Первые результаты исследования коронавируса

Согласно руководству ВОЗ, анализы на вирус SARS-CoV-2 должны проводиться:

Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с обратной транскрипцией. Это самый точный и надежный метод диагностики вирусной инфекции, который позволяет обнаружить даже очень небольшое количество генетического материала (РНК) вируса в биологическом материале человека. Предпочтительно брать мазок из ротоглотки или носоглотки, потому что в кале и крови вирусов меньше.
В лаборатории с уровнем биологической безопасности 2 (BSL-2). Всего существует четыре уровня безопасности. На первом уровне требования минимальные, на четвертом — самые строгие. В лабораториях с уровнем безопасности BSL-2 исследуют микробов, представляющих умеренную опасность для сотрудников лаборатории и для окружающей среды.

ПЦР-анализ с обратной транскрипцией на SARS-CoV-2 можно провести только в лабораторных условиях, потому что для него требуется набор реактивов и лабораторное оборудование. Для этого нужны:

микроцентрифуга,
мешалка,
детекторный модуль ПЦР в реальном времени с реакционным модулем амплификатора.

На дому такой тест сделать нельзя, поэтому экспресс-тестов на основе ПЦР не существует.

Но даже если в конце концов экспресс-тесты на основе ИФА и появятся, они будут уступать лабораторной ПЦР и в точности, и в скорости определения заражения вирусом. ИФА-тест обнаруживает не генетический материал вируса, а антитела — иммунные белки, которые организм вырабатывает к вирусу. Чтобы организм успел выработать антитела, с момента заражения должно пройти около недели. Если сделать ИФА-тест раньше, он не покажет заражения, даже если в организме у человека уже есть вирус SARS-CoV-2.

Где делают тест. В Европе, Великобритании и Австралии тесты делают в любой лаборатории с уровнем безопасности BSL-2, в которой есть оборудование для ПЦР-реакции с обратной транскрипцией и реактивы, которые необходимы для поиска РНК вируса SARS-CoV-2. В США тесты делают в лабораториях Центра по контролю и профилактике инфекционных заболеваний (CDC) и в государственных лабораториях общественного здравоохранения. Тест проводится в соответствии с протоколом, принятым в конкретной стране.

Принцип действия теста. В США и других странах для анализа берут мазок с задней стенки глотки, образец слюны или жидкости из нижних дыхательных путей (то есть мокроты). Затем образец доставляют в лабораторию и выделяют из него рибонуклеиновую кислоту (РНК), содержащую геном вируса. Затем к смеси реагентов добавляют фермент, который превращает РНК в ДНК — это и есть обратная транскрипция. После этого вирусную ДНК копируют миллионы раз и ищут в ней участок, соответствующий геному SARS-CoV-2. Если такой участок есть, анализ признают положительным.

Точность. Тест способен обнаружить 0,3–3 копии вирусной РНК в микролитре (0,001 мл).

Сроки. 24–48 часов.

Сколько сделано анализов. По данным CDC, на 16 марта 2020 года в США на SARS CoV-2 было проверено: в лабораториях CDC — 4 тыс. 255 анализов; в 48 государственных лабораториях — 20 тыс. 907 анализов. Анализы начали делать 18 января 2020 года.

Цена. Тестирование оплачивает государство. Сдать анализ на SARS-CoV-2 в частной лаборатории за деньги нельзя.

Это соответствует уровню безопасности BSL-3. Пример микроба, с которым обычно работают в лаборатории BSL-3 — Mycobacterium tuberculosis, то есть бактерии, вызывающие туберкулез. Получается, что в нашей стране для работы с коронавирусом лаборатории нужен почти что самый высокий уровень биологической безопасности из возможных — BSL-3. Это притом что большинство российских лабораторий, как и везде в мире, имеет уровень безопасности BSL-2. (Дополнение от 17.03.2020, 18:27 мск: в этот фрагмент внесены изменения, уточнена информация об уровнях безопасности лабораторий.)

Принцип действия теста. Как и за рубежом, анализ проводят методом ПЦР-реакции с обратной транскрипцией.

реагент-1, прозрачная бесцветная жидкость, 0,70 мл, 1 пробирка;
реагент-2, прозрачная бесцветная жидкость, 1,20 мл, 1 пробирка;
положительный контроль (ПКО), прозрачная бесцветная жидкость, 0,20 мл, 1 пробирка;
отрицательный контроль (ОКО), прозрачная бесцветная жидкость, 0,20 мл, 1 пробирка;
эксплуатационная документация: инструкция по применению и паспорт.

Данные по составу реагентов не опубликованы.

Точность. ТАСС сообщает, что тест позволяет обнаружить 50–500 вирусных частиц в образце.

Цена. Тестирование оплачивает государство. Сдать анализ на SARS-CoV-2 в частной лаборатории за деньги нельзя.

Новые исследования вирусологов подтверждают, что заразиться COVID-19 не так-то легко

07.04.2020 в 21:25, просмотров: 507251

Результаты исследования команды вирусолога Хендрика Штрека из Хайнсберга полностью перевернули представления о путях передачи новой коронавирусной инфекции. Тщательно обследовав квартиры зараженных коронавирусом COVID-19 в городе Хайнсберге, где эпидемия началась раньше других немецких городов и где много заболевших, ученые пришли к выводу, что на поверхностях жизнеспособных вирусов нет — только нежизнеспособные. В интервью обозревателю "МК" директор Института медицинской паразитологии, тропических и трансмиссивных заболеваний им. Е.И. Марциновского Сеченовского медуниверситета Александр ЛУКАШЕВ рассказал, что это может стать важным открытием в мире эпидемиологии.

Ни на дверных ручках, ни на кнопках сливных бачков, ни на кошках вирусологи команды Хендрика Штрека не обнаружили. Даже в домах, где были инфицированы все, не нашлось ни одного жизнеспособного вируса на поверхностях! Чаще всего заражения происходили на танцах, вечеринках и праздниках с большим количеством гостей. Заразиться в парикмахерской, супермаркете, магазине одежды, согласно Штреку, невозможно, и вирусолог недоумевает, почему супермаркетам можно работать, а парикмахерские и магазины одежды должны быть закрыты. Также он недоумевает, почему такое исследование, которое ведет его команда, — одной из главных его целей является выяснение числа болеющих бессимптомно и потому не попадающих в математические модели, которыми все сейчас оперируют, — так вот, почему такое исследование не начал вести федеральный Институт Роберта Коха, чьей прямой обязанностью было сразу же его запустить. Также он отметил, при моделировании мы получаем неправильный прогноз — математическая модель не годится.

Александр Николаевич Лукашев рассказал "МК", что не доверять исследованию столь опытной команды нет никаких оснований:

- Исследование очень важное для понимания эпидемиологии вируса, оно действительно позволяет нам исключить некоторые пути передачи вируса. Хотя, конечно, я бы рекомендовал проявлять осторожность и не прекращать мыть руки и вообще вести себя аккуратно. Возможно, эти результаты позволят нам пересмотреть некоторые из конкретных мер, которые мы предпринимаем для защиты от вируса

Но мы в любом случае не сможем исключить их полностью. Все равно останется множество сфер деятельности, где происходит тесный контакт между большим количеством людей, - рестораны, кафе, парикмахерские, салоны красоты, где передача вируса возможно только из-за тесных контактов между людьми. Поэтому, даже если исключается путь передачи через зараженные поверхности, в любом случае при контакте людей на расстоянии меньше полутора метров вирус передается. И это знание не позволяет нам вернуться сразу к нормальной жизни.

- А как же другие исследования? Я читала об исследовании, что в каютах корабля "Даймонд Принцесс" вирус выживал до 17 дней?

- Ну, 17 дней он никак не может жить вне организма. Я таких исследований не видел. Были некоторые, которые показывали, что вирус может существовать на некоторых поверхностях до семи дней - но это в экстремальных условиях. Можно смело говорить, что в быту за одни сутки количество вируса снижается во много раз, а за трое суток его практически не остается.

- То есть, продукты из супермаркета можно не обрабатывать спиртом или паром утюга?

- Достаточно просто помыть их водой, если хочется, то с мылом. Вирус на них может быть лишь в том случае, если вирусовыделитель хорошенько их облизывал. В целом же вероятность заразиться через продукты крайне низкая. Поэтому не нужно паниковать - соблюдайте разумные меры предосторожности, то есть держитесь на расстоянии от других людей.

- В сети есть видео китайского доктора, который говорит, что больной человек выделяет вирус не только при кашле или чихании, но даже и при разговоре?

- Да, он прав. Если говорить о масках, опубликовано большое количество исследований про их эффективность. В любом случае простая хирургическая маска не является стопроцентным способом защиты. Но она достаточно эффективно предотвращает передачу вируса в обществе. И даже если маски позволят предотвратить треть случаев заражения, это будет отличный результат. Поэтому я считаю, что повсеместное ношение масок позволило бы намного быстрее вернуться к обычной жизни.

- Прочитала страшное: поскольку вирус передается с фекалиями, он может аэролизироваться в общественном туалете, если зараженный не закроет крышку унитаза? Это правда?

- Вирус действительно выделяется с фекалиями (мочи это не касается). Конечно, можно представить ситуацию, что будет сформирован аэрозоль, но такое бывает редко. И крышка унитаза совершенно не при чем и в любом случае не поможет.

- Итак, мы пришли к выводу основной путь передачи все же воздушно-капельный?

- Именно. Поэтому социальная дистанция – самый простой и надежный путь предотвращения заражения на сегодня.

На стадии регистрации

По словам руководителя лаборатории геномной инженерии МФТИ Павла Волчкова, сделать такие тесты несложно. Однако для подтверждения того, что изготовленный набор имеет клиническую и диагностическую значимость, его должно зарегистрировать надзорное ведомство.

— Процедура эта не так проста, ее нужно проводить на базе лаборатории с особой категорией допуска, — рассказал вирусолог. — Цель — доказать, что изготовитель делает качественные системы и способен воспроизводить их в промышленных масштабах. Обойтись без регистрации даже в такой критической ситуации, как сейчас, по российским законам просто нельзя, хотя правительство и приняло меры для ускорения процедуры.

По словам экспертов, регистрация может длиться от недели до месяца.

— Первый лабораторный образец теста ИФА мы надеемся получить уже в конце недели, — сообщил директор научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины КФУ Альберт Ризванов. — Учитывая, что на получение временного регистрационного удостоверения (срок действия до конца года) нужно семь дней, мы надеемся на быстрый запуск тест-системы. А потом можно подать заявление и на получение постоянного свидетельства.

Казанские ученые работают и над экспресс-системой определения антител к коронавирусу. Она будет похожа на тест-полоски, применяемые для определения беременности. Если результатов лабораторных анализов надо ждать 2–3 часа, то здесь надо будет лишь нанести на полоску капельку крови, и через 10–15 минут человек узнает, есть ли у него антитела к SARS-CoV-2. Сейчас, по словам ученых, идет закупка линии для производства таких полосок. Исследователи надеются, что она появится в России в течение трех недель, плюс потребуется некоторое время на налаживание изготовления.

Тесты на антитела к коронавирусу разрабатывают и в лаборатории трансплантационной иммунологии НМИЦ Гематологии в сотрудничестве с Институтом молекулярной биологии (ИМБ) им. В.А. Энгельгардта РАН.

— Точная дата внедрения тестов на рынок пока не известна, надеемся, это случится в самом ближайшем будущем, — заявил заведующий лабораторией трансплантационной иммунологии в Центре гематологии Григорий Ефимов. — Что касается аспектов применения тест-систем, то решение должен принять Минздрав. Или мы будем продавать их на свое усмотрение, или делать диагностические наборы по заданию министерства.

Кроме того, НМИЦ Гематологии и ИМБ РАН провели научно-исследовательскую работу, направленную на разработку тестов для Центра генетики и репродуктивной медицины Genetico. Центр в ближайшие дни планирует подготовить и подать документы на регистрацию своей первой тест-системы.

Скорее всего, к концу этой недели поступит на регистрацию в Росздравнадзор и тест-система НИЦ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи. Об этом ранее на совещании с Владимиром Путиным сказал директор центра, академик РАН Александр Гинцбург.

Союзники и посредники

В поиске иммунитета

Тестирование на антитела к SARS-CoV-2, по сообщению Роспотребнадзора, стартовало в России во вторник, 14 апреля. Однако пока оно доступно лишь медперсоналу. Анализы берут в десяти клиниках Москвы, которые работают с инфицированными новым коронавирусом. А сам тест проводит Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского. Новый диагностический инструмент позволяет выявлять переболевших, а также изучать популяционный иммунитет и проводить оценку эффективности разрабатываемых вакцин против коронавирусной инфекции.

Сам тест представляет собой иммуноферментный анализ (ИФА) сыворотки плазмы крови человека. На подложку теста исследователи помещают каплю этой сыворотки. Антитела из нее связываются с нанесенными на ту же подложку белками SARS-CoV-2. Чтобы тест визуально реагировал на антитела, добавляют особый реагент, который меняет цвет в ответ на их присутствие в пробе. Интенсивность цвета зависит от концентрации антител в сыворотке.

Чаще всего для диагностики коронавируса применяют надежные молекулярно-генетические анализы, но иногда чтобы точно установить диагноз, необходимо подождать несколько дней. Эта технология все еще изучается, поэтому о достоверности быстрого теста говорить сложно.

Лабораторная диагностика

Вирус COVID-19 передается воздушно-капельным путем во время чихания и кашля больного. Для диагностики коронавируса врачи берут у пациентов мазки из носа и горла.

На данный момент способы диагностики COVID-19 не всегда могут выявить болезнь на ранней стадии. Человек уже может быть носителем вируса, но концентрация его настолько маленькая, что никаких симптомов нет. А чувствительности анализа может оказаться недостаточно, чтобы найти вирус в таком малом количестве. Поэтому врачи назначают тесты уже после появления симптомов или тем, кто имел контакт с заболевшим.

ОТ-ПЦР

Этот тест подразумевает взятие мазка из горла. К большому сожалению, он является надежным только в первую неделю заболевания. Позже коронавирус может исчезнуть в горле, в то время как продолжит размножаться в легких.

Серологические тесты

Такие тесты находятся пока еще в разработке. Совсем недавно появилась информация о создании тестов на основе определения специфических антител в организме. Использовался метод комбинированного тестирования крови на антитела к вирусу.

Тестирование позволило определить факт недавнего заражения коронавирусом, а также наличие инфекции на поздних стадиях болезни. Время тестирования составляло 15 минут, а итоговая чувствительность во время испытания составила 88 %.

Взятые у человека мазки изо рта и горла проверяют на наличие коронавирусной инфекции в диагностических лабораториях. Данная процедура основана на полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Справка! По мнению российских ученых, ПЦР-тест — самый чувствительный метод, так как может обнаружить даже самое небольшое количество генетического материала вируса.

Скрининговый тест

Скрининговый тест не прошел испытания. В среднем он пропускает около 2/3 инфицированных человек. Инкубационный период у COVID-19 от 10 до 14 дней. Это означает, что пациенты могут быть заразными и не подозревать об этом, а температурные тесты, которые определяют контрольную температуру, во многом бесполезны. Если человек не знает, что у него был контакт с зараженным, и нет никаких симптомов, то идентифицировать его невозможно.

В этом заключается проблема скринингового теста, цель которого — в раннем выявлении случаев заболевания: у людей просто не проявляются симптомы на ранних стадиях болезни.

КТ-легких

КТ-легких становится основным инструментом диагностики COVID-19, так как точность данного способа составляет 98 %. Процедура занимает по времени не больше тридцати минут. Также КТ можно смело комбинировать с другими способами диагностики.

Важно! Если по результатам КТ у пациента обнаружились так называемые матовые стекла в легких (уплотнения больше 5 см), то это значит, что ему скоро станет хуже. И терапию можно начать на более ранней стадии, а не ждать, пока ему на самом деле станет плохо.

Рентгенологическое обследование

Диагностические показатели и биомаркеры

Главная задача диагностики — своевременное определение пациентов, у которых болезнь с большей вероятностью может прогрессировать в тяжелую форму. Для таких целей требуется определение соответствующих биомаркеров. В зависимости от тяжести течения болезни, проводится анализ крови для ведения пациента и быстрого реагирования на изменения его состояния.

Дифференциальный диагноз

По признакам COVID-19 невозможно отличить от других респираторных инфекций, в частности от простуды и других ОРВИ. Пневмонию при коронавирусе также нельзя отличить от пневмонии, вызванной другими патогенами. Ключевой фактор диагностики в этом случае — история путешествий или контактов пациента.

Для улучшения прогноза заболеваемости необходимо вводить своевременные карантинные мероприятия и ограничивать массовые скопления людей. Многие специалисты уверены, что с приходом тепла коронавирус утратит свою актуальность и процент заболевших значительно уменьшится.

Консультант проекта, соавтор статьи: Овчинникова Наталья Ивановна | Гастроэнтеролог, Гепатолог, Инфекционист Стаж 30 лет / Врач высшей категории, Кандидат медицинских наук

Образование: Диплом по специальности "Лечебное дело", Новосибирский государственный медицинский институт (1988 г.), Ординатура по специальности "Гастроэнтерология", Российская медицинская академия последипломного образования (1997 г.)

Результаты исследования команды вирусолога Хендрика Штрека из Хайнсберга полностью перевернули представления о путях передачи новой коронавирусной инфекции. Тщательно обследовав квартиры зараженных коронавирусом COVID-19 в городе Хайнсберге, где эпидемия началась раньше других немецких городов и где много заболевших, ученые пришли к выводу, что на поверхностях жизнеспособных вирусов нет - только нежизнеспособные. В интервью обозревателю "МК" директор Института медицинской паразитологии, тропических и трансмиссивных заболеваний им. Е.И. Марциновского Сеченовского медуниверситета Александр ЛУКАШЕВ рассказал, что это может стать важным открытием в мире эпидемиологии.

Ни на дверных ручках, ни на кнопках сливных бачков, ни на кошках вирусологи команды Хендрика Штрека не обнаружили. Даже в домах, где были инфицированы все, не нашлось ни одного жизнеспособного вируса на поверхностях! Чаще всего заражения происходили на танцах, вечеринках и праздниках с большим количеством гостей. Заразиться в парикмахерской, супермаркете, магазине одежды, согласно Штреку, невозможно, и вирусолог недоумевает, почему супермаркетам можно работать, а парикмахерские и магазины одежды должны быть закрыты. Также он недоумевает, почему такое исследование, которое ведет его команда, - одной из главных его целей является выяснение числа болеющих бессимптомно и потому не попадающих в математические модели, которыми все сейчас оперируют, - так вот, почему такое исследование не начал вести федеральный Институт Роберта Коха, чьей прямой обязанностью было сразу же его запустить. Также он отметил, при моделировании мы получаем неправильный прогноз - математическая модель не годится.

- То есть, продукты из супермаркета можно не обрабатывать спиртом или паром утюга?

- Итак, мы пришли к выводу основной путь передачи все же воздушно-капельный?

- Именно. Поэтому социальная дистанция - самый простой и надежный путь предотвращения заражения на сегодня.

Coronavirus (Covid-19)

Главная
Новости
Антималярийные препараты против коронавируса, похоже, не работают. Данных все еще мало, но первые результаты — неутешительные

Российское правительство 16 апреля выпустило документ, в котором по сути содержится указание лечить пациентов с COVID-19 гидроксихлорохином — препаратом, одобренным для лечения малярии. Еще раньше особые надежды на это лекарство возлагал Дональд Трамп. К сожалению, в реальности нет особых оснований для оптимизма — проведенные исследования не доказывают, что гидроксихлорохин на самом деле эффективен.

Еще до того, как программа клинических исследований ВОЗ была объявлена, президент США Дональд Трамп по не вполне понятной причине возложил особые надежды именно на гидроксихлорохин. В своем твиттере он охарактеризовал его как лекарство, которое радикально повлияет на распространение коронавируса. По всей видимости, именно его высказывания раздули чрезмерный интерес к этому препарату.

Что было известно о препарате до сих пор?

Надежду на эффективность средства от малярии подал французский исследователь Дидье Рауль. В марте его группа опубликовала статью, где показала эффективность комбинации гидроксихлорохина в сочетании с антибиотиком азитромицином против вируса SARS-CoV-2.

Еще более подозрительно, что результат не удалось воспроизвести. Другая исследовательская группа из Франции решила проверить результаты Рауля и повторила испытание на 11 пациентах, которые получали комбинацию лекарств в той же дозировке. На шестой день 80% испытуемых все еще демонстрировали высокую вирусную нагрузку.

Но тут на помощь Раулю подоспело исследование из Китая, где на выборке в 62 пациента показали, что гидроксихлорохин ускоряет выздоровление больных COVID-19. Однако в другом китайском исследовании, включающем 30 пациентов, ученые пришли к заключению, что гидроксихлорохин скорее не показал эффективности. Французское исследование, включающее уже 181 пациента, причем с подтвержденной пневмонией, вызванной коронавирусом, также не подтвердило эффективность гидроксихлорохина: в то время как в контрольной группе умерли 22% пациентов, в группе, получавшей препарат, умерли 20%. Разницу между группами сами исследователи признали статистически незначимой.

В любом случае, все перечисленные работы отличаются маленькой выборкой и довольно расплывчатыми конечными точками, относительно которых оценивается эффективность результатов. Кроме последнего упомянутого испытания, в них оценивали довольно косвенные признаки эффективности: наличие генетического материала вируса в организме, тяжесть пневмонии либо время выздоровления.

Что показало самое последнее исследование?

Новое исследование, проведенное в США, стало самым большим из до сих пор опубликованных — оно включает уже 368 больных COVID-19. Кроме того, в нем эффективность препарата измеряли по надежным конечным результатам — снижению смертности или недопущению ухудшения состояния.

В выборку исследователи включили 368 госпитализированных пациентов, средний возраст которых составил 70 лет, все они были мужского пола. Часть из них (97 человек) получали гидроксихлорохин в дополнение к стандартным терапевтическим мерам, еще часть (113 человек) получали гидроксихлорохин в комбинации с азитромицином. Еще 158 человек вошли в контрольную группу.

В качестве конечных точек исследования, на которые обращали особое внимание ученые, взяли либо назначение искусственной вентиляции легких в результате ухудшения состояния пациента, либо смерть. В первом случае результаты между группами достоверно не отличались: ИВЛ понадобилась 13,3% пациентов, получавших гидроксихлорохин, 6,9% тех, кто получал его в сочетании с антибиотиком, и 14,1% контрольных пациентов.

Однако анализ летальных исходов показал, что, похоже, гидроксихлорохин не только не помогает, но даже ухудшает ситуацию. В то время как в контрольной группе умерли 11,4% пациентов, в группе на гидроксихлорохине умерли 27,8% больных, а среди получавших комбинацию с азитромицином — 22%. Такое заключение авторы статьи и сделали — применение гидроксихлорохина в качестве терапии достоверно (p=0,03) увеличивает риск смерти пациентов от всех причин.

Почему эти выводы не окончательные?

К примеру, в первой группе (только гидроксихлорохин) оказалось больше людей с повышенным кровяным давлением и осложненным диабетом, то есть факторами, которые увеличивают риск неблагоприятного исхода при COVID-19. Этот сдвиг объясняется рекомендацией применять препарат в экстренных случаях, то есть по умолчанию в первую группу попали самые тяжелые пациенты. Этим вполне можно объяснить повышенную смертность. Впрочем, все равно такой высокий процент смертей, вероятно, указывает на то, что препарат как минимум не облегчает состояние тяжелых больных.

Исходя из предполагаемых механизмов действия (о них можно прочитать здесь) энтузиасты гидроксихлорохина считают, что его нужно применять при первом проявлении симптомов, а не после наступления осложнений. Кроме того, в исследовании не упоминаются дозировки гидроксихлорохина, который сам по себе имеет серьезные побочные эффекты, такие как кардиотоксичность. Так что, возможно, наблюдаемые результаты могут частично объясняться неоптимальной дозировкой.

Так чем же лечить ковид?

Получается, что опубликованные исследования на тему гидроксихлорохина при COVID-19 пока что вызывают сомнения. Нужно ждать качественного двойного рандомизированного слепого исследования с достаточно большой выборкой пациентов. Уже после публикации большого американского исследования появились и первые систематические обзоры других испытаний антималярийных препаратов. В них авторы приходят к тем же неутешительным выводам — надежных доказательств, что гидроксихлорохин или хлорохин могут работать не только на отдельных человеческих клетках в пробирке, но и на живых людях, пока нет.

К сожалению, пока ни ВОЗ, ни американская панель экспертов Национальных институтов здоровья, не могут порекомендовать ничего специфического для лечения коронавирусной инфекции.

Читайте также: