Микроскопическое исследование эякулята при трихомонадах

Принцип. Метод основан на том, что раствор эозина окрашивает мертвые сперматозоиды, а живые не окрашиваются, так как содержащийся в них фермент дегидраза восстанавливает эозин, который при этом теряет окрашивающие свойства.

Ход исследования.На предметное стекло наносят 1 каплю спермы, рядом – 2 капли 5% водного раствора эозина. Капли смешивают, делают тонкий мазок, высушивают и микроскопируют с иммерсией. Подсчитывают не менее 200 клеток, выделяя при подсчете живые (бесцветные) и мертвые (окрашенные в красно-фиолетовый цвет) сперматозоиды.

В норме эякулят содержит не менее 90% живых сперматозоидов.

Микроскопическое исследование окрашенных препаратов(подсчет сперматограммы).Сперматограмма отражает соотношение количества сперматозоидов с нормальной и патологической морфологией.

Каплю хорошо размешанной спермы помещают на предметное стекло, делают из нее мазок, окрашивают по Паппенгейму и микроскопируют с иммерсией, дифференцируя не менее 200 сперматозоидов.

В норме морфологически неизмененные сперматозоиды составляют 80-85%.

К патологическим формам относятся сперматозоиды с деформированной головкой (макро-, микро-, конические головки, клювовидные, двуглавые с одной шейкой и одним хвостом, без шейки), с несколькими хвостами, без хвоста и т.д.

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Трихомониаз — самое распространенное заболевание, предающееся половым путем [1] . Он встречается чаще, чем сифилис и гонорея, вместе взятые [2] . Это заболевание часто протекает бессимптомно и приводит к серьезным осложнениям. Поэтому так важно знать, как вовремя выявить трихомониаз и какие анализы нужно сдать, чтобы его обнаружить.

Трихомониаз — это заболевание мочеполовой системы, которое вызывает небольшое одноклеточное простейшее трихомонада.

Трихомонада — крайне нестойкий организм. Она не переносит высушивания, на влажном белье может сохраняться всего 2–3 часа, и даже водопроводная вода убивает ее всего за несколько минут [3] . То есть заразиться трихомониазом бытовым путем практически невозможно. Для этого обязательно нужен половой контакт.

По данным исследователей, в разных странах трихомонаду выявляют у 2–85% мужчин и 12–65% женщин, которые обратились по поводу уретритов и других воспалительных заболеваний мочеполовой системы. Ученые объясняют такую разницу в показателях точностью лабораторной диагностики трихомониаза [6] .

Если брать российские данные, то трихомонадная инфекция составляет около 34,8% случаев негонококкового уретрита у мужчин и 20–40% обращений среди пациенток гинекологических клиник [7] .

Трихомониаз не всегда вызывает клинически выраженное заболевание. У женщин до половины случаев заражения могут протекать бессимптомно. И выявляется это заболевание уже при обследовании по поводу осложнений — бесплодия, невынашивания беременности, сальпингоофорита, эндометрита [8] . Трихомонады увеличивают риск заражения ВИЧ-инфекцией и риск развития рака шейки матки [9] .

Из-за трихомониаза в половых путях и в уретре развивается воспалительная реакция, появляются микроскопические кровоизлияния. Это нарушает естественный защитный барьер и делает организм более восприимчивым к любым другим инфекциям. Лейкоциты и другие иммунные клетки мигрируют в очаг поражения, где создается их большая концентрация. А именно эти клетки в первую очередь поражает ВИЧ-инфекция. И от того, насколько высока их концентрация в месте соприкосновения с вирусом, зависит вероятность заражения [10] .

Симптомы трихомониаза у женщин — болезненность и дискомфорт внизу живота, которые усиливаются при половых контактах или при мочеиспускании. Появляются выделения желтоватого цвета из половых путей. Часто эти выделения имеют пенистый вид и неприятный запах.

У мужчин появляются слизистые выделения из уретры, боль во время мочеиспускания и половых контактов. Основными осложнениями этой инфекции для мужчин являются простатит и везикулит [11] . В одном из исследований было доказано, что именно трихомонада стала причиной хронического простатита у 29% пациентов [12] .

Российское общество дерматовенерологов и косметологов советует проводить диагностику трихомониаза [13] :

• при воспалительных урологических и гинекологических заболеваниях;
• при обследовании партнеров во время планирования беременности;
• во время самой беременности;
• перед урологическими и гинекологическими операциями;
• при бесплодии;
• после незащищенного полового контакта.

Для выявления трихомонады используют четыре типа методов: микроскопический, культуральный, молекулярно-генетический и серологический. Для того чтобы установить диагноз, достаточно обнаружить этот микроорганизм хотя бы одним из первых трех методов [14] .

Микроскопия — это выявление трихомонады в мазках. Биологический материал наносят на предметное стекло и исследуют его под микроскопом.

Кроме исследования влажного мазка материал могут обрабатывать различными красителями. В этом случае врач ищет под микроскопом клетки определенного размера со специфической окраской и формой.

Этот метод применяют, когда заболевание не сопровождается ярко выраженными симптомами [17] . Его также используют как второй этап диагностики, если микроскопический метод не дал результата. Чувствительность этого метода достигает 95% [18] . Из минусов можно отметить длительность исследования.

Молекулярно-генетические методы — это различные виды ПЦР, NASBA и других реакций, которые выявляют участки ДНК или РНК в биоматериале. ПЦР обладает меньшей чувствительностью, чем культуральный метод, порядка 88–97% [19] . А по некоторым данным — от 55 до 95% [20] .

ПЦР желательно применять вместе с культуральным исследованием. Это значительно повышает вероятность выявления болезнетворного микроорганизма.

Серологическое исследование , то есть определение в крови антител к трихомонаде, используется как дополнение к первым трем методам. Если коротко, то сдать анализ крови на трихомониаз можно, но его результаты нужно оценивать только комплексно с учетом других исследований.

Его недостатком является возможность ложных положительных и ложноотрицательных реакций. Из положительных моментов — антитела сохраняются длительное время, около 1 года после заражения [21] . То есть даже спустя год можно определить, что человек перенес трихомониаз.

Для определения уровня антител понадобится кровь, для проведения всех остальных исследований чаще всего берут соскоб из уретры. У женщин также могут брать материал из влагалища или из цервикального канала — здесь концентрация трихомонад будет самая высокая.

Мужчинам перед взятием анализа на трихомониаз нужно не мочиться около двух–трех часов. Для женщин правил несколько больше. Обследование не проводится во время месячных или накануне, после кольпоскопии или вагинального УЗИ. За 1–2 дня до обследования желательно не использовать свечи, спринцевания и воздержаться от половых актов. Все эти процедуры нарушают состав микрофлоры, и исследование может получиться неточным.

Для проведения ПЦР кроме соскоба можно использовать первую порцию утренней мочи или сперму. Собрать сперму или мочу нужно в специальный стерильный контейнер.

Из всех анализов на трихомониаз самый быстрый — микроскопия нативного мазка. В идеале она должна проводиться через 10 минут после взятия материала. За это время трихомонады не успевают потерять свою подвижность и сохраняют типичную форму [22] . То есть уже примерно через час врач может дать предварительный результат.

В реальности такое возможно в гинекологических или урологических клиниках, при которых есть своя лаборатория с возможностью проводить микроскопическое исследование.

Окрашенные мазки не требуют такой срочности анализа. Поэтому результат будет готов на следующий день или через день.

Результаты ПЦР-исследования обычно можно получить через 1–2 рабочих дня. При обнаружении трихомонад результат могут задержать для постановки подтверждающих проб. Положительный результат выдают при обнаружении этих микроорганизмов, отрицательный — при их отсутствии.

Диагностика трихомониаза культуральным методом — самая долгая. Она может занимать более недели. За это время исследуемый материал помещают на питательную среду, следят за ростом микроорганизмов на ней, проводят повторное определение возбудителя. Идеальный вариант — отсутствие роста. Это означает, что в собранном материале не было живых трихомонад. Если, конечно, были точно соблюдены все требования по забору биоматериала, его хранению и транспортировке. Положительный результат анализа на трихомониаз говорит о заражении.

Анализ крови на трихомониаз проводится в течение 1–2 рабочих дней. Положительный результат говорит о том, что в крови есть антитела, то есть пациент или болеет трихомониазом, или перенес его в прошлом. Отрицательный результат — отсутствие заболевания или низкий уровень антител. Сомнительный — это пограничный результат, который сложно интерпретировать. В таком случае обычно рекомендуют повторить исследование через 1–1,5 недели.

Стоимость анализа на трихомониаз зависит от метода исследования и метода забора материала. Например, в Москве стоимость забора мазка из уретры или из влагалища — около 400 рублей. За взятие крови возьмут 150–200 рублей. А при сдаче мочи или спермы доплачивать не придется, стоимость контейнера обычно уже включена в цену исследования.

Микроскопия мазка будет стоить от 450 до 600 рублей в зависимости от лаборатории. ПЦР-исследование — 300–450 рублей вне зависимости от вида материала. Анализ на трихомониаз культуральным методом выполняется не во всех клиниках и стоит от 800 до 1300 рублей [24] . А серологическая диагностика трихомониаза по крови обойдется примерно в 600–800 рублей.

Трихомониаз — это венерическое заболевание, которое часто протекает бессимптомно и является причиной серьезных осложнений. Лабораторная диагностика трихомониаза позволяет выявить это заболевание даже в стертой форме и вовремя начать лечение. А лучшей профилактикой любых половых инфекций остается использование барьерных методов контрацепции.

От­каз от слу­чай­ных по­ло­вых свя­зей и за­щи­щен­ный секс — вот луч­шие ме­то­ды про­фи­лак­ти­ки три­хо­мо­ни­а­за и дру­гих ИП­ПП. Но если за­ра­же­ние все же про­изо­шло, сто­ит точ­но со­блю­дать схе­му ле­че­ния и по окон­ча­нии те­ра­пии прой­ти кон­троль­ный ана­лиз. Кста­ти, сей­час во мно­гих част­ных кли­ни­ках ком­плек­с­ную ди­аг­нос­ти­ку ИП­ПП мож­но прой­ти ано­ним­но.

Основной целью исследования эякулята является определение способности спермы к оплодотворению и выявление заболеваний и/или патологических процессов, вызвавших соответствующие поражения. Исследование спермы – неотъемлемая часть диагностики бесплодия. Примерно в 47% случаев причиной бездетности семейных пар является мужчина. Причиной бесплодия мужчин могут быть заболевания яичек, простаты, нарушения проводимости семявыводящих путей, заболевания и пороки развития уретры. Исследование семенной жидкости также является одним из тестов при диагностике гормональных расстройств, заболеваний половых органов или пороков их развития.

В норме эякулят представляет собой взвесь сперматозоидов в секрете яичек и их придатков, которая к моменту эякуляции смешивается с секретом предстательной железы, семенных пузырьков и луковично-уретральных желез.

Сперматозоиды составляют около 5% объема спермы, они образуются в семенниках. Приблизительно 60% объема спермы образуется в семенных пузырьках. Это вязкая, нейтральная или слегка щелочная жидкость, часто желтая или даже сильно пигментированная из-за высокого содержания рибофлавина.

Простата производит примерно 20% объема семенной жидкости. Эта жидкость, похожая на молоко, имеет слабокислую реакцию (рН около 6,5), в основном из-за высокого содержания лимонной кислоты. Простатический секрет также богат кислой фосфатазой и протеолитическими ферментами, считается, что протеолитические ферменты отвечают за коагуляцию и разжижение семенной жидкости.

Менее 10–15% объема спермы образуется в придатках яичек, семявыводящих протоках, бульбоуретральных и уретральных железах.

Стандартная спермограмма оценивает физические (макроскопические) и микроскопические параметры эякулята (Табл., рис. 1-3).

Условия взятия и хранения образца

Эякулят должен быть получен после, как минимум, 48 ч, но не более 7 дней полового воздержания.

Эякулят, полученный путем мастурбации, необходимо собрать полностью и держать в тепле (20–40 оС). Образец стабилен один час, однако в случае, если подвижность сперматозоидов патологически низкая (менее 25% сперматозоидов с быстрым линейным поступательным движением), срок между получением и анализом образца следует свести к минимуму.

Макроскопическое исследование – определение консистенции, объема, запаха, цвета, вязкости и рН эякулята.

Микроскопическое исследование – изучение в нативном препарате подвижности сперматозоидов и наличия агглютинации, подсчет количества сперматозоидов в камере Горяева, изучение морфологии сперматозоидов, клеток сперматогенеза и дифференциальная диагностика живых и мертвых сперматозоидов в окрашенных препаратах.

Микроскопическое исследование эякулята проводят после полного его разжижения

Для оценки подвижности сперматозоидов рекомендуется использовать простую систему классификации по категориям. Для классификации 200 сперматозоидов последовательно просматривают в 5 полях зрения микроскопа (Рис. 1).

Подвижность каждого сперматозоида классифицируют по категориям, используя следующие критерии:

а) быстрое поступательное движение;

b) медленное и вялопоступательное движение;

c) непоступательное движение;

d) неподвижные сперматозоиды.

Сначала подсчитывают все сперматозоиды категорий а и b в ограниченном участке поля зрения или, если концентрация сперматозоидов низкая, во всем поле зрения (%). Далее в той же области подсчитывают сперматозоиды с непоступательным движением (категория с) (%) и неподвижные сперматозоиды (категория d) (%).

Определять подвижность можно с подсчетом в камере Горяева. Сперму разводят в 20 раз физиологическим раствором, в камере смотрят только неподвижные и малоподвижные сперматозоиды.

Расчет ведут по формуле:

А – общее количество сперматозоидов;

В – количество малоподвижных сперматозоидов;

С – количество неподвижных сперматозоидов.

Отсюда количество активно подвижных сперматозоидов в процентах составляет (Y):

Подвижность сперматозоидов зависит от времени года и суток. Имеются данные, что весной происходит снижение подвижности сперматозоидов (сезонные колебания). При наблюдении за количеством активно-подвижных сперматозоидов в течение суток было отмечено увеличение их количества во второй половине дня (суточные ритмы).

Снижение подвижности сперматозоидов ниже нормы – астенозооспермия. Незначительной степени астенозооспермии – количество активно- и малоподвижных сперматозоидов c поступательным движением в сумме составляет менее 50%, но более 30%.

Подсчет общего количества сперматозоидов проводят в камере Горяева. Общее количество сперматозоидов в эякуляте рассчитывают, умножая количество сперматозоидов в 1мл спермы на объем выделенной спермы.

Нормоспермия – у здорового мужчины в 1 мл эякулята содержится более 20 млн. сперматозоидов.

Полизооспермия – количество сперматозоидов в 1 мл эякулята превышает 150 млн.

Олигозооспермия – в 1 мл эякулята содержится менее 20 млн. сперматозоидов.

Азооспермия – отсутствие сперматозоидов в эякуляте.

Аспермия – в доставленной жидкости нет сперматозоидов и клеток сперматогенеза.

Оценка жизнеспособности может служить контролем точности оценки подвижности сперматозоидов, поскольку процент мертвых клеток не должен превышать (с учетом ошибки подсчета) процента неподвижных сперматозоидов. Наличие большого количества живых, но неподвижных сперматозоидов, может указывать на структурные дефекты жгутиков. Сумма мертвых и живых сперматозоидов не должна превышать 100%.

В большинстве случаев эякулят человека содержит лейкоциты, в основном нейтрофилы. Повышенное содержание этих клеток (лейкоспермия) может свидетельствовать о наличии инфекции и о плохом качестве сперматозоидов. Число лейкоцитов не должно превышать 1106/мл. Подсчет ведут в камере Горяева аналогично подсчету сперматозоидов.

Эякулят кроме лейкоцитов может содержать незрелые половые клетки (клетки сперматогенеза) на разных стадиях созревания: сперматогоний, сперматоцит I порядка, сперматоцит II порядка, сперматид. (рис. 2)

Наличие в эякуляте различных типов незрелых клеток сперматогенеза обычно говорит о его нарушении. Избыток этих клеток является следствием нарушения функции семенных канальцев, в частности, при сниженном сперматогенезе, варикоцеле и патологии клеток Сертоли.

Оценка морфологии сперматозоидов. Для анализа используют мазок, окрашенный гистологическими красителями (гематоксилин, Романовский-Гимза и др.), в котором производят последовательный подсчет 200 сперматозоидов (однократный подсчет 200 сперматозоидов предпочтительней двукратного подсчета 100 сперматозоидов) и выражают в процентах количество нормальных и патологических форм (Рис. 3).

Головка сперматозоида должна быть овальной формы. Отношение длины головки к ее ширине должно составлять от 1,5 до 1,75. Должна быть видна хорошо очерченная акросомная область, составляющая 40–70% площади головки. Шейка сперматозоида должна быть тонкой, составлять 1,5 длины головки сперматозоида и прикрепляться к головке вдоль ее оси. Размеры цитоплазматических капель не должны превышать 1/2 размера головки нормального сперматозоида. Хвост должен быть прямым, одинаковой толщины на всем протяжении и несколько уже в средней части, не закрученным и иметь длину около 45 мкм. Отношение длины головки к длине хвоста у нормальных сперматозоидов 1:9 или 1:10.

Дефекты головки: большие, маленькие, конические, грушевидные, круглые, аморфные, с вакуолями в области хроматина; головки с маленькой акросомальной областью, вакуолизированной акросомой, с несимметрично расположенной акросомой; двойные и множественные головки, головки с компактным строением хроматина и т.д.

Дефекты хвоста: хвосты короткие, множественные, в виде шпильки, сломанные, наклонные (угол больше 90°), неравномерная толщина хвоста, тонкая средняя часть, закрученный конец, закрученный полностью и их любая комбинация. При дифференцированном морфологическом подсчете учитываются только сперматозоиды с хвостами.

Тератозооспермия – увеличение количества патологических форм сперматозоидов выше референсных значений. Выраженная тератозооспермия резко снижает шансы оплодотворения и увеличивает вероятность пороков развития у плода, если оплодотворение произошло. Тератозооспермия обычно сочетается с олигозооспермией и астенозооспермией.

Сперматозоиды, у которых головка заключена в цитоплазматическую каплю, и те, у которых цитоплазматическая капля расположена на шейке в виде шарфа и по отношению к размеру головки составляет более 1/3, выделяются как незрелые или юные. В нормальной спермограмме они составляют около 1%.

Референтные интервалы

• Объем – 2,0 мл или более;
• рН – 7,2 или более;
• концентрация – 20 *106 сперматозоидов/мл или более;
• общее количество – 40 *106 сперматозоидов и более в эякуляте;
• подвижность – 50% или более подвижных (категория а+b); 25% или более с поступательным движением (категория а) в течение 60 мин после эякуляции;
• жизнеспособность – 50% или более живых, т.е. не окрашенных;
• лейкоциты – менее 1 *106/мл.

Классификация показателей эякулята

• Нормозооспермия – нормальный эякулят;
• олигозооспермия – концентрация сперматозоидов ниже нормативных значений;
• астенозооспермия – подвижность ниже нормативных значений;
• тератозооспермия – морфология ниже нормативных значений;
• олигоастенотератозооспермия – наличие нарушений всех трех показателей;
• азооспермия – нет сперматозоидов в эякуляте;
• аспермия – нет эякулята.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 - 2020

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.