Стафилококковый реагент содержащий белок

Реакция коагглютинации (РКОА) — быстрый, удобный и технически простой метод выявления и типирования микроорганизмов, а также обнаружения их растворимых антигенов и токсинов.

РКОА с успехом применяется для диагностики сальмонеллеза, иерсиниозов, бруцеллеза, пастереллеза, сапа, мелиоидоза, вирусов.

Принцип реакции. Белок А (видоспецифический протеин) золотистого стафилококка обладает способностью соединяться с Fc-фрагментом IgG человека и ряда млекопитающих, в том числе лабораторных животных. При этом Fab-фрагменты антител остаются свободными и взаимодействуют с гомологичными антигенами.

Основные преимущества РКОА: 1) высокая экономичность (в 50—250 раз дешевле других иммунологических методов); 2) довольно высокая чувствительность; 3) простота постановки (отсутствие необходимости в дорогом оборудовании для приготовления реагентов и учета реакций).

При подготовке и проведении РКОА можно выделить три основных этапа:

• получение активной и стабильной по содержанию белка А взвеси золотистого стафилококка;
• определение требований к иммунной сыворотке, используемой для сенсибилизации стафилококка, а также проведение процесса сенсибилизации;
• постановка реакции и учет результатов.

Получение активной и стабильной по содержанию белка А взвеси золотистого стафилококка. Присутствие белка А является видовым признаком золотистого стафилококка, однако в качестве продуцента обычно используют S. aureus (штамм Cowan 1), наиболее богатый белком А. Приготовление из него реагента для коагглютинации заключается в предварительной обработке клеток, обеспечивающей закрепление на их поверхности белка А и предупреждающей потерю активности в процессе длительного хранения суспензии клеток.

Штамм Cowan 1 можно культивировать как на жидких, так и на плотных питательных средах.

Использование жидкой питательной среды. Суточную агаровую культуру штамма Cowan 1 засевают в жидкую пептонно-дрожжевую среду и выращивают в течение 12…14 ч при усиленной аэрации (встряхивание на шутгель-аппарате при 100 движениях в 1 мин). Это способствует накоплению белка А.

Пептонно-дрожжевую среду готовят по специальной прописи: пептон — 10 г, дрожжевой экстракт — 5 г, глюкоза — 2 г, двузамещенный фосфат калия — 3 г, дистиллированная вода — 1 л. Среду стерилизуют в течение 30 мин при 115 °С; pH после этого составляет 7,2…7,4. Посевная доза — смыв с одного скошенного агара на 2 л питательной среды.

Бактериальные клетки осаждают центрифугированием в течение 15 мин при частоте вращения 3000 мин -1 и дважды отмывают от питательной среды в ФБР (pH 7,2…7,4). Измеряют сырую массу бактерий и доводят до 10%-й концентрации с помощью ФБР. Взвесь отмытых микробов обезвреживают 0,5%-м раствором формалина в течение 2 ч.

Использование плотной питательной среды. В качестве плотной питательной среды можно использовать агар Хоттингера с содержанием аминного азота не менее 1,5 г/л или сердечно-мозговой агар. Посев производят с бульона Хоттингера. Чашки или матрасы засевают 18…20-часовой культурой и выращивают в течение 16…18 ч при 37 °С. После этого смывают ФБР (pH 7,2…7,4) и центрифугируют при частоте вращения 10 000 мин -1 в течение 15 мин. Затем над осад очную жидкость удаляют, а осадок тщательно ресуспензируют в 0,5%-м формалине с таким расчетом, чтобы получить 10%-ю взвесь. После этого приготовленная взвесь встряхивается в шуттель-аппарате при 100 колебаниях в 1 мин и 37 °С в течение 3 ч. Затем клетки стафилококка дважды отмывают от формалина ФБР (pH 7,2…7,4) центрифугированием при частоте вращения 10 000 мин -1 в течение 15 мин и выдерживают 30 мин при 80 °С на водяной бане. После этого осадок окончательно ресуспензируют в ФБР до получения 10%-й взвеси и консервируют мертиолатом натрия.

Вне зависимости от того, каким способом получают взвесь стафилококка, необходимо на каждом этапе контролировать биологическую активность белка А. Очень простой контроль — использование эритроцитарного диагностикума для обнаружения ревматоидного фактора (ЦРФ) (выпускается С.-Петербургским ИВС) по следующей методике. Ампулу с препаратом вскрывают и вносят туда 1 мл 0,85%-го раствора NaCl. Хорошо обезжиренное стекло делят на две равные части: на одну половину наносят каплю 0,85%-го физиологического раствора, а на другую — одну петлю культуры S. aureus Cowan 1. Затем добавляют по одной капле диагностикума и хорошо перемешивают. Учитывают реакцию через 3…5 мин. При достаточно высокой биологической активности протеина А эритроциты склеиваются: в капле хорошо выражена агглютинация. В отрицательном случае и в контроле — равномерная взвесь эритроцитов.

В жидком виде 10%-ю взвесь хранят не более 1,5…2 мес при 4…6 °С: при длительном сроке снижается активность белка А.

Санкт-Петербургским НИИЭМ им. Пастера выпускается коммерческий препарат — стафилококковый реагент, содержащий белок А сухой. Для приготовления соответствующих диагностикумов следует использовать лишь те серии препарата, которые не дают спонтанной агглютинации.

Требования к иммунной сыворотке, используемой для сенсибилизации клеток стафилококка, и проведение процесса сенсибилизации. Для получения коагглютинирующего реагента взвесь стафилококков следует обработать иммунной сывороткой против искомого антигена. Сыворотка должна быть взята от животного, IgG которого обладает сродством к белку А. Наибольшим сродством к нему обладают иммуноглобулины человека, свиньи, собаки и морской свинки, меньшим — осла и кролика, a IgG овцы, лошади, крысы и мыши взаимодействуют с ним очень слабо.

Помимо строгой специфичности к искомому антигену сыворотка, используемая в РКОА, не должна содержать антител к стафилококку, чтобы избежать агглютинации стафилококкового реагента, обусловленной специфическим воздействием антигена и антител, которая в системе IgG — белок А должна быть исключена. Контроль проводят путем смешивания на стекле одной капли сыворотки и 10%-й суспензии стафилококкового реагента. Если по истечении 3…5 мин не образуются хлопья агглютината, то сыворотку считают пригодной для реакции.

Если имеющиеся образцы сывороток к этому антигену агглютинируют стафилококк, то можно провести их адсорбцию взвесью стафилококковых клеток, не имеющих белка А (например, штаммы Wood-46). Таким путем удаляют антитела, реагирующие со стафилококком за счет Fab-фрагментов.

Адсорбцию проводят путем смешивания равных объемов сыворотки и 10%-й суспензии стафилококка штамма Wood-46. Смесь инкубируют в течение 30…40 мин при 20…25 °С, затем центрифугируют 20 мин при частоте вращения 3000 мин -1 . Надосадочную жидкость используют для сенсибилизации стафилококкового реагента.

Таким образом, сыворотка, применяемая для приготовления коагглютинирующего реагента, должна отвечать следующим требованиям:

• получена от животного-продуцента, IgG которого обладает сродством к белку А;
• должна обладать специфичностью по отношению к искомому антигену;
• быть свободна от противостафилококковых антител.

Выбор оптимального рабочего разведения антисыворотки. Оптимальное соотношение IgG сыворотки и протеина А на поверхности стафилококка имеет большое значение для чувствительности получаемого диагностикума: при избытке IgG может происходить спонтанная агглютинация клеток стафилококка, а при недостатке — снижение чувствительности диагностикума. Зоны оптимального соотношения между реагирующими агентами можно достичь путем предварительного определения разведения сыворотки, наиболее эффективного для приготовления диагностикума с максимальной чувствительностью.

Техника определения оптимального разведения сыворотки. 1. В пробирках готовят последовательные разведения специфической сыворотки 1:10…1:1280 в объеме 1 мл.

2. К каждому разведению добавляют по 1 мл 10%-й взвеси приготовленного стафилококкового реагента.

3. Смесь встряхивают на шуттель-аппарате при 90 колебаниях в 1 мин в течение 60 мин при 40…42 °С.

4. Клетки стафилококка дважды отмывают ФБР от избытка IgG и других компонентов сыворотки центрифугированием при частоте вращения 5000 мин -1 в течение 10 мин.

5. Осадок ресуспензируют до 2%-й концентрации ФБР (pH 7,2…7,4).

6. Полученные диагностикумы контролируют для исключения спонтанной агглютинации. С этой целью на предметное стекло наносят по одной капле каждого диагностикума, добавляют столько же физиологического раствора и учитывают результат.

Изменение гомогенности в сторону даже слабой агрегации указывает на спонтанную агглютинацию в этой пробе диагностикума, и соответствующее разведение расценивают как непригодное для дальнейшего получения диагностикума.

Из пробирок с диагностикумами, не давшими спонтанной агглютинации, наносят на предметное стекло по 3 капли и к каждой добавляют по 1 капле взвеси соответствующего возбудителя в количестве 100 млн м. т./мл, 500 млн, 1 млрд, 2 млрд, 3 млрд и 4 млрд м. т./мл. Капли смешивают и учитывают результат. За оптимальные рабочие разведения иммунной сыворотки принимают те диагностикумы, на основе которых происходила агглютинация с минимальными количествами микроорганизмов.

Определение оптимальных рабочих разведений иммунной сыворотки необходимо проводить каждый раз при использовании новой серии сыворотки.

Приготовление диагностикума. Приготовленный 10%-й стафилококковый реагент соединяют с равным объемом иммунной сыворотки в определенном ранее оптимальном рабочем разведении. Смесь встряхивают в течение 60 мин при 40…42 °С в шутгель-аппарате при 90 колебаниях в 1 мин. Затем через 15 мин дважды отмывают ФБР, ресуспензируют до 2%-й взвеси и консервируют мертиолатом натрия (1 : 10 000).

Постановка РКОА. Жидкий диагностикум необходимо тщательно встряхнуть. На предметное стекло помещают каплю Ко-диагностикума и с помощью бактериологической петли вносят часть исследуемой колонии, предварительно тщательно растерев ее в капле физиологического раствора рядом с каплей диагностикума, а затем смешивают с ней до получения гомогенной взвеси.

При наличии в исследуемой культуре искомого возбудителя через 1…3 мин наступает положительная реакция коагглютинации: просветление жидкости с образованием хлопьев. Учет результатов реакции следует проводить на темном фоне.

Учет результатов. Результаты оценивают по следующим показателям:

Каждый опыт сопровождается постановкой нескольких отрицательных контролей: 1) стафилококковый реагент, сенсибилизированный нормальной сывороткой + испытуемый материал; 2) Ко-диагностикум + ФБР; 3) испытуемый материал + ФБР.

Преимуществом РКОА является и то, что обнаружение того или иного возбудителя можно проводить непосредственно в патологическом материале (кровь, секционный материал, фекалии). Во избежание неспецифических реакций следует провести адсорбцию суспензией стафилококка этого материала, который может содержать IgG. С этой целью смешивают равные объемы 10%-й взвеси стафилококкового реагента и испытуемого материала, в котором предполагается присутствие микроорганизма. Смесь выдерживают в течение 30 мин при 37 °С, два раза центрифугируют, а надосадочную жидкость используют для дальнейшего исследования. Кроме того, при работе с патологическим материалом необходимо добиться того, чтобы он не содержал взвешенных частиц (т. е. был прозрачен), так как это может послужить причиной ложноположительных результатов.

Техника постановки РКОА с надосадочными жидкостями, копрофильтратами и др. Каплю патологического материала смешивают с каплей Ко-диагностикума осторожным покачиванием стекла. Результат учитывают через 5…30 мин после выдержки стекол во влажной камере. Постановка контролей и техника учета результата аналогичны вышеописанным.

РКОА при соблюдении всех требований к иммунным сывороткам, а также оптимальных условий сенсибилизации довольно специфична: не более 1…2 % ложноположительных результатов.

Практическое применение. Необходимо отметить, что существуют и другие методики приготовления диагностикума для РКОА. Описанная методика апробирована для типирования и обнаружения в патологическом материале (фекалии, молоко) Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis. Чувствительность сконструированных диагностикумов составляла 5 ∙ 10 7 …5 ∙ 10 8 , что практически совпадало с чувствительностью коммерческих диагностикумов.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Состав

В состав этого лекарства входит в качестве основного вещества иммуноглобулин человека антистафилококковый (антиальфаставафилолизин), в качестве дополнительных веществ — глицин, натрия хлорид.

Форма выпуска

Производится в форме раствора, который вводится внутримышечно, раствор расфасован в ампулы, в пачке из картона – 10 ампул.

Фармакологическое действие

Человеческий антистафилококовый иммуноглобулин – это белковая фракция, обладающая иммунологической активностью, которую получают из плазмы человека. В ней содержатся антитела к стафилококковому экзотоксину. В препарате содержится от 9 до 11% белка. Также под влиянием этого лекарства повышается неспецифическая сопротивляемость организма.

Фармакокинетика и фармакодинамика

Наибольшая концентрация антител в крови наблюдается через 24 часа после введения лекарства. Период полувыведения из организма равняется четырем-пяти неделям.

Показания к применению

Иммуноглобулин антистафилококовый назначается людям, у которых диагностированы болезни стафилококковой этиологии. Применяется для лечения взрослых и детей.

Противопоказания

Нельзя применять Иммуноглобулин человека антистафилококковый в следующих случаях:

• при условии, что у пациента в анамнезе отмечались тяжелые аллергические реакции после введения препаратов крови;
• при тяжелом сепсисе у людей, у которых в анамнезе есть анафилактический шок при введении препаратов крови;
• при аллергических болезнях либо при наличии в анамнезе серьезных аллергических реакций в день, когда были введены иммуноглобулины, и на протяжении восьми дней после того, как была проведена инъекция. В таком случае можно принимать Иммуноглобулин на фоне антигистаминных средств;
• люди с системными иммунопатологическими болезнями должны получать препарат только на фоне соответствующего лечения.

Побочные действия

В большинстве случаев после введения этого лекарственного средства у человека не проявляются побочные реакции. Очень редко отмечается подъем температуры тела, местные реакции в том месте, где был введен раствор.

У пациентов, у которых отмечается измененная реактивность, возможно проявление аллергических реакций. Очень редко отмечается развитие анафилактического шока. Поэтому каждый человек, получивший инъекцию Иммуноглобулина, в течение получаса должен пребывать под наблюдением специалистов. Врач при этом должен иметь доступ к средствам для противошокового лечения.

Инструкция на антистафилококовый Иммуноглобулин (Способ и дозировка)

Раствор вводится внутримышечно в ягодицы либо в наружную поверхность бедра. Перед тем, как вводить средство, нужно выдержать ампулу при комнатной температуре на протяжении двух часов.

Нужно строго соблюдать требования асептики и антисептики, вскрывая ампулы и выполняя введение. Стафилококковый Иммуноглобулин желательно набирать в шприц с помощью иглы с широким просветом. Хранить раствор во вскрытой ампуле нельзя. Дозировка и частота введения раствора зависит от особенностей течения заболевания. Если у пациента была диагностирована генерализованная стафилококковая инфекция, то разовая доза должна определяться из расчета 5 ME препарата на 1 кг веса пациента. Дети до 5 лет должны получать разовую дозу не меньше 100 ME.

Если у больного отмечается локализованная болезнь, следует вводить ему разовую дозу не меньше 100 ME.

На курс лечения назначается от 3 до 5 инъекций, их проводят ежедневно или через день, в зависимости от назначения врача.

Нельзя использовать Иммуноглобулин с истекшим сроком годности, поврежденные ампулы, раствор с измененными физическими свойствами.

Проведение укола регистрируется в специальной форме.

Передозировка

Нет данных о передозировке средства.

Взаимодействие

Препарат совместим с другими лекарствами, его можно принимать одновременно с антибиотиками, использовать в комплексной терапии.

Можно вводить Иммуноглобулин антистафилококковый не раньше, чем через три месяца после того, как пациенту была проведена иммунизация с использованием живых вирусных вакцин. На эффективность других вакцин лекарство не влияет.

После получения препарата у пациента могут измениться результаты серологических реакций. Результат в таком случае может являться ложноположительным.

Условия продажи

Иммуноглобулин антистафилококковый можно приобрести только по рецепту.

Условия хранения

При хранении или транспортировании средства должен соблюдаться соответствующий температурный режим – от 2 до 8°С. Нельзя замораживать препарат.

Срок годности

Срок хранения — 2 года.

Особые указания

Люди, у которых отмечаются аллергические болезни, либо есть склонность к развитию аллергических реакций, должны в день получения Иммуноглобулина и в последующие восемь дней принимать антигистаминные лекарства. При обострении аллергических процессов можно вводить препарат только при наличии соответствующего заключения аллерголога.

После введения средства не наблюдается психомоторных нарушений, соответственно, допускается вождение транспорта и работа со сложными механизмами.

Детям

По показаниям назначается для лечения детей в соответствующей дозировке. Дети до 5 лет должны получать средство в разовой дозе не меньше 100 ME.

При беременности и лактации

Можно принимать в период беременности, а также при кормлении грудью только при наличии жизненных показаний. При этом специалист должен оценить предполагаемые вред и пользу. Следует учесть, что активное вещество попадает в молоко, поэтому защитные антитела могут попадать в организм новорожденного.

Отзывы об антистафилококковом Иммуноглобулине человека

Отзывы тех людей, которые принимали стафилококковый Иммуноглобулин, свидетельствуют о разной реакции организма. Отмечается, что после приема препарата появлялся выраженный эффект. Однако встречаются также отзывы о том, что после приема средства не было заметного улучшения состояния здоровья.

Цена Иммуноглобулина антистафилококкового, где купить

Цена препарата составляет в среднем 9600 рублей за 10 ампул. Где купить стафилококковый Иммуноглобулин, можно узнать в ближайшем медицинском учреждении.

Опыт работы: С 2003 по 2013 г. – работала на должностях провизора и заведующего аптечным киоском. Награждена грамотами и знаками отличия за многолетний и добросовестный труд. Статьи на медицинскую тематику публиковались в местных изданиях (газеты) и на различных Интернет-порталах.

Отзывы

иммуноглобулин антистафилококковый, ампулы 100 ME, 1 доза, 3мм, 10 шт . Вот это мне срочно надо

При первом уколе,на следующий день я резко прям за 15 минут заболел,появились признаки гриппа,разболелось горло,заложило уши,насморк,головная боль,но самое интересное температура не повышалась а падала почти до 34 а такое чувство что температура была 40.Как вы думаете это нормально?

Не советую использовать . после введения через три дня был анафилактический шок ,теперь спустя два года ,до сих пор имею болезнь дисциркуляторная энцефалопатия,потеряла зрение,шатет и еще не знаю если детей смогу иметь

Стафилококки

[Рис. 1] Золотистый стафилококк

[Рис. 2] Золотистый стафилококк

Организм здорового человека обладает значительной устойчивостью к стафилококкам. После перенесенной стафилококковой инфекции в крови появляются антитоксины. Обнаружение антитоксина свидетельствует о напряженности иммунитета к стафилококкам. Наличие в крови человека а-антитоксина в титре больше 2 ME указывает на недавно перенесенное заболевание стафилококковой этиологии.

При контакте с широко распространенными в окружающей среде стафилококками, а также в результате перенесенных заболеваний индуцируется гуморальный иммунный ответ, в результате которого образуются антитела на антигены микробных клеток, токсины и ферменты. Клеточный иммунный ответ проявляется в подавлении фагоцитоза. Устойчивость к фагоцитозу у вирулентных штаммов S. aureus, возможно, связана с их способностью образовывать капсулу in vivo, а также с продукцией коагулазы, образующей вокруг бактерий фибрин. Белок А препятствует фагоцитозу, связываясь с Fc-участками IgG. В ряде случаев наблюдается специфическая сенсибилизация организмов. Определенное значение при стафилококковых инфекциях имеют секреторные IgA, обеспечивающие местный иммунитет слизистых оболочек. Экология и эпидемиология. Стафилококки широко распространены в природе. Они обнаруживаются на коже и слизистых оболочках человека, встречаются у животных. Каждый вид стафилококка подразделяется на экологические варианты (эковары). Вид S. aureus включает 6 эковаров: А, В, С, D, Е и F. Основными хозяевами этих эковаров являются соответственно человек, свинья, домашняя птица, крупный рогатый скот, овцы, зайцы, собаки и голуби. Резервуаром золотистого стафилококка служат здоровые носители и больные с различными стафилококковыми поражениями. Наибольшую опасность в смысле распространения стафилококков представляют бактерионосители, у которых патогенные стафилококки обнаруживают на слизистой верхних дыхательных путей, особенно передних отделов носовых ходов, а также больные люди с кожными поражениями. Стафилококки достаточно резистентны к факторам окружающей среды. Они хорошо переносят высушивание, длительное время остаются жизнеспособными в пыли.

Стафилококковые инфекции

Род Staphylococcus включает шаровидные неподвижные аспорогенные грамположительные факультативно-анаэробные бактерии, принадлежащие к семейству Mисrососсасеае. В определителе бактерий Д.Берги приведены дифференциальные признаки 29 видов стафилококков. Они делятся на две группы - коагулазоположительные и коагулазоотрицательные. К первой группе относятся S. aureus, S. intermedius и S. hyicus. их роль в инфекционной патологии равнозначна. Чаще различные заболевания у людей и животных вызывает S.aureus, реже - S. hyicus. S. intermedius патогенный только для животных. На протяжении многих лет коагулазоотрицательные стафилококки считали непатогенными. Но теперь эта точка зрения изменилась. В связи с ухудшением экологической ситуации в большинстве стран и связанным с ней снижением естественного иммунитета участились случаи гнойно-септических поражений тканей и органов, вызванных коагулазоотрицательные видами, которые встречаются на коже и слизистых оболочках человека (S. epidermidis, S.auricularis , S.capitis, S.cohnii, S.haemolyticus, S.hominis, S.lentus, S.saprophyticus, S.schleiferi, S.simulans, S.wameri, S.xylosus ma in.).

Среди эпидемиологов, микробиологов и клиницистов довольно распространенное убеждение, что сегодня непатогенных стафилококков не существует. Все учащаются случаи выделения из крови, тканей и органов культур стафилококков без каких-либо маркеров патогенности. Однако, при элиминации их из организма исчезают все симптомы заболевания. Все это необходимо учитывать при проведении лабораторной диагностики стафилококковых инфекций. К сожалению, в рутинных бактериологических лабораториях нашей страны пока возможна идентификация лишь S. aureus, S. epidermidis и S.saprophyticus.

Стафилококки чаще поражают кожу, ее придатки и подкожную клетчатку. Они вызывают фурункулы, карбункулы, панариции, паронихии, абсцессы, флегмоны, маститы, лимфадениты, нагноения ран, в том числе операционных. У детей стафилококки являются возбудителями стафилодермий, эпидемических пухирчаток, импетиго. их выделяют при плевритах, бронхитах, пневмониях, перитонитах. Они могут вызвать ангины, тонзиллиты, гаймориты, отиты, конъюнктивиты, несколько реже - менингиты, абсцессы мозга, миокардиты, эндокардиты, артриты, инфекции сосудистых протезов. Очень опасные пищевые токсикоинфекции, энтероколиты, холециститы, циститы, пиелит, пиелонефрит. При проникновении в кровь или костный мозг вызывают сепсис, остеомиелит, синдром токсического шока. Однако все заболевания стафилококковой этиологии не рассматриваются как острозаразное.

При стафилококковых инфекциях исследуют гной, кровь (при сепсисе), выделения слизистых оболочек, мокроты, воспалительный экссудат, ликвор, раневое содержание, плевральный выпот, желчь, мочу. В случае подозрения на токсикоинфекцию - рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, остатки пищи (особенно творог, молоко, пирожные, торты, кремы, мороженое и др.).. При санитарно-бактериологическом контроле исследуют смывы с рук, столов и других предметов. В бактерионосителей материал забирают тампоном отдельно из глотки и носовых ходов.

Из открытых гнойных поражений материал берут стерильным ватным тампоном после удаления раневого налета, в котором может быть сапрофитная микрофлора из воздуха, кожи и т.д.. При закрытых нарыва делают пункцию шприцем. Слизь из рото-и носоглотки берут стерильным тампоном. Мокроту и мочу забирают в стерильные пробирки, банки. Кровь (10 мл), взятую из локтевой вены, и ликвор - при пункции спинномозгового канала, с соблюдением асептики сеют у постели больного в 100 мл сахарного бульона. Кровь рекомендуют быстро (к ее свертыванию) вносить прямо из шприца во флакон с бульоном, тщательно перемешать, предотвращая образование сгустка. Пробы крови нельзя замораживать. В 25% случаев при стафилококковом сепсисе количество бактерий в крови (КОЕ) может быть меньше 1 / мл. При подозрении на такое положение необходимо сеять 25-30 мл крови.

Почти со всех исследуемых материалов (навоз, раневой содержание, экссудат, мокроты, осадок мочи и т.д.) с помощью бактериологической петли изготавливают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Только из крови и смывов мазки не делают так в них малое количество микроорганизмов. В типичных случаях стафилококки имеют шарообразную форму, фиолетовый цвет, располагаются несимметричными гроздьями, но встречаются и одинокие клетки, пары или тетради.

В последнее время в связи с широким использованием антибиотиков морфология стафилококков изменилась и типового их расположения в мазках из гноя часто не наблюдают. В связи с этим отличить стафилококки от стрептококков по их морфологии и взаимным расположением часто практически невозможно. Поэтому нужно делать посев, выделять чистую культуру и идентифицировать ее.

[Рис. 3] Золотистый стафилококк в чаше Петри

Материал от больных и бактерионосителей засевают немедленно или не позднее 3-4 ч после взятия при условии хранения его на холоде.В первый день петлей, шпателем или непосредственно тампоном делают посевы на кровяной агар и элективные для стафилококков среды (желтково-солевой (ЖСА) или молочно-желтково-солевой агар (МЖСА). Чашки с посевами инкубируют при 37 ° С в течение 48 часов , или сутки в термостате и дополнительно 24 ч при комнатной температуре при хорошем освещении. Если в исследуемом материале бактерий мало (данные микроскопии) - занял для обогащения делают еще в тиогликолевой среду.На второй день производят высев из сахарного бульона на указанные элективные среды, исследуют массивность роста и характер колоний после посевов других материалов. На кровяном агаре стафилококки образуют непрозрачные, слегка выпуклые колонии средних размеров с гладкой, блестящей, словно полированной поверхностью, четко очерченным краем, маслянистой консистенции. Патогенные штаммы образуют вокруг колоний прозрачные зоны гемолиза. На элективные-дифференциальных средах, как правило, вырастают только колонии стафилококков. В частности, на желтково-солевом агаре они образуют колонии с зоной помутнения вокруг них и характерным радужным венчиком по периферии (лецитовителазна реакция). На молочно-желтково-солевом агаре выявляют наличие пигмента, который может быть золотистым, палевым, белым, желтым, оранжевым и др..

Из всех типов колоний изготовляют мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют, проявляя типичные грамположительные стафилококки. Не менее двух типичных или подозрительных в отношении стафилококков колоний пересевают на скошенный агар. В первую очередь отсеивают колонии с гемолизом и те, которые дали положительную лецитовителазную реакцию. При отсутствии таких колоний исследуют не менее двух пигментированных колоний, при микроскопии которых выявили типичные стафилококки. Пробирки с посевами помещают в термостат при 37 ° С на 18-20 час.
В последующие дни проводят идентификацию выделенных чистых культур, для чего проверяют их морфологические и тинкториальные свойства (окраска по Граму), плазмокоагулюючу активность и другие свойственные стафилококков тесты.

Плазмокоагулазу выявляют путем внесения выделенной культуры в пробирку с цитратной плазмы кролика. Ее можно приготовить в любой лаборатории. У кролика из сердца берут 8 мл крови, вносят в пробирку с 2 мл 5% лимонно-кислого натрия и ставят в холодильник. После полной осадки форменных элементов плазму отсасывают в стерильную пробирку. Она может храниться в холодильнике 8-10 дней. Перед использованием ее разводят 1:5 (1 мл плазмы и 4 мл изотонического раствора хлорида натрия) и разливают в аглютинацийни стерильные пробирки по 0,5 мл. Полную петлю культуры стафилококков эмульгируют в плазме и помещают в термостат на 3 часа, затем оставляют при комнатной температуре на 18-20 часов. Предварительный учет свертывания плазмы проводят через 3 ч, окончательный - на второй день. Очень удобно пользоваться стандартной сухой цитратной плазмы кролика. Перед употреблением в ампулу добавляют 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и после полного растворения ее разводят 1:5. Плазма человека малопригодна для постановки реакции плазмокоагуляции, поскольку в ней могут быть консерванты, лекарственные вещества, антитела, которые могут подавлять образование плазмокоагулаза.

Если выделена культура вызывает гемолиз, коагулирует плазму и дает положительную лецитовителазну реакцию, уже на третий день можно выдать результат на наличие S. aureus. Если культура обладает только плазмокоагулаза или только вителазну активность, для окончательного установления вида стафилококка необходимо определить дополнительные критерии патогенности: ферментацию маннита в анаэробных условиях, ДНК-азную активность, продукцию лизоцима, фосфатазы, а также определить чувствительность к новобиоцин.

Исследование на бактерионосительство среди медицинского персонала проводится дважды в год. При плановых бактериологических обследованиях обязательно исследуют слизь из носа. Исследования слизи из ротоглогки проводят выборочно, при наличии воспалительных процессов в зеве. Материал берут из передних отделов носа стерильным ватным тампоном и им же сеют на ЖСА не позднее, чем через 2 ч после взятия. Выделение и идентификацию S.aureus проводят так же, как и при исследовании других материалов.

При определении массивности обсеменения стафилококками слизистой носа тампон с исследуемым слизью вносят в пробирку с 0,5 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия, прополаскивают его в жидкости встряхиванием в течение 10 мин, отжимают о стенки и удаляют. Жидкость многократно перемешивают пипеткой. Отдельно пипеткой наносят 0,1 мл смыва на чашку с ЖСА и тщательно растирают шпателем. Чашки с посевами инкубируют при 37 ° С в течение 48 ч, после чего подсчитывают количество колоний. Если с 50 колонийS.aureus, выросшие, две отнесены к одному и тому же фаготип, правомерно считать, что и все остальные колонии, идентичные по морфологии и пигментом, относятся к S. aureus аналогичного фаготип.
Пример для расчета: после посева 0,1 мл смыва выросло 50 колоний S.aureus. Так, в 0,5 мл будет 50 * 5 = 250 колоний или 2,5 * 10В2.Массивность стафилококкового обсеменения, которое выражается числом 102 микробных клеток, является умеренной, при ней возбудитель в окружающую среду не выделяется. При выделении> 10в3 бактериальных клеток уровень обсемененности определяют как высокий, при котором возбудитель выделяется во внешнюю среду не только при кашле и чихании, а при спокойном дыхании. При таких обстоятельствах нужно обязательно проводить санацию бактерионосителей.

Профилактика заболеваний, вызываемых стафилококками, включает несколько направлений. К ним относятся меры борьбы с источником инфекции, которыми являются люди, страдающие гнойно-воспалительными процессами и бактерионосители, при лечении которых возникают определенные трудности. Особенно важно в комплексе профилактических мероприятий предупреждение стафилококковых заболеваний в лечебных учреждениях. Это прежде всего организация режима работы отделений больниц. Отделения, в которых находятся больные с открытыми гнойно-воспалительными процессами, должны обслуживаться отдельным персоналом. Для предупреждения возникновения стафилококковых заболеваний у лиц, подвергающихся риску травматизма или инфицирования, рекомендуется использовать метод иммунизации сорбированным анатоксином или введение иммуноглобулина.

Особая проблема - профилактика стафилококковых заболеваний у новорожденных. У них еще до настоящего времени стафилококк является одним из главных возбудителей инфекции. В данном случае в профилактику включают иммунизацию рожениц стафилококковым анатоксином, а также проведение количественного и качественного анализа обсемененности молока родильниц с целью более строго подхода к переводу новорожденного на вскармливание кипяченым грудным молоком. В норме в женском молоке содержится три класса иммуноглобулинов - IgG, IgM и IgA, которые разрушаются при кипячении.

Для лечения стафилококковых инфекций применяют антибиотики, выбор которых определяется чувствительностью выделенной культуры к определенным препаратам. Из них наибольшее значение имеют р-лактамные препараты (оксициллин, метициллин и др.). В последние годы появились метициллиноустойчивые штаммы. Их устойчивость в отличие от других штаммов не контролируется R-плазмидами, а объясняется хромосомными мутациями. Для лечения таких больных применяют ванкомицин и фторхинолоны.Кроме того, для лечения стафилококковых инфекций используют цефалоспорины 1 и 2 поколении, реже тетрациклины. При сепсисе наряду с антибиотиками вводят противостафилококковый Ig. Для лечения хронических стафилококковых инфекций (хронический сепсис, фурункулез и др.) используют анатоксин, аутовакцину, стимулирующие синтез антитоксических и антимикробных антител.