Титры пцр коронавирус

Россия готовится к тотальному тестированию, новые тест-системы позволяют быстро провести масштабную проверку на вирус. К массовому выпуску приступил один из разработчиков нового продукта, два других начинают производство. Олег Гусев, ведущий научный сотрудник Научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины Казанского федерального университета и института физико-химических исследований RIKEN (Япония) помог РБК Тренды разобраться в том, как устроено тестирование на коронавирус в России и в мире.

Что предлагает ВОЗ

Глава Всемирной организации здравоохранения Тедрос Гебреисус еще в середине марта призвал страны проводить как можно больше тестов на вирус, который вызывает заболевание SARS-CoV-2, даже людям без симптомов. Согласно руководству ВОЗ, анализы на коронавирус COVID-19 должны проводиться методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с обратной транскрипцией. Как говорится в рекомендациях, на сегодня это самый точный и надежный метод диагностики вирусной инфекции. Он позволяет определить даже очень небольшое количество РНК вируса в биологическом материале человека. Это помогает выявить болезнь в инкубационном периоде.

Изобретенный в 1983 году метод и сейчас считается фундаментальным в молекулярной диагностике. Американский ученый, который придумал способ значительного увеличения малых концентраций фрагментов ДНК в биологической пробе, получил за него Нобелевскую премию. Выявление ДНК/РНК методом ПЦР позволяет диагностировать такие заболевания, как ВИЧ, вирусные гепатиты, инфекции, передающиеся половым путем, туберкулез, боррелиоз, энцефалит и многие другие. Метод используют в археологии, криминалистике, генетике.

Как работает ПЦР-тест

Для анализа из физиологических жидкостей извлекают одноцепочечную РНК, моделируют на ее основе двуцепочечную ДНК и многократно дублируют с помощью специального фермента (полимеразы). Увеличение числа копий ДНК называется амплификацией. В результате концентрация определенных фрагментов ДНК/РНК в биологическом образце, изначально минимальная, значительно увеличивается. При исследовании копируется только необходимый для теста участок ДНК. И, конечно, дублирование происходит только в том случае, если искомый участок вирусной ДНК или РНК присутствует в исследуемом биоматериале. В случае с коронавирусом мазок для анализа берут из ротоглотки или носоглотки, поскольку в крови или в кале вирус появляется на более продвинутой стадии болезни.

Тест-система EMG — продукт совместной разработки российских и японских разработчиков, проводившейся с 2016 года, рассказывает Олег Гусев. На данный момент эти тесты включены в систему обязательного медицинского страхования в Японии.

В ближайшее время планируется производить до 2,5 млн. тестов и 1 тыс. портативных лабораторий в неделю. Сами тесты, как и многие реагенты производятся в России. Планируется, что цена на тесты EMG будет в среднем в пять раз меньше, чем на стандартные ПЦР-тесты в Европе.

Российско-японские тесты основаны на методе изотермальной молекулярной диагностики SmartAmp, превосходящем метод ПЦР по скорости работы в восемь раз, а переносная лаборатория позволяет тестировать до 20 пациентов в час, говорит Гусев.

Ключевое отличие теста EMG в том, что многие тесты, которые производятся сейчас, это тесты ИФА (имунноферментный анализ), а не ПЦР. Данные системы определяют антитела, которые организм начинает вырабатывать не ранее, чем через неделю после заражения. Российско-японская разработка позволяет получать результат уже за 30 минут, с точностью, равной почти 100%. Кроме того, тест EMG позволяет определить наличие вируса уже на самых ранних стадиях, в то время как другие системы диагностики короновируса обладают меньшей чувствительностью и не могут выявлять вирус на ранней стадии инфицирования.

Принцип технологии российско-японского теста, по сути, не отличается от классической ПЦР — это наращивание количества целевых фрагментов ДНК и их детекция. Однако в изотермической амплификации, в отличие от классической ПЦР, где необходимы циклы нагрева и охлаждения, все происходит при одной температуре. Это позволяет многократно увеличивать скорость реакции. Метод SmartAmp был изобретен более 15 лет назад (как и LAMP — другая популярная технология изотермальной амплификации, предшествующая SmartAmp). Впервые для инфекционных заболеваний эту технологию применили в 2009 году для быстрого выявления пандемического гриппа (H1N1) в Японии.

Повторные тесты необходимы при любом методе. Отрицательный тест на COVID-19 не гарантирует, что человек не заразится этим вирусом на следующий день. Поэтому, например, в японских лабораториях персонал тестируют каждые несколько дней. Повторный тест нужен и для того, чтобы подтвердить, что человек излечился.

Эта тест-система будет использоваться для диагностики COVID-19 не только в России и Японии. 40 тыс. тестов закупила Австрия, поступили заказы из других стран Европы, Ближнего Востока, и Латинской Америки. Подана заявка в Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA) для поставок в эту страну.

На данный момент в России прошли регистрацию еще три теста на коронавирус.

По некоторым данным, в Москве проводится около 700 тестов на коронавирус в сутки. В планах у московских властей увеличить этот показатель до 10 тыс. тестов в сутки, а затем довести его до 25—28 тыс. тестов ежедневно.

Новые разработки за рубежом

Компания Bosch выводит на рынок свой тест на коронавирус, который сначала будет доступен в Германии, а вскоре появится в других странах. В его основе лежит диагностический аппарат Vivalytic, который, по словам изготовителей, станет первым автоматизированным тестом на COVID-19. Тест распознает не только коронавирус, но еще шесть респираторных заболеваний, например, вирусы гриппа А и B. Во время лабораторных испытаний аппарата его точность составила 95%.

Как пишет издание ZME Science, анализ может проводиться прямо в стационаре или медицинском центре — не нужно отправлять образцы в лабораторию и ждать, пока придет ответ. Врачи смогут быстрее идентифицировать и изолировать зараженных, а пациентам не придется пребывать в неизвестности несколько дней. Тест прост в обслуживании и не требует специальной подготовки. Медперсоналу нужно только взять мазок из носа или горла пациента, нанести его на картридж, содержащий реагент, и вставить картридж в анализатор. Каждый аппарат может выполнять до десяти анализов за 24 часа.

Еще более оперативный тест на COVID-19 разработали в Великобритании. Он позволяет выявить COVID-19 всего за 30 минут. Чтобы провести его, достаточно портативного оборудования стоимостью около $120 и набора полосок для мазков из носа и горла по $5 каждая. Одновременно проходить тест могут до шести человек.

FDA в экстренном порядке одобрило сверхбыстрый тест на коронавирус, разработанный калифорнийской компанией Cepheid. С его помощью диагноз можно будет поставить всего за 45 минут. Как отмечает Business Insider, для обработки результатов теста не требуется специальное обучение. Нужен лишь доступ к системе Cepheid GeneXpert — в США их 5 тыс., а по всему миру — 23 тыс.

Начало тотального тестирования людей на COVID-19 во всем мире — хорошая новость как для людей, так и для национальных органов здравоохранения. До сих пор в мире нет четкого представления о том, сколько людей заражены коронавирусом и выявление тех, у кого он уже есть: их госпитализация или отправка на домашний карантин позволит быстрее оценить масштаб угрозы и вовремя принять правильные меры.

3) лечить, лечить и ещё раз лечить! Многим тяжело принять то, что с некоторыми заболеваниями подавляющее большинство кошек прекрасно справляются самостоятельно. Есть болезнь — значит необходимо ее лечить, и пошло-поехало — уколы, таблетки, пересдача анализов раз в неделю…

Поэтому сегодня мы решили рассказать Вам о коронавирусе — просто.

Вирус проникает в организм через ротоглотку, достигает желудочно-кишечного тракта и вызывает воспалительный процесс слизистой оболочки тонкого отдела кишечника (живёт в клетках кишечного эпителия и разрушает их).
Иммунитет кошки работает над выведением вируса и большинство животных побеждают инфекцию самостоятельно. Процесс естественного выведения коронавируса из организма может занимать от нескольких недель до нескольких месяцев.
Если большое количество кошек живут скученно, то они могут перезаражать коронавирусом друг друга снова и снова.
Небольшой процент кошек могут остаться носителями коронавируса навсегда (13% инфицированных).

Коронавирус в большом количестве (миллиарды вирусных частиц на 1 грамм кала) выделяется с фекалиями инфицированных. Заражение происходит, когда кошки глотают или вдыхают вирус.
Заразность коронавируса очень высокая, для распространения достаточно небольшой частицы наполнителя из лотка, которым пользовалась выделяющая вирус кошка.

Кошачий коронавирус хорошо себя чувствует во внешней среде и может оставаться жизнеспособным на поверхностях в течение 7 недель.

По разным исследованиями от 60 до 80% всех кошек планеты заражены коронавирусом или когда-то контактировали с ним.

Риск передачи коронавируса через прикосновения рук, одежду или животных других видов невелик, только если руки/одежда/другое животное будут загрязнены непосредственно калом выделяющего вирус кота.

FIP — ВИРУСНЫЙ ПЕРИТОНИТ КОШЕК

Существует очень похожий вирус FIPV — вирус инфекционного перитонита кошек/ФИП, который не привязан ни к какому органу, с током крови распространяется по всему организму и поражает все системы органов.

Эти два вируса чрезвычайно близки по антигенному составу, и существует вероятность того, что ФИП — это мутационная форма коронавируса. Принято считать, что под воздействием стресс-факторов коронавирус может мутировать в ФИП — это не доказано наверняка, но на сегодняшний день является основной теорией.

Коронавирус обычно протекает достаточно легко и не является заболеванием, угрожающим жизни животного, в то время как ФИП — тяжёлое, 100% смертельное состояние.

Очень важно понимать, что хотя коронавирус и ФИП, вероятно, имеют одного и того же возбудителя, это принципиально разные, ни в коем случае не тождественные заболевания.
Кошка с положительным анализом на коронавирус может никогда не заболеть перитонитом, в то время как у кошки с инфекционным перитонитом может быть отрицательный анализ кала на коронавирус.

ФИП развивается менее чем у 10% кошек, зараженных кишечным коронавирусом.

Если ваше животное погибло из-за инфекционного перитонита, выждите не менее 7 недель прежде чем приносить в этот же дом нового питомца.

ПРОГНОЗ ПРИ КОНТАКТЕ С КОРОНАВИРУСОМ

При контакте кошки с коронавирусом существуют 4 варианта развития событий:

1) У животного разовьется ФИП (как было сказано выше, это происходит менее чем у 10% зараженных).

2) Кошка некоторое время будет выделять коронавирус и вырабатывать антитела к нему, затем прекратит выделять вирус, и титр антител снизится вплоть до нуля. Примерно в половине всех случаев заражения выделение вируса длится в пределах месяца, и только 5% кошек выделяют вирус более 9 месяцев.

3) Кошка становится носителем коронавируса пожизненно (13% всех инфицированных кошек). Такие кошки постоянно выделяют FCoV в фекалиях, оставаясь заразными непрерывно. Большинство пожизненных носителей остаются клинически здоровыми, однако у некоторых проявляется хроническая диарея.

4) Кошка устойчива к вирусу — представляется, что около 4% кошек из всей популяции абсолютно устойчивы к коронавирусной инфекции.

Коронавирусная инфекция у кошек чаще всего протекает без каких-либо жалоб, либо проявляется умеренно выраженными симптомами, такими как

— мягкий или жидкий стул,
— плохой аппетит,
— температура.

Как правило, эти симптомы не вызывают серьезного ухудшения общего состояния и не требуют медикаментозного лечения, если речь не идет о присоединении вторичной инфекции или сопутствующих заболеваниях.

Очень важно понимать, что если у котёнка жидкий стул и плохой аппетит, а также положительный анализ на коронавирус, то это вовсе не значит, что коронавирус является причиной симптомов болезни, он может просто тоже быть у животного, заодно, в то время как зверь страдает от инородного тела, застрявшего в кишечнике, например (или от любого из ещё 150 дифференциальных (возможных) диагнозов с такими распространёнными симптомами, как сниженный аппетит и диарея).
Именно поэтому, даже если вы знаете, что у питомца коронавирусный энтерит, никогда нельзя списывать на него появившиеся симптомы, при их появлении обязательно необходимо обратиться в ветеринарную клинику для диагностики.

Коронавирус выделяется со стулом, поэтому наиболее чувствителен тест на определение вируса в фекалиях.

Существуют разные мнения насчет того, как достоверно установить факт избавления кошки от инфекции — как правило, для этого требуется выполнение 5 последовательных исследований фекалий методом ПЦР с интервалом в 4 недели, и получить все результаты негативными. Согласно шведскому институту вирусологии, кошка считается не выделяющей коронавирус, если будут отрицательными 4 исследования фекалий методом ПЦР, сданные один за одним с промежутком 7–10 дней.

Уменьшение титра антител до уровня ПРОФИЛАКТИКА КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

Перед тем как подселять новых животных в группу кошек, свободную от коронавируса, новичков необходимо обследовать и не вводить в прайд серопозитивных животных (серопозитивные — это кошки, у которых организм вырабатывает антитела против коронавируса, вырабатывает — значит знаком с ним, значит может быть инфицированным).

Карантин в отдельном помещении с отдельным лотком должен составлять 12 недель, после чего проводится повторный анализ. Только кошки с нулевым титром антител должны быть допущены в питомники, свободные от коронавируса.

Инфекция FCoV может быть естественным образом выведена из питомника, где обитает менее 10 животных, в то время, как если в одном помещении контактируют более 10 животных, спонтанное естественное выведение вируса очень маловероятно, так как происходит постоянная перекрестная передача возбудителя от одной кошки к другой.
В таких группах кошек необходимо провести тестирование и изолировать кошек с котятами на 12 недель. Ранний отъем (до 4 недель) и удаление котят на 12 недель от серопозитивных матерей способствует искоренению инфекции.
Все кошки, дающие положительную реакцию, должны быть удалены.

Если кошки содержатся в доме, необходимо обеспечить индивидуальный лоток для каждой кошки, в идеале — в разных комнатах. Лотки должны содержаться в чистоте, необходимо избегать остатков высохших фекалий, которые становятся летучими. Предпочтительно использовать закрытые лотки-домики и непылящий комкующийся наполнитель, чтобы минимизовать распространение микрочастиц фекалий.
Миски с кормом должны стоять как можно дальше от лотков с наполнителем.

ВАКЦИНАЦИЯ ОТ КОРОНАВИРУСА

Попыток разработать эффективную и безопасную вакцину от ФИП было предпринято множество, однако большинство из них были неудачными.
На сегодняшний день на рынке представлена интраназальная вакцина (спрей, впрыскиваемый в ротоглотку) от коронавируса кошек Primucell, Pfizer.

Вакцина изготовлена на основе температурно-зависимого штамма коронавируса, этот штамм способен к размножению только в ротоглотке, где более низкая температура, поэтому он вызывает местный иммунитет в воротах вхождения вируса, но продуцирует очень маленькое количество системных антител.

Данная вакцина эффективна против коронавируса и удовлетворяет требованиям безопасности, однако не получено убедительных доказательств в пользу ее эффективности от инфекционного перитонита, вызываемого коронавирусом. Кроме того, к моменту достижения возраста 16 недель (рекомендуемый срок первичной вакцинации) большинство кошек группы риска уже имели контакт с коронавирусом, а значит вакцинация не имеет смысла.

Кишечный коронавирус не является тяжелым заболеванием, поэтому вакцинация от него применяется редко, эффективность же от ФИП требует дальнейших исследований.
На 2014 год данная вакцина не включена в список рекомендуемых комитетом по вакцинации Всемирной ассоциации врачей по мелким домашним животным (WSAVA).

ЭЛИМИНАЦИЯ ВИРУСА (ВЫВЕДЕНИЕ ВИРУСА ИЗ ОРГАНИЗМА)

Вопросом скорейшим выздоровлением от коронавируса озабочены многие владельцы кошек и питомников. В интернете можно встретить самые фантастические многоступенчатые схемы выведения вируса, содержащие рекомендации по диете, курсам иммуномодуляторов из нескольких препаратов, витаминов, антиоксидантов, гомеопатических средств и т. п.
Как правило, авторы этих схем имеют отдаленное отношение к ветеринарии и еще более отдаленное — к принципам доказательной медицины.

Для кошек — носителей коронавируса наибольшая вероятность развития ФИП существует в возрасте до года (по некоторым данным до 3-х лет), поэтому если у вашей кошки приходит положительный анализ на коронавирус в более позднем возрасте, маловероятно, что у нее возникнет ФИП.

Меры, которые могут способствовать выведению коронавируса из организма или по крайней мере бессимптомному перенесению заболевания:

— Хороший уход, поддержание высокого уровня гигиены;

— Полноценное сбалансированное кормление высокобелковым рационом.

Существует мнение, что закисление среды желудочно-кишечного тракта, что достигается, прежде всего кормлением сырыми мясом/рыбой, может способствовать победе над коронавирусом, однако это не подтверждается никакими объемными исследованиями, кроме того, кормление сырым рационом закономерно повышает риск получения гельминтозов, токсоплазмоза и т. д.;

— Антиоксиданты, такие как витамины A, C и E и цинк, возможно, оказывают противовирусное и/или иммуностимулирующее действие.

Все витаминные препараты можно применять только под контролем ветеринарного врача.
Нет необходимости продолжать использовать антиоксиданты дольше, чем несколько месяцев после того, как у кошки был риск заражения коронавирусом FCoV, более того, это может быть вредно.

Так как очень вероятно, что мутацию коронавируса в FIP провоцируют различные стресс-факторы, то после рекомендации ветеринарного врача избегать стрессовых ситуаций для животного, многие владельцы начинают содержать зверя как инвалида, который в любой момент может умереть — не дают ему препараты от блох и глистов, не вакцинируют животное, отказываются от кастрации и от других операций, даже при наличии показаний, не посещают планово ветеринарного врача.

Это однозначно неверная позиция, поскольку животное, лишённое поствакцинального иммунитета против опасных заболеваний, лишённое защиты от внешних и внутренних паразитов, испытывающее постоянное непродуктивное половое напряжение (течки у кошек) и рискующее заработать пиометру (гнойное воспаление матки) или опухоль молочных желез, а так же в принципе лишенное ветеринарного обслуживания — рискует заболеть и умереть гораздо больше, чем кот с коронавирусом, испытавший разовый сиюминутный стресс.

Важно понимать, что стресс — это нормальная физиологическая и психическая реакция организма на любое предъявленное ему требование, которая позволяет справиться с опасным раздражителем.
А острый стресс (такой, как насильное скармливание таблетки от глистов, поездка в ветеринарную клинику для вакцинации или кастрация, например) — это вообще хорошо, это адаптивная реакция, благодаря которой организм узнаёт что-то новое для себя, приобретает дополнительные навыки, что как раз способствует повышению стрессоустойчивости. Попытка справиться с острым стрессом всегда ведёт к улучшению особи.
В отличии от хронического стресса, который может испытывать зверь например, от постоянного зуда из-за клещей в ушах (ведь кота пожалели и не обработали от паразитов) или от постоянного полового влечения (ведь кота пожалели и не кастрировали), и который может приводить к заболеваниям.

Что касается вакцинации и хирургических операций для животных с положительным анализом на коронавирус:
вакцинируют и планово оперируют только клинически здоровых животных, то есть, если у животного нет внешних признаков заболевания (повышенной температуры, рвоты, диареи, сниженного аппетита, истощения, обезвоживания, выделений из разных мест и т. д.) — его обязательно вакцинируют и его можно оперировать, даже если оно является носителем коронавируса.
Нет никаких данных за то, что данные процедуры повлияют на течение заболевания самим коронавирусом или его мутации в ФИП.

Если у животного с коронавирусным энтеритом есть симптомы заболеваний, то его лечат симптоматически и потом вакцинируют/при необходимости оперируют.

Если животное не страдает от неутолимого полового влечения и кастрация планируется планово, а не как избавление от мучений, то имеет смысл подождать. Скорее всего коронавирус в течение нескольких месяцев естественным путем покинет организм животного.

На этом всё. О вирусном перитоните кошек (ФИП) можно рассказать больше, но в рамках отдельной статьи, так как это два разных заболевания.

Если у вас остались вопросы, не стесняйтесь задавать их в комментариях к статье.

— Первый вопрос: а как вообще выглядит тест на коронавирус? Экспресс-тест на ВИЧ мы все видели: белая лопаточка с ручкой и пробирка с реагентом. Через 15 минут готов результат. Новый коронавирус тестируется по методу полимеразной цепной реакции (ПЦР). Насколько вообще его сложно производить?

— Выглядит тест на коронавирус как пробирки с прозрачными жидкостями в коробочке или пакетике, как-то так. Но чтобы провести саму реакцию и получить результат, нужно еще специальное оборудование.

Производить тест умеренно сложно, это высокие технологии, но очень хорошо отлаженные за много лет. Ограничения — как на любом производстве: реагенты и материалы, производственные мощности и должная культура производства — не надо объяснять, что будет, если чихнуть в пробирку, — плюс кадры. Каких объемов реально достигнуть — зависит от того, какие мощности будут задействованы: если, например, какие-то линии, которые сейчас производят ПЦР-тесты для других инфекционных заболеваний, волевым решением перебросить на SARS-CoV-2, производство возрастет.

— Почему сейчас тестируют коронавирус именно по методу ПЦР, а не иммуноферментного анализа, например, как ВИЧ? С ИФА диагностика была бы быстрее, дешевле? Или это вообще не имеет значения?

За подробностями лучше обратиться к специалистам в области молекулярной диагностики. Но, на мой взгляд, ПЦР с обратной транскрипцией, а именно он используется в случае с COVID-19, — хороший метод. Для ПЦР-тестов характерна высокая чувствительность. В их основе лежит амплификация нуклеиновой кислоты, то есть даже при малом количестве копий в образце можно получить хороший сигнал. Кроме того, для разработки таких тестов нужен, по большому счету, только геном вируса или часть генома.

— По факту ПЦР-тесты для COVID-19 появились почти сразу после того, как китайцы опубликовали расшифровку генома вируса. То есть для того, чтобы начать их разработку, не нужно было никаких образцов, хватило журнальной публикации и специалистов, способных быстро разработать технологию.

— Да. В том и прелесть ПЦР-теста, что для него достаточно генома вируса. Зимой, как только первый геном был опубликован, специалисты во всех странах начали заказывать синтез генетического материала nCoV-19. Зная нуклеотидную последовательность генома, в лаборатории можно получить участок этого генома и дальше экспериментировать уже с ним. В частности, проверить чувствительность и специфичность теста, используя вместо клинических образцов растворы ДНК.

В январе у ученых большинства стран вообще и не было другого выхода, настоящие пациенты имелись только в Китае. К такому методу могут быть претензии. Например, если чувствительность теста проверяется по растворам кДНК, не учитываются потери при обратной транскрипции. Тут разные другие тонкости. Но в целом ученые сработали очень оперативно.

КАК УСТРОЕН МЕТОД ПЦР?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это метод тестирования, который способен находить генетический материал вируса непосредственно в крови пациента, слюне или любой другой жидкости, изобретенный в 1983 году американским биохимиком Кэрри Муллисом.

Как это работает?

Сначала вирусную ДНК выделяют из материала, представленного в лабораторию, денатурируют: на этом этапе двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94—96 °C, чтобы цепи ДНК разошлись. Затем добавляют так называемые праймеры — начальные звенья цепочки, которые необходимы для старта синтеза новой копии, и так называемую полимеразу — тот самый фермент, который и будет заниматься репликацией ДНК.

Как правило, для лабораторной ПЦР используются ДНК-полимеразы из термофильных бактерий, поскольку в течение реакции смесь многократно охлаждают и нагревают. На следующем этапе в смесь из ДНК, полимеразы и праймеров добавляются нуклеотиды — то есть строительный материал для воспроизводства, после чего емкость с нею нагревается до 37°C, и процесс запускается.

На последующей стадии элонгации полимераза начинает синтез на каждой из двух цепочек разделенной ДНК недостающей пары. Происходит это по принципу комплементарности: фермент присоединяет напротив каждого нуклеотида, из которых состоят ДНК, противоположный. По завершении реакции цикл неоднократно повторяется (см. видео ниже).

Ингибиторы обратной транскриптазы — одни из самых распространенных видов лекарств от ВИЧ-инфекции. К ним относятся, например, зидовудин и ламивудин — самые первые препараты АРВТ, разработанные еще в 80-х.

Производится ПЦР на специальных приборах, амплификаторах, или так называемых термоциклерах (Thermal cycler).

Наглядно, как работает метод ПЦР, можно посмотреть на приведенном ниже видео.

— Что касается ИФА-тестов для коронавируса, их разработать так и не успели?

— Почему? Тесты на определение антител к антигенам SARS-CoV-2 в крови существуют. У теста на антитела свои преимущества. Но я бы сказала так: они с ПЦР-тестом дополняют друг друга. Тест на антитела лучше работает на поздних стадиях. Антитела в крови сохраняются и тогда, когда вирус исчезает из организма, то есть с помощью такого теста можно узнать, кто переболел COVID-19 в прошлом.

— Даже если у пациента не было выраженных симптомов и дело обошлось без госпитализации?

— А что за организации, кто в нашей стране занимается этими тестами? Роспотребнадзор?

У каждого теста есть погрешность. При низкой заболеваемости ложноположительных результатов может быть намного больше, чем выявленных реальных пациентов, даже если тест вполне хороший.

На первом заседании координационного совета по борьбе с коронавирусом вице-премьер РФ Татьяна Голикова сказала, что правительство ждет от регионов предложений о том, на базе каких еще лабораторий можно будет проводить эти исследования. Частные компании тоже смогут делать тесты на коронавирус на платной основе. Возможно, в самом скором времени будет новая информация о том, как все это будет происходить.

— На 15 марта появилась информация, что в России было произведено почти 110 тысяч тестов на коронавирус. Это много для наших масштабов или мало?

— По поводу возможности произвести достаточное количество тестов — тут много вопросов: производственные мощности, которыми мы располагаем, количество реагентов, которые понадобятся, наконец, лаборатории с необходимой техникой и обученным персоналом, где эти тесты проводить. Мало нам будет пользы и от миллиона тестов, если не хватит рук, чтобы эти тесты запускать. Все эти вопросы надо исследовать.

Срок исполнения

Исследуемый материал

Метод определения

ОПИСАНИЕ

Инфекционный перитонит кошек (ИПК, Feline infectious peritonitis, FIP) — чрезвычайно тяжелая форма течения коронавирусной инфекции, получившая свое название наиболее часто встречающегося клинического проявления: воспаления брюшной полости (перитонита). Возбудитель данной инфекции — вирус порядка Nidovirales семейства Coronaviridae рода Coronavirus вида Felinae Coronavirus (FCoV). В эту группу входят также таксономически близкие коронавирусы: вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ВТГС, TGEV) и коронавирус собак (CCV).
Болеют кошки всех возрастов, но наиболее чувствительны к заболеванию молодые животные в возрасте до 2 лет, а также взрослые старше 10 лет. Количество зарегистрированных случаев ИПК не зависит от времени года (не наблюдается сезонности заболевания), соотношение по полу больных животных существенно не отличается (болеют как коты, так и кошки), особой чувствительностью к инфекции обладают кошки британской породы голубого и серого окраса. Не отмечено устойчивости к инфекции у беспородных животных.
Клинически болезнь проявляется в двух формах: влажной (инфузионной), сопровождающейся скоплением экссудата в брюшной и/или плевральной полостях, и сухой (неинфузионной), проявляющейся в гранулематозном поражении внутренних, преимущественно паренхиматозных органов и не сопровождающейся накоплением экссудата в полостях тела. Инфузионный ИПК считается классической формой проявления и составляет приблизительно 75% клинических случаев. ИПК может иметь длительный инкубационный период (от одной недели до полугода), во время которого клинические признаки не наблюдаются. Кроме того, существует скрытая форма заболевания, при которой возможно выделение вируса во внешнюю среду.
Передача вируса от больных животных происходит вертикально (трансплацентарно), либо горизонтально (контактно от животного к животному или через предметы ухода).
Первоначально коронавирус попадает в ротовую или носовую полость, где в фарингеальных эпителиальных клетках происходит первичная репликация вируса. Затем вирус проникает в клетки столбчатого эпителия кишечника — основное место его размножения и персистенции. При таком варианте заражения инфекция может протекать бессимптомно или проявляться в виде энтерита, легкого недомогания, диареи, снижения аппетита и не представляет опасности для жизни животного. Кошки с персистирующей коронавирусной инфекцией являются основным источником вируса, выделение которого может происходить со слюной, мочой, но основное количество выделяется с калом.
Однако в некоторых случаях коронавирус приобретает способность поражать моноциты и макрофаги, и тогда инфекционный процесс формируется совершенно по другому пути, приводящему к развитию ИПК. После попадания в макрофаги, вирус разносится по всему организму. Пораженные макрофаги скапливаются под серозной оболочкой стенок кровеносных сосудов, вызывая системный васкулит, что приводит к повышению проницаемости сосудов и скоплению выступающей жидкости (выпота) в полостях тела (инфузионная форма ИПК). В случае незначительного поражения кровеносных сосудов паренхиматозных органов (печени, селезенки, легких, брыжеечных лимфатических узлов, стенок кишечника, поджелудочной железы, увеального глазного тракта) происходит образование отдельных пиогранулем (гранулематозная, сухая форма ИПК). Обе формы заболевания могут привести к смерти животного.
Изменение тропности коронавируса и поражение макрофагов — ключевого компонента в системе иммунной защиты организма — является основной причиной, обуславливающей тяжесть заболевания ИПК. Заражение макрофагов приводит к так называемому антителозависимому усилению инфекции. Поскольку макрофаги, содержащие вирус, не экспрессируют вирусные антигены на поверхности, то специфические антикоронавирусные антитела (АТ) не узнают инфицированные вирусом клетки. В то же время, сывороточные иммунные комплексы АТ с вирусом продолжают распространять вирус в организме и инфицировать макрофаги. Таким образом, наличие АТ не только не защищает, но и, напротив, способствует развитию ИПК.
Сложность серологической диагностики ИПК связана с тем, что большой процент здоровых кошек имеют АТ против коронавирусов: 20–60% среди домашних животных и до 100% у животных из приютов или питомников.
Установлено, что тяжесть клинических проявлений при ИПК имеет прямую корреляцию с величиной титра АТ к возбудителю заболевания. Другими словами, важен не сам факт наличия в сыворотке крови АТ к коронавирусу, а высокий уровень титров с тенденцией к быстрому нарастанию. Однако, необходимо помнить, что некоторые кошки, которые будут иметь клиническое проявление ИПК и не будут иметь АТ к возбудителю.
Широкое применение находит иммуноферментный анализ (ИФА) для определения точной величины титра АТ к вирусу ИПК.
Метод основан на взаимодействии иммобилизованного в лунках планшета антигена коронавируса со специфическими антителами из исследуемой пробы сыворотки и последующем выявлении полученного комплекса конъюгатом (меченными пероксидазой хрена специфическими антителами к IgG кошки). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в растворе перекиси водорода и окисление хромогена. В лунках развивается окраска, интенсивность которой прямо пропорциональна количеству антител в определяемой пробе.
Для уточнения диагноза проводят повторные исследования клинического материала с интервалом 2–4 недели. Снижение или увеличение титра АТ напрямую связано с течением инфекционного процесса.
Диагностика инфекционного перитонита должна осуществляться комплексно, с учетом клинических признаков и результатов серологических и других видов исследований.

ПРЕАНАЛИТИКА

Для исследования методом тИФА (твердофазный иммуноферментный анализ) основным биоматериалом является сыворотка крови кошек. Образец стабилен 5 дней при температуре +2С…+8С. Гемолиз и хилез сыворотки (++++) может стать препятствием для проведения исследования.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ (РАСШИФРОВКА АНАЛИЗОВ)

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

РЕЗУЛЬТАТ ИССЛЕДОВАНИЯ

Многие здоровые кошки и кошки с другими болезнями имеют антитела к коронавирусу. Обнаружение только антител к коронавирусу НЕ является диагностическим критерием ИПК. Диагноз Инфекционный перитонит кошек ставится комплексно.

Антитела в исследуемом образце (сыворотка крови) не обнаружены.
Диагноз ИПК (инфекционный перитонит кошек) ставится комплексно. На основании только данного исследования подтвердить или опровергнуть ИПК невозможно, так как в редких случаях антитела могут не обнаруживаться .

Титры коронавируса у кошек

Результат свидетельствует об обнаружении антител в исследуемом. Данный титр следует считать фоновым, свидетельствующем о контакте кошки с энтеральным штаммом коронавируса.
Диагноз ИПК (инфекционный перитонит кошек) ставится комплексно. На основании только данного исследования подтвердить или опровергнуть ИПК невозможно.