Паразитологические и иммунологические методы диагностики протозойных заболеваний

Простейших выявляют в различных биологических материалах, взятых от больного.

Фекалии исследуют в день дефекации (обычно доставляют в лабораторию утром), причем вегетативные подвижные формы дизентерийной амебы выявляют не позд­нее 20 мин после дефекации, а вегетативные формы других простейших (лямблий, диэнт-амеб) исследуют в течение первых 1 — 1,5 ч после дефекации.

Микроскопический метод- основной метод диагностики протозойных инфекций. Микро- скопируют мазки, окрашенные по Романовскому-Гимзе или Райгу. Иногда применяют серологический, аллергологический, биологиче­ский и молекулярно-генетический (ПЦР и др.) методы диагностики.

Исследование фекалий.Фекалии исследуют в день дефекации. Из фекалий, внесенных в небольшом количестве (с булавочную головку) в каплю физиологического раствора, готовят мазок в виде негу­стой эмульсии на предметном стекле и смешивают с каплей 1% рас­твора Люголя. На приготовленную смесь наносят покровное стекло и микроскопируют с окуляром х 10 и объективом х 40 для выявления амеб и жгутиковых (лямблий и диэнгамеб). Дополнительно изучают трофозоиты дизентерийной амебы при окраске буферным раствором метиленового синего. Ооцисты криптоспоридий выявляют модифи­цированными методами окраски по Цилю—Нильсену. Они окраши­ваются в красный цвет (кислотоустойчивые).

Исследование крови.Для исследования крови готовят тонкий мазок и толстую каплю, которые окрашивают по Романовско­му—Гимзе или Райту. Для приготовления тонкого мазка на край предметного стекла наносят небольшую каплю крови, к которой касаются краем шлифованного стекла, наклоненного под углом 45° к предметному стеклу. Растекшуюся каплю по шлифованному краю быстро и равномерно передвигают к противоположному краю стек­ла. Мазок должен быть равномерным и тонким по всей поверхности стекла. Дату исследования, фамилию и инициалы или номер истории болезни наносят простым карандашом на высохшем мазке (надпись не смывается после окрашивания).

Основной метод выявления плазмодий малярии — изучение тол­стой капли на подкладке. Для этого на предметном стекле готовят мазок крови с помощью края шлифованного стекла. Невысохшей (влажной) поверхностью мазка прикасаются к капле крови, которая при покачивании предметного стекла распределяется (растекается) на большую площадь. Оптимальную толщину полученного препа­рата определяют возможностью рассматривания печатного текста через толстую каплю.

Для фиксации препаратов применяют метиловый спирт (1—2 мин), этиловый спирт (10 мин) или смесь Никифирова (20 мин). Толстую каплю не фиксируют.

Аллерген сохраняет антигенные свойства, но лишен инфекциозности. Постановка внутрикожных проб с аллергеном про­изводится на внутренней стороне предплечья, вводится 0,1 мл аллергена (тулярин).

Ответ оценивается спустя 1—2 суток по диаметру папулы, зоны гиперемии и отека. Например, при токсоплазмозе используется внутрикожная проба с токсоплазмином, она считается положи­тельной, если на месте введения 0,1 мл токсоплазмина появля­ется гиперемия и инфильтрация кожи диаметром не менее 10 мм (более 20 мм — резко положительная) и через 48 часов размер инфильтрата не уменьшается. Для суждения об активности про­цесса можно использовать титрационную пробу с токсоплазми­ном, при постановке которой внутрикожно вводят различные раз­ведения токсоплазмина (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10 000, 1:100 000) по 0,1 мл каждого разведения. При активном процессе реакция наблюдается на высокие разведения (до 1:100 000 и выше), а ди­аметр инфильтрата на более слабые разведения может быть ра­вен или даже больше, чем на высококонцентрированные.

Вопросы для самоконтроля

1. Какие простейшие относятся ксаркодовым?

2. Каковы особенности морфологии дизентерийной амебы?

3. Перечислите представителей жгутиковых.

4. Назовите характерные клинические проявления кишечных ин­вазий.

5. Каков жизненный цикл малярийного плазмодия?

6. Какой источник инфекции мочеполовых инвазий?

7. Назовите клинические проявления токсоплазмоза.

8. Профилактические мероприятия, проводимые в очаге инфекции.

9. Охарактеризуйте микроскопические методы исследования про- тозоозов.

1. Амебиаз— инфекция, вызванная Entamoeba histolytica. Механизм заражения фекально-оральный. Заражение происходит при употреблении загрязненных пищи и воды. Проявления заболевания могут быть разными — от бессимптомной инфекции до тяжелого поражения кишечника, абсцесса печени и головного мозга. В диагностике амебиаза применяют метод непрямой иммунофлюоресценции, реакцию непрямой гемагглютинации, двойную радиальную иммунодиффузию, твердофазный ИФА. Высокий титр антител в реакции непрямой гемагглютинации характерен для тяжелых случаев инфекции и амебных абсцессов печени. При бессимптомной инфекции и легких формах заболевания чувствительность серологических методов невысока.

2. Бабезиоз. Это заболевание вызывают простейшие рода Babesia, паразитирующие в эритроцитах. Переносчики инфекции — клещи. Бабезиозом обычно болеют животные, изредка отмечаются случаи заражения людей. У человека заболевание характеризуется лихорадкой, недомоганием и анемией. Надежные серологические методы диагностики бабезиоза пока не разработаны. Диагноз ставят при обнаружении возбудителя в мазках крови.

3. Сонная болезнь.Возбудители — Trypanosoma gambiense и Trypanosoma rhodesiense, переносчик инфекции — муха це-це. Заболевание обычно начинается с общих симптомов, на поздних стадиях развивается менингоэнцефалит. В период разгара заболевания диагноз ставят при выявлении паразита в мазках крови и костного мозга. Недавно разработаны серологические методы диагностики заболевания, основанные на методе непрямой иммунофлюоресценции и твердофазном ИФА.

4. Болезнь Чагаса— острое или хроническое заболевание, вызванное Trypanosoma cruzi. Человеку передается при укусе клопов семейства Reduviidae. Основные проявления болезни — лихорадка, недомогание, увеличение лимфоузлов, ахалазия кардии, увеличение размеров пищевода, мегаколон, гепатоспленомегалия и дилатационная кардиомиопатия. В диагностике болезни Чагаса используются реакции преципитации, связывания комплемента и непрямой гемагглютинации, метод иммунофлюоресценции, РИА и твердофазный ИФА. Применение моноклональных антител позволило снизить число ложноположительных результатов, обусловленных перекрестными реакциями с возбудителями лейшманиоза.

5. Лейшманиоз. Возбудители — внутриклеточные паразиты рода Leishmania, переносчиками которых служат москиты. Лейшмании паразитируют в макрофагах кожи и внутренних органов. Различают 3 клинические формы заболевания: кожную, висцеральную и кожно-слизистую. Кожная проба с антигеном возбудителя позволяет поставить диагноз при любой форме заболевания. Кожные пробы становятся положительными не позднее чем через 3 мес после начала лейшманиоза. В диагностике лейшманиоза, кроме того, используются методы иммунодиффузии, иммунофлюоресценции и реакция непрямой гемагглютинации. Диагноз кожного и кожно-слизистого лейшманиоза ставят при обнаружении возбудителя в биоптате кожи и при положительной кожной пробе с антигеном лейшманий.

6. Маляриювызывают простейшие рода Plasmodium: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae и Plasmodium ovale. Переносчики инфекции — комары рода Anopheles. Диагноз ставят при выявлении возбудителя в толстой капле или мазке крови больных. Наиболее информативный серологический метод диагностики малярии — метод непрямой иммунофлюоресценции. Выявление антител в титре 1:64 и более указывает на недавнее заражение малярией. Однако в большинстве клинических лабораторий этот метод пока не используется. При проведении массовых исследований применяют реакцию непрямой гемагглютинации. Положительным считается титр антител 1:16 и более. С помощью реакции непрямой гемагглютинации можно определить вид возбудителя малярии.

7. Пневмоцистная пневмония. Возбудитель — Pneumocystis carinii. Заболевают обычно новорожденные, больные с первичными и вторичными иммунодефицитами, в том числе обусловленными иммуносупрессивной терапией. Диагноз основан на микроскопии материала, полученного с помощью пункционной коникотомии, бронхоальвеолярного лаважа или открытой биопсии легкого. Окраску мазков проводят по методу Гомори. Серодиагностика не применяется.

8. Токсоплазмоз. Возбудитель — Toxoplasma gondii. Заражение происходит через фекалии кошек и при употреблении сырого мяса. Инфекция нередко протекает бессимптомно, но может проявляться лихорадкой, спленомегалией, увеличением лимфоузлов. У больных с иммунодефицитами токсоплазмоз проявляется тяжелыми миокардитом, пневмонией, энцефалитом, менингитом или менингоэнцефалитом. Острая инфекция во время беременности может привести к врожденному токсоплазмозу. Диагноз токсоплазмоза обычно ставят по результатам серологического исследования. Чаще всего используются метод непрямой иммунофлюоресценции и реакция непрямой гемагглютинации. Диагностически значимым считается не менее чем четырехкратное повышение титра антител. Для выявления IgM к возбудителю применяются методы прямой и непрямой иммунофлюоресценции и твердофазный ИФА. Антитела к возбудителю появляются через 1—2 нед после начала заболевания, их титр возрастает в течение примерно 6 нед (до 1:600 и выше), затем снижается в течение 6—8 мес. IgG к токсоплазмам могут сохраняться на протяжении всей жизни.

а. Метод непрямой иммунофлюоресценции — наиболее распространенный метод диагностики токсоплазмоза, позволяющий выявить IgG и IgM к Toxoplasma gondii. Титр антител, выявляемых с помощью этого метода, соответствует титру антител, выявляемых в реакции Сейбина—Фельдмана. Диагностически значимым считается титр 1:64 и выше.

б. Реакция Сейбина—Фельдмана.Суть метода заключается в следующем. Ядро и цитоплазма клеток Toxoplasma gondii, не покрытых антителами, в присутствии метиленового синего окрашиваются в темно-синий цвет. Клетки возбудителя, обработанные сывороткой, содержащей антитела к нему, не окрашиваются этим красителем. Диагностически значимым считается не менее чем четырехкратное повышение титра антител. В период разгара инфекции титр антител, выявленных в реакции Сейбина—Фельдмана, обычно достигает 1:1000 и более. Эту реакцию в настоящее время почти не применяют, поскольку она проводится с живыми возбудителями. Предпочитают использовать метод непрямой иммунофлюоресценции.

в. Реакция непрямой гемагглютинации — простой, точный и недорогой серологический метод, который часто применяется для выявления IgG к токсоплазмам. В большинстве лабораторий диагностически значимым считается титр 1:256 и более. Эта реакция может оставаться положительной в течение нескольких лет.

г. Реакция связывания комплемента применяется редко, поскольку ее оценка не стандартизирована. Положительным считается титр антител не менее 1:4. В период разгара заболевания он обычно повышается до 1:32. Реакция связывания комплемента остается положительной в течение нескольких месяцев или лет.

Б. Серодиагностика нематодозовоснована на выявлении паразитов и их яиц в кале. Токсокароз встречается в основном у детей дошкольного возраста, механизм заражения — фекально-оральный. Возбудители токсокароза — Toxocara canis и Toxocara cati — самая частая причина висцеральной формы синдрома larva migrans. Личинки паразита из ЖКТ попадают в кровь и разносятся по организму. Характерные симптомы — лихорадка, бледность, кашель, одышка, сухие хрипы, гепатомегалия, которые обычно сопровождаются эозинофилией, гипергаммаглобулинемией и повышением титра изогемагглютининов. Изредка отмечаются эпилептические припадки. Поскольку яйца токсокар почти никогда не обнаруживаются в кале, диагноз токсокароза ставят при выявлении в сыворотке антител к паразиту. Готовые наборы для твердофазного ИФА можно получить в Центре по контролю заболеваемости.

IX. Диагностика внутриутробных инфекций. К числу особенно опасных внутриутробных инфекций относятся краснуха, инфекции, вызванные цитомегаловирусом и вирусом простого герпеса, сифилис и токсоплазмоз. Течение инфекции у новорожденного может быть разным — от бессимптомного до тяжелого, сопровождающегося поражением внутренних органов к моменту рождения или в период новорожденности. Иммунный ответ плода на инфекцию проявляется повышением синтеза IgM, которые можно выявить в пуповинной крови. О внутриутробной инфекции следует думать, если уровень IgM в пуповинной крови превышает 20 мг%. Поскольку повышение уровня IgM в пуповинной крови может быть обусловлено попаданием в нее материнской крови, уровень IgM определяют повторно после рождения.

А. Врожденная краснуха. Диагноз ставят при выявлении микроцефалии, катаракты, врожденных пороков сердца, гепатоспленомегалии и других проявлений врожденной краснухи у новорожденного, мать которого перенесла краснуху (в том числе если серологические исследования не проводились) в I триместре беременности. Ниже перечислены исследования, подтверждающие диагноз.

1. Выделение вируса в культуре клеток. Для этого используют отделяемое из носа и мочу новорожденного.

2. Уровень IgMв пуповинной крови более 20 мг%.

3. Повышение титра IgG к возбудителю в реакции торможения гемагглютинации. Если IgG материнского происхождения, их титр постепенно снижается. При врожденной инфекции титр антител остается повышенным более 6 мес.

4.Выявление в сыворотке новорожденного IgM к вирусу краснухи. Обычно титр этих антител быстро снижается.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

У человека возбудителями протозойных болезней могут быть некоторые патогенные простейшие животные (тип Protozoa). К их числу относятся: амебиаз, лямблиоз, балантидиаз, вагинальный трихомониаз, лейшманиозы (висцеральный и кожный), малярия, токсоплазмоз, кокцидиоз, пневмоцистоз (интерстициальная пневмония у детей; у ВИЧ-инфицированных выделяют Pneumocysta carinii).

Методы лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых простейшими, обитающими в кишечнике человека (амебы, лямблии, балантидии, кокцидии), идентичны. Из 6 видов амеб, обнаруживаемых в кишечнике человека, патогенен лишь один вид амебы - Entamoeba histolytica, который, помимо язвенного поражения толстой кишки и бессимптомного носительства, может вызывать внекишечные поражения: печени (абсцессы печени, чаще поддиафрагмальные, гнойные гепатиты), легких, головного мозга, кожи и других органов.

Из жгутиковых простейших безусловно патогенной является Lamblia intestinalis, которая вызывает неустойчивый стул, рецидивирующие энтериты, иногда протекающие с дизентериеподобной клиникой, а также поражения печени и желчного пузыря (гепатиты, холециститы, холангиты). Возможно бессимптомное носительство лямблий, которые служат источником заражения здоровых людей.

Из споровиков в кишечнике человека паразитирует один вид -Ysospora belli, вызывающий сравнительно редко встречающийся кокцидиоз. Инфузория - Balantidium coli вызывает у человека балантидиаз, источником инфекции при котором часто являются свиньи; заболевание протекает в виде колитов, часто рецидивирующих, иногда эрозивно-язвенных.

Лабораторный диагноз протозойных заболеваний ставится на основании обнаружения в кале (свежем, теплом), соскобах со слизистой кишки (при сигмоскопии и колоноскопии), в пунктатах абсцессов и других цист и вегетативных форм простейших, правильная идентификация которых и частота находок зависят от квалификации работников клинической лаборатории.

Сходная клиническая картина при различных гельминтозах, а также наличие общих симптомов с заболеваниями желудочно-кишечного тракта другой этиологии (протозоозы, хронические колиты, частые дуодениты и др.) выдвигает на первый план значение лабораторного диагноза.

Для обнаружения гельминтов исследуют фекалии, дуоденальный сок, желчь, ректальную и перианальную слизь, мокроту, мочу, мышечную ткань, кожу, кровь и др. Исследуют фекалии не более суточной давности; берут около столовой ложки из разных мест в чистую стеклянную посуду (например, в хорошо отмытый пенициллиновый флакончик). Сначала фекалии осматривают невооруженным глазом для выявления аскарид, остриц, члеников цестод. Для оценки эффективности дегельминтизации исследуют всю суточную порцию фекалий в период лечения и несколько дней спустя. Фекалии, смешанные с водой, просматривают небольшими порциями в проходящем свете на черном фоне в чашках Петри или черной кювете. Для обнаружения мелких гельминтов (самцов остриц, трихинелл и др.) все подозрительные комочки кала помещают в каплю воды на предметное стекло и просматривают с помощью лупы

Основной поиск яиц и члеников гельминтов проводят после применения специальных способов (отстаивания, обогащения, всплывания и др ) Исследуют фекалии и нативные мазки на предметных стеклах, под микроскопом при малом увеличении (в 60-80 раз) в затемненном поле зрения Подозрительные находки сверяют с оригиналом (имеются специальные атласы или рисунки для идентификации гельминтов)

Для лабораторной диагностики гельминтозов применяются также серологические и аллергологические методы Серологические реакции (РСК) ставят с антигенами из ткани гельминтов (аскарид, трихинелл), на латексе - при эхинококкозе и цистецеркозе головного мозга. РГА применяется для диагностики шистосомозов, трихинеллеза, эхинококкоза.

Внутрикожные аллергические пробы со специально приготовленными аллергенами применяют для диагностики эхинококкоза, филяриоза, парагонимоза Некоторые пациенты эти пробы переносят тяжело, с развитием общих аллергических реакций вплоть до анафилактического шока, что следует учитывать при их назначении (внутрикожные пробы нежелательно проводить лицам с отягощенным аллергоанамнезом)

В стадии обызвествления некоторых гельминтов в тканях и органах для их обнаружения оказался эффективным рентгенологический метод, в частности, для диагностики эхинококкоза (легких, плевры), цистецеркоза (мышц), мочеполового шистосомоза Возможно также применение УЗИ и компьютерной томографии (КТ) при некоторых видах гельминтозов.

Понятие иммунного ответа. Общие принципы иммунодиагностики инфекционных заболеваний. Особенности применяемых методов. Сущность и значение кожных проб. Диагностика вирусных, бактериальных, грибковых и внутриутробных инфекций, паразитарных заболеваний.

Рубрика	Медицина
Вид	реферат
Язык	русский
Дата добавления	04.07.2010
Размер файла	51,2 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

1. Реакция преципитации позволяет выявить IgM, которые появляются на ранних стадиях инфекции и при ее обострении.

2. Реакция связывания комплемента позволяет выявить IgG, которые появляются на поздних стадиях заболевания и могут присутствовать в сыворотке спустя много лет после перенесенного кокцидиоидоза. Одновременное выявление IgG в титре от 1:2 до 1:8 с помощью реакции связывания комплемента и методов иммунодиффузии свидетельствует об острой или недавно перенесенной инфекции.

Выявление IgG в титре 1:16 и более характерно для генерализованной инфекции.

Титр антител определяют повторно через 3 нед. При бессимптомно протекающей легочной форме кокцидиоидоза или легочной форме, сопровождающейся образованием каверн, антитела могут не выявляться. Серологические реакции бывают также отрицательными при исследовании СМЖ больных кокцидиоидозным менингитом.

3. Методы иммунодиффузии по чувствительности и специфичности сопоставимы с реакцией связывания комплемента.

4. Реакция латекс-агглютинации высокочувствительна, но менее специфична и применяется на начальных этапах обследования.

Д. Криптококкоз -- заболевание из группы глубоких микозов, проявляющееся поражением ЦНС, легких или генерализованной инфекцией. Наиболее характерное проявление криптококкоза -- менингоэнцефалит. Особенно высок риск этой инфекции при иммунодефиците.

Антитела к возбудителю в сыворотке не определяют, поскольку они выявляются лишь у трети больных с криптококковым менингитом и иногда присутствуют в сыворотке здоровых.

Диагноз ставят при выявлении Cryptococcus neoformans в посевах и мазках, контрастированных тушью, а также при выявлении криптококковых антигенов в биологических жидкостях, прежде всего СМЖ. Высокочувствительна и специфична реакция латекс-агглютинации с антителами к полисахаридным антигенам капсулы Cryptococcus neoformans. Она дает ложноположительные результаты лишь в присутствии ревматоидного фактора.

Е. Гистоплазмоз. Эта инфекция особенно распространена в центральной части США. Заболевание может протекать с преимущественным поражением легких или в виде генерализованной инфекции, проявляющейся прежде всего менингитом и гепатоспленомегалией.

Диагноз основан на результатах посева. Для него обычно используют биоптаты пораженного органа.

Серологические методы (реакция связывания комплемента и методы иммунодиффузии) подтверждают диагноз: значимым считается не менее чем четырехкратное повышение титра антител или высокий титр при однократном исследовании сыворотки.

Однако результаты серологических исследований надо оценивать только в совокупности с клинической картиной, поскольку реакция связывания комплемента часто бывает ложноположительной.

Последнее объясняется тем, что антитела к гистоплазмам перекрестно реагируют с возбудителями аспергиллеза и североамериканского бластомикоза. В районах распространения гистоплазм антитела к ним выявляются и в сыворотке здоровых. При гистоплазмозе у больных ВИЧ-инфекцией антитела к возбудителю часто отсутствуют.

Ж. Паракокцидиоидоз -- заболевание, распространенное в Латинской Америке. Протекает хронически, характеризуется поражением легких, кожи, слизистых и увеличением лимфоузлов.

Для диагностики заболевания применяют реакцию связывания комплемента, методы иммунодиффузии и твердофазный ИФА. Эти методы информативны и доступны большинству лабораторий.

З. Споротрихоз. Заболевание чаще всего проявляется поражением кожи, подкожной клетчатки (с образованием абсцедирующих узлов), костей, суставов, увеличением лимфоузлов и пневмонией.

Возбудитель обитает в почве и на некоторых видах растений. Заражение обычно происходит через поврежденную кожу.

Диагноз основан на выявлении возбудителя в посеве синовиальной жидкости и биоптатах пораженных участков кожи и других тканей. Серологические методы диагностики не получили широкого распространения.

Диагностика паразитарных заболеваний

Серодиагностика паразитарных заболеваний малоинформативна, поскольку не позволяет отличить острую инфекцию от ранее перенесенной. Серологическое исследование помогает поставить диагноз лишь при некоторых гельминтозах. При подозрении на паразитарное заболевание рекомендуется консультация в Отделе паразитологии Центра по контролю заболеваемости.

А. Диагностика протозойных инфекций

1. Амебиаз -- инфекция, вызванная Entamoeba histolytica. Механизм заражения фекально-оральный. Заражение происходит при употреблении загрязненных пищи и воды. Проявления заболевания могут быть разными -- от бессимптомной инфекции до тяжелого поражения кишечника, абсцесса печени и головного мозга. В диагностике амебиаза применяют метод непрямой иммунофлюоресценции, реакцию непрямой гемагглютинации, двойную радиальную иммунодиффузию, твердофазный ИФА. Высокий титр антител в реакции непрямой гемагглютинации характерен для тяжелых случаев инфекции и амебных абсцессов печени. При бессимптомной инфекции и легких формах заболевания чувствительность серологических методов невысока.

2. Бабезиоз. Это заболевание вызывают простейшие рода Babesia, паразитирующие в эритроцитах. Переносчики инфекции -- клещи. Бабезиозом обычно болеют животные, изредка отмечаются случаи заражения людей. У человека заболевание характеризуется лихорадкой, недомоганием и анемией. Надежные серологические методы диагностики бабезиоза пока не разработаны. Диагноз ставят при обнаружении возбудителя в мазках крови.

3. Сонная болезнь. Возбудители -- Trypanosoma gambiense и Trypanosoma rhodesiense, переносчик инфекции -- муха це-це. Заболевание обычно начинается с общих симптомов, на поздних стадиях развивается менингоэнцефалит. В период разгара заболевания диагноз ставят при выявлении паразита в мазках крови и костного мозга. Недавно разработаны серологические методы диагностики заболевания, основанные на методе непрямой иммунофлюоресценции и твердофазном ИФА.

4. Болезнь Чагаса -- острое или хроническое заболевание, вызванное Trypanosoma cruzi. Человеку передается при укусе клопов семейства Reduviidae. Основные проявления болезни -- лихорадка, недомогание, увеличение лимфоузлов, ахалазия кардии, увеличение размеров пищевода, мегаколон, гепатоспленомегалия и дилатационная кардиомиопатия. В диагностике болезни Чагаса используются реакции преципитации, связывания комплемента и непрямой гемагглютинации, метод иммунофлюоресценции, РИА и твердофазный ИФА. Применение моноклональных антител позволило снизить число ложноположительных результатов, обусловленных перекрестными реакциями с возбудителями лейшманиоза.

5. Лейшманиоз. Возбудители -- внутриклеточные паразиты рода Leishmania, переносчиками которых служат москиты. Лейшмании паразитируют в макрофагах кожи и внутренних органов. Различают 3 клинические формы заболевания: кожную, висцеральную и кожно-слизистую. Кожная проба с антигеном возбудителя позволяет поставить диагноз при любой форме заболевания. Кожные пробы становятся положительными не позднее чем через 3 мес после начала лейшманиоза. В диагностике лейшманиоза, кроме того, используются методы иммунодиффузии, иммунофлюоресценции и реакция непрямой гемагглютинации. Диагноз кожного и кожно-слизистого лейшманиоза ставят при обнаружении возбудителя в биоптате кожи и при положительной кожной пробе с антигеном лейшманий.

6. Малярию вызывают простейшие рода Plasmodium: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae и Plasmodium ovale. Переносчики инфекции -- комары рода Anopheles. Диагноз ставят при выявлении возбудителя в толстой капле или мазке крови больных. Наиболее информативный серологический метод диагностики малярии -- метод непрямой иммунофлюоресценции. Выявление антител в титре 1:64 и более указывает на недавнее заражение малярией. Однако в большинстве клинических лабораторий этот метод пока не используется. При проведении массовых исследований применяют реакцию непрямой гемагглютинации. Положительным считается титр антител 1:16 и более. С помощью реакции непрямой гемагглютинации можно определить вид возбудителя малярии.

7. Пневмоцистная пневмония. Возбудитель -- Pneumocystis carinii. Заболевают обычно новорожденные, больные с первичными и вторичными иммунодефицитами, в том числе обусловленными иммуносупрессивной терапией. Диагноз основан на микроскопии материала, полученного с помощью пункционной коникотомии, бронхоальвеолярного лаважа или открытой биопсии легкого. Окраску мазков проводят по методу Гомори. Серодиагностика не применяется.

8. Токсоплазмоз. Возбудитель -- Toxoplasma gondii. Заражение происходит через фекалии кошек и при употреблении сырого мяса. Инфекция нередко протекает бессимптомно, но может проявляться лихорадкой, спленомегалией, увеличением лимфоузлов. У больных с иммунодефицитами токсоплазмоз проявляется тяжелыми миокардитом, пневмонией, энцефалитом, менингитом или менингоэнцефалитом. Острая инфекция во время беременности может привести к врожденному токсоплазмозу. Диагноз токсоплазмоза обычно ставят по результатам серологического исследования. Чаще всего используются метод непрямой иммунофлюоресценции и реакция непрямой гемагглютинации. Диагностически значимым считается не менее чем четырехкратное повышение титра антител. Для выявления IgM к возбудителю применяются методы прямой и непрямой иммунофлюоресценции и твердофазный ИФА. Антитела к возбудителю появляются через 1--2 нед после начала заболевания, их титр возрастает в течение примерно 6 нед (до 1:600 и выше), затем снижается в течение 6--8 мес. IgG к токсоплазмам могут сохраняться на протяжении всей жизни.

а. Метод непрямой иммунофлюоресценции -- наиболее распространенный метод диагностики токсоплазмоза, позволяющий выявить IgG и IgM к Toxoplasma gondii. Титр антител, выявляемых с помощью этого метода, соответствует титру антител, выявляемых в реакции Сейбина--Фельдмана. Диагностически значимым считается титр 1:64 и выше.

б. Реакция Сейбина--Фельдмана. Суть метода заключается в следующем. Ядро и цитоплазма клеток Toxoplasma gondii, не покрытых антителами, в присутствии метиленового синего окрашиваются в темно-синий цвет. Клетки возбудителя, обработанные сывороткой, содержащей антитела к нему, не окрашиваются этим красителем. Диагностически значимым считается не менее чем четырехкратное повышение титра антител. В период разгара инфекции титр антител, выявленных в реакции Сейбина--Фельдмана, обычно достигает 1:1000 и более. Эту реакцию в настоящее время почти не применяют, поскольку она проводится с живыми возбудителями. Предпочитают использовать метод непрямой иммунофлюоресценции.

в. Реакция непрямой гемагглютинации -- простой, точный и недорогой серологический метод, который часто применяется для выявления IgG к токсоплазмам. В большинстве лабораторий диагностически значимым считается титр 1:256 и более. Эта реакция может оставаться положительной в течение нескольких лет.

г. Реакция связывания комплемента применяется редко, поскольку ее оценка не стандартизирована. Положительным считается титр антител не менее 1:4. В период разгара заболевания он обычно повышается до 1:32. Реакция связывания комплемента остается положительной в течение нескольких месяцев или лет.

Б. Серодиагностика нематодозов основана на выявлении паразитов и их яиц в кале. Токсокароз встречается в основном у детей дошкольного возраста, механизм заражения -- фекально-оральный. Возбудители токсокароза -- Toxocara canis и Toxocara cati -- самая частая причина висцеральной формы синдрома larva migrans. Личинки паразита из ЖКТ попадают в кровь и разносятся по организму. Характерные симптомы -- лихорадка, бледность, кашель, одышка, сухие хрипы, гепатомегалия, которые обычно сопровождаются эозинофилией, гипергаммаглобулинемией и повышением титра изогемагглютининов. Изредка отмечаются эпилептические припадки. Поскольку яйца токсокар почти никогда не обнаруживаются в кале, диагноз токсокароза ставят при выявлении в сыворотке антител к паразиту. Готовые наборы для твердофазного ИФА можно получить в Центре по контролю заболеваемости.

Диагностика внутриутробных инфекций

К числу особенно опасных внутриутробных инфекций относятся краснуха, инфекции, вызванные цитомегаловирусом и вирусом простого герпеса, сифилис и токсоплазмоз. Течение инфекции у новорожденного может быть разным -- от бессимптомного до тяжелого, сопровождающегося поражением внутренних органов к моменту рождения или в период новорожденности. Иммунный ответ плода на инфекцию проявляется повышением синтеза IgM, которые можно выявить в пуповинной крови. О внутриутробной инфекции следует думать, если уровень IgM в пуповинной крови превышает 20 мг%. Поскольку повышение уровня IgM в пуповинной крови может быть обусловлено попаданием в нее материнской крови, уровень IgM определяют повторно после рождения.

А. Врожденная краснуха. Диагноз ставят при выявлении микроцефалии, катаракты, врожденных пороков сердца, гепатоспленомегалии и других проявлений врожденной краснухи у новорожденного, мать которого перенесла краснуху (в том числе если серологические исследования не проводились) в I триместре беременности. Ниже перечислены исследования, подтверждающие диагноз.

1. Выделение вируса в культуре клеток. Для этого используют отделяемое из носа и мочу новорожденного.

2. Уровень IgM в пуповинной крови более 20 мг%.

3. Повышение титра IgG к возбудителю в реакции торможения гемагглютинации. Если IgG материнского происхождения, их титр постепенно снижается. При врожденной инфекции титр антител остается повышенным более 6 мес.

4. Выявление в сыворотке новорожденного IgM к вирусу краснухи. Обычно титр этих антител быстро снижается.

Б. Врожденная цитомегаловирусная инфекция

1. Наиболее надежный диагностический признак -- выделение вируса в культуре клеток. Для этого используют мочу или мазок из зева новорожденного.

2. Четырехкратное возрастание титра антител к цитомегаловирусу в сыворотке новорожденного по сравнению с сывороткой, полученной из пуповинной крови, также подтверждает диагноз. Снижение титра антител свидетельствует о том, что они имеют материнское происхождение.

3. В настоящее время разрабатываются серологические методы выявления цитомегаловируса в пуповинной крови.

В. Врожденная инфекция, вызванная вирусом простого герпеса. Диагноз подтверждается при выделении вируса в культуре клеток (для этого используют соскоб с пораженных участков кожи) и четырехкратном повышении титра антител в течение заболевания. Снижение титра антител свидетельствует о том, что они материнские.

Г. Врожденный сифилис. Диагноз ставят на основании характерных клинических признаков раннего врожденного сифилиса: сифилитический ринит, сифилитическая пузырчатка, анемия и гепатоспленомегалия -- и результатов серологических исследований. Последние включают как нетрепонемные (VDRL), так и трепонемные (реакция иммунофлюоресценции-абсорбции) тесты. Положительные результаты этих тестов могут быть обусловлены примесью материнских антител. Если антитела материнские, то их титр в материнской крови обычно выше, чем в пуповинной. В отсутствие симптомов лечение откладывают до повторного определения антител с помощью VDRL. Его проводят через 1 мес -- не менее чем четырехкратное повышение титра антител свидетельствует о врожденном сифилисе. Разработанный недавно метод определения IgM к Treponema pallidum в пуповинной крови не нашел широкого применения.

1. Повышение титра антител к Treponema pallidum в пуповинной крови (по результатам VDRL и реакции иммунофлюоресценции-абсорбции) не позволяет с точностью поставить диагноз врожденного сифилиса, а может лишь свидетельствовать о сифилисе у матери.

2. Если результаты VDRL и реакции иммунофлюоресценции-абсорбции у матери положительны и она не лечилась или прошла неполный курс лечения сифилиса, новорожденному проводят люмбальную пункцию и ставят VDRL с СМЖ -- при положительном результате проводят лечение нейросифилиса.

3. При подозрении на врожденный сифилис в отсутствие его клинических проявлений VDRL проводят ежемесячно в течение 3 мес. При четырехкратном повышении титра антител к Treponema pallidum начинают лечение сифилиса.

Д. Врожденный токсоплазмоз. Заражение плода обычно происходит в III триместре беременности, в I триместре риск заражения минимален. Антитела к возбудителю в сыворотке новорожденного, выявленные с помощью реакции Сейбина--Фельдмана или метода непрямой иммунофлюоресценции, могут иметь материнское происхождение. Следует учитывать, что материнские IgG выявляются в крови ребенка в течение 6--12 мес. Диагноз врожденного токсоплазмоза ставят на основании клинической картины и следующих серологических показателей.

1. Уровень IgM к Toxoplasma gondii в пуповинной крови не менее 20 мг%.

2. Постоянно высокий титр IgG, определяемых с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции.

3. Повышение титра IgM до 1:2 и более в сыворотке новорожденного.

1. Аллергология и Иммунология . Под ред. К.В. Никитин - Ф48 М.: Медицина, 1985. - 635 с.