилищах кормов.

4.6. Постоянно контролировать качество кормов, особенно силоса и комбикорма, а при наличии показаний подвергать их бактериологическому исследованию.

4.7, Вести строгий учет случаев абортов, мертворождения и падежа животных и направлять патологический материал на исследование в ветлабораторию.

4.8. При маститах проводить бактериологическое исследование молока.

4.9. Забор и направление материалов на бактериологическое обследование проводится в соответствии с инструктивно-методическими документами Минсельхозпрода РФ.

5.1. При выявлении в хозяйстве (в животноводческом комплексе, на ферме, в отделении, стаде, свинарнике, индивидуальном дворе и т.д.) больных листериозом животных ветеринарный специалист, обслуживающий хозяйство, немедленно сообщает об этом руководителю хозяйства, Главному государственному ветеринарному инспектору района и в территориальный Центр госсанэпиднадзора. Одновременно проводит тщательное эпизоотологическое обследование в соответствии с инструктивно-методическими документами Минсельхозпрода РФ.

5.2. Хозяйство (отдельные корпуса животноводческих комплексов, фермы, отделения, свинарники, птичники, индивидуальные дворы и т.д.), объявляют неблагополучным по листериозу, если в нем выявлено заболевание животного листериозом на основании комплекса эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований.

5.3. В хозяйствах, неблагополучных по листериозу, вводят ограничения, на основании которых запрещается:

1. вывод из хозяйства животных, за исключением вывоза животных для убоя;
2. вывоз мяса от вынужденно убитых больных листериозом животных в сыром виде, за исключением его вывоза для переработки на мясокомбинаты. Мясо от таких животных в хозяйствах и на мясокомбинатах подвергают ветеринарно-санитарной оценке согласно "Правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов";
3. вывоз кормов, имевших контакт с больными животными или подозрительных на инфицирование листериями.

5.4. В хозяйствах (животноводческих комплексах, фермах, отделениях, стадах), неблагополучных по листериозу, проводят поголовный клинический осмотр животных и отбраковку животных согласно инструктивно-методическим документам Минсельхозпрода РФ, для выявления животных листерионосителей и бессимптомно больных проводят серологические исследования проб крови. Животных с положительной реакцией изолируют и подвергают лечению антибиотиками или направляют на убой.

5.5. В неблагополучных хозяйствах в период ограничений молоко, полученное от животных, давших положительный результат в серологической реакции, кипятят в течение 15 мин или перерабатывают на топленое масло.

5.6. В неблагополучных по листериозу стадах животных осеменяют искусственно спермой от здоровых производителей, которых предварительно обследуют серологически на листериоз.

5.7. Дезинфекцию, дезинсекцию и дератизацию на животноводческих фермах, неблагополучных по листериозу, а также обеззараживание навоза проводят согласно действующей "Инструкции по проведению ветеринарной дезинфекции объектов животноводства".

5.8. Скирды, стога сена, соломы, силос, комбикорма, находящиеся в неблагополучных по листериозу хозяйствах, тщательно проверяют на заселение грызунами, при обнаружении последних проводят дератизацию. Комбикорма, сено и солому из скирд и стогов, заселенных большим количеством грызунов, подвергают термической обработке при 100 град. С в течение 30 мин. Пробы силоса для выявления обсеменения его листериями направляют на бактериологическое исследование.

5.9. В случаях контаминации силосной массы, хранящейся в траншеях или в буртах, возбудителем листериоза вся испорченная силосная масса подлежит обеззараживанию биотермическим способом в порядке, предусмотренном "Инструкцией по проведению ветеринарной дезинфекции объектов животноводства".

5.10. Полученное от больных листериозом животных кожевенно-меховое сырье обеззараживают согласно действующей "Инструкции по технологическому консервированию и дезинфекции при неспорообразующих инфекциях и дерматомикозах кожевенного сырья композиционными составами на основе солей органических кислот".

5.11. Хозяйство (животноводческий комплекс, ферму, отделение, двор) объявляют благополучным по листериозу через два месяца после последнего случая выделения клинически больных животных и проведения заключительной дезинфекции помещений и территории фермы.

5.12. Вывод овец для племенных и пользовательных целей в течение двух лет после оздоровления хозяйства (животноводческого комплекса, фермы, отделения) от листериоза допускается при условии получения отрицательных серологических (РСК) результатов исследования сыворотки крови выводимых животных на листериоз. Вывод других видов животных допускается при тех же условиях в течение 1 года.

Разрешается без ограничений вывоз животных на мясокомбинат для убоя.

5.13. В хозяйствах, ранее неблагополучных по листериозу, необходимо проводить серологические обследования животных 1 раз в год перед постановкой на стойловое содержание до исчезновения положительных реакций. Положительно реагирующих животных изолируют, подвергают лечению или направляют на убой. При вывозе животных в ветеринарном свидетельстве указывают результаты исследования их на листериоз.

6.1. При подозрении на листериоз медицинский работник должен обеспечить лабораторное подтверждение диагноза.

6.2. Отбор материала на бактериологическое исследование и самоисследование проводится в соответствии с инструктивно-методическими документами Госкомсанэпиднадзора РФ и Минздравмедпрома РФ.

6.3. Госпитализация больных листериозом, а в отдельных случаях и листерионосителей проводится по клиническим и эпидемиологическим показаниям.

6.4. Все переболевшие листериозом подлежат диспансерному наблюдению, которое осуществляется в соответствии с инструктивно-методическими документами Минздравмедпрома РФ.

6.5. Предварительные и периодические медицинские осмотры проводятся на территориях, эпизоотически неблагополучных по листериозу.

6.6. Решение о проведении осмотров выносится территориальными органами госсанэпиднадзора и минздравмедпрома.

докторант 1 курса КазНАУ,

Республика Казахстан, г. Алматы

докторант 1 курса КазНАУ,

Республика Казахстан, г. Алматы

докторант 1 курса КазНАУ,

Республика Казахстан, г. Алматы

докторант 1 курса КазНАУ,

Республика Казахстан, г. Алматы

докторант 1 курса КазНАУ,

Республика Казахстан, г. Алматы

BACTERIOLOGICAL DIAGNOSIS OF LISTERIOSIS OF BIRDS

Zhumagul Kirkimbaeva

dr. prof. of Kazakh National University,

Nurzhan Sarsembayeva

dr. prof. of Kazakh National University,

Sholpan Mustafina

candidate of veterinary Science, a senior fellow at the Kazakhstan-Japan Innovation Center,

Nailya Bekturova

doctoral student Kazakh National University,

Dinara Bolatbekova

master student Kazakh National University,

АННОТАЦИЯ

Проведено бактериологическое исследование патологического материала от павших птиц. Результаты анализа клиники, патологоанатомических признаков, а также биологических свойств выделенной культуры доказывает принадлежность их к виду Listeria monocytogenes. Культура Listeria monocytogenes обладала типичными биологическими свойствами: культуральные свойства на жидкой, твердой и дифференциально-диагностической питательных средах, морфология бактериальных клеток на окрашенных по Граму мазках, характерное сбраживание углеводов, каталазная активность суточной культуры.

ABSTRACT

A bacteriological examination of pathological material from dead birds has been conducted. The results of the analysis of clinic, pathological features, as well as the biological properties of the selected culture proves that they belong to the species – Listeria monocytogenes. Culture of Listeria monocytogenes had the typical biological properties: cultural properties on the liquid, solid and differential diagnostic nutrient media, morphology of bacterial cells on Gram-stained smears, characterized by the digestion of carbohydrates, cat alase activity of daily culture.

Ключевые слова: листериоз, токсикоинфекция, диагностик, клинические признаки, бактериологическое исследование, питательные среды.

Keywords: listeria, toxicoinfection, diagnosis, clinical signs, bacteriological research, culture media.

Современное птицеводство является высокодоходной отраслью, оно дает народному хозяйству и населению страны ценное сырье и продукты питания. Поставлены задачи по обеспечению возрастающих потребностей населения в мясе и доведение уровня производства мяса и продукции из него до уровня потребления сравнимого с развитыми европейскими странами [1, с. 192].

Приоритетными должны стать показатели конкурентоспособности отечественной продукции, соответствия их качества международным требованиям, что обеспечит эффективность отрасли в условиях открытой мировой системы торговли, в области птицеводческой деятельности.

При этом пристальное внимание уделять безопасности получаемых продуктов птицеводства, так как пищевые токсикоинфекции в птицеперерабатывающей промышленности по-прежнему представляют весьма актуальную проблему. Эта задача остаётся не менее важной в связи с созданием Таможенного союза и вступлением Казахстана в ВТО.

Наибольшую опасность для потребителя представляет продукты птиц, больной инфекционными болезнями, в том числе листериозом. К настоящему времени листериоз птиц зарегистрирован в более чем 50 странах мира, где он наносит весьма существенный экономический ущерб и осложняет эпидемиологическую обстановку [4].

Листерия – это грамположительная факультативно-анаэробная палочка, не образующая спор, она выделяется из почвы, воды, пыли, сточных вод и др. широко распространены в природе и носителями являются десятки видов домашних животных и диких млекопитающих, птиц. Большинство носителей листерий по внешним признакам выглядят вполне здоровыми.

В настоящее время экспресс-диагностика листериоза основана на ПЦР. При определении специфических антител доступными в настоящее время методами имеют место как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты исследований [2].

Цель исследований: изучить ситуацию по листериозу в Алматинской области на птицефабриках путем выделения и идентификации возбудителя болезни, вызвавшей гибель птиц.

Материалы и методы исследования. Работа по мониторингу листериоза бактериологическими методами выполнена в Казахстанско-Японском инновационном центре, а также на птицефабриках Алматинской области РК, проводили исследования по обнаружению возбудителя листериоза за период 12.12.2015 по 12.02.2016 г.

Диагностические исследования проводились с использованием бактериологических методов. Материалом для бактериологического исследования служили грудные и бедренные мышцы, мозг, а также внутренние органы (печень, сердце) и корм. Микробиологические показатели определяли в образцах мяса, а также печени и мозге в свежем виде сразу после убоя. Микробиологический анализ проводили согласно СТ РК ГОСТ Р 51921-2002 и методическому пособию.

В паренхиматозных органах павших птиц наблюдались характерные патологоанатомические изменения: изменен цвет паренхимы печени, мягкой консистенции; селезенка кровенаполнена, темного цвета; паренхима почки мягкой консистенции, цвет изменен, сосуды серозной оболочки мозга инъецированы, сами оболочки разрыхлены, тусклые, местами на них видны кровоизлияния.

Для бактериологического исследования пробы были в соответствии с ГОСТ 21237-75.

Посевы суспензии из головного мозга и паренхиматозных органов на физиологическом растворе в соотношении 1:5 делали на питательные среды МПБ (мясо-пептонный бульон), МПА (мясо-пептонный агар). Посевы культур выращивали в термостате при 25°С. Из головного мозга и печени готовили мазки-отпечатки. Мазки из суточных колоний листерий и мазки-отпечатки окрашивали по Граму [3, c. 90].

Предназначенные для идентификации 24 – часовые бульонные культуры, выращенные при 25˚С, бактериологической петлей засевали частым штрихом на 2 пробирки МПА, так, чтобы получить рост по всей поверхности агара, выращивали при комнатной температуре 24–30 часов.

Через 24 ч культивирования посевов в термостате при 25°С в МПБ наблюдалось легкое равномерное помутнение бульона, на МПА выросли колонии мелкие, росинчатые, блестящие, вязкой консистенции, в проходящем свете наблюдали нежный рост колоний – мелкие выпуклые беловатые колоний как беловатый налет на агаре (Рис. 1).

Рисунок 1. Рост листерий на МПА

Рисунок 2. Рост листерий на кровяном агаре

Через 24 ч при появлении сплошного роста колоний бактериологической петлей производили, пересев на селективную диагностическую среду Palkam и кровяной агар. Через 24 часа инкубирования на селективной среде Pаlcam отмечался обильный рост мелких, серовато-зелёных или зелёных колоний, диаметром 0,5–1,0 мм. При появлении сплошного роста колоний листерий производили, пересев бактериологической петлей из зон наибольшего почернения среды штрихами на 2–3 чашки Петри с селективной дифференциально-диагностической средой для получения изолированных колоний. На кровяном агаре у выделенных культур обнаруживали зону гемолиза различной интенсивности (Рис. 2). Бактериальную массу из выросших изолированных колоний использовали для приготовления препаратов и окрашивания по Граму.

В окрашенных по Граму препаратах бактерии рода листерия установлены в виде коротких палочек, располагающихся одиночно и попарно. Возбудитель листериоза представляет собой грамположительные с закругленными концами палочки, которые могут быть полиморфными. Характерной особенностью листерий является то, что некоторые бактерий располагаются по отношению друг к другу в виде римской цифры V или параллельно. Суточная культура листерий, выделенная от бройлера, представлена на рис. 3.

Рисунок 3. Культура листерий в мазке, окрашенном по Граму

При посеве выделенных культур на углеводные среды получены следующие результаты.

Таблица 1.

Биохимические свойства выделенных культур листерий

Рефераты и конспекты лекций по географии, физике, химии, истории, биологии. Универсальная подготовка к ЕГЭ, ГИА, ЗНО и ДПА!

Микробиологическая диагностика листериоза

Листериоз - зоонозная инфекция с преимущественным поражением системы

мононуклеарных фагоцитов, что регистрируется в большинстве случаев с поражением нервной ткани или в виде ангинозно-септической формы.

Возбудитель Listeria monocytogenes относится к роду Listeria, семьи Corynebacteriacea.

В связи с тем, что заболевание протекает с большим разнообразием клинических проявлений, основное значение в диагностике имеют микробиологические методы.

Материалом для исследования: испражнения, моча, смыв из носоглотки, ликвор, околоплодные воды. Материал для исследования выбирают в первые 7-10 дней болезни. Значительная контагиозность возбудителей этой инфекции требует соблюдать осторожность при работе с материалом, который исследуется.

В диагностике листериоза используют микроскопический, бактериологический, биологический, серологический, аллергологический методы.

Микроскопический метод. Из материала, который исследуют, готовят мазки, окрашивают их по Граму и Романовскому. Обнаруживают грамположительные бактерии или коккобактерии размером 1-2 х 0,5 мкм, которые располагаются в виде римской пятерки или параллельно друг другу и не образуют спор. При температуре 20-25 ° С бактерии подвижны. При 37 ° С подвижность резко снижается. Микроскопический метод диагностики не является решающим.

Бактериологический метод. Материал для исследования высевают в чашки Петри с кровяным агаром и в пробирку с МПБ. Посевы помещают в термостат (t 30-37 ° С). Листерии являются факультативными анаэробами. Хорошо культивируются на обычных нейтральных или слабощелочных средах (МПА, МПБ), однако селективным средой является кровяной агар с трипафлавином.

Через 24-48 часов обнаруживают резко очерченные гладкие выпуклые бесцветные или нежно-голубые колонии (S-форма), которые могут быть окружены узкой зоной β-гемолиза. В процессе культивирования листерии могут образовывать R-форму колоний. Эти Колонии большие по размерам, шероховатые, с утолщенным зазубренным краем и менее прозрачные. В жидких средах в процессе роста вызывают равномерное помутнение, а затем выпадает скользкий осадок диспергируется.

Для выделения чистой культуры микробов отбирают подозрительные колонии с зоной β-гемолиза и пересевают в пробирки со скошенным МПА. Пробирки помещают в термостат при температуре 30-37 ° С на 24 часа. Полученную чистую культуру бактерий сеют в пестрый ряд Гисса для изучения биохимических свойств. Листерии ферментируют глюкозу, мальтозу, рамнозу, левулезы, салицин к кислоты без газа. Индол и сероводород не образуют. Нитраты и нитриты не восстанавливают.

Антигенные свойства листерий определяют в реакции агглютинации на стекле (ориентировочная реакция) и в пробирках со стандартной диагностической сывороткой (см. Приложение).

Биологический метод. Материал, который исследуют вводят подкожно белым мышам. Животные погибают в сроки от 3-го до 51 суток. Из органов павших животных делают мазки - отпечатки и посев на питательные среды. При выделении подозрительных колоний делают биологическую пробу на белых мышах, у которых вызывают иммуносупрессию посредством введения кортизона. Культуру вводят внутрь живота животного. На 2 - 6 сутки животные погибают. Возбудителя обнаруживают в тканях животных, погибших, путем посева на питательные среды.

Серологический метод. Основан на определении антител в сыворотке больного. Обычно используют РА, РПГА, РСК. Кровь для исследования берут дважды, начиная со второй недели болезни и в динамике наблюдают за нарастанием титров антител.

Для определения титра антител ставят развернутую, пробирочных РА (см. Приложение). Для этого в серии двукратно разведенных сывороток добавляют листериозный диагностикум. Реакция считается положительной при образовании аглютинату в разведении 1: 1400 и выше.

Наиболее чувствительной считается РПГА (см. Приложение). Используют сыворотку больного и листериозный эритроцитарный диагностикум. При положительной реакции происходит склеивание эритроцитов в виде зонтика в разведении 1: 400 и более. Учитывают РСК (см. Приложение) при которой диагностическим титром считается разведение 1: 5 и выше.

Аллергологический метод. Внутрикожная аллергическая проба становится положительной с 7-9 дня заболевания. Аллерген (кислотный гидролизат бактериальной массы листерий) вводят в объеме 0,1 мл внутрикожно и учитывают результат через 24-48 г. Пробу считают положительной при появлении гиперемии и отека, диаметром до 2 см.

Листериоз является инфекционным заболеванием, которое вызывает самые вирулентные пищевые инфекции. Листериоз распространен среди животных и людей. Характеризуется множеством источников инфекции, разнообразными путями и факторами ее передачи, множественными формами проявления и высокой летальностью. Листериозом в мире заболевает тысячи человек, от 20 до 30% из которых умирает. Смертность от тяжелых распространенных форм заболевания достигает 90 — 100%. Своевременная диагностика листериоза позволяет назначить адекватное лечение что, обеспечивает больному полное излечение.

Рис. 1. На фото больной с листериозным менингитом.

Полиморфизм клинических проявлений и невозможность выявления в ряде случаев источника инфекции создает исключительные трудности при установлении диагноза по клинико-эпидемиологическим данным. В связи с этим решающее значение приобретает лабораторная диагностика листериоза. Предварительный диагноз устанавливается на основании бактериоскопического исследования, окончательный диагноз требует бактериологического подтверждения или ПЦР.

Для исследования используются:

• Образцы крови, носоглоточная слизь, отделяемое из глаз, пунктат из лимфатических узлов, фекалии.
• У женщин, родивших мертвого ребенка или с признаками листериоза исследованию подлежат плацента, околоплодные воды, отделяемое родовых путей.
• У новорожденных исследуется меконий.
• У больных с подозрением на листериозный менингит исследуется спиномозговая жидкость.
• От трупов берется разнообразный биологический материал.
• Фекалии и мазки из ротоглотки берутся для установления бактерионосительства.

Диагностика листериоза с помощью простой и люминесцентной микроскопии

Рис. 2. Вид листерий под микроскопом. Бактерии располагаются поодиночке или парами, реже — короткими цепочками. При окраске по Граму листерии окрашиваются в розовый цвет.

Рис. 3. Листерии в свете микроскопа, дающего трехмерное увеличение, выглядят как цилиндры.

Рис. 4. Листерии в макрофагах.

Снижение работы клеточного иммунитета приводит к распространению инфекции по всему организму. В органах и тканях образуются специфические гранулемы — листериомы. Их специфический состав определяется при микроскопировании мазка или биопата.

Рис. 5. Гранулемы в печени (фото слева). Гранулема (листериомы) в головном мозге (фото справа).

Лабораторная диагностика листериоза с помощью бактериологического исследования

Листерии растут при комнатной температуре на обычных питательных средах — слабощелочных и нейтральных. Посевы рекомендуется делать в первые 7 — 10 суток заболевания. Инкубация продолжается 3 недели при температуре 37 °С. При посеве на глюкозно-кровяной агар отбирают типичные колонии (прозрачные или роговидные), дающие гемолиз.

Рис. 6. Колонии листерий при посеве на мясопептонном агаре напоминают капельки росы. В проходящем свете колонии приобретают перламутровый оттенок.

Рис. 7. При росте листерий на хромогенном агаре колонии приобретают синюю окраску.

Рис. 8. При росте на оксфордском агаре вокруг колоний образуется черный ореол.

Рис. 9. При росте листерий в мясопептонном бульоне образуется помутнение с легкой опалесценцией.

Диагностика листериоза с помощью биологических проб

Биологические пробы основаны на заражении лабораторных животных биологическим материалом, взятого от больного, с целью обнаружения бактерий. Заражению подвергают белых мышей, кроликов, морских свинок, степных пеструшек.

Рис. 10. На фото зараженные листериозом белые мыши. В центре здоровый мышонок. Справа и слева от него мыши-сосунки с параличом передних лапок.

Рис. 11. На фото слева листериоз у кролика, развившийся после внутривенного заражения. На фото справа воспалительная реакция, развившаяся на месте внутрикожного введения листерий.

Антитела к листериям

Антитела к листериям определяются с помощью серологических реакций: реакции агглютинации (РА), реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) и реакции связывания комплемента (РСК) с листериозным антигеном с постановкой в парных сыворотках. При наличии листериоза у больного нарастание титра регистрируется в 4 раза и более. Реакции проводятся дважды с 2-х недельным перерывом.

В связи с антигенным родством листерий и стафилококков, возможно получение ложноположительных результатов.

Через 2 недели от начала заболевания в крови больного выявляются антитела IgG, которые присутствуют в крови на протяжении всего периода заболевания. Длительное время антитела сохраняются в крови при хроническом течении листериоза.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — экспрессный и высокочувствительный метод диагностики листериоза. Существует прямой и непрямой метод РИФ. При определении антител прямым методом к взвеси микробов, зафиксированной на предметном стекле, добавляется сыворотка, меченная флуорохромом. При образовании комплекса антиген-антитело при освещении сине-фиолетовыми (ультрафиолетовыми) лучами бактерии светятся ярко-зеленым цветом в люминесцентном микроскопе.

Рис. 12. Свечение листерий при проведении реакции иммунофлюоресценции.

Кровь на листерии

Анализ крови на листерии является эффективным способом определения листериозной инфекции. При различных формах листериоза в организме больных, прежде всего, активизируется система мононуклеарных фагоцитов — макрофагов. Они захватывают и уничтожают бактерии и вирусы, живущие внутриклеточно, считывают информацию об их строении и передают ее Т-лимфоцитам. В дальнейшем В-лимфоциты начинают вырабатывать антитела, уничтожающие патоген. При заболевании количество моноцитов в периферической крови возрастает. При септической форме листериоза их количество достигает 70% (при норме 3 — 11%).

Рис. 13. На фото моноциты — самые крупные клетки периферической крови.

Внутрикожная проба на листериоз

Для диагностики листериоза используется внутрикожная (аллергическая) проба. Листериозный антиген вводится внутрикожно. Через 24 часа проводится изучение реакции. В случае наличия листерий в организме исследуемого на месте введения листериозного антигена коже появляется папула (инфильтрат) 10 и более миллиметров.

Внутрикожная проба ставиться на 6 — 9 день от момента заболевания.

В случае появления единичных случаев листериоза диагностика заболевания должна проводиться с использованием бактериологического метода и метода ПЦР.

Дифференциальная диагностика листериоза

Дифференциальная диагностика листериоза проводится с учетом развившейся клинической формы заболевания.

• Листериозные ангины следует отличать от стрептококковых ангин.
• Острые формы листериоза следует отличать от инфекционной эритемы, инфекционного мононуклеоза, острого токсоплазмоза, заболеваний крови.
• Нервные формы листериоза следует отличать от бактериальных менингитов разной этиологии — пневмококковых, менингококковых, стафилококковых.
• Листериоз беременных следует отличать от вялотекущих пиелоциститов и пиелонефритов.