Герпес и микроскопия мазка

Идентификация вируса простого герпеса 1-го и 2-го типов (Herpes simplex 1/2), основанная на явлении флюоресценции, возникающей при связывании антигена HSV 1/2 и специального реагента (антитела, меченного флюорохромом) и наблюдаемой с помощью флюоресцентной микроскопии.

Вирус простого герпеса 1-го и 2-го типа, герпес-вирусная инфекция, ИФ.

Синонимы английские

HSV 1/2, immunofluorescence, immunofluorescence staining, immunofluorescence analysis.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок урогенитальный, мазок из носоглотки, мазок с конъюнктивы.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок до менструации или через 2-3 дня после ее окончания.
• Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка.

Общая информация об исследовании

Оба типа простого герпеса (HSV 1/2) относятся к ДНК-содержащим оболочечным вирусам. Они являются самыми распространенными вирусными патогенами и способны вызывать целый спектр заболеваний, в том числе простой пузырьковый лишай ("лабиальный герпес", HSV-1, и "генитальный герпес", HSV 1/2), гингивостоматит и кератоконъюнктивит, а также более тяжелые состояния (энцефалит, диссеминированную герпетическую инфекцию новорождённого). В структуре оболочки HSV 1/2 обнаружены белковые молекулы, обладающие специфическими для этого возбудителя вирулентными и антигенными свойствами (ngB, ngC, ngD и другие). В лабораторной диагностике эти антигены используются для идентификации HSV 1/2. Один из методов их выявления – иммунофлюоресценция.

Иммунофлюоресценция (ИФ) – это иммуногистохимическое исследование, позволяющее выявить антиген возбудителя в образце биоматериала. Она основана на взаимодействии антигена HSV 1/2 и специфического для него антитела, маркированного флюоресцентным красителем (флюорохромом), а также на регистрации флюоресценции при изучении биоматериала в ультрафиолетовом свете. Метод позволяет получить результат в более короткие сроки, чем выделение вируса в культуре клеток, а также характеризуется большей точностью по сравнению с другим распространенным анализом – пробой Цанка с окраской по Райту – Гимзе.

Чувствительность ИФ зависит от стадии герпес-вирусной инфекции. Наиболее точный результат будет получен при анализе отделяемого из везикул и "свежих" эрозий. При этом чувствительность теста составляет около 70 %. Обнаружение вируса с помощью ИФ менее вероятно, если отделяемое получено из язвенных дефектов, пустулезных элементов или корок. По этой причине для диагностики герпес-вирусной инфекции с помощью ИФ рекомендуется повторное (многократное) взятие биоматериала. Также чувствительность теста максимальна при взятии отделяемого при самых первых высыпаниях и значительно снижается через 72 часа (составляет 19 %). Наибольшая чувствительность достигается при исследовании образцов, полученных из элементов "генитального герпеса", по сравнению с элементами другой локализации. Необходимо также отметить, что чувствительность теста снижается при анализе биоматериала, взятого на фоне лечения противовирусными препаратами. Учитывая эти особенности, интерпретировать отрицательный результат следует с учетом клинической картины и некоторых других лабораторных данных.

ИФ характеризуется достаточно высокой специфичностью (96-99 %). Это означает, что положительный результат теста позволяет с уверенностью подтвердить диагноз "герпес-вирусная инфекция".

ИФ может быть с успехом применена при обследовании пациентов из группы риска по герпес-вирусной инфекции (например, пациентов, имеющих несколько половых партнеров) и с ее симптомами. Наоборот, не следует использовать метод ИФ при обследовании пациентов без факторов риска (например, девочек препубертатного возраста) и пациентов с бессимптомной инфекцией HSV1/2. Учитывая распространенность бессимптомной инфекции HSV1/2 среди беременных, данный анализ не рекомендован для обследования планирующих беременность и беременных без клинических признаков генитального герпеса.

При подтверждении диагноза "генитальный герпес" с помощью ИФ также рекомендуется обследование на другие инфекции, передаваемые половым путем (гонорею, трихомониаз, хламидиоз и др.). Кроме того, следует обследоваться на ИППП всем половым партнерам пациента.

Для чего используется исследование?

• простого пузырькового лишая;
• герпетического гингивостоматита;
• герпетического кератоконъюнктивита.

Когда назначается исследование?

• "генитального герпеса" у мужчин (сгруппированные везикулезные, эрозивные или язвенные высыпания в области гениталий или бедер, дизурия, дискомфорт в паховой области или промежности);
• "генитального герпеса" у женщин (к описанным симптомам добавляются слизистые выделения из влагалища и диспареуния);
• герпетического кератоконъюнктивита (острое начало болезни, слезотечение, светобоязнь, блефароспазм, инъекции сосудов склеры, интенсивная боль в области пораженного глаза);
• герпетического гингивостоматита (острое начало болезни, лихорадка, отек и эритема десен, болезненная шейная лимфаденопатия, а также везикулезные высыпания в ротовой полости и на коже периоральной области).

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружено.

Причины положительного результата:

Причины отрицательного результата:

• отсутствие герпес-вирусной инфекции.

Что может влиять на результат?

• Применение ацикловира, ганцикловира и фоскарнета могут приводить к ложноотрицательному результату.



Кто назначает исследование?

Дерматовенеролог, уролог, офтальмолог, ЛОР.

Литература

• Domeika M, Bashmakova M, Savicheva A, Kolomiec N, Sokolovskiy E, Hallen A, Unemo M, Ballard RC; Eastern European Network for Sexual and Reproductive Health (EE SRH Network). Guidelines for the laboratory diagnosis of genital herpes in eastern European countries. Euro Surveill. 2010 Nov 4;15(44).
• Caviness AC, Oelze LL, Saz UE, Greer JM, Demmler-Harrison GJ. Direct immunofluorescence assay compared to cell culture for the diagnosis of mucocutaneous herpes simplex virus infections in children. J Clin Virol. 2010 Sep;49(1):58-60.
• Scicchitano LM, Shetterly B, Bourbeau PP. Evaluation of light diagnostics SimulFluor HSV/VZV immunofluorescence assay. Diagn Microbiol Infect Dis. 1999 Nov;35(3):205-8.
• Lafferty WE, Krofft S, Remington M, Giddings R, Winter C, Cent A, Corey L. Diagnosis of herpes simplex virus by direct immunofluorescence and viral isolation from samplesof external genital lesions in a high-prevalence population. J Clin Microbiol. 1987 Feb;25(2):323-6.
• Schmidt NJ, Gallo D, Devlin V, Woodie JD, Emmons RW. Direct immunofluorescence staining for detection of herpes simplex and varicella-zoster virus antigens in vesicular lesions and certain tissue specimens. J Clin Microbiol. 1980 Nov;12(5):651-5.

Мазок на заболевания урогенитальной сферы — один из самых распространенных и информативных методов анализа в современной медицине. С его помощью можно выявить не только банальные воспаления, но и предупредить развитие онкологических заболеваний. Несмотря на надежность и доступность метода, не все женщины осознают необходимость регулярного посещения гинеколога и сдачи анализов и нередко обращаются к врачу только в запущенных случаях.

Показания к назначению анализа мазка у женщин

Каждая женщина хоть раз в своей жизни, посещая гинеколога, сдавала мазок на микрофлору или скрытые инфекции. Мазок берется со стенок влагалища, цервикального канала и шейки матки. В лабораторных условиях проводится микроскопическое исследование клеток, содержащихся в биологическом материале. Такой анализ позволяет оценить состояние эпителиальных клеток матки и влагалища, выявить патогенные микроорганизмы и заболевания, передающиеся половым путем. Мазок желательно сдавать регулярно, раз в год, даже если у женщины нет видимых поводов для беспокойства, поскольку многие инфекции в течение длительного времени могут не вызывать никаких симптомов.

В обязательном порядке назначается мазок в тех случаях, когда женщина жалуется на зуд и жжение в области половых органов, необычные выделения из них, внезапную боль внизу живота. Как правило, эти признаки указывают на наличие какого-либо заболевания, диагностировать которое можно только с помощью анализа мазка. Кроме того, желательно провести исследование биоматериала в том случае, если у женщины произошел незащищенный контакт с малоизвестным ей партнером и есть риск заразиться инфекционным заболеванием, передающимся половым путем.

Также врач-гинеколог назначает обязательную сдачу анализа мазка женщинам, планирующим беременность, готовящимся к ЭКО или другим процедурам искусственного оплодотворения (ВРТ). Женщинам, ожидающим ребенка, анализ мазка проводится трижды на всем протяжении срока, поскольку инфекции способны передаваться от матери к ребенку, осложнять роды или вызывать выкидыш.

В гинекологии существует несколько типов анализа мазка в зависимости от вида исследования.

1. Самым распространенным является мазок на флору или общий мазок , при помощи которого врач определяет так называемую чистоту влагалища у женщины. Что он показывает? Этим способом можно определить состояние клеток эпителия и выявить наличие заболеваний, вызванных патогенными микроорганизмами, таких как вагинит, кандидоз (молочница), вагиноз, цервицит.
   В результате проведения бактериоскопического исследования также диагностируются некоторые заболевания, передающиеся половым путем — гонорея, трихомониаз. В основе анализа лежит способность разных микроорганизмов окрашиваться в разные цвета в зависимости от степени устойчивости к воздействию антибиотиков. Эта способность была открыта датским ученым Г.К. Грамом. В результате окрашивания биоматериала выявляются грамположительные (грам+) микроорганизмы, имеющие большую чувствительность к антибиотикам, и грамотрицательные (грам—), отличающиеся более тонкой и сложной в строении оболочкой и низкой чувствительностью к препаратам. Грамотрицательные микроорганизмы способны вызвать различные заболевания женской половой сферы.
   Врач-лаборант в процессе проведения анализа под микроскопом подсчитывает количество по-разному окрашенных микроорганизмов, лейкоцитов, определяет форму бактерий, их размеры и расположение. В некоторых случаях исследуются неокрашенные (нативные) мазки, что позволяет обнаружить жгутиковые формы трихомонад. Кроме того, в рамках мазка на флору может проводиться так называемый посев на микрофлору. Он используется в тех случаях, когда возбудитель заболевания из-за его малой концентрации не может быть обнаружен под микроскопом и для определения рода и вида бактерий. В этом случае биоматериал, взятый из половых органов женщины, помещают в специальную питательную среду на основе желатина, и через определенное время изучают результат.

Появление на питательном субстрате колоний микроорганизмов говорит о наличии заболевания. Метод посева также используется для определения стратегии лечения, поскольку во время созревания колонии можно выяснить, к воздействию каких групп антибиотиков она особенно неустойчива.

1. Мазок на скрытые инфекции . К скрытым инфекциям относят группу болезней, которые могут бессимптомно протекать на протяжении нескольких месяцев или даже лет, вызывая осложнения, а некоторых случаях — даже бесплодие. На сегодняшний день наиболее достоверным способом выявления скрытых инфекций является исследование мазка при помощи ПЦР (полимеразной цепной реакции). Этот метод используется для диагностики инфекций, не обнаруживаемых в общих мазках. Для проведения анализа берется секрет из шейки матки, влагалища или мочеиспускательного канала и производится многоэтапное повышение концентрации нуклеиновой кислоты и копирование отдельных фрагментов ДНК присутствующих в мазке микроорганизмов. В результате врач может установить видовую и родовую принадлежность всех патогенных бактерий и их способность вызывать развитие заболеваний. В большинстве случаев ПЦР-анализ применятся при подозрении на наличие заболеваний, передающихся половым путем и имеющих на ранних стадиях практически бессимптомное течение. Преимуществами метода являются:

• высокая точность определения возбудителя инфекции;
• возможность определения именно наличия вируса, а не продуктов его жизнедеятельности или распада;
• возможность постановки точного диагноза на основе всего одной клетки микроорганизма.

1. Мазок на онкоцитологию, или тест по Папаниколау (пап-тест) , позволяет выявить наличие онкологических заболеваний в шейке матки на ранних стадиях и вовремя начать терапию. Пап-тест определяет большинство воспалительных заболеваний, дисплазию эпителия и злокачественные образования. Сдавать этот мазок рекомендуется ежегодно всем женщинам в возрасте от 21 до 65 лет. В случае если у женщины наблюдаются нарушения менструального цикла, воспалительные процессы цервикального канала, бесплодие, врач назначит мазок на онкоцитологию в обязательном порядке. Также рекомендуется пройти пап-тест при диагностировании диабета, ожирения 2–3 степени, в период планирования беременности, при приеме гормоносодержщих препаратов и наличии в организме вирусов генитального герпеса и папилломы.
   При анализе мазка можно получить пять типов результата в зависимости от наличия и степени патологии. Первый тип — это отрицательный показатель, говорящий о том, что никаких отклонений от нормы в организме женщины нет, и она полностью здорова. При втором типе присутствует воспалительное заболевание, требующее лечения. Третий тип свидетельствует о наличии в эпителии единичных клеток с аномальным строением ядра. Четвертый тип — подозрение на злокачественное образование или эрозию шейки матки, генитальный герпес, папиллломовирусную инфекцию, паракератоз. Пятый тип — наличие онкологического заболевания, требующего незамедлительного лечения. Следует помнить, что мазок показывает только степень изменения клеток, но не причину, их вызвавшую. Для постановки диагноза необходимы результаты других анализов, включая биопсию, кольпоскопию и гистологическое исследование.
   Если в мазке будут найдены атипичные клетки, то в заключении будет об этом написано, а также будет указан тип изменений. Если в расшифровке мазка на цитологию нет особых примечаний, это говорит о том, что в ходе исследования никаких патологий обнаружено не было.

При выборе дня для взятия мазка нужно учитывать менструальный цикл. Желательно сдавать анализ перед началом менструации или через несколько дней после ее окончания (оптимальный срок — пятый день), чтобы избежать попадания крови в мазок. Хотя процедура взятия мазка и не слишком сложна, все же необходимо заранее принять некоторые дополнительные меры, чтобы обеспечить чистоту результата. Подготовка к мазку на инфекции у женщин заключается в следующем:

1. Не использовать вагинальные свечи, тампоны, мази перед анализом.
2. Отказаться от спринцевания.
3. При наличии воспалительного заболевания, сопровождающегося обильным выделением секрета необходимо сначала провести лечение и только после полного выздоровления сдавать мазок.
4. Воздержаться от половых контактов в течение одного-двух дней до сдачи анализа.
5. Не использовать средства интимной гигиены накануне и в день процедуры.
6. Воздержаться от опорожнения мочевого пузыря в ближайшее время перед сдачей мазка.

В остальном женщина может вести обычный образ жизни: не требуется ограничений ни по питанию, ни по физической активности.

Взятие у женщины мазка на флору, на скрытые инфекции и на онкоцитологию несколько различается. Во всех случаях перед процедурой женщина проходит общий гинекологический осмотр на кресле с помощью зеркала.

При мазке на флору после визуальной оценки стенок влагалища врач специальным стерильным шпателем осуществляет забор материала из трех участков — влагалища, шейки матки и наружного отверстия мочеиспускательного канала. В некоторых случаях забор производится только с двух первых участков. Взятый шпателем материал равномерно широким мазком распределяется по стерильному предметному стеклу. Нанесение материала каплей, толстым слоем или небольшим мазком считается неправильным, поскольку затрудняет работу врача-лаборанта. При этом материалы из разных участков должны наносится на стекло отдельно друг от друга. С обратной стороны стекла врач делает пометки о месте взятия мазка: U — мочеиспускательный канал, V — влагалище, С — шейка матки. После этого стекло высушивается и направляется в лабораторию на исследование.

При сдаче мазка у женщин на скрытые инфекции и на онкоцитологию забор материала производится специальной щеточкой или с помощью особых стерильных ватных тампонов. Перед взятием материала обязательно удаляют слизь, так как ее наличие может дать ложный результат. Поскольку большинство микроорганизмов являются внутриклеточными паразитами, точное обнаружение их возможно только при исследовании соскоба со стенок половых органов. При анализе на скрытые инфекции материал со щеточки помещают в физраствор, хранящийся в холодильнике. Мазок на онкоцитологию наносят на предметное стекло и высушивают.

Как правило, процедура забора мазка для женщины практически безболезненна. Неудобство может вызывать соприкосновение с гинекологическим зеркалом из-за разницы температур между телом и металлическим инструментом. При взятии материала тампоном или щеточкой с шейки матки может отмечаться незначительное болевое ощущение, которое проходит сразу после окончания манипуляции. Мазок на онкоцитологию иногда способен вызывать незначительные кровянистые выделения в течение двух-трех дней. Если возникают сильные кровотечения, повышение температуры, боли в животе, то необходимо срочно обратиться к гинекологу, поскольку такие симптомы при взятии мазка нормой не являются.

После проведения анализа мазка пациентка получает результаты, которые полностью зависят от типа, назначенного ей исследования.

При расшифровке анализа мазка на флору необходимо знать показатели нормы:

1. Плоский эпителий (пл.эп) — у здоровой женщины этот показатель не должен превышать 15 клеток в поле зрения. Большее их количество говорит о воспалительном процессе, а меньшее — о наличии гормональных нарушений.
2. Лейкоциты (L) . Нормальное количество во влагалище — не более 10-ти, а в шейке матки не более 30-ти единиц.
3. Палочки Дедерлейна , обеспечивающие нормальную микрофлору женских половых органов. В мазке здоровой женщины они должны присутствовать в большом количестве, поскольку их недостаток свидетельствует о нарушенной микрофлоре влагалища.
4. Слизь должна присутствовать в мазке в умеренном количестве. Обильные выделения слизи — признак воспаления или инфекции.
5. Грибки рода кандида, гонококки, трихомонады в мазке выявляться не должны. Их наличие свидетельствует о заболевании.

Кроме этих показателей в анализе может быть указана одна из четырех степеней чистоты влагалища. Нормальными являются только первая и вторая степень, третья и четвертая являются признаком заболевания половых путей.

Результаты анализа мазка на скрытые инфекции можно получить через 1–2 суток после сдачи. В некоторых случаях они могут быть готовы прямо в день прохождения процедуры. При помощи мазка выявляются следующие инфекции:

• герпес-вирус человека 1 и 2 типов;
• вирус Эпштейна-Барр;
• цитомегаловирус;
• герпес-вирус человека;
• вирус папилломы человека;
• бледная трепонема;
• мобилункус;
• бактероиды;
• гонококк;
• гарднерелла;
• микоплазма;
• уреаплазма;
• хламидии.

Мазок на инфекции в большинстве случаев является достаточно надежной диагностической процедурой. С его помощью можно выявить большинство серьезных заболеваний половой сферы, при этом стоимость анализа является вполне доступной даже в частных клиниках.

Инфицирование вирусом герпеса не считается опасным для жизни — большинство больных сохраняет качество жизни, либидо. Однако в некоторых случаях генитальный герпес может привести к тяжелым осложнениям. Вот почему стоит узнать, в каких случаях нужно делать анализ на генитальный герпес, даже если симптомов болезни нет.

Генитальный герпес — заболевание, передающееся половым путем (ЗППП). Его возбудитель — вирус простого герпеса (ВПГ), однажды попав в организм человека, остается там на всю жизнь. Человек может быть носителем вируса, не подозревая об этом.

Актуален вопрос и для тех, кому уже поставлен диагноз генитальной инфекции вирусом герпеса или обнаружил у себя симптомы этого неприятного заболевания.

Какие анализы придется сдать, насколько они точны для диагностики. Кроме того многих интересует вопрос: возможно ли по результатам анализов узнать время заражения — ведь ответ позволяет определить с максимальной точностью источник заражения.

Что такое генитальный герпес?

Всем известен герпес на губах, в народе его называют простудой, так как характерные пузырьки периодически появляются в периоды заболевания ОРЗ или гриппом, после переохлаждения или нахождения на сквозняках. Этот вид заболевания вызывается ВПГ 1 типа.

Для полового герпеса характерно наличие тех же пузырьков, локализующихся на коже и слизистых половых органов. Но вызывается заболевание вирусом 2 типа.

Клиника полового герпеса аналогична герпесу на губах: после заражения и инкубационного периода (от 1 до 25 дней) вирус периодически проявляет себя высыпаниями в виде пузырьков, наполненных прозрачным или желтоватым содержимым. До появления пузырьков пациент испытывает в точке локализации чувство покалывания, зуда, жжения. Впоследствии пузырьки лопаются, образуются корочки, которые со временем отпадают.

В зависимости от состояния иммунной системы, герпес рецидивирует от 1 до 6 и более раз в год. Для дифференциальной диагностики, выработки тактики лечения потребуется сдать анализы на половой герпес.

Результат исследования поможет узнать не только присутствие вируса (подтверждение диагноза), но и стадию заболевания (острая или хроническая). Ведь зачастую видимые симптомы (пузырьки, зуд) возникают только через длительный период времени, во время ослабления иммунитета в результате разных негативных факторов.

Анализ мазка на герпес

Для диагностики берется мазок — содержимое пузырьков.

Мазок берут в течение первых 2-ух дней с момента образования пузырьков, в противном случае возможен ложноотрицательный результат. Ложноположительного результата анализа не бывает.

Анализ крови на антитела (иммуноферментный анализ)

При заражении организм начинает бороться с инфекцией — вырабатывать специальные антитела (иммуноглобулины). Анализ крови на антитела помогает диагностировать герпес, даже если нет типичных симптомов.

Результаты такого анализа не всегда безусловны:

Кровь для анализа на герпес генитальный берут из вены.

Интересно, что прием противовирусных препаратов не влияет на количество и качество иммуноглобулинов. Поэтому ИФА можно делать и в период приема противовирусных препаратов — это обстоятельство не повлияет на чувствительность теста.

Варианты результатов анализа на антитела

К вирусу герпеса организм вырабатывает два вида антител:

1. Антитела lgM присутствуют в крови пациента, если заражение произошло недавно (до 1 мес.). То есть присутствие антител этого типа в анализах говорит о том, что организм вырабатывает защиту.
2. Наличие антител lgG означает, что вирус присутствует давно и иммунитет сформирован.

Малое количество антител lgG в сочетании с большим содержанием lgM говорит об остром генитальном герпесе, обратный результат характерен для хронического течения болезни.

Для обоих типов вируса (ВПГ–1 и ВПГ–2) своя пара антител. Поэтому результаты анализа демонстрируют тип вируса (первый или второй), стадию заражения (острая или хроническая).

Нередки случаи, когда в крови обнаруживают антитела, характерные для герпеса обоих типов — первого и второго. В этом случае констатируют инфицирование ВПГ двумя типами.

Показания для ИФА

Возможность определить стадию инфицирования особенно актуальна для беременных и планирующих зачатие.

• Если результат анализа говорит о хронической инфекции, то иммунная система женщины препятствует проникновению вируса через плаценту. Риск заражения плода минимален, но необходимо следить за состоянием и предупреждать рецидивы болезни в виде высыпаний. При наличии рецидива во время родов показано кесарево сечение. Так минимизируется риск заражения младенца во время прохождения по родовым путям.
• При констатации острой стадии следует отложить зачатие на 1–2 мес., а беременным пройти курс лечения противовирусными препаратами. Дело в том, что пока организм матери не выработал стабильной защиты от инфекции, вирус может проникнуть в плод и повлиять на его развитие. Врожденные патологии — довольно частое осложнение при остром генитальном герпесе во время беременности, особенно на ранних сроках.

Внимание! Беременным, у которых антитела не обнаружены, следует предпринять все меры по защите от заражения. Острая стадия полового герпеса чревата для будущего малыша пороками развития, вплоть до инвалидности и летального исхода.

Проба Тцанка

Для получения материала берут соскоб дна свежего герпесного пузыря. После окраски его изучают под микроскопом. При положительном результате лаборант обнаружит атипичные клетки огромных размеров.

Примечание: исследование является быстрым методом диагностики, но обладает недостаточной точностью.

Невозможно определить возбудителя, в результате которого получен положительный анализ: герпес генитальный любого типа дает одинаковый результат. Проба является положительной и при наличии Varicella-zoster — типа вируса, вызывающего ветряную оспу, опоясывающий лишай.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Диагностика с помощью анализа ПЦР считается наиболее оптимальной. Анализ дает быстрый и точный результат. Биоматериал содержимого пузырьков исследуется на присутствие ДНК вируса. Преимуществом метода является и его небольшая стоимость.

Ложноположительный и ложноотрицательный результаты практически исключены. Если в лаборатории соблюдаются условия проведения анализа — необходимая стерильность и температурный режим, то даже мельчайшие фрагменты ДНК будут обнаружены.

Всем ли нужно делать анализ на ВПГ

В связи с большим количеством носителей вируса герпеса (до 90 проц. от всего населения) у многих возникает вопрос: как сдать анализ на генитальный герпес и нужно ли это делать, если проявлений болезни нет. Специалисты рекомендуют в обязательном порядке сдавать анализы так называемой группе риска — тем, для кого носительство может обернуться серьезным осложнением:

• Женщинам, планирующим беременность;
• Беременным — обязательный анализ на TORCH включает в себя все инфекции, потенциально опасные для плода, в том числе и герпес;
• Детям, рожденным от матери с герпесом в острой или рецидивирующей стадии;
• Людям с ослабленным иммунитетом — ВИЧ–инфицированным, послеоперационным больным, принимающим кортикостероиды, химиотерапию и т.д.

Вовремя выявленное носительство позволит врачу назначить лечение и избежать таких осложнений, как:

• Энцефалит герпетической этиологии — поражение головного мозга;
• Миелит — болезнь позвоночника;
• Офтальмогерпес (кератит) — способный привести к полной слепоте;
• Гепатит — поражение печени;
• Пневмония.

Практически вирус поражает любые органы и ткани, если иммунитет понижен/отсутствует.

При ярко выраженных симптомах генитального герпеса человек обращается к врачу. Поэтому решение о необходимых анализах принимает врач, пациенту остается только следовать его рекомендациям.

Проблеме диагностики герпесвирусных инфекций посвящено множество научных публикаций, однако в последнее время все более возрастает интерес к этому вопросу со стороны клиницистов разных специальностей. По данным литературы, вирусом простого герпеса инфицировано 65-90 % взрослого и детского населения планеты. Местом локализации первичной герпесвирусной инфекции чаще всего является слизистая оболочка полости рта.

Несмотря на широкое и разностороннее изучение данной патологии, отмечается тенденция к росту распространенности герпетических стоматитов, особенно среди детского населения. Наделю герпетической инфекции среди всех поражений слизистой полости рта у детей приходится около 80 %, у 8-20% пациентов заболевание принимает рецидивирующий характер. При этом вирус может поражать практически все органы и ткани человеческого организма. У детей грудного и раннего возраста, после исчезновения антител, полученных интерплацентарно от матери, герпетическая инфекция, как правило,протекает в виде острого герпетического стоматита. Хроническая герпетическая инфекция в полости рта проявляется в виде рецидивирующего герпетического стоматитаили герпеса губ.

Современные наблюдения специалистов позволяют говорить о изменении клинической картины герпетического стоматита и выделении атипичных форм заболевания, а именно геморрагической, геморагически-некротической, язвенной, отечной, элефанзиазоподобной, рупеоидной, зудящей, эритематозной и папулезной, герпетиформной экземы Капоши, генерализованного герпеса. В литературе упоминается импетигоподобная форма герпеса, при которой высыпания на слизистой оболочке полости рта сочетаются со стрептококковым импетиго в периоральной зоне. Атипичные формы заболевания затрудняют диагностику. Таким образом, высокая инфицированность населения и распространенность заболевания, наличие атипичных форм и отсутствие четких диагностических алгоритмов свидетельствуют об актуальности этой проблемы.

Материалом для исследования при герпетической инфекции полости рта являются:

Соскоб и мазок-отпечаток с элементов поражения, слюна, кровь.

На сегодняшний день существует большое количество лабораторных методов диагностики герпесвирусных инфекций.

Выделяют три основных диагностических подхода:

1). изоляция и идентификация вирусаиз клинического материала;

2). непосредственное исследование материала на наличие вируса, вирусного антигена или нуклеиновых кислот

3). серологическая диагностика, основанная на установлении значительного прироста вирусных антител в течение болезни.

В настоящее время применяется ускоренный вирусологический метод выявления вирусов. При этом методе материал, полученный от больных, культивируется совместно с культурой клеток Vero в течение 24-х часов. После предварительной обработки применяется реакция непрямой иммунофлюорисценциии результаты оценивают под люминисцентным микроскопом.Этот метод позволяет выбрать антивирусный препарат для лечения герпетической инфекции и оценить эффективность противовирусной терапии через 1,5-2 месяца после окончания лечения. Результаты обследования готовы через 2-е суток.

Биологическая проба состоит в заражении чувствительных лабораторных животных (белых мышей или кроликов) биоматериалом, полученным от больного. Метод рекомендуют использовать в спорных случаях герпесвирусной инфекции и для диагностики атипичных форм.

Микроскопические методы исследования герпеса:

включают цитологическую диагностику и электронную микроскопию. Исследуемый материал для микроскопических методов получают путем соскоба или мазка-отпечатка с пораженных участков слизистой и кожи.

Цитологический метод простой, доступный, рассматривается как экспресс-метод, так как результаты исследования получают через 2-3 часа. Его чувствительность и специфичность не превышают 70-75 %. Метод нашел широкое применение в стоматологической практикедля проведения дифференциальной диагностики в сложных случаях и оценки эффективности лечебных мероприятий.

К методам экспресс-диагностики герпеса относится:

Электронная микроскопия. Метод позволяет выявить вирусные частицы в исследуемом образце. Для успешного определения вируса его концентрация в пробе должна быть примерно 1ˑ10 6 частиц в 1 мл. Но поскольку концентрация возбудителя в материале обычно незначительна, то требуется предварительное центрифугирование. Однако метод электронной микроскопии не позволяет дифференцировать вирусы простого герпеса и ветряной оспы, цитомегалии, поскольку они морфологически практически одинаковы. Использование метода ограничивается его трудоемкостью, малодоступностью, дороговизной, поэтому он применяется в основном в научных целях. Для получения результатов метода электронной микроскопии необходимо около 3-х часов, чувствительность метода составляет 70 %, специфичность около 100 %.

В настоящее время главенствующую роль в верификации герпесвирусных инфекций играют методы ДНК-диагностики, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР) и ДНК-гибридизация.

Гибридизация ДНК – высокоспецифичный метод, позволяющий идентифицировать геном вируса после его специфического связывания (гибридизации) с меченой комплементарной молекулой ДНК-диагностикума. В качестве маркера применяют ферменты (пероксидазу, щелочную фосфатазу) и изотопы. Недостатком метода является его длительное время выполнения- в среднем 5-7 суток, а также высокая частота ложноотрицательных результатов при низком количестве вирусной ДНК в исследуемой пробе.

Наиболее широко используемым методом диагностики герпетической инфекции является полимеразная цепная реакция (ПЦР), предложенная Мюллисом в 1983 году. В основе метода лежит катализируемая ферментом ДНК-полимеразой многократное образование копий (ампликация) определенного участка ДНК, представляющего диагностический интерес. Для ампликации отбирают уникальный ген, который наиболее четко отличает определяемый патоген от прочих.

Различают качественный, полуколичественный и количественный варианты метода. При проведении качественной ПЦР определяют лишь факт присутствия вируса, однако не возможным является оценка его репродуктивной активности, что не позволяет провести дифференциальную диагностику между латентными, персистирующими и реактивными формами инфекции. Полуколичественная ПЦР дает информацию о содержании копий вирусных ДНК в виде условных обозначений (+, ++, +++, ++++). Методом, позволяющим получить числовые значения, отражающие репродуктивную активность вируса является количественная ПЦР. Полученный количественный результат не соответствует истинному содержанию ДНК возбудителя в исследуемой пробе. При этом существует определенная пропорциональность между исходным количеством ДНК вируса и конечным результатом исследования. Такая пропорциональность соблюдается лишь при проведениидиагностики в стандартных условиях с использованием одних и тех же реактивов, поэтому сравнительный анализ полученных результатов в динамике проводят при обследовании пациента в одной лаборатории.

Ложноотрицательные результаты возможны при несоблюдении технологий и использовании некачественных реактивов. Ложноположительные данные возможны при подсчете результатов методом электрофореза, что обусловлено контаминацией воздушной среды рабочего пространства ампликонами при предварительных постановках, поэтому используют открытые методики подсчета результатов с надлежащей вентиляцией помещений и закрытые, которые являются более предпочтительными, так как предполагают отсутствие прямогоконтактамежду продуктами реакции и воздушной средой.

Наиболее точной является методика ПЦР в реальном времени (real time ПЦР). Ее особенностью является подсчет количества амплифицированных ДНК по мере их накопления после каждого цикла, а не в конце постановки ПЦР.

Даже количественная ПЦР не всегда позволяет отдифференцировать латентную и реактивированную инфекции. В этом случае рекомендуют использовать ПЦР обратной транскрипции, с помощью которой подсчитывают количество вирусной м-РНК, которое свидетельствует об интенсивности экспрессии вирусных генов. ПЦР является точным методом, так как для получения результата достаточно иметь в пробе всего одну молекулу ДНК возбудителя. Чувствительность ПЦР составляет 98%, а специфичность – 94 %. РезультатыПЦР можно получить уже через 3-6 часов после начала проведения.В стоматологической практике ПЦР широко применяется в диагностических целях. Установлена зависимость уровня вирусной активности в ротовой жидкости от степени тяжести герпетической инфекции.

Определения вирусных антигенов возможно при помощи реакции иммунофлюорисценции.

Этот метод основан на использовании иммуноглобулинов, меченных красителями и дающих зеленовато-желтую или красную флюорисценцию. Результаты метода учитывают при люминисцентой микроскопии препаратов обработанных меченными антителами. Метод иммунофлюорисценции используют в двух вариантах: прямой (ПИФ) и непрямой (НИФ). При прямом методе красителями метят антитела, непосредственно взаимодействующие с антигеном. При непрямом методе с исследуемым антигеном взаимодействуют специфические антитела, а уже с ними антивидовые антитела, меченые флюорохромом. Эти методы в какой то мере дублируют результаты ПЦР и могут быть полезны для исключения ложноположительных или ложноотрицательных результатов ДНК-диагностики. Чувствительность метода – 55-75 %, специфичность – 90 %. Метод нашел широкое применение в стоматологической практике для уточнения диагноза.

Серологические методы диагностики герпеса:

(реакции нейтрализации, связывания комплемента, гемагглютинации, иммунофлюорисценции и др.) позволяют оценить характер и напряженность специфического гуморального иммунитета. Все эти методы позволяют с разной степенью достоверности установить факт инфицирования пациента с вирусом. Диагностика основывается на наличии противогерпетическихIg M и Ig G. Наличие специфического Ig M свидетельствует об остроте процесса (первичная инфекция, реинфекция, реактивация). При первичной герпесвирусной инфекции противогерпетический Ig M появляется на 7-14 сутки после инфицирования и циркулирует 1-3 месяца. У отдельных лиц может сохраняться на протяжении длительного времени, давая ложную информацию об остроте процесса. Противогрепетические Ig G являются антителами вторичного иммунного ответа. При первичной инфекции выявляются во второй половине инфекционного процесса, а также при латентной, персистирующей инфекции и реактивации вируса. Рекомендуют применять метод парных сывороток, оценивая титр специфических антител с промежутком в 2-3 недели. Однако четырехкратное повышение титра специфическогоIg G является диагностическим критерием лишь при первичном инфицировании. Проведение серологических исследований позволяет оценить иммунный статус организма. Так, расхождение между показателями ПЦР, свидетельствующими о высокой репродуктивнойактивности вируса, и данными серологических исследований, показывающими низкий титр специфических антител, свидетельствует о недостаточности специфического гуморального иммунного ответа и является показанием к назначению заместительной терапии (препаратов специфических иммуноглобулинов) или средств, повышающих антителогенез (полиоксидоний, спленин и др.).

Иммунологические исследования являются обязательными при манифестных формах инфекции, так как вирус способен оказывать иммуносупрессивное действие на зараженный организм. Результаты таких исследований позволяют выявить иммунный дефект и назначить рациональную терапию. Метод применяется для выбора средств иммунотерапии и оценки их эффективности при лечении герпетических стоматитов.

Таким образом, диагностическими критериями герпетической инфекции полости рта являются:

-выявление вирусных агентов в крови, слюне, соскобах и мазках-отпечатках с элементов поражения достоверными методами: ПЦР, методом иммунофлюорисценции;

- в спорных случаях для экспресс-диагностики необходимо проводить цитологическое исследование с целью выявления клеток Тцанка;

- для диагностики первичной герпетической инфекции важным является выявление вирус-специфических иммуноглобулинов M и G.

При постановке диагноза обязательно учитывают наличие клинических признаков герпетической инфекции (типичных элементов поражения).

Для назначения рациональной противовирусной и иммунотерапии рекомендуется проведение следующих исследований:

- определение противогерпетических антител классаM, G и А для оценки напряженности специфического гуморального иммунитета;

- иммунологическое исследование проводят при тяжелом или атипичном течении и частых рецидивах герпетической инфекции, при низкой чувствительности к лечению ацикловиром и его аналогами.