Listeria escherichia coli salmonella
Если вы собираетесь работать с продуктами, для получения медицинской книжки вам нужно провериться на кишечные инфекции. В кале в этом случае ищут возбудителей заболеваний из так называемой дизгруппы: шигеллу, сальмонеллу и патогенные кишечные палочки.
Дизентерия (шигеллёз)
Бактерия под названием шигелла вызывает дизентерию (шигеллёз). Заразиться можно через еду, например, сырые овощи. Основные симптомы этого заболевания в остром периоде:
- диарея (понос) с кровью или слизью,
- спазмы в животе,
- тошнота или рвота,
- температура выше 38˚C.
Шигеллёз проходит сам — нужно только пить побольше и желательно растворы для пероральной регидратации, которые продаются в любой аптеке. Для снятия боли и снижения температуры можно принимать парацетамол. Противодиарейные препараты вроде лоперамида могут ухудшить ситуацию. Только в редких тяжёлых случаях назначаются антибиотики.
Заражение шигеллой происходит фекально-оральным путём. И если человек не помыл руки после туалета и прикоснулся к продуктам, потребитель этих продуктов также заражается кишечной инфекцией.
Может ли человек оставаться заразным вне острого периода? После последнего эпизода диареи врачи советуют не выходить на работу ещё 48 часов, так как риск передачи инфекции в это время велик. В некоторых случаях бактерии могут жить в организме ещё 3–4 недели после выздоровления.
Сальмонеллёз
Сальмонелла может вызывать как брюшной тиф, так и сальмонеллёз. Правда, причиной этих двух заболеваний становятся разные серотипы бактерии. Симптомы сальмонеллёза мало отличаются от признаков других кишечных инфекций:
Жар обычно проходит через 48–72 часа, а диарея — через 4–10 дней.
Заразиться можно при употреблении куриного мяса, яиц и молока и при контакте с рептилиями, например, черепахами. Лечения инфекции как такового нет, кроме постоянного замещения жидкости. Если пациенты до 50 лет принимают антибиотики, то это, во-первых, не ускоряет выздоровление, а во-вторых, может повысить риск бессимптомного носительства сальмонеллы. Но чаще после острого периода заразными остаются пожилые люди и те, у кого есть проблемы с желчевыводящими путями или, например, камни в желчном пузыре.
Обычно бактерии находятся в организме не больше 4–5 недель после выздоровления, но у некоторых людей сальмонеллы могут жить годы. В таком случае достаточно плохо помыть руки после туалета и начать готовить какое-то блюдо, чтобы еда стала опасной.
Инфекции, вызванные кишечной палочкой
Кишечная палочка (E. coli) в норме живёт в желудочно-кишечном тракте. Но существуют разные её штаммы и те, которые вызывают заболевания, называются патогенными. Зачастую именно патогенная кишечная палочка становится причиной бактериальной диареи. Самый распространённый из этих штаммов — EHEC O157, его можно легко обнаружить с помощью анализов, которые проводятся практически в любой лаборатории.
Набор симптомов при заражении патогенной кишечной палочкой довольно типичный:
- спазмы в желудке,
- диарея (часто с кровью),
- рвота,
- если есть жар, то меньше 38,5˚C.
Через 5–7 дней пациенту становится лучше. Противодиарейные препараты применять не рекомендуется, так как они увеличивают риск осложнений, то же делают антибиотики, поэтому обычно используются лишь растворы для пероральной дегидратации.
Кроме как через мясо, кишечная палочка проникает в организм фекально-оральным путём. Поэтому люди, прикасающиеся на работе к еде, которую потом кто-то другой будет есть, должны подтвердить, что у них нет патогенных штаммов кишечной палочки. Даже если у вас нет диареи с кровью, это не значит, что вы не носитель патогенного штамма E. coli. Если перечисленные симптомы у вас были, то несколько недель, а то и месяцев после выздоровления вы можете быть заразны.
Чтобы провериться на кишечные инфекции, приезжайте к нам на сдачу анализов или на приём к терапевту. Узнайте больше по телефону: +7 (495) 308-39-92.
| К.п | сал | |
| Рост на среде Сименса | - | + |
| Сбр лактозы | + | - |
| Образ индола | + | - |
| Образ H2S | +/- | + |
| Сверт молока | + | - |
| Редукция синьки в молоке | + | - |
| Р-я Фогес-Проскауэра | - | + |
| Р-я с Коли-сыворотками | + | - |
Казеозный лимфаденит (псевдотуберкулез овец) –
C. pseudotuberculosis. Кнойно-воспалительные поражения лимфоузлов, внутр органов, ЦНС, гибель от асфиксии, кахексии и сердечной недостаточности.
В лабораторию – свежие невскрывшиеся инкапсулированные очаги, пораженные лимфоузлы.
Гр +, сп -, кп -, двж -.
МПБ – помутнение, потом осадок и осветление
МПА – круглые выпуклые серо-желтые маслянистые колонии с ровными краями.
Среды с теллуром – черные колонии.
Биохим – гюкозу, галактозу, манит, глицерин, мальтозу до к-ты, не ферм. лактозу, сахарозу; не образует индол, выделяет аммиак, инода сероводород.
Биопроба – самцам свинок по1-2 мл внутримышечно, гибель через 5-20 суток с образованием орхитов и периорхитов
| vbhghghjhj |
Пастереллез- Pasteurella multocida
Инфекционная болезнь многих видов животных и птиц. Острое – септицемия, подострое и хроническое – поражение легких. В лабораторию посылается селезенка, печень, почка, кровь сердца, лимфатические узлы, пораженные участки легких и регионарные лимфоузл ы.
Гр -, сп -, кп +/-, двж +.
Короткие палочковидные бактерии, с закругленными концами, вплоть до коккобактерий. Располагаются единично, попарно, короткими цепочками. Три типа – D, M и G.
МПА и МПБ(сама вспоминай!)
Биохим – сахарозу, сарбит, манит до к-ты; молоко не сверт, лактозу и дульфит не ферментирует.
Бруцеллез - B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.ovis, B.neotomae, B.canis.
Бруцеллез у стельных проявляется абортами, задержкой последа, эндометритами, эпидидимидами, орхитами, воспалениями суставов, но чаще бессимптомно. В лабораторию плод, желудок плода, кусочки плаценты, молоко, кровь, паренх.органы, пробы воды и подстилки. Правила асептики и антисептики!
Гр -, сп -, кп –(только у мукоидных и слиз.), двж—.
Палочковидной коккоподобной формы бактерии, по Козловскому или Шуляку окрашиваются красно, остальные – сине.
ГПГБ –помутнение, пристеноч кольцо, небольш осадок
Эритрит агар –мелкие голубоватые прозрачные колони с ровными краями R,S, потом сливаются в серый налет.
Картофеьная среда – колонии кричневого цвета.
Биохим – слабо выражены, желатину не разжижают, индол не образуют, молоко не сверт.
Биопроба – свинкам подкожно 1-2мл,45 дней наблюдают, каждые 8-10 дней кровь на анализ РА.
Серолог – с кровью РСК, РА, РН, РДСК, с молоком-КР (синее кольцо), с культурой – пластинчатая или капельная РП
Виды бруцелл и их дифф-ия
| Потребность в СО2 | Образование Н2О | Рост в среде с фуксином | Рост в среде с тионином | Агглютинация моноспецифич | Лизис фагом Тб | ||
| А | М | ||||||
| B.melitensis | - | - | + | - | - | + | - |
| B.abortus | + | + | + | - | + | - | + |
| B.suis | - | + | - | + | + | - | - |
| B.ovis | + | - | + | + | - | - | - |
| B.neotomae | - | + | - | - | + | - | - |
| B.canis | - | - | - | + | - | - | - |
Серологическая диагностика бруцеллеза (РБП). Росбенгал проба.
Сначала ставим контроль антигена с негативной и позативной сыворотками и контроль на спонтанную агглютинацию. Затем исследуемые сыворотки вносят по 0,3мл на дно лунки, арядом по 0,03мл анигена. Антиген тщательно смешивают с кажной каплей сыворотки, пластинку покачивают 5 мин.
Сап лошадей – Pseudomonas mallei
Сапные узелки, разрушаясь, образуют язвы в паренхиматозных органах. В лаораторию отправляют пораж органы, лимфоузлы, язвенные очаги.
Гр -, сп -, кп -, двж-.
Палочка, прямая или слегка изогнутая, зернистая.
Аэро, t 37 – оптимум.
МПА с глицерином – слизистый серо-белый вязкий налет, со временем коричневеет.
МПБ с глицерином – помутнение, пристеночное кольцо, пленка, осадок.
Глицериновый картофель – слизистый медообразный налет, темеющий со временем.
Биохим – глюкзу и лактозу без газа, разжижает желатину.
Биопроба – хомячкам или свинке 1-5мл подкожно в области шеи – абсцессы, гибель через 1-2 недели
Серологич – РСК, конъюктивальная проба, пдкожная проба.
Вибриоз (кампилобактериоза)
Campilobacter fetus generalis
Вызывает уретриты, вагиниты, эндометриты, острые воспаления ЖКТ, аборты. В лабораторию слизи с половых органов, паренх органы, аборт-плоды, половые органы.
Гр -, сп -, кп -, двж+.
Это полиморфные м-о, в форме запятой,чайки, S и V
МППА – серовато-голубые колонии.
Среда Кита-Тароци без вазелина
Биохим – образует сероводород, нетгемолиза и сверт молока.
Биопроба на беременных свинках и небер мышах – внутрибрюшинно и внутривлагалищно, через 10 дней аборты и воспаления моче-половой системы.
Лептоспироз - Leptospira interrogans(пат), L. biflexa(не пат).
Природно-очаговое заболевание животных и человека, характеризуется кратковременной лихорадкой, желтухой, геморрагией, гемоглоби-нурией и абортами. В лабораторию кровь в период лихорадки, моча, абортированный плод целиком или желудок с содержимым, мочевой пузырь, паренх. органы. От трупов – сердце, кусочки паренх. о-в, почку, транссудат, перикардиальную жидкость, мочевой пузырь с содержимым, спинномозговую жидкость, пробы воды и подстилку.
Гр -, сп -, кп -, двж+.
Спиралевидные тонкие серебристые нити, 1 или 2 конца которых в виде крючков.
Факультативные анаэробы, пит среды Мобошенко, Терских, Умшнута –рост внешне не заметен
Биопроба – на 20дневных хомячках(подкож 0,5мл), 10-20дневных крольчатах(2-3мл подкожно), через 4-5 и 14-16 дней соответстенноих убивают иделают из их органов посевы.
Серологич – РА, РМА, РСК.
Патогенные микоплазмы, морфология, культивирование, патогенность
Микоплазмы – мельчайшие свободноживущие прокариоты без ригидной клеточной стенки.
Морфолоия – полиморфы, форма зависит от среды,Гр-, не имеют типичных мезосом.
Патогенность – экзотоксины нейрогенного действия (индюшки – поражение ЦНС), эндотоксины галактин и глюкан. М-о могут поражать отдельные органы и целые системы, вызывая специфические заболевания.
Контагиозная перипневмония крс – M.Micoides subsp.micoides Проявляется некротическими и инкапсулированными очагами в легочной ткани, серозно-фибринозным плевритом. В лабораторию кровь и части пораженных органов.
Полиморфная клетка: кокк, диплококк, кольца и т.д.
Возбудитель проходит сквозь бакт-фильтры.
Культивация на мартеновском бульоне с 10% сыворотки и мартеновском агаре. На бульоне – опалесценция, муаровые волны. На агаре – колонии в форме яичницы-глазуньи, на кров агаре – зона α- гемолиза. Ферментирует глюкозу, мальтозу, манозу, крахмал, образует сероводород.
Серологич – РСК, РИД в геле, имунно-флюарисценция, кожная аллергическая проба.
Инфекционная агалактия мрс
контагиозное заболевание, хар-ся прекращением секреция молока. поражением молочной железы, суставов глаз. У беременных жив-ых наступают аборты. Возб-ть проходит ч/з бактер. фильтры. В мазках из бульонных культур-шаровид, овальные, дисковидные, кольце видные струк-ры. Микоплазмы красятся по Роман-Гимзе, азурэозином, импреги-нируются серебром, Г-.Испол-ют спец-ые среды с сыв-ой крови лош., крс. Среда Эдварда или среду, приготовленую на основе мартеновского бульона.На жид-их пит. ср рост со слабой опалесценцией.На тв пит.ср-округлые колонии с мелкозернистой поверх-тью.В полужид-кой пит. ср-интенсивное нежное помутнение.Не сбраживает глюкозу,не редуцирует метиленовую синь, не обр-ет индола и сероводорода. Обладает гемолитической активностью. Возб-ль разв-ся в куриных эмбрионах. Иммунитет у пере-болевших живых стойкий, нестерильный. Мат. для иссл-я служит молоко,веделения из пораженного глаза, жид-ть из суставов и отеков, парехимат. орг., кровь,л-узлы. Биопроба на лактирующих козах и козлятах. В кач-ве заражаю-щего материала испод-ют молоко,жид-ть из суста-вов,суспензию внутрен органов. Заражают подкожно или в молочную цистерну.Серологич.м-д: РСК, РА, им-диф-я в геле
Последнее изменение этой страницы: 2016-06-23; Нарушение авторского права страницы
Информация об исследовании
ПЦР (полимеразно- цепная реакция) - это метод, который позволяет найти в клиническом исследуемом материале небольшой участок генетической информации (ДНК) любого организма среди огромного количества других участков и многократно размножить его.
Биологический материал: кал.
Правила подготовки: кал следует сдавать до начала приема антибиотиков и химиотерапевтических препаратов (если это невозможно, то не ранее чем через 12 часов после отмены препарата).
Энтероинвазивные E.coli.
Кишечная палочка(E.coli) - возбудитель эшерихиозов, основная аэробная часть микрофлоры кишечника. Это граммотрицательные палочковые бактерии, принадлежащие к семейству Enterobacteriaceae. E.coli является обычным обитателем кишечника многих млекопитающих и приматов, к числу котрых принадлежит человек. Поэтому её называют кишечной палочкой. В организме человека кишечная палочка выполняет полезную роль, подавляя рост вредных бактерий и синтезируя некоторые витамины. Однако существуют разновидности бактерий E.coli способных вызывать у человека острые кишечные заболевания. В настоящее время выделяют более 150 типов патогенных (энтеровирулентных) палочек E.coli, объеденённых в 4 класса:
-Энтеропатогенные (ЭПЭК)
-Энтеротоксигенные (ЭТЭК)
-Энтероинвазивные (ЭНЭК)
-Энтерогемморагические (ЭГЭГ)
Энтероинвазивные кишечные палочки - возбудители поражений весьма напоминающих бактериальную дизентерию.Патогенез тоже носит черты явного сходства: подобно шигеллам энтероинвазивные кишечные палочки проникают и размножаются в клетках эпителия кишечника. Как и шигеллы они неподвижны и не способны ферментировать лактозу.
Поражения характеризуются выраженными болями в животе и профузной водянистой диареей с примесью крови. На инвазивность указывает большое количество полиморфных ядерных лейкоцитов в испражнениях. Путь передачи: фекально-оральный.
Источник инфекции:
-Больной человек и животные
-Бактериносители
-Фекально-загрязнённые продукты питания и вода
Одним из подтверждающих методов диагностики эшерихиоза является ПЦР.
Биологический материал: кал.
Правила подготовки: кал сдается до начала приема антибиотиков и химиотерапевтических препаратов (если это невозможно, то не ранее чем через 12 часов после отмены препарата).
Сальмонелла (Salmonella spp.)
Сальманеллёзы - острые кишечные инфекции животных и человека, вызываемые сальмонеллами. Salmonella spp - это подвижные, грамотрицательные палочки, принадлежащие к роду Salmonella, семейства Enterobacteriacea (энтеробактерии).
Источник инфекции:
-Больные животные
-Больной человек
-Бактериносители
Путь передачи: алиментарный - через инфицированные пищевые продукты, как правило животного происхождения (мясо, мясные продукты, молоко, яйца, особенно утиные и гусиные, студень), при вынужденном неправильном убое животных, нарушений правил хранения и приготовления продуктов (соприкосновение готовой и сырой продукции, недостаточная термическая обработка продуктов перед употреблением и т.д.).
Клиническая картина.
Инкубационный период колеблется от 2-6 часов до 2-3 суток. Клинические проявления сальмонеллезов от бессимптомного носительства возбудителя инфекции до тяжелых септических форм.
Правила подготовки: кал следует сдавать до начала приема антибиотиков (если это невозможно, то не ранее чем через 12 часов после отмены препарата).
Кампилобактерии (Campylobacter spp.)
Кампилобактериоз - это острое инфекционное зоонозное заболевание, характеризующееся синдромом общей интоксикации, поражением желудочно-кишечного тракта и возможностью генерализации патологического процесса.
Кампилобактерии (Campylobacter spp.) представители семейства Campylobacteriaceae - мелкие необразующие спор грамотрицательные палочки.
В настоящее время в состав семейства Campylobacteriaceae входит три рода: Campylobacter, Helicobacter, Arcobacter.
Эпидемиология.
Клиническая картина.
Инккубационный перид: 1-10 дней (чаще 2-5 дней).
By Maria Teresa Mascellino
chapter and author info
- Sapienza University of Rome, Italy
*Address all correspondence to: [email protected]
Edited by Mitra Ranjbar, Marzieh Nojomi and Maria T. Mascellino
1. Introduction
The present book deals with the following microorganisms: E. coli, Salmonella, and Listeria. The first two are Gram-negative bacteria belonging to the group of Enterobacteriaceae with the characteristic of becoming resistant to the most common antibiotics; whereas, the last one is a Gram-positive bacterium belonging to Corynebacterium, Erysipelothrix, and other Gram-positive microorganisms showing an involvement in pathologies as newborn meningitis and gynecological infection which may interfere with the pregnancy outcome. The peculiarity of all these bacteria is that they can be transmitted by contaminated food.
2. E. coli
Class: Gamma Proteobacteria
The bacteria, in fact, can be found in the gastrointestinal tract (GI) of humans and animals, but they are mainly considered as ubiquitous microorganisms.
This bacterium includes a single species (E. coli) and is divided into 171 serotypes, aerobic-anaerobic Gram-negative rods with flagella fimbriae, and able to ferment glucose and lactose.
The most important serotype is Escherichia coli O157:H7 or enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC), which often leads to enterohemorrhagic diarrhea and is also able to induce hemolytic uremic syndrome (HUS) which is characterized by acute renal failure, hemolytic anemia, and thrombocytopenia that are more common in children and in elderly people [1].
Serotype O157-H7 causes numerous outbreaks and sporadic cases of bloody diarrhea. Foodborne pathogenic E. coli contamination, such as that with E. coli O157 and O104, is very common even in developed countries. Bacterial contamination may occur from environmental, animal, or human sources and cause foodborne illness [2].
The three main diseases, depending on each particular serotype involved, are urinary tract infections, intestinal diseases, and neonatal meningitis [3].
Many different mechanisms of action are reported regarding the virulence of E. coli. Although most strains are saprophytic colonizing the large bowel, some types of them are involved in different pathologies such as traveler’s and childhood diarrhea (ETEC and EPEC also in Mexico and North Africa EAEC), hemorrhagic colitis (EHEH), and a Shiga-like disease (EIEC). As far as this last point is concerned, it is reported that the differentiation between Shigella and E. coli is quite more complicated when we consider enteroinvasive E. coli (EIEC). In fact, EIEC are strains that are similar to E. coli but are able to cause dysentery using the same method of invasion as Shigella. In fact, in this specific situation, EIEC is more related to Shigella than to non-invasive E. coli [4]. This strain is among the most common cause of foodborne diseases other than of neurological and renal complications, especially in children.
Escherichia coli K1 strains are major causative agents of invasive disease of newborn infants. Colonization of the small intestine following oral administration of K1 bacteria leads rapidly to blood stream infections (BSI). Indeed, these microorganisms are the cause of life-threatening infections that are acquired from the mother at birth thus colonizing the small intestine, from where they invade the blood and central nervous system.
E. coli is increasingly present as a MDR (multi-drug resistant) bacterium, in fact its genomic outfit has acquired various antibiotic resistances through the production of ESBL [5] and carbapenemases as well as metallo-beta lactamases (NDM = New Delhi metallo-beta lactamases) making the infections of this bacterium extremely worrying [6] (Figures 1 and 2).
3. Listeria monocytogenes
Listeria monocytogenes is a Gram-positive, mobile, rod-shaped bacterium that is ubiquitous in the environment. It can be isolated in soil and wood and decays in the natural environment; however, the principal acquisition of Listeria is through the ingestion of contaminated food products. Listeria is a foodborne pathogen that contaminates food-processing environments and persists within biofilms in the surroundings. The peculiar characteristic of this microorganism is its ability to grow even in extreme situations, such as under high salt conditions and refrigeration temperatures, maintaining its vitality in various food products [7]. Even though the incidence of listeriosis is lower than other enteric illnesses, infections caused by L. monocytogenes are more serious and may lead to hospitalizations and fatalities. These infections mainly affect women and children who acquire the disease through vertical transmission from mother to infant during pregnancy or childbirth. Nosocomial infections between children are rare but anyhow they were reported. The most important disease for the newborns is the neonatal meningitis, which shows a high degree of mortality (higher in the developing countries which can reach 40–58% of cases). Listeriosis requires rapid treatment with antibiotics and most drugs suitable for Gram-positive bacteria are effective against L. monocytogenes. Generally, the Listeria clinical strains are susceptible to the common antibiotics because only a minority results as being resistant to antimicrobial agents. In the same way, several strains detected from food exhibited resistance to antimicrobials not suitable against listeriosis [8]. Pregnant women can carry Listeria asymptomatically in their gastrointestinal tract or vagina and the risk of transmitting this infection to their babies is high. The consequence of listeriosis to human health is a very important issue due to its virulence mainly in children with an underlying immunodeficiency. Symptoms include fever, headache, abdominal pain, diarrhea, vomiting, and convulsions. The complications can be appendicitis and Meckel’s diverticulitis [9].
Listeria which is saprophyte in the environments such as water, soil, and food, once internalizes into the mammalian host, shows its virulence through the expression of many gene products reported in Figure 3 [10].
Phagocytosis of Listeria. Legenda: (internalins InlA and InlB), phagosome lysis (listeriolysin O (LLO)), phosphatidylinositol-specific phospholipase C (PI-PLC) and phosphatidylcholine ((PC)-PLC), cell-to-cell spread (actin assembly-inducing protein (ActA)), intracellular growth (hexose-6-phosphate transporter (Hpt)) [10].
4. Salmonella
Salmonella is the most commonly isolated bacterial agent of foodborne and epidemic infections. It was reported for the first time in 1886, in a case of swine fever by the American doctor Daniel Elmer Salmon.
The genus Salmonella is characterized by Gram-negative facultative anaerobic bacilli without spores. They are mobile through peritrichous flagella with the exception of S. gallinarum and S. pullorum. The serotypes are diversified according to the somatic antigen “O,” the flagellar antigen “H” and the surface antigen “Vi.” The Vi antigen is exclusively expressed by S. typhi and is able to circumvent the innate immune response by repressing flagellin and LPS expression [11]. The “O” antigens are distinguished in the serogroups A, B, C1, C2, D, and E.
Salmonella is present in the environment and can be either commensal or pathogen for men and various animals; some serotypes are exclusively pathogen for humans (i.e., S. typhi and S. paratyphi A and C), others infect both humans and animals such as S. typhimurium [12].
In humans, there are two kind of infectious diseases:
typhoid and paratyphoid fever [13]
Salmonella infection is transmitted through fecal route by the ingestion of contaminated food and drink. Salmonella typhi is responsible for typhoid fever, and its transmission can occur, especially in developing countries, by water and food infected or with direct contact among people, especially in poor hygienic conditions. The minimum infectious dose can be less than 15–20 cells. Individual sensitivity depends on the patients’ age and on the nature of Salmonella strains.
In most cases, Salmonella infection occurs in mild form and resolves on its own within a few days. In these situations, the advice is not to consider the diarrheal phenomenon, since it is the natural defense mechanism used by the organism to expel germs. Normally, for Salmonella, it should be enough to adopt a supportive therapy: administration of oral rehydration solutions (which are used to compensate for water and salts lost with vomiting and diarrhea), lactic ferments, and probiotics.
Although salmonellosis is a bacterial infection, the use of antibiotics is not recommended as it could lengthen the persistence time of Salmonella in feces or induce antimicrobials resistance [15]. Hospitalization and the use of antibiotics are indicated only in severe cases (with extra-intestinal symptoms), in infants under 3 months and in subjects with chronic-degenerative diseases.
In recent times, Salmonella has changed its characteristics worldwide, becoming the etiologic agent of many peculiar pathological processes such as cancer development, inflammatory process, and immune-pathogenesis [16, 17] (Figure 4).
Salmonella infection pathogenesis. The ingestion of contaminated food or water begins the infective processes (gastroenteritis or systemic infection) depending on the species of Salmonella involved (minor and major Salmonellae). The microorganisms reach the intestinal epithelial cells and migrate to the lamina propria invading the liver from where Salmonella reaches the gall bladder and can cause chronic carriage which gives rise to healthy carriers [18].
1. селективное обогащение (накопление):
· жидкая среда Кесслера с поплавком (с лактозой): культивирование – (36±1)°С, для E.coli используют температуру (43±1)°С в течение 24-48 ч. Проверяется сбраживание лактозы и образование газа. На среде Кесслера кишечная палочка дает обесцвечивание и помутнение среды связи с подкислением среды, и образование газа в поплавке.
· жидкая элективная среда Кода: культивирование – 37°С 18-24 ч. Проверяется сбраживание лактозы и образование газа. Признаком роста лактозоположительных энтеробактерий (БГКП, E. coli) является изменение цвета среды с темно-зеленого до ярко-желтого.
2. плотные дифференциально-диагностические среды:
· среда Эндо: культивировать – (37±1)°С в течение 18-20 ч. На среде Эндо Е.соli колонии имеют круглую форму, ровный, четко очерченный край, матовую поверхность, малиново-красный темно-красный цвет, который зависит от способности культуры расщеплять лактозу с образованием кислоты, с металлическим блеском. Колонии от бледно-розового до темно-красного цвета с нечетким металлическим блеском. Диаметр колоний 1,5-2,5 или 2,0-3,0 мм.
· среда Левина: культивировать – (37±1)°С в течение 24-48 ч. Колонии кишечной палочки темно-синего (темно-фиолетового) цвета с зеленым металлическим блеском (или без него) диаметром 1,5-2,0 мм, в остальном они не отличаются от колоний кишечной палочки на среде Эндо.
· скошенный РПА (МПА): культивировать – 37°С 18-20 ч. На поверхности агара кишечная палочка образует влажный, блестящий налет сероватого цвета, слегка опалесцирующий в проходящем свете.
3. морфология клеток:
4. биохимические тесты:
E. coli образует индол.
Оксидазоотрицательные бактерии пересевают на поверхность МПА (РПА) или среды, приготовленной из ПА. Посевы инкубируют до появления видимого роста при температуре (36±1)°С. У оксидазоотрицательных грамотрицательных культур (палочки размером 1,1×1,5×2 6 мкм), выросших в пересевах по 7.3, определяют возможность образования индола, ацетоина, сероводорода, утилизации цитрата, интенсивность ферментации углеводов с образованием кислоты, ферментацию сорбита, глюкозы и лактозы.
· способность образовывать индол: культуру высевают в пробирку с бульоном Хоттингера или МПБ (РПБ) с триптофаном. Под пробку в пробирку помещают полоску индикаторной бумажки. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 24 ч. Если за время инкубирования посевов в среде накапливается индол, то желтый цвет индикаторной бумажки меняется на цвет от сиренево-розового до интенсивного малинового. Образование индола можно определить с помощью реактивов Эрлиха и Ковача. Для этого к 5 см 24-часовой культуры добавляют 1 мл одного из реактивов. Образование красного слоя на поверхности культуральной жидкости указывает на положительную реакцию. E.coli образует индол.
E. coli не образует ацетоин.
· способность образовывать ацетоин (реакция Фогес-Проскауэра): культуру высевают в пробирки со средой Кларка. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 48 ч. После инкубирования посевов к 1 мл отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 мл раствора 1-нафтола и 0,2 мл раствора гидроокиси калия. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Проявление розового окрашивания через 15-60 мин. указывает на положительную реакцию. E.coli не образует ацетоин.
E. coli не утилизирует цитрат.
· способность утилизировать цитрат: культуру высевают в пробирки со средой Козера или на поверхность среды Симмонса. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 24-48 ч. Изменение оливково-зеленого цвета сред на васильковый, синий указывает на положительную реакцию.
E.coli интенсивно ферментирует углеводы (реакция с метил-рот положительная).
· определение интенсивности ферментации углеводов с образованием кислоты (реакция с метил-рот): культуру высевают в пробирки с глюкозо-фосфатным бульоном или средой Кларка или используют посевы после отбора 1 мл культуральной жидкости для проведения реакции Фогес-Проскауэра. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 48 ч. К 5 мл культуральной жидкости прибавляют 5-10 капель реактива Кларка. Появление через 1 мин. красного цвета культуральной жидкости указывает на ферментацию углеводов до рН ниже 5,0.
E.coli ферментирует глюкозу, лактозу и сорбит.
· определение ферментации сорбита, глюкозы и лактозы: культуру высевают в среды Гисса с сорбитом или глюкозой, или лактозой. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 24 ч, а на среде Гисса с лактозой при температуре (44±1)°С в течение 24 ч. При ферментации глюкозы образуется газ. Ферментацию глюкозы можно учитывать в засеянных косяках ТСА или среды Клиглера по изменению цвета столбика среды и образованию в нем газа. Ферментацию лактозы учитывают по изменению цвета скошенной поверхности среды Клиглера. Ферментацию сорбита учитывают по изменению цвета среды. У культур типичных для Е.соli по всем изученным признакам, но не ферментирующим сорбит, изучают возможность ферментации целлобиозы на среде Гисса с целлобиозой, при температуре (36±1)°С в течение 24 ч.
Е.соli не образует сероводород.
· определение образования сероводорода: образование сероводорода учитывают в посевах на среду Клиглера или ТСА после инкубирования посевов при температуре (36±1)°С в течение 24 ч. Почернение в столбике среды указывает на образование сероводорода.
Идентификация Salmonella
Salmonella грамотрицательные палочки с закругленными концами.
1. первичное неселективное накопление (обогащение):
· ЗПВ (забуференная пептонная вода): навеску продукта засевают в среду. Соотношение продукта и ЗПВ 1:9. Рост проявляется в помутнении среды. Культивирование – (36±1)ºС 18±2 ч.
· магниевая среда (хлормагниевая): Засевают непосредственно продукт. Культивирование – (36±1)ºС 24-48 ч.
2. селективное обогащение:
· жидкая элективная среда Кода: культивировать. Признаком роста лактозоотрицательных энтеробактерий (сальмонелл) является помутнение среды без изменения цвета.
· магниевая среда (хлормагниевая): засевают культуру, полученную после предварительной инкубации. Культивирование – (36±1)ºС 24-48 ч.
· селенитовая среда (селенитовый бульон Лейфсона): засевают культуру, полученную после предварительной инкубации. Культивирование – 35ºС 18-24 ч.
· среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон): засевают культуру, полученную после предварительной инкубации. Культивирование – (41,5±1)ºС 24±3 ч. Рост проявляется диффузным помутнением среды.
· тетратионатная среда Мюллер-Кауфман (МКТ-бульон): засевают культуру, полученную после предварительной инкубации. Культивирование – (43±1)ºС 24-48 ч. или (37±1)ºС 24±3 ч.
3. плотные дифференциально-диагностические среды:
· питательная среда Эндо: низкоселективная среда. Культивирование – (37±1)ºС 18-20 ч. На среде сальмонеллы круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные. Образование полупрозрачных бесцветных или бледно-розовых колоний свидетельствует о принадлежности микроорганизмов, давших рост на накопительных питательных средах, к лактозоотрицательным энтеробактериям, в том числе сальмонелл.
· среда Плоскирева (или бактоагар Плоскирева): среднеселективная среда. Культивирование – (37±1)ºС 18-20 ч. На средах колонии сальмонелл бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо. Бесцветные, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0-2,0 мм.
· среда ВСА (висмут-сульфит агар): высокоселективная среда. Культивирование – (37±1)ºС 24-48 ч. На ВСА колонии сальмонеллы имеют черный цвет с характерным сероватым металлическим блеском в виде ободка, а также зеленоватого цвета с темным центром и темно-зеленым ободком и с пигментированием (потемнением) среды под колониями.
· среда Левина: низкоселективная среда. Культивирование – (37±1)ºС 24-48 ч. На среде колонии сальмонеллы прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.
· ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар (XLD-агар): культивирование – (37±1)ºС 24-48 ч. Колонии сальмонелл имеют черный центр и слегка прозрачную зону красноватого цвета, что принадлежит цвету индикатора. Бактерии рода сальмонелл сероводородотрицательные образуют на среде розовые колонии с темным розовым центром. Лактозоположительные бактерии рода сальмонелла на среде дают желтые колонии с почернением или без него. Круглые, блестящие, бесцветные с черным центром или без него, диаметром 1,0-3,0 мм.
· бриллиантовый зеленый агар: культивирование – (37±1)ºС 48 ч. На среде сальмонеллы образуют красноватые или розовые, почти белые колонии (их цвет зависит от штамма и срока культивирования). Лактозо- и сахарозоположительные сальмонеллы образуют зеленоватые колонии, окруженные яркой желто-зеленой зоной.
· сальмонелла-шигелла агар (SS-агар): культивировать 37°С 18-20 ч. Колонии бесцветные, диаметром 1-2 мм.
· среда Плоскирева: культивировать 37°С 18-20 ч. Колонии малинового цвета, круглые, выпуклые, гладкие диаметром 1,5-2,5 мм.
· скошенный РПА или ПА: Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. Рост прозрачный по штриху.
4. морфология клеток:
· сальмонеллы грамотрицательные палочки с закругленными концами.
5. биохимические тесты:
Salmonella ферментирует глюкозу с образованием или без образования газа, не ферментирует лактозу и сахарозу.
· способность ферментировать сахара (лактозу, глюкозу и сахарозу): на трехсахарном агаре (ТСА, TSI-агар), среде Олькеницкого (3 сахара с мочевиной) среде Клиглера (2 сахара): Посев осуществляется петлей на скошенную поверхность и уколом в столбик с помощью бактериальной иглы. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. Пожелтение скошенной части среды указывает на ферментацию лактозы или сахарозы, или обоих сахаров. Красная или неизменившая цвета среда говорит о лактозо- и сахарозоотрицательных сальмонеллах. Пожелтение столбика среды указывает на ферментацию глюкозы. Красный или неизменившийся цвет – глюкоза отрицательная. Столбик с разрывом агара или пузырьками газа – образование газа. Отсутствие разрывов и пузырьков – газ не образуется. Агар Клиглера – по скошенной поверхности учитываю только ферментацию лактозы.
Salmonella образует сероводород.
· способность образовывать сероводород: Посев осуществляется петлей на скошенную поверхность и уколом в столбик ТСА, среду Олькеницкого, Клиглера с помощью бактериальной иглы. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. Почернение среды в столбике указывает на образование сероводорода.
Salmonella не расщепляет мочевину.
· способность расщеплять мочевину: культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают штрихом на поверхность агара с мочевиной (агар Кристенсена с мочевиной). Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. При положительной реакции – расщеплении мочевины с выделением аммония цвет среды фенолового красного меняется от розового до светло-вишневого. Для уреазоположительных бактерий реакция часто становится видимой после 2 ч. инкубации.
Salmonella не образует ацетоин (реакция Фогес-Проскауэра отрицательная).
· способность образовывать ацетоин: реакция Фогес-Проскауэра. Культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают в МПБ (РМБ) с глюкозой или суспендируют петлей в стерильной пробирке с 3 мл VP среды. Культивирование – (36±1)ºС 48 ч. После культивирования к 1 мл отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 мл раствора α-нафтола и 0,2 мл раствора гидроокиси калия концентрации 400 г/л. Или прибавляют две капли раствора креатина, три капли спиртового раствора 1-нафтола и две капли раствора гидроокиси калия, перемешивают содержимое пробирки после прибавления каждого реактива. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового или светло-красного окрашивания через 15 мин. указывает на положительную реакцию.
Salmonella не образует индол.
· способность образовывать индол: культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают в бульон Хоттингера или в МПБ (РПБ) с L-триптофаном, или в 5 мл триптон/триптофановой среды. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. После инкубирования, к посеву прибавляют по 1 мл реактива Эрлиха и Ковача. Образование красного слоя указывает на положительную реакцию.
Salmonella не сбраживает сахарозу, но сбраживает манит. При сбраживании маннита цвет среды изменяется, образуется или не образуется газ.
· способность сбраживать манит и сахарозу: культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают с среды Гисса с маннитом и сахарозой. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч.
Большинство штаммов Salmonella подвижны.
· способность двигаться: культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают уколом с помощью бактериальной иглы в полужидкий МПА. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. При росте подвижных культур отмечается диффузный рост по всему столбику агара, при росте неподвижных – вдоль места укола.
Salmonella paratyphi не образует L-лизиндекарбоксилазу, остальные образуют.
· образование L-лизиндекарбоксилазы: инокулируют снизу жидкую L-лизиндекарбоксилазную среду. Культивирование – (37±1)ºС 24±3 ч. Помутнение и пурпурный цвет среды указывает на положительную реакцию. Желтый цвет – на отрицательную.
Salmonella, кроме Salmonella arizonae не обладают β-галактозидазой.
· наличие β-галактозидазы: суспендируют петлей суточную культуру со скошенного РПА (ПА) в 0,25 мл физраствора, прибавляют одну каплю толуола и встряхивают пробирку. Помещают ее на водяную баню при температуре 37ºС и оставляют примерно на 5 мин. Затем добавляют0,25 мл реактива для определения β-галактозидазы и перемешивают. Оставляют пробирку на водяной бане при 37ºС в течение (24±3) ч, наблюдая за изменением цвета через определенные промежутки времени. Желтый цвет указывает на положительную реакцию. Изменение цвета обнаруживается примерно через 20 мин.
Читайте также: