Petrifilm salmonella express system

3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (3M™ Petrifilm™ SALX)
Компания 3М™ разработала систему 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System для экспрессного обнаружения и биохимического подтверждения сальмонелл в продуктах питания, сырье и смывах. Система не требует наличия специального оборудования, исключает длительные рутинные процедуры посева на чашки Петри, позволяет провести выделение и биохимическое подтверждение сальмонелл в течение 44 часов, что в два раза быстрее по сравнению с традиционным методом.

Система для обнаружения сальмонелл включает:
- Среду для обогащения сальмонелл: основа среды (3M™ Salmonella Enrichment Base) и селективная добавка (3M™ Salmonella Enrichment Supplement)

- Петрифильм для обнаружения сальмонелл (3M™ Petrifilm™ Salmonella Express Plate) – готовая дифференциально-диагностическая среда (селективный хромогенный агар) на подложке

- Диск для экспрессного биохимического подтверждения сальмонелл (3M™ Petrifilm™ Salmonella Express Confirmation Disk)

Ход анализа:
1) Добавить 25 г образца к 225 мл селективной среды обогащения сальмонелл (основа среды - 3M Salmonella Enrichment Base и селективная добавка - 3M Salmonella Enrichment Supplement). Инкубировать 18 часов при 41,5°C.

2) Перенести 0,1 мл культуральной жидкости со среды обогащения к 10 мл селективного бульона Раппапорт-Вассилиадис RV R10. Инкубировать 8 часов при 41,5°C.

Примечание: пункт (2) применяется только для продуктов с высоким показателем ОМЧ ≥ 104 клеток/грамм (сырые продукты); для продуктов с низким показателем ОМЧ ≤ 104 клеток/грамм (термически обработанные продукты) следует пропустить пункт (2) и сразу перейти к пункту (3).

3) Посеять петлей на поверхность петрифильма 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Plate. Инкубировать 24 ± 2 часа при 41,5°C.

4) Поместить подтверждающий диск на петрифильм для биохимического подтверждения сальмонелл и инкубировать 4 часа при 41,5°C и учесть результаты.

- Ускоренный метод. Обнаружение и подтверждение сальмонелл за 44 часа

- Биохимическое подтверждение колоний за 4 часа. Система 3M Petrifilm Salmonella Express System позволяет сразу же провести биохимическое подтверждение всех характерных колоний сальмонелл на подтверждающем диске. Нет необходимости пересевать каждую колонию на чашки с агаром или отправлять образцы в референсную лабораторию для биохимического подтверждения.

- Надежность результатов. Ошибки, которые случаются при приготовлении питательных сред, при использовании петрифильмов исключены. Используется уже готовая среда на подложке с проверенными характеристиками качества.

- Длительный срок хранения. Срок годности системы 3M Petrifilm Salmonella Express Plates значительно превосходит допустимые сроки хранения для чашек Петри с готовой агаризованной средой.

- Компактность. Петрифильмы занимают на 85% места меньше по сравнению с готовыми средами на чашках Петри, освобождая место в термостатах, холодильниках, ламинарах и автоклавах (при утилизации отходов).

Система 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System позволяет повысить производительность и эффективность работы в лаборатории, получить надежные и точные результаты.

Сертификация
Ускоренный метод обнаружения сальмонелл с использованием 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System сертифицирован организацией AOAC, №061301.

Купить 3M Petrifilm Salmonella Express (SALX) Plate (Кат.№ 6536, 6538) – Петрифильмы для обнаружения сальмонелл можно в компании Агролаб и заказать доставку в следующие города: Абакан, Анадырь, Архангельск, Астрахань, Барнаул, Белгород, Биробиджан, Благовещенск, Брянск, Великий Новгород, Владивосток, Владикавказ, Владимир, Волгоград, Вологда, Воронеж, Горно-Алтайск, Грозный, Екатеринбург, Иваново, Ижевск, Иркутск, Йошкар-Ола, Казань, Калининград, Калуга, Кемерово, Киров, Кострома, Краснодар, Красноярск, Курган, Курск, Кызыл, Липецк, Магадан, Магас, Майкоп, Махачкала, Москва, Мурманск, Нальчик, Нарьян-Мар, Нижний Новгород, Новосибирск, Омск, Оренбург, Орёл, Пенза, Пермь, Петрозаводск, Петропавловск-Камчатский, Псков, Ростов-на-Дону, Рязань, Санкт-Петербург, Салехард, Самара, Саранск, Саратов, Севастополь, Симферополь, Смоленск, Ставрополь, Сыктывкар, Тамбов, Тверь, Томск, Тула, Тюмень, Улан-Удэ, Ульяновск, Уфа, Хабаровск, Ханты-Мансийск, Чебоксары, Челябинск, Черкесск, Чита, Элиста, Южно-Сахалинск, Якутск, Ярославль

Система для обнаружения сальмонелл включает:

- Среду для обогащения сальмонелл: основа среды (3M™ Salmonella Enrichment Base) и селективная добавка (3M™ Salmonella Enrichment Supplement)

- Диск для экспрессного биохимического подтверждения сальмонелл (3M™ Petrifilm™ Salmonella Express Confirmation Disk)

Ход анализа:

1) Добавить 25 г образца к 225 мл селективной среды обогащения сальмонелл (основа среды - 3M Salmonella Enrichment Base и селективная добавка - 3M Salmonella Enrichment Supplement). Инкубировать 18 часов при 41,5°C.

Примечание: пункт (2) применяется только для продуктов с высоким показателем ОМЧ ≥ 10 4 клеток/грамм (сырые продукты); для продуктов с низким показателем ОМЧ ≤ 10 4 клеток/грамм (термически обработанные продукты) следует пропустить пункт (2) и сразу перейти к пункту (3).

3) Посеять петлей на поверхность петрифильма 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Plate. Инкубировать 24 ± 2 часа при 41,5°C.

Преимущества:

- Ускоренный метод. Обнаружение и подтверждение сальмонелл за 44 часа

Информация для заказа:

Кат. №

Наименование

Количество

3M™ Salmonella Enrichment Base – Основа среды для обогащения сальмонелл

3M™ Salmonella Enrichment Supplement – Селективная добавка к среде обогащения

3M™ Rappaport-Vassiliadis R10 (R-V R10) Broth – Среда Раппапорт-Вассилиадис для селективного обогащения сальмонелл

3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Plate – Петрифильмы для обнаружения сальмонелл

3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Confirmation Disk – Диск для биохимического подтверждения сальмонелл

3M™ Petrifilm™ Flat Spreader – Распределитель для 3M™ Petrifilm™ (SALX)

- Диск для экспрессного биохимического подтверждения сальмонелл (3M™ Petrifilm™ Salmonella Express Confirmation Disk)

Примечание: пункт (2) применяется только для продуктов с высоким показателем ОМЧ ≥ 10 4 клеток/грамм (сырые продукты); для продуктов с низким показателем ОМЧ ≤ 10 4 клеток/грамм (термически обработанные продукты) следует пропустить пункт (2) и сразу перейти к пункту (3).

3) Посеять петлей на поверхность петрифильма 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Plate. Инкубировать 24 ± 2 часа при 41,5°C.

Преимущества:

- Ускоренный метод. Обнаружение и подтверждение сальмонелл за 44 часа

Информация для заказа:

Кат. №

Наименование

Количество

3M™ Salmonella Enrichment Base – Основа среды для обогащения сальмонелл

3M™ Salmonella Enrichment Supplement – Селективная добавка к среде обогащения

3M™ Rappaport-Vassiliadis R10 (R-V R10) Broth – Среда Раппапорт-Вассилиадис для селективного обогащения сальмонелл

3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Plate – Петрифильмы для обнаружения сальмонелл

3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Confirmation Disk – Диск для биохимического подтверждения сальмонелл

3M™ Petrifilm™ Flat Spreader – Распределитель для 3M™ Petrifilm™ (SALX)

Статья в журнале "Молочная промышленность", №4, 2014

Ускоренный метод обнаружения сальмонелл в пищевых продуктах с использованием петрифильмов 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System

Глобальный мониторинг за пищевыми инфекциями, проводимый ВОЗ, показал, что 47 % всех вспышек были вызваны сальмонеллами, причем 34 % связаны с потреблением куриного мяса [5]. Источниками инфекции также могут быть молоко, сливочное масло, сыр: в молоке сальмонеллы выживают до 20 дней, в сливочном масле – 4 мес, в сырах – 1 год, в замороженном мясе – 2–3 года [6]. Основной путь заражения при сальмонеллезе – алиментарный. Факторами передачи возбудителей сальмонеллеза являются, как правило, продукты животного происхождения. В настоящее время чаще всего заболевания возникают при употреблении в пищу инфицированных яиц или продуктов, в состав которых входят яйца. Ряд заболеваний связан с инфицированным сальмонеллами мясом и мясопродуктами. Инфицированными могут быть и продукты растительного происхождения (овощи, фрукты, ягоды), а также дрожжи, кондитерские красители. Даже при интенсивном размножении в пищевых продуктах сальмонеллы не изменяют их вкус, запах или внешний вид [1]. Определение сальмонелл в пищевых продуктах и сырье, а также различных объектах окружающей среды является одним из ключевых звеньев многоуровневой системы профилактики острых кишечных инфекций вообще и сальмонеллеза в частности.

Классический метод определения сальмонелл

При наличии типичных колоний, подозрительных на принадлежность к роду Salmonella, время анализа существенно увеличивается. Репрезентативное число типичных колоний отсевают на среду Клиглера или Олькеницкого (18±2 ч), затем при наличии типичных свойств выполняют биохимическую и при необходимости серологическую идентификацию вначале до рода, затем до серотипа (не менее 48 ч). Таким образом, окончательный положительный ответ при использовании классического метода получают в среднем через 140–160 ч.

Не следует также забывать о трудоемкости метода, связанной прежде всего с приготовлением, хранением и утилизацией питательных сред. Для исследования каждого образца используется одна среда неселективного обогащения, две жидкие среды селективного обогащения и по две чашки каждой из двух плотных селективных сред. При наличии типичного роста количество сред для идентификации будет исчисляться десятками пробирок и чашек.

Система ускоренного обнаружения сальмонелл
Несмотря на недостатки, у бактериологического метода есть главное преимущество перед экспресс-методами на основе иммунологических и молекулярно-биологических технологий. Классический метод позволяет оценить жизнеспособность целевых микроорганизмов, а значит, их реальную опасность, а также обладает самой высокой чувствительностью из существующих методов исследования. Поэтому усилия компаний, занятых в сфере лабораторного бизнеса, направлены на совершенствование, упрощение и ускорение бактериологического метода.

Для ускорения процедуры анализа в состав современных питательных сред помимо селективных добавок, подавляющих рост нецелевой микрофлоры, вносятся специальные хромогенные добавки, позволяющие определять маркеры, высокоспецифичные для той или иной группы целевых микроорганизмов. Использование таких добавок дает возможность облегчить учет и сократить длительность анализа за счет исключения этапа идентификации. В хромогенных средах для определения сальмонелл чаще всего используются хромогенные добавки на основе пропиленгликоля, который сальмонеллы способны разлагать, в отличие от других бактерий.

Еще одним перспективным решением, упрощающим процедуру бактериологического анализа, является использование питательных сред на специальных подложках. Срок хранения таких сред не уступает сухим, а способ применения заметно проще, так как исключаются этапы приготовления, стерилизации и разливки, нет необходимости в подготовке посуды, а инокуляция пробы в большинстве случаев не требует сложных манипуляций.

Компания 3М (США) разработала тест-системы 3M™ Petrifilm™ (петрифильмы) – питательные среды на подложке. Петрифильмы предназначены для санитарно-микробиологического контроля пищевых продуктов и широко используются во всем мире. Только в странах EC тест-пластины 3M™ Petrifilm™ используют более 3000 производителей. С 2011 г. 3M™ Petrifilm™ рекомендованы Роспотребнадзором РФ для применения в производственных лабораториях, контролирующих производственное сырье и пищевые продукты, а также в испытательных лабораториях Роспотребнадзора и Россельхознадзора, сертификационных центрах и других организациях, аккредитованных на право проведения микробиологических исследований [4]. Тест-системы 3M™ Petrifilm™ позволяют определять такие показатели микробиологического качества пищевых продуктов, как КМАФАнМ, дрожжи и плесени, БГКП (ЛКП), E.coli, S.aureus, Listeria spp. и молочнокислые бактерии.

В 2013 г. компания 3М анонсировала новую тест-систему 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System , предназначенную для ускоренного определения сальмонелл бактериологическим методом (рис. 1). Компоненты тест-системы 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System приведены в табл. 2. Данная тест-система соединяет в себе элементы классического метода с преимуществами питательных сред на подложках и подразумевает два алгоритма исследования в зависимости от общей степени контаминации образцов. Сильно контаминированными считаются образцы, в которых уровень КМАФАнМ превышает 10 4 КОЕ/г. Образцами с низкими уровнями контаминации, как правило, являются пищевые продукты, прошедшие термическую обработку.

Первичное обогащение подготовленного образца осуществляется в фирменной среде обогащения – 3M™ Salmonella Enrichment Base, в которую перед использованием добавляется специальная ростовая добавка – 3M™ Salmonella Enrichment Supplement. Образцы инкубируют 18 ч при 41,5 °C. Далее обогащенные образцы с низкой степенью контаминации высевают петлей на заранее подготовленные подложки 3M™ Petrifilm™ SalmonellaExpress (SALX) Plate для получения изолированных колоний (рис. 2). Посевы инкубируют 24 ± 2 ч при 41,5 °C. При исследовании образцов с высокой степенью фоновой контаминации обогащенный образец перед высевом на подложку подвергают дополнительному этапу селективного обогащения в среде Раппопорт–Вассилиадиса в течение 8 ч при 41,5 °С [2].

После инкубации посевы на подложках просматривают на наличие типичных колоний: красных колоний, ассоциированных с зоной пожелтения вокруг колонии; красных, ассоциированных с пузырьками газа; красных колоний, обладающих обоими признаками. При отсутствии типичных колоний выдается отрицательный результат, время получения которого составит для низкоконтаминированных образцов 38–44 ч, а для высококонтаминированных – 48–52 ч, что в 2 раза быстрее по сравнению с классическим методом (см. табл. 1). При наличии типичных колоний их отмечают маркером на пленке, покрывающей питательную среду на подложке, и проводят биохимическую идентификацию путем наложения на посев специального диска 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Confirmation Disk, покрывающего всю площадь посева (см. рис. 2). Подложку вместе с диском инкубируют 4 ч при 41,5 °C. Сальмонеллами будут считаться бактерии, образующие типичные колонии, которые при инкубации с диском меняют свой цвет с красного на черно-синий [6].

Таким образом, использование 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System позволяет получить биохимически подтвержденный положительный результат уже через 42–56 ч, что в 3 раза быстрее по сравнению с классическим методом (см. табл. 1).

Система 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System – мнение независимых экспертов
Качество петрифильмов 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System подтверждено путем проведения сравнительных испытаний с методами, регламентированными законодательством США, и референсными методами, регламентированными международными организациями (ИСО, АОАС).

Сравнительное испытание тест-системы 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System провела независимая компания Q Laboratories, Inc. (Цинциннати, шт. Огайо), специализирующаяся на проведении подобных испытаний. В отчете этой компании [7] приведены результаты сравнения эффективности 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System с американскими стандартами USDA/FSIS MLG 4.05 (2011) Isolation and Identification of Salmonella from Meat, Poultry, Pasteurized Eggs and Catfish Products и FDA/BAM Chapter 5 Salmonella, а также стандартом ISO 6579: Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp. Исследования были выполнены согласно требованиям протокола апробации новых методов, рекомендованного AOAC.

Ускоренным и референсным методами исследовали по 25 образцов каждого из 8 видов пищевых продуктов и сырья (куриный, говяжий и свиной фарши, замороженные сырые креветки, пастеризованные яйца, готовые куриные нагетсы, шпинат, сухой корм для собак), а также один объект окружающей среды (смывы с поверхности нержавеющей стали). В каждой серии образцов исследовали 5 незараженных образцов в качестве отрицательного контроля и 20 образцов, зараженных тестовыми штаммами сальмонелл в низких концентрациях (0,2–2 КОЕ/образец).

Проведенные исследования показали отсутствие статистически достоверных различий между результатами 3M™ Petrifilm Salmonella Express System и полученными традиционными референсными методами. Более того, в ряде случаев (при исследовании куриного фарша, сырых замороженных креветок, свежего шпината и сухого корма для собак) методом 3M™ Petrifilm Salmonella Express System сальмонеллы выделялись с частотой, превышающей результаты традиционных методов.

В отчете подчеркиваются преимущество в скорости выполнения исследования методом 3M™ Petrifilm Salmonella Express System по сравнению с традиционными методами и большая простота выполнения исследования.

3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System – инновационная тест-система для санитарно-микробиологического контроля продуктов питания, способна обеспечить достоверный надежный результат, не уступающий результатам референсных методов. Тест-система 3M™ Petrifilm Salmonella Express System обладает рядом преимуществ, позволяющих увеличить эффективность и производительность работы:

- ускоренное получение надежных результатов (в 2–3 раза быстрее по сравнению с классическим методом);
- исключаются этапы приготовления, стерилизации и разливки питательных сред;
- нет необходимости в подготовке посуды;
- процедура посева значительно упрощена;
- занимают мало места при хранении и утилизации;
- сроки хранения не уступают срокам хранения сухих сред;
- упрощение процедуры посева, стандартизация учета результата позволяет снизить долю ошибок, вызванных человеческим фактором, и высвободить высококвалифицированный персонал лаборатории для выполнения других задач;
- ускоренный метод обнаружения сальмонелл с использованием 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System сертифицирован международной организацией AOAC (Association of Analytical Communities).

Все вышеизложенное делает тест-систему 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System крайне привлекательным инструментом при определении сальмонелл для всех микробиологов, занятых в сфере контроля продуктов питания и других объектов окружающей среды.

Ключевые слова: сальмонеллы, анализ воды, производственный контроль, экспресс-методы.

В настоящей статье мы продолжаем рассказывать о собственном опыте использования в санитарно-бактериологическом анализе воды продукции американской компании 3М под общей торговой маркой Petrifilm®, кторая все шире завоевывает российский рынок расходных материалов и оборудования для санитарной микробиологии, особенно в сфере контроля пищевых продуктов и сырья. Тест-системы Petrifilm® представляют собой сухие питательные среды на специальных пластиковых подложках. Такие тест-системы являются одним из перспективных решений, упрощающих процедуру бактериологического анализа. Срок хранения сред на подложках не уступает сроку хранения сухих сред, а способ применения заметно проще, так как исключаются этапы приготовления, стерилизации и разливки, нет необходимости в подготовке посуды, а инокуляция пробы, в большинстве случаев, не требует сложных манипуляций. На рынке питательных сред представлен широкий ассортимент подобной продукции. В настоящей работе мы представляем результаты апробации пригодности тест-системы 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System для использования в санитарно-микробиологическом исследовании различных типов вод и сравнения ее эффективности с классическим методом.

Новая тест-система 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX), предназначенная для ускоренного определения сальмонелл бактериологическим методом, была анонсирована в 2013 году и стала продолжением экспансии продуктов 3M™ Petrifilm™ на рынке средств микробиологического контроля.

Salmonella Express System (SALX) позиционируется, прежде всего, как тест-система для контроля пищевых продуктов, однако производитель заявляет о ее пригодности и для исследования смывов с поверхностей различных объектов [4]. Данная тест-система соединяет в себе элементы классического метода с преимуществами питательных сред на подложках и подразумевает два алгоритма исследования для слабо и сильно контаминированных образцов (рис. 1). Сильно контаминированными считаются образцы, уровень КМАФАнМ в которых превышает 104 КОЕ/г(мл).

Первичное обогащение подготовленного образца осуществляется в фирменной среде обогащения - 3M Salmonella Enrichment Base, в которую перед использованием добавляется специальная селективная добавка - 3M Salmonella Enrichment Supplement. Образцы инкубируют 18 часов при 41,5°C. Далее обогащенные образцы с низкой степенью контаминации высевают петлей на заранее подготовленные подложки 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Plate для получения изолированных колоний (рис.2). Посевы инкубируют 24 ± 2 часа при 41,5°C.

При исследовании образцов с высокой степенью фоновой контаминации обогащенный образец перед высевом на подложку подвергают дополнительному этапу селективного обогащения в среде Раппопорт-Вассилиадис в течение 8 часов при 41,5°С.

После инкубации посевы на подложках просматривают на предмет наличия типичных колоний: красных колоний, ассоциированных с зоной пожелтения вокруг колонии, красных колоний, ассоциированных с пузырьками газа либо красных колоний, обладающих обоими признаками (рис. 3).

При отсутствии типичных колоний выдается отрицательный результат, время получения которого составит для малоконтаминированных образцов 38-44 часа, а для высококонтамини рованных - 48-52 часа, что в два раза быстрее по сравнению с классическим методом (таблица 1).

При наличии типичных колоний их отмечают маркером на пленке, покрывающей питательную среду на подложке, и проводят их биохимическую идентификацию путем наложения на посев специального диска 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Confirmation Disk, покрывающего всю площадь посева. Подложку вместе с диском инкубируют 4 часа при 41,5°C. Сальмонеллами будут считаться бактерии, образующие типичные колонии, которые при инкубации с диском меняют свой цвет с красного на черно-синий.

Таким образом, использование 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX) позволяет получить биохимически подтвержденный положительный результат уже через 42-56 часов, что в три раза быстрее по сравнению с классическим методом (таблица 1).

Материалы и методы

Две порции по 100 мл стерильной деионизованной воды заражали двумя вариантами смесей целевых и не целевых штаммов и фильтровали через мембранные фильтры (МФ) 0,45 мкм Millipore серии F3NA63463. МФ со сконцентрированными образцами помещали в 100 мл среды обогащения SALX с селективной добавкой и инкубировали 18-20 часов при (42±1,0)°С. Далее по 0,1 мл каждой обогащенной смеси пересевали в 10 мл среды Rappoport-Vassiliadis R10 broth (далее RVS) серии 2248306, согласно инструкции по исследованию высококонтаминированных проб. Инкубировали 24 часа при (42±1,0)°С. После первичного обогащения, а также после 8 и 24 часов вторичного обогащения в RVS из каждого образца модельной смеси делали высевы параллельно на подготовленные подложки SALX и на классические среды XLT4-agar (далее XLT4) серии vm512719 311 и висмут-сульфитный агар (далее ВСА) серии 209172. Идентификацию типичных колоний выполняли методом SALX при помощи идентификационного диска SALX (серии КА 2015-03) и классическим методом, включая серотипирование. Параллельно такие же модельные смеси исследовались классическим методом согласно [3].

На втором этапе мы оценивали эффективность 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX) на пробах природных и сточных вод. 2 л проб природных вод и 100 мл проб сточных вод концентрировали на достаточном количестве МФ Millipore 0,45 мкм серии F3NA63463, которые помещали в 100 мл среды обогащения SALX. Дальнейшее исследование проводили по схеме, описанной выше для модельных образцов, с тем отличием, что высев после первичного обогащения не проводился. Параллельно такой же объем пробы исследовался классическим методом согласно [3]. В качестве среды неселективного обогащения использовалась забуференная пептонная вода (далее БПВ) серии vm432928 228, а в качестве второй среды селективного обогащения Selenite Cystine Broth (далее SCB) серии vm546609 328. Схема опыта отражена на рис. 4.

Полученные результаты

При апробации 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX) на модельных суспензиях в посевах обеих смесей после первичного обогащения на подложках SALX обнаружены типичные колонии сальмонелл, соответствующие описанию производителя (точечные, красно-кориченевые с желтым ореолом), которые после биохимической идентификации при помощи диска SALX подтвердились как сальмонеллы.

В посевах модельной смеси №1 признаки постороннего роста не обнаруживались ни на подложках SALX, ни на высевах со среды обогащения SALX на классические среды, ни при классическом исследовании.

В посевах смеси №2 признаки постороннего роста наблюдались только при высеве со среды обогащения SALX на XLT4. При этом колонии нецелевых штаммов не составляли проблемы для дальнейшей идентификации.

При исследовании классическим методом посторонний рост также наблюдался в комбинациях с XLT4, но он стал проблемой только в комбин ции SCB - XLT4. Для дальнейшей идентификации были доступны только 2 колонии.

Из каждого варианта посева смеси №2 после 24 часового обогащения на RVS и из посевов классическим методом мы сняли по 3-6 типичных колоний для дальнейшей биохимической и серологической идентификации. Результаты представлены в таблице 3.

Результаты оценки эффективности 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX) на пробах природных и сточных вод представлены в таблице 4. Цветом обозначены ячейки с полжительным результатом, а цифра в ячейке отражает количество серотипов сальмонелл, идентифицированных в пробе. Всего было исследовано 8 проб сточной воды и 5 проб природной. Классическим методом сальмонеллы были обнаружены в 6 пробах сточной и 1 пробе природной воды, тогда как методом SALX только в 1 пробе сточной воды после 8 часового вторичного обогащения и в 3 пробах после 24 часового обогащения в RVS.

Обсуждение результатов

При исследовании модельных суспензий целевых и нецелевых штаммов в соотношении 1:10000 тест-система 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX) показала неплохие результаты и соответствовала параметрам, заявленным производителем. Однако классическим методом из посева модельных смесей были выделены оба внесенные штамма сальмонелл, тогда как методом SALX только один - S.abony. Это свидетельствует о неодинаково благоприятных условиях сред SALX для разных серотипов сальмонелл.

В отличие от исследования модельных суспензий эталонных культур при исследовании проб реальных водных объектов тест-стстема 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX) продемонстрировала крайне низкую чувствительность и специфичность. Если методом ИСО сальмонеллы были обнаружены в 7 пробах из 13, то при использовании тест-системы SALX после 8 часов обогащения сальмонеллы были обнаружены только в одной пробе, а после 24 часов обогащения только в трех образцах из 13. Кроме того, система SALX также уступала и по количеству выделенных серотипов сальмонелл в положительных пробах (таблица 4).

Становится очевидным, что при исследовании проб природной и сточной воды 8 часового обогащения в среде RVS недостаточно и требуется полноценное обогащение 24 часа, что на сутки удлиняет заявленное производителем время анализа. Но даже при этом чувствительность системы SALX остается низкой и существенно уступает классическому методу.

Основная причина низкой чувствительности системы SALX, на наш взгляд, кроется в избыточной ингибирующей активности на целевые штаммы самих подложек Petrifilm® SALX. Этот тезис подтверждают результаты параллельного высева из системы обогащения SALX на традиционные среды, которые представлены в таблице 5.

При высеве на традиционные среды эффективность метода оказалась сравнима с методом ИСО, однако при этом терялись преимущества, которые дают сухие подложки Petrifilm®.

Второй по важности причиной, на наш взгляд, является отсутствие этапа неселективного обогащения, значимость которого мы уже демонстрировали в своих предыдущих работах [1, 2]. Отдельно хочется остановиться на одном из самых слабых мест тест-системы 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX), на ее дифференцирующих свойствах, которые существенно уступают классическим средам (рис. 5).

Колонии, вырастающие на подложках, очень мелкие, а типичные колонии от нетипичных отличает только наличие желтого ореола или пузырьков газа (рис. 3). В ряде случаев типичные колонии легко различимы, но при большом скоплении нетипичной флоры или сильном газообразовании дифференцирующие признаки колоний искажаются и их невозможно достоверно определить. Как следствие, для надежной идентификации подозрительных и сомнительных колоний требуется получение субкультур подозрительных клонов с последующей биохимической и серологической идентификацией классическим способом, а не способом, который используется в системе SALX. Следовательно, при отсутствии типичных колоний время анализа удлиняется, так как идентификация будет занимать столько же времени, сколько и в классическом методе.

Выводы:

Подложки SALX обладают всеми традиционными для подложек Petrifilm™ преимуществами перед классическими и готовыми средами:
- простотой приготовления и использования;
- компактностью при хранении, инкубации и утилизации;
- длительными сроками хранения.
Дифференцирующие свойства подложек Petrifilm™ SALX очень низкие и уступают классическим средам:
- из-за скудности дифференцирующих признаков;
- из-за микроскопического размера колоний;
- из-за возможного искажения свойств колоний.

При исследованиях проб воды 8 -часового селективного обогащения недостаточно.

Низкая эффективность тест-системы Petrifilm™ Salmonella Express System, обусловлена, прежде всего, высокой ингибирующей активностью подложек Petrifilm™ SALX.

На основании этого можно сделать вывод о том, что использование тест-систем Petrifilm™ Salmonella Express System может ускорить выполнение анализа по определению сальмонелл, как заявлено производителем, при условии преобладания сальмонелл в обогащенной смеси над нецелевыми микроорганизмами. Однако, учитывая низкую чувствительность системы и низкие дифференцирующие свойства, мы считаем ее малопригодной для санитарно-микробиологического контроля воды.

Efficiency comparison of 3M Petrifilm Salmonella Express System classical methods for the determination of Salmonella in water, on model suspensions and natural samples

The article is devoted to the assessment of the feasibility of the test system 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX) for the determination of Salmonella within the sanitary/microbiological control of waters of different type. In the study of model suspensions of test microorganisms test system SALX has demonstrated satisfactory results, although it was allocated only one of the two model Salmonella strains.
The analysis of samples natural water by test/SALX system was ineffective. Its sensitivity was significantly less than ones of the classical method of cultivation, primarily due to the high inhibiting activity themselves substrates 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Plate. The differentiating properties of the substrate, is also substantial/ ly inferior to the classic cultivation methods, because of the small size of the colonies, the scarcity of differentiating features and their possible distortions typical Salmonella signs with copious extraneous growth.
The necessity for further identification of suspect colonies and the necessity for 24 hour selective enrichment instead of the 8 hour claimed, negates the advantages of the 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (SALX) in the speed of analysis.

Keywords: salmonella, water analysis, production control, rapid methods.

Seleznev Alexander Sergeevich, PhD, associate Professor of the First MGMU them. I. M. Sechenov. 119048, Moscow, St. Trubetskaya, 8.

Читайте также: