Микротестсистема для биохимической идентификации стафилококков мтс-с

Определение родовой, видовой и таловой принадлежности микроорганизмов на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и антигенных свойств — наиболее ответственная часть микробиологического исследования.

Большое количество патогенов, принимающих участие в возникновении инфекционного процесса, обусловливает применение различных тестов по определению ферментативных свойств путем постановки большого количества биохимических реакций, что позволяет в комплексе с другими данными определить вид микроорганизма. Этот наиболее трудоемкий процесс выполняется в несколько этапов, требует большого количества дифференциально-диагностических сред, реактивов, посуды, что значительно удорожает стоимость анализа и удлиняет сроки его проведения. Результаты удается получить через 4…7 сут. Поэтому для идентификации микроорганизмов наиболее перспективны микрообъемные коммерческие тест-системы (МТС). Они избавляют практических бактериологов от трудоемких и дорогостоящих процедур и позволяют получать стандартные, сопоставимые, воспроизводимые данные, экономят реактивы, ускоряют выдачу результата анализа.

Коммерческие тест-системы для биохимической идентификации микроорганизмов различных групп представляют собой готовые к использованию полистироловые планшеты и панели с сухими дифференцирующими средами или субстратами, которые выпускаются разными производителями.

Коммерческие тест-системы на основе полистироловых планшетов. В Российской Федерации наибольшее распространение получили следующие тест-системы.

4. Системы на основе стандартных 96-луночных микротитровальных планшетов для идентификации энтеробактерий (ММТ-Е1 и ММТ-Е2) (Ставропольская государственная медицинская академия).

5. Наборы для ускоренной (в течение 5 ч) идентификации энтеробактерий РапидЭнтеро 200 и РапидЭнтеро 750 (НИИЭМ им. Пастера, г. Санкт-Петербург).

Диагностические полоски и диски для биохимической идентификации микроорганизмов. Системы индикаторные бумажные (СИБ) представляют собой полоски или диски из хроматографической бумаги, пропитанные соответствующим субстратом и индикатором и покрытые для стабилизации водным раствором поливинилового спирта.

1. Диски с бацитрацином (10 ЕД). Применяют для селективной изоляции Haemophilus spp. при первичном культивировании. Тест основан на устойчивости Haemophilus spp. к высоким концентрациям бацитрацина по сравнению с сопутствующей флорой и саттелитного роста микроорганизмов этого рода в зоне диффузии экзогенных факторов роста из культуры S. aureus.

2. Диски с бацитрацином S. Предназначены для предварительной индикации β-гемолитических стрептококков группы А (S. pyogenes). Тест основан на высокой чувствительности S. pyogenes к незначительным концентрациям бацитрацина (0,04 ЕД), обеспечивающей образование зон задержки роста вокруг диска. Другие β-гемолитические стрептококки резистентны к таким дозам или образуют незначительные зоны ингибиции роста.

3. Диски с оптохином. Предназначены для рутинной первичной индикации S. pneumoniae и дифференциации их от других зеленящих стрептококков. Принцип теста основан на избирательной чувствительности пневмококков к оптохину и резистентности к нему других зеленящих стрептококков.

Общие правила работы с МТС. Методика проведения микробиологических исследований с использованием МТС должна полностью соответствовать прилагаемой инструкции. Общая схема работы с тест-системами состоит из следующих этапов.

1. Выделение культуры. Для работы с МТС используют только чистые культуры. При их выделении особое внимание следует уделять качеству питательных сред. От этого зависит видовой состав изолированных микроорганизмов, их количество в исследуемом материале и успех идентификации. По результатам первичного посева и микроскопии проводят дифференциацию культур на грамположительные и грамотрицательные кокки и палочки.

2. Приготовление бактериальной суспензии. Суспензию готовят в рекомендованной суспензионной среде из чистой 18…24-часовой культуры определенной степени мутности согласно инструкции. Использование слишком густой или жидкой суспензии может привести к ложным результатам. Параллельно делают контрольный высев взвеси культуры на кровяной агар для проверки ее чистоты, ростовых свойств и (или) для постановки дополнительных тестов.

3. Инокуляция. Суспензию тщательно встряхивают; необходимый объем вносят в каждую лунку соответствующего ряда. После этого в определенные лунки для создания анаэробных условий добавляют по 2 капли стерильного вазелинового или парафинового масла.

4. Инкубация. Планшеты в полиэтиленовых пакетах или закрытые крышками инкубируют при 30…37 °С в течение 4…48 ч.

5. Оценка результатов. По окончании выращивания проверяют чистоту культуры по контрольному посеву. При отсутствии роста увеличивают время инкубации. Затем добавляют в определенные лунки необходимые реактивы, позволяющие визуализировать или усилить цветные реакции. Учет проводят визуально с помощью специальных таблиц, цветовых шкал и (или) цветных реакций контрольных штаммов и заносят их в бланки.

6. Идентификация. Проводят с помощью таблиц биохимической активности, индексов профилей, книг-кодов или компьютерных программ.

При окончательной идентификации учитывают дополнительную информацию (микроскопия, характер колоний, наличие гемолиза, пигментообразование, подвижность и т. д.).

При работе с тест-системами следует придерживаться следующих рекомендаций.

1. Строго соблюдать правила работы с инфицированным материалом.

2. После употребления МТС необходимо обезвреживать автоклавированием при (120+2) °С в течение 1 ч.

3. Строго соблюдать условия и сроки хранения в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к тест-системам.

4. Если культуру не удается идентифицировать, следует проверить ее чистоту и повторить исследование.

5. При отсутствии роста на контрольной чашке необходимо увеличить время инкубации.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Дифференциация и идентификация возбудителей - определение родовой, видовой и типовой принадлежности микроорганизмов — наиболее ответственная часть микробиологического исследования. Оно осуществляется на основании изучения целого комплекса свойств: морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и антигенных.

Все расширяющийся спектр возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний требует изучения их по многим биохимическим показателям. Применяемые в настоящее время традиционные методы проведения микробиологического исследования не могут обеспечить необходимого его уровня в связи с трудоемкостью процесса приготовления дифференциально-диагностических сред, их многообразием, сложностью приобретения и дороговизной многих компонентов, отсутствием необходимой стандартности, большим расходом лабораторной посуды и т. д. Кроме того, продолжительность исследования в течение 4-7 дней практически обесценивает его значимость для конкретного больного.

Разработанные и внедренные в широкую практику коммерческие микротест-системы имеют несомненные преимущества перед традиционными методами исследования. Преимущества эти состоят в следующем:
— возможность одномоментного проведения широкого ряда биохимических реакций, что позволяет осуществить идентификацию, как правило, в один этап;
— значительное расширение спектра идентифицируемых микроорганизмов;
— сокращение продолжительности исследования, материальных и трудовых затрат;
— получение стандартных воспроизводимых результатов;
— математическая обработка данных;
— использование автоматизации при оценке результатов биохимических реакций.

В основе коммерческих тест-систем лежат различные модификации классического метода, включающего тесты для определения ферментации, ассимиляции, оксидации, деградации, гидролиза различных биосубстратов. В некоторые из них для ускорения процесса идентификации добавляют хроматогены или флюорохроматогены, которые могут быть выявлены химическими или флюорометрическими методами при помощи приборов. Коммерческие тест-системы позволяют проводить идентификацию большинства групп микроорганизмов. Ниже приведены тест-системы, наиболее известные в нашей стране.

Кроме того, широкое применение имеют диагностические полоски САЛМтест и КОЛИтест для ускоренной предварительной идентификации сальмонелл и кишечной палочки, ОКСИтест для выявления бактериальной цитохромоксидазы, ОНП тест для обнаружения бета-галактозидазы, ВПтест для определения продукции ацетоина (PLIVA-Lachema, Чехия).

а) Диагностические полоски и диски для идентификации стрептококков и энтерококков. PYRtest для дифференциации энтерококков и стрептококков, предварительной идентификации Str. pyogenes (производители — Oxoid; PLIVA-Lachema, Чехия);

Bacitracin S для предварительной идентификации Str. pyogenes (производители — Oxoid; PLIVA-Lachema, Чехия);

Оптохин для предварительной идентификации Str. pneumoniae (производители — Oxoid; PLIVA-Lachema, Чехия);

ТАХО Р для предварительной идентификации Str. pneumoniae (производитель - BBL, США);

ТАХО А для предварительной идентификации Str. pyogenes (производитель — BBL, США).

б) Диагностические диски:

X, V, X+V для дифференциации гемофильных бактерий (производители — PLIVA-Lachema, Чехия; BBL, США);

Bacitracin 10 ED для селективной изоляции гемофильных бактерий (производитель — PLIVA-Lachema, Чехия);

V+K для селективной изоляции N. meningitidis (производитель — PLIVA-Lachema, Чехия).

в) Общие правила работы с микротест-системами. Техника работы с микротест-системами проста и состоит из следующих этапов:

1. Выделение культуры:
• при идентификации микроорганизмов необходимо работать только с чистой культурой;
• по результатам первичного посева и данным микроскопии проводится дифференциация культур на грамположительные и грамотрицательные кокки и палочки для выбора тест-системы; при необходимости ставятся экспресс-тесты: определение каталазы, оксидазы.

2. Приготовление бактериальной суспензии:
• бактериальную суспензию готовят на физиологическом растворе, дистиллированной воде или суспензионной среде для определенных групп микроорганизмов из чистой 18-24-часовой культуры бактерий определенной степени мутности, по стандарту Мак-Фарланда. Тщательно гомогенизируют суспензию. Слишком густая или жидкая суспензия может привести к ложным результатам;
• параллельно делают контрольный высев суспензии культуры на кровяной агар для проверки чистоты культуры, ее ростовых свойств и/или для постановки дополнительных тестов.

3. Инокуляция:
• суспензию бактерий тщательно встряхивают и в необходимом объеме ино-кулируют в каждую лунку или ячейку в зависимости от вида тест-систем. При работе с планшетными тест-системами необходимо исключить возможность заражения соседних лунок;
• после инокуляции в определенные лунки для создания анаэробных условий добавляют стерильное вазелиновое (парафиновое) масло в соответствии с инструкцией.

4. Инкубация:
• инокулированные тест-системы инкубируют в термостате при рекомендованной в инструкции температуре в течение 2-48 ч, в зависимости от вида тест-системы. В ряде случаев для ускорения роста микроорганизмов культивирование проводят со встряхиванием тест-систем.

Расчет профиля. Результаты биохимических реакций переводят в цифровой код — профиль. Для этого все тесты в биохимическом ряду разбивают на триады, в каждой из которых положительным результатам дают числовые значения: 1 тест — 1, 2 тест — 2, 3 тест — 4, все отрицательные результаты — 0. Суммируют числовые значения в триадах. Полученный числовой код соответствует профилю исследуемого микроорганизма. Например:

Полученный профиль 361 соответствует таксону Klebsiella pneumoniae.

Аналогично рассчитанный профиль используется для идентификации при помощи книг кодов (регистров). При этом для каждого таксона определяются два следующих показателя:

а) процент идентификации (%id.) —показывает, насколько полученный профиль соответствует идентифицируемому микробу по сравнению с другими таксонами, включенными в банк данных (%id. — критерий отличия микроба от других таксонов);

б) Т-индекс (Tin) — показывает соответствие профиля большинству типичных реакций данного таксона; значение этого показателя варьирует от 0 до 1 и обратно, пропорционально количеству атипичных тестов.

Книги кодов позволяют проводить достоверную идентификацию и в случае выявления 1-2 нетипичных для исследуемого вида результатов.

Контроль качества. Качество тест-систем контролируют при помощи референтных бактериальных культур, перечень последних приводится в инструкциях к тест-системам.

Наиболее частые причины неудач при идентификации:
• смешанная культура
• использование суспензий с недостаточной мутностью или в недостаточном объеме
• перекрестная контаминация суспензий в расположенных рядом лунках
• соответствующие лунки не заполнены парафиновым маслом
• попадание реактивов в соседние лунки (ячейки)
• не точно соблюдена методика постановки теста
• отсутствие анаэробной атмосферы при культивации анаэробных бактерий
• возможно выделение штамма с нетипичными свойствами или его данные не заложены в таблицы.

При получении несовпадающих результатов при работе с тест-системами разных производителей, в сомнительных случаях и при получении заключения о выделении редко встречающихся видов микроорганизмов для окончательной верификации культуры необходима проверка ее либо в референтных лабораториях, либо проведение повторной идентификации классическим методом с использованием традиционно приготовленных дифференциально-диагностических сред в комплексе с оценкой морфологических, тинкториальных, культуральных и других свойств.

Накопленный опыт работы с коммерческими тест-системами показал:
— уникальность тест-систем, включающих различные спектры биохимических тестов для одних и тех же групп микроорганизмов;
— возможность различного проявления одних и тех же ферментативных реакций при культивировании одних и тех же культур в различных тест-системах;
— необходимость использования для контроля качества работы тест-систем музейных штаммов, рекомендованных фирмой производителем;
— в банках к тест-системам встречаются различные наименования одних и тех же таксонов, что необходимо учитывать при проведении идентификации.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 4.09.2019

Закон закупки 44-ФЗ

Закон, регулирующий правовые отношения в области государственных закупок.

Что изменилось в закупках в конце мая: обзор Постановлений Правительства
Неустойка по 44-ФЗ: разбираемся с особенностями начисления
Идентификационный код закупки (ИКЗ) по 44-ФЗ: определение, формирование, расшифровка и поиск закупок по ИКЗ
Предметы роскоши по 44-ФЗ: как их опознать
Сравниваем 44-ФЗ и 223-ФЗ: таблица для чайников
Расширили список запрещенных иностранных товаров по 44 ФЗ
Банковское сопровождение контракта по 44-ФЗ: виды, случаи и порядок осуществления
Что такое госзакупки: полное определение понятия, виды закупок по 44-ФЗ
Способы закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ
Что не так с 44-ФЗ, или Почему злится Артемий Лебедев
Вопрос: Я продаю компьютеры. Могу ли я участвовать в закупках по 44фз, если у меня нет документов о том, что эта техника - российского происхождения?
Чем обычный договор отличается от контракта по 44-ФЗ
В каких случаях указывать и подтверждать страну происхождения товара по 44-ФЗ?
Как оплатить неустойку по 44-ФЗ
Переторжка по 44-ФЗ и 223-ФЗ: особенности, процедура проведения
Как проходят закупки у СМП по 223-ФЗ и 44-ФЗ
Национальный режим при осуществлении закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ: запреты, ограничения, условия допуска
Исключения из правил: что нельзя закупить по 44-ФЗ или 223-ФЗ
Существенные условия контракта по 44-ФЗ: что к ним относится и можно ли их изменять?
Независимый регистратор по 44-ФЗ: обзор, функции, цели, плюсы и минусы использования
Оплата по контракту по 44-ФЗ: как получить вовремя

Заказчик

ИНН: 1021000204 / КПП: 102101001

Топ-5 ловушек заказчика в техзадании
Заказчик не платит
Кто такие государственные заказчики
Об исчезновении строительства детского сада.
Ошибки заказчика и обжалование действий заказчика
Как отличить убытки от неустойки
Топ-5 ловушек заказчика в документации
Права поставщика, о которых молчат заказчики
Контракт исполнен, а оплаты нет - знакомая ситуация?
"Зачем потеть и страдать, затачивая техзадание под своего подрядчика?" - подумал как-то заказчик и обратился к компьютерщикам.
Общение с заказчиками
Заказчик разместил аукцион на ремонтные работы. Сроки выполнения работ - нереальные. Стоит ли участвовать?
Как заказчики злоупотребляли своими правами
Может ли поставщик увидеть заявки конкурентов?
Любовь заказчика к ПДФ (pdf)
Положение о закупках по 223-ФЗ: содержание, структура, примеры
ФАС в шоке: новое нарушение госзаказчиков
Может ли заказчик поменять техзадание после публикации закупки?

Информационная лента

При прокрутке вниз Вы можете получить очень полезную информацию, подобранную специально для Вас нашей программой. А также самые интересные и актуальные статьи о тендерах и закупках, которые мы подобрали для Вас на просторах интернета.

Портал отображает информацию о закупках, публикуемых в сети интернет
и находящихся в открытом доступе, и предназначен для юрлиц и индивидуальных предпринимателей,
являющихся участниками размещения государственного и коммерческого заказа. Сайт использует Cookie, которые нужны для авторизации пользователя.
На сайте стоят счетчики Яндекс.Метрика, Google Analytics и LiveInternet,
которые нужны для статистики посещения ресурса.

Введение

HiMedia предлагает ряд наборов для биохимической идентификации микроорганизмов (от KB001 до KB012) и наборов для биохимической идентификации на основе теста на подвижность (от KBM01 до KBM003). Каждый тест для биохимической идентификации стандартизован по цвету. Тесты основаны на общепринятых принципах изменения рН и утилизации субстрата. В процессе инкубирования проявляется метаболитическая активность микроорганизмов, которая влечет изменение цвета среды видимые сразу или после добавления соответствующих реагентов.

В состав каждого набора входит:

Панели с наборами тестов для биохимической идентификации
Инструкция по использованию
Таблицы для записи результатов и их интерпретации
Компьютерная программа для идентификации микроорганизмов
Набор реактивов, если они необходимы
Петли бактериологические одноразовые
Капельницы одноразовые калиброванные
Пробирки со средой для подращивание микроорганизмов
Пробирки со средой для приготовления суспензии микроорганизмов

Кат. №

Наименование

HiIMViC Набор для биохимической идентификации энтеробактерий (12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiIMViC Набор для биохимической идентификации энтеробактерий (12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiAssorted Набор для биохимической идентификации грамотрицательных бактерий (12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiAssorted Набор для биохимической идентификации грамотрицательных бактерий (12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

Hi25 Набор для биохимической идентификации энтеробактерий (25 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

Hi25 Набор для биохимической идентификации энтеробактерий (25 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiStaph Набор для биохимической идентификации стафилококков (12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiStaph Набор для биохимической идентификации стафилококков (12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiStrep Набор для идентификации стрептококков, (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiStrep Набор для идентификации стрептококков, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCandida Набор для идентификации грибов рода Candida, (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCandida Набор для идентификации грибов рода Candida, (1уп. х 20наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiVibrio Набор для идентификации вибрионов (Vibrio spp.), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiVibrio Набор для идентификации вибрионов (Vibrio spp.), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiNeisseria Набор для идентификации нейссерий, (1уп. х 10наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiNeisseria Набор для идентификации нейссерий, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов (36 тестов: Часть А + Часть В + Часть С), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов (36 тестов: Часть А + Часть В + Часть С), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть А - 12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть А – 12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть B – 12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть B – 12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть C – 12 тестов), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов – (часть C – 12 тестов), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiE. coli Набор для идентификации кишечных палочек, (12 тестов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (1уп. х 10 наборов) (ФСЗ 2008/01440)

HiE. coli Набор для идентификации кишечных палочек, (12 тестов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (1уп. х 20 наборов) (ФСЗ 2008/01440)

HiSalmonella Набор для идентификации Salmonella spp., (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiSalmonella Набор для идентификации Salmonella spp., (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiListeria Набор для идентификации Listeria spp., (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiListeria Набор для идентификации Listeria spp., (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов, (Набор для идентификации Bacillus spp.), (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов, (Набор для идентификации Bacillus spp.), (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов (Набор для идентификации Acinetobacter spp.) (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiCarbo Набор для изучения ферментации углеводов (Набор для идентификации Acinetobacter spp.) (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации E.coli, (1уп .х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации E.coli, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации Salmonella, (1уп. х 10 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации Salmonella, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации Listeria, (1уп. х 10 наборов) (ФСЗ 2008/01440)

HiMotility Набор для биохимической идентификации Listeria, (1уп. х 20 наборов) (панель с тестами, реагенты, пробирки со средами, петли, капельницы, таблицы) (ФСЗ 2008/01440)

Приготовление инокулома

Для идентификации можно использовать только чистую культуру микроорганизмов.
Выделять микроорганизмы можно на таких средах, как Питательный агар (M001) или других подходящих дифференциальных средах.
Отобрать единичную колонию и суспендировать её в 5 мл Бульона с сердечно-мозговой вытяжкой (M210). Инкубировать 4-6 часов при 35-37 0 С до получения необходимой мутности. Некоторые прихотливые микроорганизмы могут требовать более длительной инкубации, и в этом случае подращивание следует продолжать до достижения необходимой мутности.
Если можно отобрать 1 – 3 хорошо изолированные колонии, суспендируйте их в 2 –3 мл стерильной среды для приготовления суспензии, доводя мутность суспензии до необходимой.
Дальнейшие манипуляции проводите в соответствие с инструкцией к каждому конкретному набору.
Сравнивая полученные результаты с таблицей для интерпретации, внесите их в таблицу для записей.

Примечание:

Ошибочный, ложноотрицательный результат, может получаться при оптической плотности (мутности) инокулома менее чем 0,1.
Наиболее четкие результаты получаются при использовании обогащенной культуры по сравнению приготовленной суспензией.

Внесение инокулума культуры

Открыть крышку панели с тестами, соблюдая правила антисептики. Снять защитную пленку. Внести в каждую ячейку панели по 50 мкл инокулома (2 капли из пипетки PW1201) на поверхность среды;
ВНИМАНИЕ!

При использовании панелей для биохимической идентификации серии KBM ячейка № 1 засевается уколом бактериологической иглой, все другие ячейки (кроме ячейки № 2) засевать уколом калиброванной на 10 мкл петлёй.

Инкубация:

KBM001, KBM002 и все панели от KB001 до KB012 инкубировать при 35 ± 2 0 С в течение 18 –24 часов; KB006 инкубировать при комнатной температуре (22 – 25 0 С) в течение 48-72 часов и KBM003 инкубировать при комнатной температуре (22 – 25 0 С) в течение 24-48 часов.

Реактивы:

Каждый набор комплектуется необходимыми реактивами для выявления биохимических реакций исследуемых микроорганизмов.

Меры предосторожности

Все образцы клинического материала и микробные культуры рассматриваются как потенциально патогенные.

Соблюдение условий асептики должно распространятся на все время работы с набором.
Е допускать контакта реактивов с кожей, глазами и одеждой.

Утилизация использованного материала
После использования наборы и инструменты для выделения и инокулирования (капельницы, пипетки, петли и т.д.) должны быть дезинфицированы в соответствующих дезинфектантах а затем обеззаражены автоклавированием.

Принцип включения биохимических тестов

Этот тест обнаруживает способность микроорганизма продуцировать достаточное количество фермента фосфатазы. Продукция фосфотазы определяется высвобождением фенолфталеина. Фенолфталеин реагирует со щелочью (40% NaOH), что приводит к появлению яркой розовой окраски. Тест на щелочную фосфатазу.

Тест декарбоксилирования аминокислот (лизин, орнитин, аргинин)

Среда для этого теста содержит бромкрезоловый пурпурный, как индикатор рН. При утилизации карбогидрата, присутствующего в среде, рН снижается, в соответствии с продукцией кислоты, что приводит к изменению окраски среды на желтую. Продукция кислоты стимулирует фермент декарбоксилазу. Появление аминов в результате декарбоксилирования повышает рН среды, что изменяет цвет с оливкового зеленого или светло-пурпурного до пурпурного или темно-пурпурного. На негативную реакцию указывает появление желтой окраски среды.

В случае декарбоксилирования орнитина и лизина инкубацию можно увеличить до 48 часов.

Утилизация карбогидратов

Карбогидраты добавляют в основу среды, которая в качестве индикатора содержит феноловый красный. При ферментации карбогидрата выделяется кислота, что приводит к снижению рН среды и изменению окраски на желтую. Негативная реакция проявляется или не изменением окраски, или изменением на оранжево-красную / розовую.

Некоторые микроорганизмы при ферментации карбргидратов проявляют замедленную реакцию. В этом случае результат фиксируют как (±) и продолжают икубировать до 48 часов. Формирование оранжевой окраски после 48 часов инкубации интерпретируют как отрицательный результат.

Каталаза

Организмы, продуцирующие каталазу, имеют способность разлагать перекись водорода с образованием кислорода. Это проявляется в виде образования пузырьков на поверхности среды при добавлении капли 3% раствора перекиси водорода в ростовую среду.

Цитратный тест

Среда содержит натрия цитрат, как единственный источник углерода, индикатор бромтимоловый синий и неорганическую аммонийную соль. Микроорганизмы, способные утилизировать цитрат, как единственный источник углерода, также утилизируют аммонийную соль, как единственный источник азота. Аммонийная соль расщепляется до NH3, что приводит к защелачиванию среды и изменению окраски с зеленой на синюю.

Тест гидролиза эскулина

Эскулин – глюкозид, который гидролизуется определенными бактериями с образованием глюкозы и эскулетина. Эскулетин, взаимодействуя с присутствующими в среде ионами железа, образует комплекс черного цвета.

Глюкуронидаза

Фермент глюкуронидаза расщепляет субстрат х-глюкуронид, добавленный в питательную среду. Микроорганизмы абсорбируют субстрат, а внутриклеточная глюкуронидаза разрывает связи между хромофором и глюкуронидом. Хромофор придает синевато-зеленую окраску выросшей колонии или окрашивает всю среду.

Тест продукции сероводорода (H₂S)

Все виды энтеробактерий способны продуцировать различные количества H₂S. Микроорганизмы способны с помощью энзимов высвобождать серу из серосодержащих аминокислот или неорганических соединений серы. Сероводород реагирует с ионами железа или с ацетатом свинца, образуя сульфид железа или сульфид свинца, которые дают нерастворимый преципитат. Почернение среды свидетельствует о позитивной реакции.

Тест продукции индола

Этот тест демонстрирует способность определенных бактерий разлагать аминокислоту триптофан до индола, который аккумулируется в среде. При добавлении реактива Ковача (R008) в ростовую среду, появление красно-розовой окраски в течение 10 секунд указывает на положительный результат.

Малонатный тест

В среде для малонатного теста в качестве индикатора используется бромтимоловый синий. Натрия малонат и аммония сульфат являются единственными источниками углерода и азота соответственно.

Тест с метиловым красным

Тест с метиловым красным основан на регистрации изменения рН среды при утилизации микроорганизмами глюкозы. При добавлении одной капли индикатора метилового красного (I007) в конце периода инкубации если окраска становится ярко красной, то констатируется положительная реакция, если желтая или желто-оранжевая – реакция негативная.

Читайте также: