Исследование смывов на листериоз

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод выявления и определения бактерий рода
Salmonella и Listeria monocytogenes на основе
гибридизационного ДНК-РНК анализа

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: ГУ научно-исследовательский институт питания РАМН (В.А.Тутельян - руководитель, С.А.Шевелева, Н.Р.Ефимочкина, А.М.Григорьев, И.Б.Быкова, И.М.Нитяга); ГУ Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН (В.Г.Нестеренко); Центром госсанэпиднадзора в г.Москве (Н.Я.Салова, З.Г.Малышева); при участии Санкт-Петербургского ГУ "Центр контроля качества товаров (продукции), работ и услуг" (Н.И.Лебедева, Л.Б.Гамова, М.С.Колосова) и фирмы ООО "Ниармедик плюс" (С.В.Юров, Т.Б.Макарова, Д.О.Газдиев, А.Б.Швецов).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ 22 февраля 2005 г. Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко.

3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН временных методических указаний МУК 4.2.1840-04 "Метод экспрессного выявления бактерий рода Salmonella и Listeria monocytogenes в пищевых продуктах и продовольственном сырье за 24 часа с использованием твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-рРНК анализа", утвержденных 29.02.04.

ВНЕСЕНО Дополнение N 1, утвержденное и введенное в действие Главным государственным санитарным врачом РФ c 06.12.2010

Дополнение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011 год

1. Введение

Проведение контроля пищевых продуктов и продовольственного сырья традиционными методами микробиологического анализа на наличие патогенных микроорганизмов - малоизученных возбудителей новых и вновь возникших заболеваний (Listeria monocytogenes, антибиотикорезистентных сальмонелл, энтерогемморагических эшерихий) связано с такими проблемами, как трудоемкость, длительность и недостаточная специфичность используемых методик.

Последнее обусловлено тем, что в качестве тестов идентификации, входящих в стандартизованные методы анализа, в настоящее время используют в основном характеристики метаболических свойств возбудителей, зачастую не позволяющие провести четкую дифференциацию патогенных представителей искомых родов и видов от непатогенных, имеющих одинаковое с патогенами фенотипическое выражение. Это снижает достоверность результатов анализа, осложняет оценку распространенности патогенов в пищевых продуктах и сырье и не гарантирует от необоснованных браковок продукции.

Наиболее достоверными в последние годы признаются методы генотипического анализа культур, выделенных на селективных питательных средах, основанные на выявлении кодируемых признаков патогенности или анализе последовательностей рибосомальной ДНК (16S, 26s pРНК). В связи с этим внедрение высокоспецифичных методов анализа и экспрессных диагностических тест-систем в официальные схемы санитарно-микробиологического контроля пищевых продуктов становится насущной необходимостью, которая позволит повысить эффективность работы и рационализировать ресурсы контрольных органов.

2. Общие положения и область применения

2.1. Настоящие методические указания устанавливают метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах и в смывах с поверхностей оборудования и инвентаря предприятий по производству пищевых продуктов, а также методы ускоренной (за 24 ч) идентификации культур, выделенных из указанных объектов и подозрительных на принадлежность к Listeria monocytogenes и бактериям рода Salmonella, на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием.

2.2. Методы могут применяться в качестве альтернативных классическим бактериологическим методам лабораторных исследований для целей экспрессного выявления бактерий рода Salmonella и/или подтверждения принадлежности выделенных микробиологическими методами культур к бактериям рода Salmonella и Listeria monocytogenes при контроле пищевых продуктов и состояния поверхностей предприятий по производству пищевых продуктов.

2.3. Предлагаемый метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах и на поверхности оборудования и инвентаря предусматривает определение наличия или отсутствия указанных микроорганизмов в определенной массе (объеме) продукта в соответствии с нормативами СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", выраженными в альтернативной форме и основанными на существующей системе отбора образцов и оценки результатов анализа по двухклассной системе, или в определенном объеме смыва с поверхности.

2.4. При исследовании пищевых продуктов и состояния оборудования и инвентаря предприятий по производству пищевых продуктов на наличие патогенных микроорганизмов Listeria monocytogenes методами классического микробиологического анализа, метод гетерогенной твердофазной ДНК-РНК гибридизации может применяться для идентификации культур листерий после этапа их выделения на селективных дифференциально-диагностических средах.

2.6. Методические указания рекомендованы для применения в лабораториях учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за производством, хранением и оборотом пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, при проведении гигиенической оценки и выдаче санитарно-эпидемиологических заключений, а также при проведении санитарно-эпидемиологических расследований заболеваний, имеющих пищевой путь передачи; в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения контроля безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья; в организациях, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль продовольственного сырья и пищевых продуктов в процессе промышленного производства и выпуска продукции.

2.7. Настоящие методические указания устанавливают также метод ускоренного выявления бактерий Listeria monocytogenes в молоке и молочных продуктах на основе твердофазного гетерогенного гибридизационного ДНК-РНК анализа с хемилюминесцентным детектированием. Метод может применяться в качестве дополнительного к классическим бактериологическим методам лабораторных исследований для целей выявления бактерий Listeria monocytogenes при контроле пищевых продуктов.

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

2.8. Метод ускоренного выявления бактерий Listeria monocytogenes в молоке и молочных продуктах предусматривает определение наличия или отсутствия указанных микроорганизмов в определенной массе (объеме) продукта в соответствии с нормативами СанПиН 2.3.2.1078-2001 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", выраженными в альтернативной форме и основанными на существующей системе отбора образцов и оценки результатов анализа по двухклассной системе.

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

3. Сущность метода

3.1. Метод гетерогенного твердофазного гибридизационного анализа нуклеиновых кислот основан на принципе гибридизации участка бактериального генома с закрепленным на твердофазном носителе (стенке пробирки) комплементарным к определяемой последовательности ДНК олигонуклеотидным зондом, меченым флюоресцентным красителем, и последующей детекции гибридов по степени их хемилюминесценции в приборе-люминометре.

3.2. Метод может выполняться в формате коммерчески доступных тест-систем (наборов), прошедших регистрацию в РФ в установленном порядке, после процедуры их стандартизации относительно официально утвержденных методов анализа.

3.3. Метод ускоренного выявления бактерий рода Salmonella предусматривает высев определенных количеств исследуемых образцов (пищевых продуктов или смывной жидкости) в специальные неселективные и селективные питательные среды, инкубирование посевов для накопления микроорганизмов, обработку культуральной жидкости лизирующим буфером для денатурации бактериальной рибосомальной РНК, гибридизацию фрагментов денатурированной рРНК с комплементарным ей меченым зондом, входящим в набор "Люмипроб-24 Salmonella", хемилюминесцентным детектированием продуктов реакции.

При обнаружении положительных результатов присутствие бактерий рода Salmonella должно подтверждаться в соответствии с ГОСТ 30519-97 "Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella".

3.4. Метод ускоренной идентификации культур, выделенных из пищевых продуктов и с поверхности оборудования и инвентаря пищевых производств по ГОСТ 30519-97 "Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella", ГОСТ Р 51921-2002 "Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes" или по МУК 4.2.1122-02 "Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах", и подозрительных на принадлежность к бактериям рода Salmonella и Listeria monocytogenes, предусматривает инкубирование культур для накопления микроорганизмов, обработку культуральной жидкости лизирующим буфером для денатурации бактериальной рибосомальной РНК, гибридизацию фрагментов денатурированной рРНК с комплементарным ей меченым зондом, входящим в состав наборов "Люмипроб-24 Salmonella" или "Люмипроб-24 Listeria monocytogenes", хемилюминесцентным детектированием продуктов реакции.

3.5. Мишенями в реакции ДНК-РНК гибридизации являются:

- для бактерий рода Salmonella - последовательность нуклеотидов в области ДНК, кодирующая продукцию рибосомальной РНК, строго специфичной для всех представителей рода Salmonella;

- для Listeria monocytogenes - последовательность ДНК, кодирующая продукцию токсического белка листериолизина-O - основного фактора патогенности возбудителя листериоза.

3.6. Метод выявления бактерий Listeria monocytogenes предусматривает высев определенных количеств исследуемых образцов молока и молочных продуктов в специальную селективную питательную среду, инкубирование посевов для накопления микроорганизмов, обработку культуральной жидкости лизирующим буфером, денатурацию бактериальной рибосомальной РНК, гибридизацию фрагментов денатурированной рРНК с комплементарным ей меченым зондом, входящим в набор "Люмипроб-24 Listeria monocytogenes", хемилюминесцентным детектированием продуктов реакции.

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

3.7. При обнаружении положительных результатов присутствие бактерий Listeria monocytogenes должно подтверждаться в соответствии с методами ГОСТ Р 51921-2002 "Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes" или МУК 4.2.1122-02 "Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах".

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

3.8. Мишенью в реакции ДНК-РНК гибридизации для Listeria monocytogenes является последовательность ДНК, кодирующая токсический белок листериолизин-О - основной фактор патогенности Listeria monocytogenes.

(Введен дополнительно, Доп. N 1).

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы и питательные среды

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН±0,01

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80 П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160±5)°С

________________
* Документ в информационных продуктах не содержится. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру (37±1)°С

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру (41,5±1,0)°С

Баня водяная с подогревом (37±1)°С

Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100°С

Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС

Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды

Гомогенизатор перистальтического типа "Микс-2", "Стомайкер" или других наименований, AES Lab., Cat. N AESAP 1066

Гомогенизатор типа "вортекс"

Штатив для 12-миллиметровых пробирок с держателем, "Europrobe", Cat. N Р08363086

Микропипетки на 200-1000 мкл, BIOHIT, Cat. N 720040 или "Ленпипет"

Мультистеппер, BIOHIT, Cat. N 730101

Диспенсер, BIOHIT, Cat. N 723046

Распределительная емкость - объем 1-2,5 л, BIOHIT

Люминометр для пробирок "Люмлайт" или "Люмлайт мини", "Europrobe", Cat. N EBLL01

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

1.1 . Настоящие методические указания устанавливают основные принципы организации контроля и методику проведения лабораторных исследований пищевых продуктов по выявлению в них бактерий Listeria monocytogenes .

Проведение контроля на Listeria monocytogenes позволит получить реальную картину ситуации в Российской Федерации, оценить степень загрязненности пищевой продукции и дать оценку эффективности принимаемых мер в целях обеспечения ее безопасности в плане новых и вновь возникающих возбудителей инфекций с пищевым путем передачи для здоровья и жизни человека.

1.2 . Методические указания предназначены для применения в лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации, осуществляющих контроль за качеством продовольственного сырья и пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, гигиеническую оценку и выдачу санитарно-эпидемиологических заключений, а также бактериологическую диагностику заболеваний с пищевым путем передачи; в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке на право проведения контроля безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья; в организациях, независимо от форм собственности, осуществляющих производственный контроль продовольственного сырья и пищевых продуктов в процессе промышленного производства и выпуска продукции.

1.3 . Методические указания являются обязательными при контроле пищевых продуктов в ходе проведения противоэпидемических мероприятий при возникновении вспышек, а также в порядке осуществления санитарно-эпидемиологического надзора.

1.4 . Организация проведения контроля пищевых продуктов на Listeria monocytogenes .

Лабораторный контроль за отсутствием Listeria monocytogenes в пищевых продуктах, где нормируется этот показатель, проводится:

· в порядке надзора за соблюдением установленных требований в области обеспечения качества и безопасности пищевых продуктов в ходе проверок изготовления и оборота пищевой продукции, оказания услуг в сфере торговли и общественного питания;

· при экспертизе продукции и подтверждении соответствия требованиям нормативных документов для целей гигиенической оценки и выдачи санитарно-эпидемиологических заключений;

· при контроле за безопасностью продукции изготовителем (производственный контроль);

· в ходе проведения противоэпидемических мероприятий и при эпидрасследовании заболеваний.

1.5 . При проведении контроля безопасности по показателю Listeria monocytogenes согласно Положению о государственной санитарно-эпидемиологической службе, утвержденному постановлением Правительства Российской Федерации от 24 июля 2000 г. № 554, должен осуществляться периодический отбор образцов пищевой продукции.

1.5.1 . Порядок контроля и кратность исследований должны устанавливаться в соответствии с методическими и инструктивными документами, утвержденными или согласованными в установленном порядке органами государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации, при этом необходимо учитывать специфику производства, степень его эпидзначимости, материально-техническое оснащение и т.п.

Особого внимания должны заслуживать предприятия, вырабатывающие продукты детского питания, детские молочные кухни, пищеблоки детских лечебно-профилактических учреждений, стационаров для онкологических, гематологических больных, домов ребенка, родильных домов, домов престарелых и инвалидов и т.п.

При проведении текущего надзора рекомендуемая минимальная периодичность выборочного лабораторного контроля пищевой продукции массового потребления - 1 раз в квартал; для детского и диетического питания - 2 раза.

1.5.2 . При производственном контроле организация и периодичность лабораторных исследований продукции по показателю Listeria monocytogenes должна устанавливаться изготовителем продукции в соответствии с действующими санитарными правилами и согласовываться с учреждениями государственной санитарно-эпидемиологической службы по месту расположения предприятия-изготовителя.

1.5.3 . Контроль пищевых продуктов по показателю Listeria monocytogenes с целью гигиенической оценки для выдачи санитарно-эпидемиологических заключений и подтверждения соответствия установленным требованиям при проведении экспертизы осуществляется в уполномоченных лабораториях центров Госсанэпиднадзора или других организаций, аккредитованных в установленном порядке.

1.6 . В пищевых продуктах, предназначенных для непосредственного употребления в пищу, в отношении которых отсутствуют микробиологические нормативы или данные о возможности выделения Listeria monocytogenes , контроль Listeria monocytogenes не проводится, однако в случае заболеваний людей и/или нарушений в области обеспечения качества и безопасности пищевых продуктов образцы таких продуктов должны быть направлены на лабораторное исследование.

1.7 . Организация лабораторных исследований на Listeria monocytogenes .

Допускается организация лабораторных исследований путем их поэтапного выполнения в лабораториях учреждений госсанэпидслужбы различных уровней. При отсутствии возможности идентификации выделенных культур последние могут быть переданы в лаборатории, располагающие соответствующей материально-технической базой и квалифицированным персоналом, для выдачи окончательного результата.

Методические указания содержат описание метода выявления бактерий Listeria monocytogenes , основанного на высеве определенного количества продукта в жидкие селективные среды, инкубировании посевов, выявлении в этих посевах бактерий, способных расти и образовывать типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах. Принадлежность выделенных культур к Listeria monocytogenes определяется по биохимическим, морфологическим и другим свойствам.

Метод выявления L . monocytogenes в пищевых продуктах основан на применении специальных селективных и дифференциально-диагностических сред. Селективность сред по отношению к сопутствующей микрофлоре обеспечивается включением в их состав хлорида лития, акрифлавина, циклогексимида, налидиксиновой кислоты, полимиксина или других антибиотиков. Внесение эскулина и цитрата аммония железа позволяет подтверждать наличие листерий по почернению среды за счет гидролиза эскулина в присутствии ионов Fe + . Подтверждающие тесты родовой и видовой идентификации включают окраску по Граму, определение подвижности выделенных на агаризованных средах типичных по физиологическим и морфологическим признакам культур, их способности восстанавливать нитраты до нитритов, сбраживать рамнозу, ксилозу и маннит, способности к гидролизу лецитина на ГРМ-среде с активированным углем, а также определение наличия В-гемолиза на кровяном агаре и дифференциацию L . monocytogenes от других гемолизирующих листерий в САМР-тесте с контрольными штаммами Stafphylocjccus aureus и Rhodococcus equi.

При необходимости для выявления L. monocytogenes в пищевых продуктах проводится постановка реакции нарастания титра фага (РНФ).

3.1. Аппаратура и инструментарий

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН ±0,01

Рефераты и конспекты лекций по географии, физике, химии, истории, биологии. Универсальная подготовка к ЕГЭ, ГИА, ЗНО и ДПА!

Микробиологическая диагностика листериоза

Листериоз - зоонозная инфекция с преимущественным поражением системы

мононуклеарных фагоцитов, что регистрируется в большинстве случаев с поражением нервной ткани или в виде ангинозно-септической формы.

Возбудитель Listeria monocytogenes относится к роду Listeria, семьи Corynebacteriacea.

В связи с тем, что заболевание протекает с большим разнообразием клинических проявлений, основное значение в диагностике имеют микробиологические методы.

Материалом для исследования: испражнения, моча, смыв из носоглотки, ликвор, околоплодные воды. Материал для исследования выбирают в первые 7-10 дней болезни. Значительная контагиозность возбудителей этой инфекции требует соблюдать осторожность при работе с материалом, который исследуется.

В диагностике листериоза используют микроскопический, бактериологический, биологический, серологический, аллергологический методы.

Микроскопический метод. Из материала, который исследуют, готовят мазки, окрашивают их по Граму и Романовскому. Обнаруживают грамположительные бактерии или коккобактерии размером 1-2 х 0,5 мкм, которые располагаются в виде римской пятерки или параллельно друг другу и не образуют спор. При температуре 20-25 ° С бактерии подвижны. При 37 ° С подвижность резко снижается. Микроскопический метод диагностики не является решающим.

Бактериологический метод. Материал для исследования высевают в чашки Петри с кровяным агаром и в пробирку с МПБ. Посевы помещают в термостат (t 30-37 ° С). Листерии являются факультативными анаэробами. Хорошо культивируются на обычных нейтральных или слабощелочных средах (МПА, МПБ), однако селективным средой является кровяной агар с трипафлавином.

Через 24-48 часов обнаруживают резко очерченные гладкие выпуклые бесцветные или нежно-голубые колонии (S-форма), которые могут быть окружены узкой зоной β-гемолиза. В процессе культивирования листерии могут образовывать R-форму колоний. Эти Колонии большие по размерам, шероховатые, с утолщенным зазубренным краем и менее прозрачные. В жидких средах в процессе роста вызывают равномерное помутнение, а затем выпадает скользкий осадок диспергируется.

Для выделения чистой культуры микробов отбирают подозрительные колонии с зоной β-гемолиза и пересевают в пробирки со скошенным МПА. Пробирки помещают в термостат при температуре 30-37 ° С на 24 часа. Полученную чистую культуру бактерий сеют в пестрый ряд Гисса для изучения биохимических свойств. Листерии ферментируют глюкозу, мальтозу, рамнозу, левулезы, салицин к кислоты без газа. Индол и сероводород не образуют. Нитраты и нитриты не восстанавливают.

Антигенные свойства листерий определяют в реакции агглютинации на стекле (ориентировочная реакция) и в пробирках со стандартной диагностической сывороткой (см. Приложение).

Биологический метод. Материал, который исследуют вводят подкожно белым мышам. Животные погибают в сроки от 3-го до 51 суток. Из органов павших животных делают мазки - отпечатки и посев на питательные среды. При выделении подозрительных колоний делают биологическую пробу на белых мышах, у которых вызывают иммуносупрессию посредством введения кортизона. Культуру вводят внутрь живота животного. На 2 - 6 сутки животные погибают. Возбудителя обнаруживают в тканях животных, погибших, путем посева на питательные среды.

Серологический метод. Основан на определении антител в сыворотке больного. Обычно используют РА, РПГА, РСК. Кровь для исследования берут дважды, начиная со второй недели болезни и в динамике наблюдают за нарастанием титров антител.

Для определения титра антител ставят развернутую, пробирочных РА (см. Приложение). Для этого в серии двукратно разведенных сывороток добавляют листериозный диагностикум. Реакция считается положительной при образовании аглютинату в разведении 1: 1400 и выше.

Наиболее чувствительной считается РПГА (см. Приложение). Используют сыворотку больного и листериозный эритроцитарный диагностикум. При положительной реакции происходит склеивание эритроцитов в виде зонтика в разведении 1: 400 и более. Учитывают РСК (см. Приложение) при которой диагностическим титром считается разведение 1: 5 и выше.

Аллергологический метод. Внутрикожная аллергическая проба становится положительной с 7-9 дня заболевания. Аллерген (кислотный гидролизат бактериальной массы листерий) вводят в объеме 0,1 мл внутрикожно и учитывают результат через 24-48 г. Пробу считают положительной при появлении гиперемии и отека, диаметром до 2 см.

федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору

В данном разделе размещаются актуальные версии нормативно-правовых актов (законы, приказы, указы, решения Верховного суда РФ и др.), представляющие интерес для специалистов в области ветеринарии и фитосанитарии.

Дополнительную информацию Вы можете получить, задав вопрос в разделе "Электронная приемная".

Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Листериоз

1. Раздел I. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Листериоз
   1. Часть 1. Область применения
   2. Часть 2. Нормативные ссылки
   3. Часть 3. Общие сведения о листериозе
   4. Часть 4. Профилактика листериоза у животных
   5. Часть 5. Оздоровление неблагополучных хозяйст
   6. Часть 6. Профилактика листериоза у людей

УТВЕРЖДАЮ Начальник Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации - Главный государственный ветеринарный инспектор Российской Федерации В.М.АВИЛОВ от 18 июня 1996 г. N 23

УТВЕРЖДАЮ Первый заместитель Председателя Госкомсанэпиднадзора России - Заместитель Главного государственного санитарного врача Российской Федерации С.В.СЕМЕНОВ от 31 мая 1996 г. N 11

Дата введения - с момента опубликования

1. Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии Госкомсанэпиднадзора РФ (Черкасский Б.Л., Ладный В.И., Минаева Н.З.);
2. Московским Городским Центром Санэпиднадзора (Маненкова Г.М.);
3. Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной вирусологии и микробиологии РАСХН (Бакулов И.А., Котляров В.М.).

2. Утверждены и введены в действие Заместителем Председателя Госкомсанэпиднадзора России от 31 мая 1996 г. N 11 и начальником Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России от 18 июня 1996 г. N 23.

3. Взамен инструкции "О мероприятиях по профилактике и борьбе с листериозом животных" от 13.02.1987 г.

Санитарные правила обязательны для соблюдения всеми государственными органами и общественными объединениями, предприятиями и иными хозяйствующими субъектами, организациями и учреждениями, независимо от их подчиненности и форм собственности, должностными лицами и гражданами" (статья 3).

"Санитарным правонарушением признается посягающее на права граждан и интересы общества противоправное, виновное (умышленное или неосторожное) деяние (действие или бездействие), связанное с несоблюдением санитарного законодательства РСФСР, в том числе действующих санитарных правил.

Должностные лица и граждане РСФСР, допустившие санитарное правонарушение, могут быть привлечены к дисциплинарной, административной и уголовной ответственности" (статья 27).

"Ветеринарное законодательство Российской Федерации регулирует отношения в области ветеринарии в целях защиты животных от болезней, выпуска безопасных в ветеринарном отношении продуктов животноводства и защиты населения от болезней, общих для человека и животных" (статья 2).

"Должностные лица и граждане, виновные в нарушении ветеринарного законодательства Российской Федерации, несут дисциплинарную, административную, уголовную и иную ответственность в соответствии с настоящим Законом и другими актами законодательства Российской федерации" (статья 23).

1.1. Настоящие Правила обязательны для выполнения на всей территории Российской Федерации государственными органами, предприятиями и иными хозяйственными субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их принадлежности и форм собственности, должностными лицами и гражданами в области профилактики и борьбы с кампилобактериозом человека и животных.

2.1. Закон РСФСР "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2.2. Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан.

2.3. Закон Российской Федерации "О ветеринарии".

2.4. Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования Российской Федерации.

2.5. Санитарно-эпидемиологические и ветеринарные правила по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных.

2.6. Методические рекомендации: "Лабораторная диагностика листериоза животных и людей" (Москва, 1987).

2.7. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов (Москва, 1988).

2.8. Ветеринарно-санитарные правила внутрихозяйственного убоя скота на мясо.

2.9. Инструкция по проведению ветеринарной дезинфекции объектов животноводства (Москва, 1988).

2.10. Инструкция по технологическому консервированию и дезинфекции при неспорообразующих инфекциях и дерматомикозах кожевенного сырья композиционными составами на основе солей органических кислот (Москва, 1994).

2.11. Санитарные правила для предприятий торговли (Москва, 1986).

2.12. Санитарные правила для предприятий общественного питания (Москва, 1977).

2.13. О совершенствовании системы медицинских осмотров трудящихся и водителей индивидуальных транспортных средств (Приказ N 555 от 29.09.89 г., Минздрав, Москва).

3.1. Листериоз - инфекционная болезнь человека и животных.

3.2. Возбудитель листериоза - Listeria monocytogenes - подвижная, полиморфная, грамположительная мелкая палочка (длиной 0,5-2,0 нм; шириной 0,3-0,5 нм) с закругленными концами.

3.3. Листерии обладают сравнительно высокой устойчивостью, широко распространены во внешней среде, при низких температурах (+4 - +6 град. С) длительное время (до нескольких лет) сохраняются в почве, воде, соломе, зерне. Размножаются в почве, воде, молоке, мясе, силосе. а также в органах трупов.

3.4. Основным резервуаром возбудителя в природе являются многие виды диких и синантропных грызунов. Листерии обнаружены у лисиц, норок, енотов, песцов, диких копытных, птиц. Листериоз поражает домашних и сельскохозяйственных животных (свиней, мелкий и крупный рогатый скот, лошадей, кроликов, реже кошек и собак), а также домашнюю и декоративную птицу (гусей, кур, уток, индюшек, голубей, попугаев и канареек). Листерии обнаружены также в рыбе и продуктах моря (креветки).

3.5. При листериозе имеет место многообразие механизмов передачи возбудителя инфекции (фекально-оральный, контактный, аспирационный, трансплацентарный). Основным из которых является фекально-оральный.

4.1. Необходимо комплектовать фермы животными из благополучных по листериозу хозяйств.

4.2. Не допускать ввода вновь поступивших животных в общее стадо без предварительного карантинирования их в течение 30 дней.

4.3. Во время карантина при формировании новых групп в животноводческих комплексах необходимо проводить клиническое обследование животных и при необходимости (при выявлении признаков поражения нервной системы, абортов, повышенной температуры тела) - бактериологические и серологические исследования на листериоз.

4.4. Систематически проводить уничтожение грызунов, кровососущих насекомых и клещей.

4.5. Для профилактики инфицирования кормов периодически проводить отлов грызунов в животноводческих помещениях, на прилегающей территории и в хранилищах кормов.

4.6. Постоянно контролировать качество кормов, особенно силоса и комбикорма, а при наличии показаний подвергать их бактериологическому исследованию.

4.7, Вести строгий учет случаев абортов, мертворождения и падежа животных и направлять патологический материал на исследование в ветлабораторию.

4.8. При маститах проводить бактериологическое исследование молока.

4.9. Забор и направление материалов на бактериологическое обследование проводится в соответствии с инструктивно-методическими документами Минсельхозпрода РФ.

5.1. При выявлении в хозяйстве (в животноводческом комплексе, на ферме, в отделении, стаде, свинарнике, индивидуальном дворе и т.д.) больных листериозом животных ветеринарный специалист, обслуживающий хозяйство, немедленно сообщает об этом руководителю хозяйства, Главному государственному ветеринарному инспектору района и в территориальный Центр госсанэпиднадзора. Одновременно проводит тщательное эпизоотологическое обследование в соответствии с инструктивно-методическими документами Минсельхозпрода РФ.

5.2. Хозяйство (отдельные корпуса животноводческих комплексов, фермы, отделения, свинарники, птичники, индивидуальные дворы и т.д.), объявляют неблагополучным по листериозу, если в нем выявлено заболевание животного листериозом на основании комплекса эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований.

5.3. В хозяйствах, неблагополучных по листериозу, вводят ограничения, на основании которых запрещается:

1. вывод из хозяйства животных, за исключением вывоза животных для убоя;
2. вывоз мяса от вынужденно убитых больных листериозом животных в сыром виде, за исключением его вывоза для переработки на мясокомбинаты. Мясо от таких животных в хозяйствах и на мясокомбинатах подвергают ветеринарно-санитарной оценке согласно "Правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов";
3. вывоз кормов, имевших контакт с больными животными или подозрительных на инфицирование листериями.

5.4. В хозяйствах (животноводческих комплексах, фермах, отделениях, стадах), неблагополучных по листериозу, проводят поголовный клинический осмотр животных и отбраковку животных согласно инструктивно-методическим документам Минсельхозпрода РФ, для выявления животных листерионосителей и бессимптомно больных проводят серологические исследования проб крови. Животных с положительной реакцией изолируют и подвергают лечению антибиотиками или направляют на убой.

5.5. В неблагополучных хозяйствах в период ограничений молоко, полученное от животных, давших положительный результат в серологической реакции, кипятят в течение 15 мин или перерабатывают на топленое масло.

5.6. В неблагополучных по листериозу стадах животных осеменяют искусственно спермой от здоровых производителей, которых предварительно обследуют серологически на листериоз.

5.7. Дезинфекцию, дезинсекцию и дератизацию на животноводческих фермах, неблагополучных по листериозу, а также обеззараживание навоза проводят согласно действующей "Инструкции по проведению ветеринарной дезинфекции объектов животноводства".

5.8. Скирды, стога сена, соломы, силос, комбикорма, находящиеся в неблагополучных по листериозу хозяйствах, тщательно проверяют на заселение грызунами, при обнаружении последних проводят дератизацию. Комбикорма, сено и солому из скирд и стогов, заселенных большим количеством грызунов, подвергают термической обработке при 100 град. С в течение 30 мин. Пробы силоса для выявления обсеменения его листериями направляют на бактериологическое исследование.

5.9. В случаях контаминации силосной массы, хранящейся в траншеях или в буртах, возбудителем листериоза вся испорченная силосная масса подлежит обеззараживанию биотермическим способом в порядке, предусмотренном "Инструкцией по проведению ветеринарной дезинфекции объектов животноводства".

5.10. Полученное от больных листериозом животных кожевенно-меховое сырье обеззараживают согласно действующей "Инструкции по технологическому консервированию и дезинфекции при неспорообразующих инфекциях и дерматомикозах кожевенного сырья композиционными составами на основе солей органических кислот".

5.11. Хозяйство (животноводческий комплекс, ферму, отделение, двор) объявляют благополучным по листериозу через два месяца после последнего случая выделения клинически больных животных и проведения заключительной дезинфекции помещений и территории фермы.

5.12. Вывод овец для племенных и пользовательных целей в течение двух лет после оздоровления хозяйства (животноводческого комплекса, фермы, отделения) от листериоза допускается при условии получения отрицательных серологических (РСК) результатов исследования сыворотки крови выводимых животных на листериоз. Вывод других видов животных допускается при тех же условиях в течение 1 года.

Разрешается без ограничений вывоз животных на мясокомбинат для убоя.

5.13. В хозяйствах, ранее неблагополучных по листериозу, необходимо проводить серологические обследования животных 1 раз в год перед постановкой на стойловое содержание до исчезновения положительных реакций. Положительно реагирующих животных изолируют, подвергают лечению или направляют на убой. При вывозе животных в ветеринарном свидетельстве указывают результаты исследования их на листериоз.

6.1. При подозрении на листериоз медицинский работник должен обеспечить лабораторное подтверждение диагноза.

6.2. Отбор материала на бактериологическое исследование и самоисследование проводится в соответствии с инструктивно-методическими документами Госкомсанэпиднадзора РФ и Минздравмедпрома РФ.

6.3. Госпитализация больных листериозом, а в отдельных случаях и листерионосителей проводится по клиническим и эпидемиологическим показаниям.

6.4. Все переболевшие листериозом подлежат диспансерному наблюдению, которое осуществляется в соответствии с инструктивно-методическими документами Минздравмедпрома РФ.

6.5. Предварительные и периодические медицинские осмотры проводятся на территориях, эпизоотически неблагополучных по листериозу.

6.6. Решение о проведении осмотров выносится территориальными органами госсанэпиднадзора и минздравмедпрома.