Диагностикум латексный для серотипирования бактерий рода salmonella

Нет сомнения, что безопасность продуктов питания за последнее десятилетие значительно выросла, однако потребители еще сохраняют определенное недоверие. Между тем правительство ужесточает законодательство, чтобы обеспечить более тщательный контроль безопасности продуктов питания на протяжении всей производственно цепочки.

Сальмонелла в продуктах животного происхождения является предметом пристального внимания уже на протяжении многих лет. Эта инфекция вызывает диарею, лихорадку, а в случае если человек ослаблен или стар – даже смерть. Каждый год огромное число людей страдают от сальмонеллеза, что приносит убытки в миллионы долларов.
Разработано немало программ по уменьшению численности бактерий сальмонеллы, но идеального решения так и не найдено, в основном из-за отсутствия точного критерия заражения и трудностей с выбором адекватных мер дезинфекции.
С другой стороны, основным недостатком многих программ является то, что определить, на каком этапе производства произошло первоначальное заражение продуктов, практически невозможно. Именно для того чтобы проследить происхождение заражения, так важно серотипирование. Но для проверки образцов продуктов серологическим методом необходимы хорошо оснащенные лаборатории, а кроме того, анализа приходится ждать достаточно долго, что снижает эффективность мероприятия в целом.
Но сейчас можно сказать, что появился свет в конце туннеля…

Прорыв сальмонеллы
В настоящее время нидерландская компания DSM Nutrition Products предложила новую тест-систему по обнаружению сальмонеллы, которая дает возможность точно определить (серотипировать) каждый выделенный штамм бактерии. И после такого определения есть возможность оперативно отследить, на каком этапе производственного процесса – будь это инкубатор, родительское стадо, комбикормовый завод, ферма, где вырастили птицу, или мясокомбинат – произошло заражение. То есть обнаружить место, где проблема возникла впервые. Тест дает возможность идентифицировать различия между серотипами бактерии на генетическом уровне с помощью специфических маркеров, причем эти результаты полностью совпадают с результатами, полученными классическими методами.

Как отследить источник заражения
Чтобы проиллюстрировать значение серотипирования как метода для понимания возникновения заражения сальмонеллой в продуктовой цепочке, возьмем, например, птицеводство. Здесь существует два пути заражения патогеном – вертикальный и горизонтальный. Для птицы, которая во всем мире считается основным источником сальмонеллы, вертикальная трансмиссия осуществляется от прародительского стада через родительский инкубатор к стаду разведения, через инкубатор к бройлерам, переработчикам, розничной торговле – и, наконец, на кухню. Горизонтальная же трансмиссия, которая более сложна и которую порой труднее обнаружить и отследить, может иметь место через корм, оборудование или через окружающую среду на любой из стадий вертикальной трансмиссии.
Мониторинг и предотвращение заболевания включают в себя:
– отбор проб на всех стадиях производственной цепочки, то есть в цыплятниках, инкубаторах, кормораздатчиках и на комбикормовых заводах (кормоцехах);
– определение источника заражения и проведение процедур по обеззараживанию в цыплятниках, на мясокомбинатах, в окружающей среде, а также лечение персонала, если это необходимо.
Меры определения источника вертикальной трансмиссии включают также отбор проб с бахил, кормовой пыли, охладителей поддонов, полов в инкубаторе, вкладышей в ящики для цыплят, ящиков для транспортировки, помета цыплят, пробы прямой кишки и кожи бройлеров, так же как мяса грудки птицы.

Как снизить численность бактерий сальмонеллы
Хотя программы по мониторингу существуют как в некоторых странах Европы, так и во всем мире, их одних явно недостаточно. Для того чтобы программа по снижению численности бактерий сальмонеллы успешно работала, необходимо выявить источник заражения с помощью серотипирования и принять меры именно в этом месте производственной цепочки.
Например, чтобы ликвидировать проблему на уровне стада, кроме перманентного мониторинга необходимо принимать следующие меры:
– неукоснительное соблюдение мероприятий по очистке и дезинфекции помещения;
– вакцинация (в настоящее время существует вакцина только против серотипов – S.enteridis и S.typhimurium);
– применение антибиотиков и пробиотиков;
– выбор оптимального рН корма.
Другим важным аспектом для родительском стада и стада разведения является предотвращение перезаражения между отдельными птичниками, расположенными на одной территории. Чтобы предотвратить перезаражение в пределах одной фермы, обычно рекомендуют особый санитарный режим, включающий устройство отдельной канализации для каждого помещения. Сходные меры неукоснительного мониторинга были предложены и для помещений, где птицу выращивают, в то время как для мясокомбинатов основное внимание заострялось на режиме очистки и дезинфекции, а также на устройстве безопасной канализации.

Подобный режим мониторинга следует ввести и в инкубаторах перед каждой новой закладкой яиц, а также в родительских стадах. В помещениях, где выращивают птицу, пробы с бахил берут в течение 10 дней до отправки на бойню. На фазе убоя и переработки берут 30 проб прямой кишки, кожи и мяса у партий птицы из каждого отдельного курятника. В Нидерландах с 1997 по 2006 год данная программа интенсивного мониторинга и соответствующие мероприятия, направленные на снижение численности бактерий сальмонеллы, в которых серотипирование играет ключевую роль, дали положительные результаты. В настоящее время сальмонелла встречается менее чем в 1% случаев (это касается обоих сероваров), а общее заражение снизилось с 35 до 6%.

Серотипирование – ключ к успеху
Для того чтобы во всеоружии встретить проблемы, которые готовит заражение сальмонеллой, и для того чтобы не нарушать предписания правительства, в Нидерландах разработан метод ускоренного серотипирования сальмонеллы, который дает возможность обнаружить источник заражения в производственной цепочке намного быстрее, причем с высокой точностью. Этот рутинный экспресс-тест можно провести в лаборатории предприятия по переработке мяса, что даст возможность своевременно предотвратить заражение. Тест относится к первичной стадии скрининга и помогает идентифицировать большое чисто серотипов за одно испытание.
Как было отмечено выше, мониторинг сальмонеллы и серотипирование позитивных образцов должно стать интегральной частью программы по безопасности продуктов питания животного происхождения. Существует около 2000 серотипов или подтипов сальмонеллы. Различные источники заражения обычно вызывают разные серотипы. Классические серологические методы требуют хорошо подготовленного и обученного персонала, но в любом случае полная идентификация серотипа занимает две-три недели или даже больше. Однако рутинная идентификация серотипа важна по двум причинам. Во-первых: последние постановления ЕС и национальных правительств требуют более детальной серотипической идентификации при обнаружении культуры сальмонеллы. Во-вторых, рутинная серотип-идентификация сальмонеллы не дает возможности в каждом отдельно взятом случае заражения в пищевой цепочке точно засечь цель – таким образом, добиваться снижения зараженности сальмонеллой следует с помощью общепринятых санитарных мероприятий на каждом этапе производства продуктов питания, то есть в помещениях для бройлеров, на комбикормовых заводах и в инкубаторах. Пример Нидерландов показывает, что, используя такой комплексный подход, можно добиться впечатляющих результатов.

Жаап ОБДАМ, Нидерланды

Статья опубликована в World Poultry, vol. 24, № 1, 2008
Перевод с английского Ларисы ЛАТЫПОВОЙ

Утверждаю
Главный врач ФГУЗ "Федеральный
центр гигиены и эпидемиологии",
Председатель Лабораторного совета
Федеральной службы по надзору
в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека
А.И.ВЕРЕЩАГИН
8 декабря 2006 года
СЕРОТИПИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ РОДА SALMONELLA
МЕТОДОМ ЛАТЕКСНОЙ АГГЛЮТИНАЦИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
N 02.014-06
1. Разработаны ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора при участии ООО "Стай-лаб".
2. Рекомендованы к утверждению Лабораторным советом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (от 29 сентября 2006 г.).
3. Утверждены и введены в действие Председателем Лабораторного совета, Главным врачом ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора А.И. Верещагиным 08.12.2006.
4. Введены впервые.
1. Область применения
Методические рекомендации предназначены для применения в лабораториях организаций, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль, а также в лабораториях иных организаций, аккредитованных на право проведения испытаний, исследований.
Методические рекомендации распространяются на методы серологической дифференциации бактерий рода Salmonella, выделенных из проб пищевых продуктов, смывов.
2. Общие положения
Сальмонеллы принадлежат к семейству Enterobacteriaceae, их биологические характеристики во многом сходны с прочими энтеробактериями. Энтеробактерии обнаруживаются в почве, в воде, на поверхности фруктов, овощей, в злаках и других объектах окружающей среды. Многие из этих микроорганизмов имеют эпидемиологическое значение в связи с их патогенностью для человека.
В настоящее время сальмонеллы признаны индикаторными микроорганизмами всей группы патогенных кишечных бактерий.
При использовании иммунохимических методов определения бактерий рода Salmonella могут быть существенно оптимизированы, а время исследования сокращено. Метод может быть пригоден для испытания чистых культур сальмонелл, а также для подтверждения культур, выделенных при положительном результате ИФА на тест-системе LOCATE(R) Salmonella.
3. Аппаратура, материалы, питательные среды и тест-системы
Термостат электрический с диапазоном измерения от 15 до ТУ 64-1-1382-83
65 °С с допустимой погрешностью регулирования
температуры +/- 1 °С
Стерилизатор паровой медицинский ГОСТ 19569
Шкаф сушильно-стерилизационный, обеспечивающий
поддержание заданного температурного режима в диапазоне
от 50 до 200 °С с погрешностью +/- 2 °С
Гомогенизатор бактериологический перистальтического типа
Masticator (или Stomacher) со стерильными
полиэтиленовыми пакетами
Ротатор с плоской поверхностью, частота вращения
150 об./мин.
Стандарт МакФарланда 0,5 единиц или денситометр для
бактериальных суспензий типа "Densi-La-metr" или
"Десимат"
Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 ТУ 16-535-84
Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания ГОСТ 24104
200 г и допустимой погрешностью +/- 2 мг
Холодильник бытовой электрический ГОСТ 16317
Пипетки градуированные исполнения 1, 2 классов точности, ГОСТ 29227
вместимостью 1 куб. см, 10 куб. см
Пробирки бактериологические вместимостью не менее ГОСТ 25336
10 куб. см
Посуда широкогорлая ГОСТ 25336
Питательные среды:
Забуференный бульон для обогащения сальмонелл
Тетратионатный бульон
Селенитовый бульон
Висмут-сульфит агар
XLD-агар
Компоненты набора SPECTATE(R) Salmonella:
Латексный реагент 1 1 шт.
Латексный реагент 2 1 шт.
Положительный контроль 3 шт.
(термически дезактивированные сальмонеллы)
Карточки для постановки реакции агглютинации 15 шт.
Палочки-аппликаторы около 100 шт.
Разовые пипетки 50 шт.
Разовые пробирки 50 шт.
Стерильный физиологический раствор (0,9% NaCl) для
приготовления бактериальной суспензии
4. Описание и принцип действия
тест-системы SPECTATE(R) Salmonella
Тест-система SPECTATE(R) Salmonella предназначена для серологического анализа сальмонелл в культуральных бульонах и из выделенных чистых культур методом латексной агглютинации, позволяет быстро дифференцировать их принадлежность к основным серологическим группам.
В основе работы тест-системы SPECTATE(R) Salmonella лежит взаимодействие латексных частиц, покрытых специфическими антителами к сальмонеллам групп A, B, C, D, E, и антигенов сальмонелл, содержащихся в бульоне или суспензии, на специальных слайдах.
В комплект тест-системы SPECTATE(R) Salmonella входят два иммунореагента, представляющие собой смеси латексных суспензий красного, голубого и зеленого цветов. Каждая цветная латексная суспензия сенсибилизирована антителами к определенной группе сальмонелл. В ходе анализа цветные латексные частицы образуют агрегаты со специфическими антигенами сальмонелл, что сказывается в изменении вида и цвета растворов на слайде. Исследование с помощью тест-системы SPECTATE(R) Salmonella имеет продолжительность 4 минуты и используется в качестве дополнительного подтверждающего теста в комбинации с иммуноферментным методом анализа (например, с помощью тест-системы LOCATE(R) Salmonella), с методами классической микробиологии или с импедансным методом (например, с системами БАКТРАК, Мальтус и т.д.).
5. Сущность метода
Метод серотипирования бактерий рода Salmonella при исследовании микробной взвеси или обогащенного бульона основан на визуальном определении наличия агглютинации, цвет которой соответствует конкретной серологической группе бактерий.
6. Ход исследования чистой культуры
6.1. Внести 200 мкл стерильного физиологического раствора в пробирку из комплекта поставки.
6.2. С помощью аппликатора отобрать одну или две характерные колонии с чашки Петри таким образом, чтобы отобранные колонии закрыли плоский конец аппликатора.
6.3. Осторожно внести колонии в пробирку с физиологическим раствором, суспензировать колонии (суспензия должна соответствовать стандарту мутности 0,5 единиц по МакФарланду) и далее выполнять исследование при помощи метода латексной агглютинации.
Примечание:
В соответствии с действующими методическими документами рекомендуется отобрать для исследования, по крайней мере, не менее 5 колоний с чашки Петри.
6.4. Пример: использование метода латексной агглютинации агаровых и бульонных культур бактерий рода Salmonella в комплексе с классическими бактериальными методами и методом иммуноферментного анализа.
Таблица 1
ПРОВЕДЕНИЕ ЛАТЕКС-АГГЛЮТИНАЦИИ (SPECTATE(R) SALMONELLA)
В КОМБИНАЦИИ С СИСТЕМОЙ LOCATE(R) SALMONELLA
---------------------------T-------------------------------------¬
¦ Методология LOCATE(R) ¦ Рекомендуемое использование ¦
¦ ¦ латекс-агглютинации ¦
+--------------------------+-------------------------------------+
¦ Исследуемая проба ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦ Предобогащение ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦ Селективный бульон ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦Модифицированный GN-бульон¦ ----> SPECTATE(R) ¦
¦ ¦ ¦ Salmonella ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦Положительный результат на¦ ¦
¦ LOCATE(R) ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦
¦ \/ ¦ ¦
¦Селективные плотные среды ¦Подозрительные ----> SPECTATE(R) ¦
¦ ¦ колонии Salmonella ¦
L--------------------------+--------------------------------------
7. Исследование культуральной жидкости,
полученной при анализе импедансного метода
7.1. Отобрать 1 мл бульона с вероятным ростом бактерий из импедансной системы в соответствующую пробирку.
7.2. Перенести пробирку в кипящую водяную баню и оставить на 15 минут.
Примечание:
Исследуемые пробы нужно обязательно инкубировать в кипящей водяной бане для того, чтобы снизить нежелательное влияние компонентов бульона.
7.3. Охладить пробы и далее выполнять исследование на латексную агглютинацию.
Примечание:
Следует отметить, что интенсивно окрашенные бульоны, использующиеся в импедансных системах, при постановке реакции латексной агглютинации могут быть помехой для интерпретации результатов. В этих случаях рекомендуется выполнять дополнительную инокуляцию культуральной суспензии в питательный бульон с последующей инкубацией (24 часа) для увеличения количества бактерий до детектируемого уровня.
8. Порядок проведения испытания
8.1. Положить слайд на чистую горизонтальную поверхность. Убедиться, что слайд не перевернут, поверхность гладкая и ровная. Не касаться очерченных на слайде реакционных зон.
8.2. Ресуспензировать латексные и контрольные реагенты, встряхивая флаконы в течение 5 - 10 с. Нанести по 30 мкл реагента 1 в первую зону слайда и реагента 2 - в смежную зону.
8.3. С помощью разовой пипетки, держа ее под углом 45°, внести по 40 мкл исследуемой жидкости в каждую зону слайда.
8.4. С помощью разового аппликатора смешать капли на слайде и распределить равномерно по поверхности очерченной зоны. При исследовании одной пробы можно использовать один аппликатор для обеих зон.
8.5. Поместить карточку на платформу ротатора. Убедиться в том, что слайд расположен ровно и не соскользнет при включении ротатора. При необходимости, для фиксации слайда на платформе ротатора можно использовать двухстороннюю липкую ленту. Установить скорость вращения - 150 об./мин., включить ротатор. Через 4 мин. остановить ротатор и наблюдать агглютинацию на слайде.
Не использовать увеличительное стекло.
9. Учет и оценка результатов испытаний
9.1. Наблюдаемая цветная латексная агглютинация свидетельствует о наличии бактерий рода Salmonella в исследуемых пробах и позволяет идентифицировать их серологическую группу (или присутствие в пробе Vi-антигена). При положительной реакции цвет агглютинации красный, синий, зеленый.
9.2. При отрицательной реакции фон остается бесцветным или становится зелено-пурпурным, на что необходимо обращать внимание. Отрицательный результат определения свидетельствует о том, что исследуемые бактерии не принадлежат к определяемым серологическим группам бактерий рода Salmonella. При необходимости дальнейшей идентификации бактерий могут быть использованы традиционные микробиологические методы.
9.3. Неспецифические реакции с трудно интерпретируемым результатом агглютинации возможны при исследовании бульонов с высоким содержанием конкурирующих микроорганизмов. В таких случаях следует использовать классические процедуры идентификации с последующим выделением чистой культуры и повторной агглютинацией.
Учет результатов испытания в зависимости от цвета агглютинации представлен в таблице 2.
Таблица 2
-------------------------------T---------------------------------¬
¦ Комбинация реагентов реакции ¦ Цвет агглютинации ¦
+--------------T---------------+ ¦
¦ 1 ¦ 2 ¦ ¦
+--------------+---------------+---------------------------------+
¦B ¦Vi ¦Красный ¦
+--------------+---------------+---------------------------------+
¦C ¦E или G ¦Синий ¦
+--------------+---------------+---------------------------------+
¦D ¦A ¦Зеленый ¦
+--------------+---------------+---------------------------------+
¦Без окраски ¦отрицательный ¦
+------------------------------+---------------------------------+
¦Зелено-пурпурный ¦отрицательный (неспецифический) ¦
L------------------------------+----------------------------------
Примечание:
1. На слайде может наблюдаться взвесь, появление которой связано не с агглютинацией, а со свойствами жидкостей, в которых при тестировании бактерии распределены неоднородно. Эти результаты не следует рассматривать как положительные, так как агглютинированные цветные латексные частицы можно легко отличить от взвесей на фоне красного, синего или зеленого цвета капли.
2. Если результат исследования показал присутствие Vi-антигена (красная агглютинация с иммунореагентом 2), исследуемую суспензию необходимо перенести в пробирку, поместить в кипящую водяную баню на 5 минут и провести испытание повторно с двумя иммунореагентами (в наборе). Данная процедура необходима для удаления внешней Vi-капсулы микроорганизма, что поможет установить серотип сальмонеллы при агглютинации.
Если Vi-антиген обнаруживается после кипячения пробы, выделенные культуры, подозрительные на род Salmonella, необходимо отправить для дальнейшей идентификации в учреждения Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
10. Требования к помещениям и технике безопасности
Работа по проведению серотипирования сальмонелл методом латексной агглютинации должна осуществляться в соответствии с требованиями СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами", ГОСТ Р 51446 "Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований".
11. Ограничения метода
11.1. Нижний предел обнаружения сальмонелл с помощью латексных
7
иммунореагентов SPECTATE(R) Salmonella составляет около 10 КОЕ/мл бульона
или микробной суспензии (при исследовании без выделения чистой культуры).
11.2. Тест-система SPECTATE(R) Salmonella позволяет дифференцировать 97% видов сальмонелл, за исключением таких видов, как S. typhi, S. pararyhi C.

Лабораторная диагностика брюшного тифа и паратифов. проводится с учетом патогенеза заболевания. Основными методами лабораторной диагностики являютсябактериологический и серологический.

При сальмонеллезах иммунитет нестойкий непродолжительный.

С первого для заболевания исследуют кровь на гемокультуру (бактериологический метод). Для этого 5-10 мл крови больного засевают в колбы с 50-100 мл питательной элективной среды с желчью – среды Раппопорта. Желчь нейтрализует бактерицидные свойства сыворотки крови. После инкубирования в термостате производят пересев на среды Эндо, Левина, Плоскирева (для получения изолированных колоний и чистых культур из них). Прозрачные бесцветные колонии отсевают на среду Ресселя (Олькеницкого), на которой учитывают ферментацию сальмонеллами глюкозы и отсутствие ферментации лактозы.

Чистую культуру идентифицируют по биохимическим свойствам(сахаролитическим - по результатам посева на среды Гисса и протеолитическим - тестами на индол, Н2S, NH3 в посевах на МПБ) и антигенной структуре. Для сероидентификации ставят реакцию агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой к сальмонеллам групп А, В, С, Д, Е. Положительный результат свидетельствует о принадлежности выделенной культуры к роду Salmonella. Затем определяется О-серогруппа в реакциях агглютинации с отдельными О-сыворотками (входящими в поливалентную сыворотку). Для определения серовара (вида возбудителя) устанавливают Н-антигены с монорецепторными Н-сыворотками первой, а затем второй фазы. Для полноты идентификации выделенную культуру проверяют на лизабельность поливалентным брюшнотифозным фагом.

S. typhi, кроме того, фаготипируют (определяют фаговар) Vi-фагами для установления эпидемиологической цепочки.

Для ранней ускоренной диагностики перспективным является иммунофлюоресцентный метод, позволяющий выявить специфический антиген в исследуемом материале ( крови, костном мозге).

Со второй недели заболевания проводятбактериологические исследования с испражнениями(получение копрокультуры), мочой(получение уринокультуры), желчью.

Испражнения (мочу, желчь) непосредственно, а также после проведения их через среды обогащения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина, Плоскирева) так, чтобы выросли изолированные колонии. Из бесцветных колоний получают чистые культуры, которые идентифицируют так же, как и гемокультуру.

Серодиагностика(выявление антител в сыворотке больного) осуществляется с конца первой - начала второй недели заболевания путем постановки реакции агглютинации Видаля с О-, Н-брюшнотифозными и А- и В-паратифозными диагностикумами.

Более чувствительной является РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с О-, Н-, Vi-эритроцитарными диагностикумами.

Положительная реакция агглютинации с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а положительная реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших, и у привитых, так как О-антитела накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления, а Н-антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших длительное время. Диагностический титр реакции Видаля 1:200. По нарастанию титра агглютининов в динамике можно отличить имеющуюся инфекцию от реакции на прививку. В последнем случае нарастания титра антител не будет.

Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации. Vi-антитела после полного выздоровления исчезают, но при наличии брюшнотифозного носительства они присутствуют постоянно. Выявление Vi-антител в титре 1:40 и выше имеет диагностическое значение: такие лица подлежат многократному бактериологическому обследованию.

Основным методомлабораторной диагностики является бактериологический. Исследуют рвотные массы, промывные воды желудка, дуоденальное содержимое, (желчь) кровь, мочу, фекалии, гной или экссудат из воспалительных очагов, пищевые продукты. Засевают на среды обогащения (селенитовый или 20% желчный бульон), а затем на висмут-сульфит агар (высокоселективная среда), Плоскирева (среднеселективная) Эндо, Левина.

Схема микробиологических исследований аналогична таковым при выделении и идентификации гемо-и копрокультуры при брюшном тифе.

Из серологических методов применяют реакцию агглютинации с О- и Н-диагностикумами, иногда с аутоштаммами бактерий, выделенными от больных; более чувствительна РНГА с эритроцитарными диагностикумами.

Возможно использование биологического метода путем вскармливания белых мышей зараженными пищевыми продуктами. S. enteritidis и S. typhimurium вызывают гибель мышей через 1-2 суток. Посевы крови из сердца и материала из внутренних органов дает рост сальмонелл.

Для экспресс-диагностики применяют иммунофлюоресцентный метод исследования (обнаружение антигенов возбудителя с помощью иммунных сывороток, обработанных флюорохромами).

|	следующая лекция ==>
Патогенез, клиника сальмонеллезов	|	Лечение сальмонеллезов

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Группа компаний "Униконс"

Продвижение и реализация пищевых добавок, антисептиков и другой продукции НПО Альтернатива.

"Бесплатные образцы"

Комплексные пищевые добавки "Униконс".

Для всех отраслей пищевой промышленности!

"Петритест"

Микробиологические экспресс-тесты. Первые результаты уже через 4 часа.

• Вы здесь:
• Библиотека технолога
  
• ГОСТы, документы
  
• ГОСТ 7702.2.0-2016 - ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПОЛУФАБРИКАТЫ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям

Подготовка к микробиологическим исследованиям

11 Подготовка к микробиологическим исследованиям

11.1 Общие положения
Общие положения по подготовке к микробиологическим исследованиям - по ГОСТ ISO 7218.

11.2 Средства измерений, оборудование, материалы, реактивы, растворы и питательные среды
11.2.1 При подготовке к микробиологическим анализам применяют средства измерений, оборудование, материалы, реактивы, растворы и питательные среды по ГОСТ 7702.2.7, ГОСТ 7702.26, ГОСТ 31467, ГОСТ 31468. а также следующие.
Автоклав по ГОСТ ISO 7218.
Бутыли.
Весы лабораторные по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ OIML R 76-1. Дозатор для розлива питательных сред и реактивов по ГОСТ ISO 7218.
Колбы по ГОСТ 25336.
Кружка по ГОСТ 9147.
Ламинарный шкаф класса биологической безопасности II.
Баня водяная.
Лампы бактерицидные (1,5-2,5 Вт на 1 м3 воздуха).
Лоток.
Лупа по ГОСТ 25706.
Магнитные мешалки с подогревом до 300 °С.
Материалы для упаковки посуды при стерилизации.
Петля бактериологическая.
Пинцеты медицинские по ГОСТ 21241.
Пипетки градуированные по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228.
Пипетки Пастера.
Пробирки с поплавками (трубки Дархема).
Пробирки по ГОСТ 25336.
Пробирки агглютинационные.
Пипетки автоматические вместимостью 10, 2, 1 см3 по ГОСТ 29227.
Посуда одноразовая для микробиологических исследований.
Печь микроволновую для расплавления питательных сред по ГОСТ ISO 7218.
Прибор для подсчета колоний по ГОСТ ISO 7218.
рН-метр с точностью калибровки ± 0,1 ед. рН при температуре от 20 °С до 25 °С по ГОСТ ISO 7218.
Скальпели и ножи медицинские по ГОСТ 21240.
Спиртовка по ГОСТ 25336.
Стаканы по ГОСТ 25336.
Стекла предметные по ГОСТ 9284.
Стекла покровные по ГОСТ 6672.
Стерилизационный сушильный шкаф для температурного режима (180 ± 0,5) °С по ГОСТ ISO 7218.
Ступка по ГОСТ 9147.
Термометры жидкостные стеклянные с диапазоном температуры от 0 °С до 50 °С и от 50 °С до 100 °С по ГОСТ 28498.
Термостаты электрические для выращивания микроорганизмов с автоматическим терморегулято¬ром, обеспечивающие поддержание температуры от 20 °С до 55 °С по ГОСТ ISO 7218.
Фильтр Зейтца.
Флаконы из темного стекла с притертой пробкой.
Холодильник или холодильная камера по ГОСТ ISO 7218.
Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.
Чашки Петри стеклянные по ГОСТ 25336.
Бумага оберточная по ГОСТ 8273.
Бумага крепированная.
Крафт-бумага.
Пробки силиконовые, резиновые.
Пеналы для стерилизации лабораторной посуды.
Пакеты бумажные самоклеящиеся с индикаторами для паровой и воздушной стерилизации (для упаковывания изделий медицинского назначения перед стерилизацией).
Материал пластиковый без складок с индикаторами для паровой и воздушной стерилизации (для упаковывания изделий медицинского назначения перед стерилизацией).
Аппарат термосварочный ротационного или импульсного типа для запечатывания упаковок для стерилизации.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.
Марля медицинская по ГОСТ 9412.
Агар микробиологический по ГОСТ 17206.
Агар сухой питательный.
Азид натрия (NaN3).
Аминопептид.
Ацетат свинца.
Бриллиантовый зеленый,
Бромтимоловый синий.
Бромкрезоловый пурпурный.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Вода питьевая.
Генциан фиолетовый.
Глицерин дистиллированный по ГОСТ 6824.
D-Глюкоза по ГОСТ 6038.
Дрожжевой диализат.
Дрожжевой экстракт.
Дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171. Желатин по ГОСТ 11293.
Железо (II) аммония сульфат (соль Мора) (NН4)2SO4 ∙ FеSO4 ∙ 6Н2О.
Железо (III) аммония сульфат.
Железо треххлористое 6-водное по ГОСТ 4147.
Железо (III) цитрат.
Железо (II) сернокислое 7-водное по ГОСТ 4148.
Желчь крупного рогатого скота натуральная или сухая.
Индикатор Андреде.
Йод по ГОСТ 4159.
Калия гидрат окиси технический по ГОСТ 9285.
Калий йодистый по ГОСТ 4232.
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный по ГОСТ 2493.
Калий фосфорнокислый двузамещенный безводный.
Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198.
Кальций углекислый по ГОСТ 4530.
Кислота карболовая кристаллическая (фенол).
Кислота розоловая ч. д. а.
Кислота соляная по ГОСТ 3118.
Кислота щавелевая по ГОСТ 22180.
Кристаллический фиолетовый.
Хлорид лития 6-водный.
Лактоза.
Магний хлористый 6-водный по ГОСТ 4209.
Малахитовый зеленый.
Мальтоза.
Маннит.
Масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164.
Метиленовый синий (голубой).
Метиловый красный.
Карбамид (мочевина) по ГОСТ 6691.
Мясо – говядина охлажденная по ГОСТ 31797.
Мясной экстракт.
Натрия гидроокись, раствор молярной концентрацией 1,0 моль/дм3 (фиксанал).
Натрия гидроокись, раствор молярной концентрацией 0,1 моль/дм3 (фиксанал).
Натр едкий очищенный по ГОСТ 11078.
Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201.
Натрий кислый селенистокислый.
Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия, гипосульфит натрия) по ГОСТ 27068, ч.д.а.
Натрий углекислый (карбонат).
Натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 11773.
Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный по ГОСТ 245.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233.
Натрия сульфит.
Пируват натрия.
Парадиметиламинобензальдегид.
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.
Плазма кроличья сухая.
Сахароза по ГОСТ 5833.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Триптон.
Теллурит калия.
Толуол по ГОСТ 5789.
Фуксин кислый.
Феноловый красный.
Фуксин основной.
DL-фенилаланин.
L-фенилаланин.
DL-аминокислоты (лизин, орнитин, аргинин).
L-аминокислоты (лизин, орнитин, аргинин).
α-нафтол.
L-цистин.
Яйца куриные по ГОСТ 31654.
Желточная эмульсия.
Водный раствор метиленового синего (голубого) массовой концентрацией 0,1 %.
Раствор карболовый кристаллического фиолетового или генциан фиолетового.
Раствор карболовый фуксина Циля.
Раствор Люголя.
Раствор серноватистокислого натрия (тиосульфата, гипосульфита).
Раствор розоловой кислоты массовой концентрацией 5,0 %.
Раствор индикатора бромтимолового синего.
Раствор индикатора Андреде.
Раствор фенолового красного массовой концентрацией 1,6 %.
Раствор фенолового красного массовой концентрацией 0,4 %.
Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0,001 %.
Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 0,5 %.
Раствор малахитового зеленого массовой концентрацией 1,0 %.
Раствор трифенилтетразолиума хлористого массовой концентрацией 0,4 %.
Раствор натрия кислого селенистокислого массовой концентрацией 10,0 %.
Раствор L-цистина.
Раствор мочевины массовой концентрацией 40,0 %.
Раствор мочевины массовой концентрацией 20,0 %.
Раствор метилового красного.
Раствор гидрата окиси калия массовой концентрацией 40.0 %.
Раствор щавелевой кислоты массовой концентрацией 12.0 %.
Раствор железа треххлористого 6-водного массовой концентрацией 8,0 %.
Реактив Эрлиха.
Реактив Ковача по ГОСТ 31659.
β-галактозидный реактив по ГОСТ 31659.
Реактивы для теста Григорсена по ГОСТ 31747.
Спирто-водный раствор фуксина Пфейфера.
Спиртовой раствор α-нафтола.
Физиологический раствор.
Физиологический фосфат-буферный раствор.
Бумага индикаторная для обнаружения индола.
Бумага индикаторная для определения сероводорода.
Красящие бумажки с кристаллическим фиолетовым или генциан фиолетовым для окраски по Граму.
Растворы и реактивы для окрашивания по Граму и для выявления спор – по ГОСТ 10444.1, ГОСТ 30425, ГОСТ ISO 7218.
Реактивы для реакции Фогес-Проскауера по ГОСТ 31659.
Калий гидрофосфатный безводный.
Диски с углеводами для тестов на ферментацию сахаров, по прилагаемой к ним инструкции.
Диски индикаторные бумажные для определения оксидазы.
Диск для биохимического подтверждения сальмонелл.
Диск для подтверждения St. aureus.
Сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонелезные О-сыворотки основных групп А, В, C, Д, Е и редких групп; Vi-, H-аглютинирующие сыворотки по прилагаемой к ним инструкции.
Системы биохимических микротестов по прилагаемой к ним инструкции. Биохимические микро¬тесты со специальной адаптированной базой данных ГОСТ 31468.
Водорода пероксид по ГОСТ 10929 массовой концентрацией 30 г/дм3.
Сухой или жидкий панкреатический гидролизат казеина.
Сусло-агар по ГОСТ 27543.
Среда Сабуро по ГОСТ 10444.12.
Голодный агар.
Агар желточно-солевой.
Агар яично-желточный азидный.
Агар Байрд-Паркера.
Агар с мочевиной (Кристенсена).
Агар трехсахарный по Олькеницкому.
Агар полужидкий.
Агар с феноловым красным и бриллиантовым зеленым.
Агар SPS.
Агар усиленный для клостридий.
Агар триптонно-сульфитный с неомицином.
Амино-пептидный бульон.
Бульон Хоттингера по ГОСТ 10444.1.
Бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон по ГОСТ 31747.
Желатиновая среда.
Среда железосульфитная.
Забуференная пептонная вода.
Забуференная пептонная вода готовая жидкая стерильная.
Забуференная пептонная вода сухая.
Мясная вода.
Солевой бульон.
Мясо-пептонный бульон с 1 % глюкозы.
Мясо-пептонный агар.
Мясо-пептонный агар с глюкозой.
Мясо-пептонный агар с глюкозой и дрожжевым экстрактом.
Пептонная вода.
Пептонно-солевой раствор.
Пептонно-буферная среда.
Питательная среда для выявления сальмонелл.
Селенитовая среда Лейфсона.
Среды Гисса с углеводами.
Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов.
Среда Кларка для реакции Фогес-Проскауэра.
Агаризованная среда Байрд-Паркера по ГОСТ 31746.
Среда для расщепления фенилаланина.
Среды с аминокислотами (лизином, орнитином, аргинином).
Среда Китт-Тароцци.
Среда Кесслера (с лактозой).
Среда Кауфмана.
Среда Мюллера.
Селенитовая среда.
Селенитово-цистиновая среда.
Селенит-цистиновый накопительный бульон.
Магниевая или хлористомагниевая среда.
Среда Ресселя.
Среда из сухого питательного агара с глюкозой.
Среда с углеводом (маннитом или мальтозой) и феноловым красным.
Среда Хейфеца с лактозой.
Среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) по ГОСТ 31659.
Среда Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R 10).
Сахарный бульон.
Тетратионатный бульон Мюллера-Кауфмана по ГОСТ 31659.
Агаризованная среда с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном по ГОСТ 31746.
Готовая питательная среда с растворами теллурита калия, сульфамезатина и эмульсии яичного желтка по ГОСТ 31746.
ГРМ агар (сухой питательный агар для культивирования микроорганизмов на основе гидролизата рыбной муки) по ГОСТ 31746.
Модифицированная полужидкая среда по инструкции на этикетке.
Висмут-сульфитный агар по инструкции на этикетке.
Среда Плоскирева по инструкции на этикетке.
Среда Эндо.
Среда готовая на тест-пластине
Среда Левина по инструкции на этикетке.
Среда Клиглера по ГОСТ 31659.
Среда SIM для идентификации по инструкции на этикетке.
Среда для реакции Фогес-Проскауера по ГОСТ 31659.
Среда Олькеницкого.
Триптон-триптофановая среда по ГОСТ 31659.
L-лизиндекарбоксилазная среда по ГОСТ 31659.
ONPG-диски для определения ß-галакгозидазной активности по инструкции на этикетке.
Модифицированная полужидкая среда MSRV по инструкции на этикетке.
Бриллиантово-зеленый агар по инструкции на этикетке.
XLD-4 агар по инструкции на этикетке.
VP-среда по ГОСТ 31659.
Агар тройной сахарный по инструкции на этикетке.
Агар с цитратом железа (Симмонса) по инструкции на этикетке.
Агар Кристенсена с мочевиной по ГОСТ 31659.
Агар Байрд-Паркера по ГОСТ 31746.
Агар тройной сахарный с цитратом железа по инструкции на этикетке.
Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным по ГОСТ 31747.
Глюкозо-триптонный (агар) бульон по ГОСТ 10444.1.
Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар (VRBL-arap).
Трехсахарный железистый агар (TSI-arap) по ГОСТ 31746.
Скошенный столбик агара с цитратом (Симмонса).
Скошенный столбик мясо-пептонного агара.
Селективная обогатительная среда (лаурил сульфат триптозный бульон) по ГОСТ 31747.
Селективная обогатительная среда (бульон Мак-Конки) по ГОСТ 31747.
Селективная добавка.
Система для культивирования анаэробных микроорганизмов и капнофильных бактерий
Диагностикум латексный для серотипирования бактерий рода Salmonella по документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.
Набор для подтверждения идентификации бактерий рода Salmonella с помощью латекс-теста по документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.
Тест-наборы для биохимической идентификации бактерий рода Salmonella.
Тест-штампы бактерий рода Salmonella, не относящихся к тифозной группе.