Дифференциальная диагностика трихинеллеза у животных
Трихинеллез вызывается нематодой Trichinella spiralis из сем. Trichinellidae. Трихинеллез - антропозоогельминтоз. Возбудитель этого гельминтоза зарегистрирован у домашних и диких свиней, собак, кошек, медведей, волков, лисиц, крыс, мышей и человека. Половозрелые трихинеллы локализуются в тонком отделе кишечника, а их личинки - в мышцах. Поэтому различают две формы болезни - кишечную и мышечную. Трихинеллез встречается в виде отдельных очагов, но в некоторых странах (США и Канаде) этот гельминтоз очень широко распространен. На территории СССР трихинеллез чаще регистрируют в Белоруссии, Винницкой и Хмельницкой областях.
Морфология возбудителя. Trichinella spiralis - одна из самых мелких нематод, паразитирующая у животных: самцы достигают 1,4-1,6 мм, а самки 3-4 мм длины. Самцы лишены спикул. У самок отверстие вульвы находится в передней части тела; они живородящие.
Биология возбудителя. У трихинеллы одно и то же животное или человек последовательно является дефинитивным, а затем промежуточным хозяином (трихинеллоидный тип развития). Самки трихинеллы проникают в просвет либеркюновых желез или в кишечные ворсинки, рождают живых личинок, которые лимфогематогенным током заносятся в мышцы. Излюбленные места локализации личинок - мышцы ножек диафрагмы, языка, пищевода, межреберные и др.
Через 17 дней они достигают инвазионной стадии (спиралевидная форма). Вокруг личинки через 3-4 недели формируется капсула лимоновидной формы, которая спустя шесть месяцев начинает обызвествляться. Полностью этот процесс заканчивается через 15-18 месяцев. После образования капсулы личинки называются мышечными трихинеллами. Жизнеспособность мышечных трихинелл сохраняется у животных годами, а у человека до 25 лет. Заражение животных и человека трихинеллезом происходит при поедании мяса, содержащего инвазионные личинки трихинелл. Мясо переваривается, а освободившиеся мышечные трихинеллы через 30-40 часов превращаются в кишечных. Самцы оплодотворяют самок и быстро погибают. Самки спустя 6-7 дней рождают от 1500 до 10 000 личинок трихинелл. Самки живут в кишечнике до двух месяцев (рис. 43).
Медико-санитарное значение трихинеллеза. При употреблении в пищу свинины, не подвергшейся ветеринарно-санитарному осмотру и трихинеллоскопии, были зарегистрированы случаи заболевания людей трихинеллезом в Винницкой, Черниговской и других областях страны. Следует иметь в виду очень большую восприимчивость людей к заражению трихинеллезом. Даже 10-15 г инвазированной свинины способно вызвать заражение и заболевание человека трихинеллезом. Но организм человека является биологическим тупиком для трихинелл.
Эпизоотологические данные. Трихинеллез - природно-очаговый гельминтоз. Основными звеньями эпизоотологической цепи этого заболевания являются не свиньи и крысы, как ошибочно считали раньше, а дикие животные. В отдельных районах страны обследованные волки были заражены трихинеллезом от 96,9 до 100%. Нередко регистрируется высокая зараженность домашних плотоядных животных. Например, исследованные в Одессе 146 кошек оказались инвазированными трихинеллами на 71,23%, в то время как зараженность крыс составила 6,45%, а свиней только 0,35%. Специфичность трихинелл в отношении выбора хозяев выражена очень слабо, и фактически они могут развиваться в любом хозяине (при естественном или искусственном заражении).
Основные источники заражения трихинеллезом: свиней - тушки и трупы, крыс, кошек, собак, волков, лисиц, а также отбросы от обработки шкур этих животных, отходы убоя свиней (особенно подворного); собак и кошек - грызуны, кухонные и боенские отходы, отбросы обработки шкур зверей; грызунов - при канибаллизме и через пищевые отбросы; диких животных - грызуны, другие животные и их трупы; пушных зверей в зверосовхозах - боенские отходы. Личинки трихинелл обладают большой устойчивостью к факторам внешней среды. Слабые растворы поваренной соли и копчение не убивают личинок этого паразита.
Патогенез. Степень болезнетворного влияния трихинелл на организм животного и человека зависит от интенсивности инвазии и резистентности организма хозяина. При внедрении в слизистую оболочку кишечника самки трихинелл разрушают ворсинки и либеркюновы железы и нередко инокулируют болезнетворных микробов. Мигрирующие личинки нематоды травмируют и вызывают дегенерацию мышечных волокон. В результате сенсибилизирующего влияния продуктов обмена и распада мышечных, а также кишечных трихинелл и аллергических реакций развиваются отеки в области головы, эозинофилия и перерождение паренхиматозных органов, отмечается лихорадка.
Диагноз. Для прижизненной диагностики трихинеллеза применяют аллергический метод. Антиген в дозе 0,1 вводят внутрикожно в кожную складку уха. При положительной реакции на месте инъекции антигена через 30-45 минут появляется розовое или красное пятно и припухание диаметром до 1,5 см. Одновременно кожная складка утолщается на 5-8 мм (в сравнении с нормой). В практических условиях применяют редко. Основной метод посмертной диагностики трихинеллеза свиней - трихинеллоскопия кусочков мышц от свиных туш с целью обнаружения личинок трихинеллы. Для исследования на трихинеллез следует брать из ножек диафрагмы каждой свиной туши две пробы. При исследовании привозного мяса и отсутствии в нем ножек диафрагмы пробы для трихинеллоскопии разрешают брать из других частей диафрагмы, а также из межреберных и шейных мышц.
Техника трихинеллоскопии. Из двух проб мяса весом до 60 г изогнутыми ножницами вдоль мышечных волокон, ближе к их сухожильной части, нарезают по 12 кусочков величиной с овсяное зерно. Срезы помещают на компрессорий и раздавливают до такой степени, чтобы сквозь них можно было читать газетный шрифт. Приготовленные 24 среза мышц тщательно исследуют под трихинеллоскопом, малым увеличением микроскопа, а также с помощью проекционной камеры КТ-3 или экранного трихинеллоскопа.
На срезах мышц личинки трихинелл обычно обнаруживают в инкапсулированном виде. Капсулы трихинелл имеют лимоноподобную форму (0,68 X 0,37 мм), внутри которой чаще бывает одна личинка спиралевидной формы. Нередко встречаются личинки с обызвествленными капсулами; для их просветления срезы мышц помещают на 5-10 минут в 50%-ный глицерин, молочную кислоту или в 2-5%-ный раствор соляной кислоты, а затем исследуют в каплях глицерина.
Обызвествленные капсулы личинок трихинелл необходимо дифференцировать от саркоцист (мишеровых мешочков) и финн. Мишеровы мешочки располагаются в мышечных волокнах, но величина и форма их непостоянные; они достигают 0,1-5 мм длины и 0,2-0,3 мм ширины; форма мишеровых мешочков может быть изогнутая, вытянутая в длину или овальная; они не имеют капсул. Видимость мешочков улучшается при обработке срезов 5%-ным раствором едкого кали.
Недоразвившиеся или погибшие и обызвествленные цистицерки (финнозные конкременты) всегда располагаются вне мышечных волокон; длина их 0,03-15 мм. Растворяются эти конкременты в 10-20%-ном растворе соляной кислоты. Согласно действующему законодательству, при обнаружении любым способом даже одной живой или мертвой личинки трихинеллы туша и субпродукты от нее, имеющие мышечную ткань, а также обезличенные мясопродукты подлежат технической переработке или уничтожению. Пищевод (пикальное мясо) и прямую кишку также уничтожают. Наружный жир (шпик) перетапливают при температуре не ниже 100° - для пищевых целей. Внутренний жир и кишки (кроме прямой) выпускаются, без ограничений. Со шкур животных тщательно удаляют мышечные ткани.
Лечение не разработано. Некоторый эффект оказывает тиабендазол.
Профилактика. Одно из важнейших профилактических мероприятий при трихинеллезе - ветеринарно-санитарный осмотр всех свиных туш, а также мяса диких кабанов и медведей с обязательной трихинеллоскопией их. Запрещение подворного убоя скота будет играть важную роль в предупреждении заболевания людей и животных.
Нельзя скармливать свиньям и пушным зверям боенские отходы от свиней. Тушки пушных зверей и плотоядных после съема с них шкур подлежат обязательной утилизации. Трупы собак, кошек, мышевидных грызунов следует сжигать или уничтожать в биотермических (пирятинских) ямах. Надо всеми средствами уничтожать крыс особенно в местах убоя животных и хранения мясных продуктов и на свинофермах. Целесообразно совершенствовать диагностику трихинеллеза. Среди населения надо систематически проводить ветеринарно-просветительную работу и прививать им гигиенические навыки.
Трихинеллоскопия - это обнаружение трихинелл в мясе. Стандартно исследуют мясо свиней, кабанов, собак, медведей.
Услуга бесплатная.
Трихинеллы в мясе не погибают при варке, заморозке, засолке, копчении и прочих видах обработки, поэтому такое мясо подлежит уничтожению. При попадании в организм человека вызывает тяжелое заболевание вплоть до летального исхода. Методические указания по лабораторной диагностике можно прочитать далее.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по лабораторной диагностике трихинеллеза животных
1. Общие положения.
1.1. Трихинеллез - опасный антропозоогельминтоз, вызываемый трихинеллами двух видов: trichinella spiralis и trichinella pseudospiralis, протекает остро и хронически. Весь цикл развития обоих видов проходит в организме одного хозяина - половозрелая стадия локализуется в кишечнике, личиночная - в мышечной ткани.
1.2. Трихинеллезом болеют свиньи , кабаны, медведи, другие всеядные и плотоядные (собаки, волки, лисы), морские млекопитающие (киты, тюлени, моржи), насекомоядные, грызуны и другие животные.
1.3. Обязательному исследованию на трихинеллез подлежат: туши, полутуши, четвертины свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), кабанов, барсуков, медведей, всеядных и плотоядных животных, а также нутрий.
1.4. При послеубойной диагностике трихинеллеза используют два метода исследования: микроскопический (компрессорный) и биохимический (метод переваривания), прижизненную диагностику осуществляют методом иммуноферментного анализа (ИФА).
Мясо и субпродукты животных (имеющие мышечную ткань) исследуют микроскопическим или биохимическим методами.
Шпиг (с наличием мышечных прослоек) исследуют только микроскопическим методом.
Исследование копченостей, импортной свинины в блоках (при выборочном контроле) и других видов продукции проводят только биохимическим методом.
Диагноз на трихинеллез ставят на основании результатов лабораторных исследований.
2. Взятие и пересылка материала для исследования.
2.1. Для исследования отбираются пробы из ножек диафрагмы (на границе перехода мышечной ткани в сухожилие), при их отсутствии - части межреберных, шейных, жевательных, поясничных, икроножных мышц, сгибателей и разгибателей пясти, а также мышцы языка, пищевода и гортани; от туш морских млекопитающих - мышцы кончика языка и глаза.
Масса пробы от каждой группы мышц должна быть не менее 5г, а общая масса пробы от одного животного должна составлять не менее 25 г.
2.2. Пробы шпига соленого, копченого (при наличии прирези или прослоек
мышечной ткани) отбирают от каждого куска, масса пробы должна быть не менее 25 г.
2.3. Пробы копченостей отбирают от 3% упаковочных единиц, делая по 10-15 выемок из каждой упаковочной единицы, из которых составляют объединенную пробу.
2.4. Субпродукты свиные (языки, головы, ножки, хвосты) при отсутствии ветеринарного подтверждения об их происхождении от туш, подвергнутых трихинеллоскопии, исследуют следующим образом: от 3% упаковочных единиц берут по 10-15 выемок из каждой и делают объединенную пробу массой не менее 25 г.
2.5. Импортную свинину (в тушах, полутушах) исследуют не менее 10% от партии мяса, пробы берут из остатков ножек диафрагмы или межреберных мышц.
Масса пробы мышц от туши, полутуши должна составлять не менее 1г, общая масса пробы для исследования - не менее 25 г.
2.6. Импортную свинину в блоках исследуют не менее 1% от партии мясных блоков, пробы отбирают по 25 выемок (1г каждая) от блока общей массой не менее 25 г.
2.7. Пробы упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора.
3. Микроскопическое исследование (компрессорная трихинеллоскопия).
3.1. При исследовании мяса и мясопродуктов количество срезов мышечной ткани (от 24 до 96) определяют в зависимости от эпизоотической и эпидемиологической ситуаций территории в соответствии с методическими указаниями "Профилактика гельминтозов, передающихся через мясо и мясные продукты", утвержденными Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 23.09.96 13-7-37 (включенными в СанПиН 3.2.569-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации", утвержденные Госкомсанэпиднадзором России 31.10.96 43).
3.2. Из кусочков мышц изогнутыми ножницами по ходу мышечных волокон делают 24 среза величиной с овсяное зерно, которые помещают в середину клеточки компрессориума, накрывают вторым стеклом и завинчивают винты, раздавливая срезы так, чтобы они стали прозрачными и удобными для их качественного просмотра.
3.3. Срезы исследуют под малым увеличением (8:10) с помощью соответствующих приборов для трихинеллоскопии (приложение 1).
3.4. При исследовании шпига из прослоек мышечной ткани (каждого куска) делают 24 среза, помещают в чашку Петри с 0,5 см3 раствора (1%-ный раствор фуксина в 5%-ном растворе едкого натра) на 5-8 мин. Затем срезы размещают в компрессориум и просматривают согласно п.п.3.3.
3.5. При просмотре срезов обнаруживают капсулы с личинками трихинелл, которые могут иметь лимоновидную или округлую формы, внутри капсул расположены одна или несколько спирально свернутых личинок.
Личинки бескапсульных трихинелл имеют специфическую конфигурацию расположения в мышечных волокнах и их легче обнаружить по краям срезов мышц и в тканевой жидкости, окружающей срезы.
Могут встречаться обызвествленные капсулы. Для их просветления срезы мышц помещают в чашку Петри с 5-10%-ным раствором соляной кислоты.
Чашку ставят в термостат при температуре 37 ? 1?С на 20-30 мин. Затем срезы переносят на компрессориум и просматривают согласно п.п.3.3.
4. Биохимическое исследование
(трихинеллоскопия после искусственного переваривания мышц).
4.1. При проведении исследования используют искусственный желудочный сок (ИЖС), который готовят по следующей прописи: вода водопроводная температуры 41-42ºС - 1000 см3; кислота соляная концентрированная (уд. масса 1,2) - 10 см3; пепсин пищевой свиной (ТУ 10.02.01.111-89) при исследовании свежего мяса и мясопродуктов - 2,0 г , при исследовании соленого, копченого мяса и мясопродуктов, шпига- 10,0 г .
При использовании пепсина медицинского (Временная фармакопейная статья 42-1000-80) дозу увеличивают до 20,0 г.
Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 ч с момента приготовления.
4.2. При исследовании мяса в тушах, полутушах, четвертинах, блоках, а также копченостей (при выборочном контроле) и других видов продукции количество срезов (массу навески) определяют согласно п.п. 3.1.
4.3. Навеску измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм, переносят в коническую колбу соответствующей вместимости и заливают ИЖС в соотношении 1:15. Колбу помещают в термостат при температуре 41-42?С и выдерживают 5-7 ч, периодически перемешивая. За 10 мин до окончания переваривания перемешивание прекращают. После окончания переваривания в осадке остаются хлопья коричневого или темно-коричневого цвета.
4.4. Из колбы сливают (осторожно) 2/3 надосадочной жидкости, осадок выливают на капроновое сито (полусферической формы с диаметром ячеек 400 мкм), установленное в стеклянной воронке диаметром 90-120 мм, соединенной резиновой трубкой с пробиркой вместимостью 5 см3.
Залитый осадок отстаивают 15-20 мин, затем резиновую трубку перекрывают зажимом и пробирку отсоединяют. Содержимое пробирки (осадок) переносят по частям на часовое стекло и исследуют под малым (8?10) увеличением микроскопа или трихинеллоскопа на наличие личинок трихинелл.
4.5.Для выделения личинок трихинелл может быть использован метод группового переваривания в аппаратах типа АВТ (приложение 1) согласно действующей инструкции.
5. Оценка результатов.
5.1. Результаты считают положительными, если в образцах исследованной продукции обнаружена хотя бы одна личинка капсульных или бескапсульных трихинелл.
6. Дифференциальная диагностика.
6.1. Капсулообразующих трихинелл необходимо дифференцировать от наиболее часто встречаемых в мясе и мясопродуктах саркоцист (мишеровы мешочки) и микрофинн (приложение 2). Дифференциация основана на морфологии возбудителя и строении капсулы:
6.1.1. Трихинеллы имеют капсулу лимоновидной, округлой формы, внутри спирально свернутая личинка (или несколько личинок).
6.1.2. Саркоцисты имеют собственную оболочку цилиндрической или неправильной формы; циста заключена в собственную тонкую оболочку и состоит из камер, внутри которых находятся мерозоиты.
6.1.3. Микрофинны располагаются в отличие от трихинелл между мышечными волокнами, имеют овальную форму и окружены слоистой соединительнотканной оболочкой.
С утверждением настоящих методических указаний на территории Российской Федерации утрачивают силу "Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных", одобренные Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 29.12.85 и "Методика лабораторной диагностики трихинеллеза" , утвержденные Главветупром Госагропрома СССР 16.10.86.
Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных разработаны Всероссийским НИИ гельминтологии имени К.И.Скрябина (А.С.Бессонов, А.В.Успенский, Н.В.Шеховцов), Центральной научно-методической ветеринарной лабораторией (В.А.Седов, В.Д.Певнева), Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станцией (А.Я.Сапунов, О.А.Митникова), Кубанским агроуниверситетом (Б.Л.Гаркави), Управлением ветеринарии г.Краснодара (А.А.Иващенко).
ОБОРУДОВАНИЕ ДЛЯ ТРИХИНЕЛЛОСКОПИИ
1. Компрессорная трихинеллоскопия
- стационарные и лабораторные проекционные устройства типа ТМП, "Стейк", микроскопы, бинокулярные лупы, устройства для полевой трихинеллоскопии и соответствующее импортное оборудование, прошедшее испытания во Всероссийском НИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина;
2. Метод переваривания мышечной ткани
2.1. Автоматизированная диагностика
- аппараты для выделения личинок трихинелл методом переваривания мышечной ткани в искусственном желудочном соке АВТ-Л2, АВТ-Л3 и др.
1.1. Трихинеллез - опасный антропозоогельминтоз, вызываемый трихинеллами двух видов: Trichinella spiralis и Trichinella pseudospiralis, протекает остро и хронически. Весь цикл развития обоих видов проходит в организме одного хозяина - половозрелая стадия локализуется в кишечнике, личиночная - в мышечной ткани.
1.2. Трихинеллезом болеют свиньи, кабаны, медведи, другие всеядные и плотоядные (собаки, волки, лисы), морские млекопитающие (киты, тюлени, моржи), насекомоядные, грызуны и другие животные.
1.3. Обязательному исследованию на трихинеллез подлежат: туши, полутуши, четвертины свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), кабанов, барсуков, медведей, всеядных и плотоядных животных, а также нутрий.
1.4. При послеубойной диагностике трихинеллеза используют два метода исследования: микроскопический (компрессорный) и биохимический (метод переваривания), прижизненную диагностику осуществляют методом иммуноферментного анализа (ИФА).
Мясо и субпродукты животных (имеющие мышечную ткань) исследуют микроскопическим или биохимическим методами.
Шпиг (с наличием мышечных прослоек) исследуют только микроскопическим методом.
Исследование копченостей, импортной свинины в блоках (при выборочном контроле) и других видов продукции проводят только биохимическим методом.
Диагноз на трихинеллез ставят на основании результатов лабораторных исследований.
2.1. Для исследования отбираются пробы из ножек диафрагмы (на границе перехода мышечной ткани в сухожилие), при их отсутствии - части межреберных, шейных, жевательных, поясничных, икроножных мышц, сгибателей и разгибателей пясти, а также мышцы языка, пищевода и гортани; от туш морских млекопитающих - мышцы кончика языка и глаза.
Масса пробы от каждой группы мышц должна быть не менее 5 г, а общая масса пробы от одного животного должна составлять не менее 25 г.
2.2. Пробы шпига соленого, копченого (при наличии прирези или прослоек мышечной ткани) отбирают от каждого куска, масса пробы должна быть не менее 25 г.
2.3. Пробы копченостей отбирают от 3 % упаковочных единиц, делая по 10 - 15 выемок из каждой упаковочной единицы, из которых составляют объединенную пробу.
2.4. Субпродукты свиные (языки, головы, ножки, хвосты) при отсутствии ветеринарного подтверждения об их происхождении от туш, подвергнутых трихинеллоскопии, исследуют следующим образом: от 3 % упаковочных единиц берут по 10 - 15 выемок из каждой и делают объединенную пробу массой не менее 25 г.
2.5. Импортную свинину (в тушах, полутушах) исследуют не менее 10 % от партии мяса, пробы берут из остатков ножек диафрагмы или межреберных мышц. Масса пробы мышц от туши, полутуши должна составлять не менее 1 г, общая масса пробы для исследования - не менее 25 г.
2.6. Импортную свинину в блоках исследуют не менее 1 % от партии мясных блоков, пробы отбирают по 25 выемок (1 г каждая) от блока общей массой не менее 25 г.
2.7. Пробы упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора.
3.2. Из кусочков мышц изогнутыми ножницами по ходу мышечных волокон делают 24 среза величиной с овсяное зерно, которые помещают в середину клеточки компрессориума, накрывают вторым стеклом и завинчивают винты, раздавливая срезы так, чтобы они стали прозрачными и удобными для их качественного просмотра.
3.3. Срезы исследуют под малым увеличением (8×10) с помощью соответствующих приборов для трихинеллоскопии (Приложение 1).
3.4. При исследовании шпига из прослоек мышечной ткани (каждого куска) делают 24 среза, помещают в чашку Петри с 0,5 см 3 раствора (1 %-ный раствор фуксина в 5 %-ном растворе едкого натра) на 5 - 8 мин. Затем срезы размещают в компрессориум и просматривают согласно пп. 3.3.
3.5. При просмотре срезов обнаруживают капсулы с личинками трихинелл, которые могут иметь лимоновидную или округлую формы, внутри капсул расположены одна или несколько спирально свернутых личинок.
Личинки бескапсульных трихинелл имеют специфическую конфигурацию расположения в мышечных волокнах, и их легче обнаружить по краям срезов мышц и в тканевой жидкости, окружающей среды.
Могут встречаться обызвествленные капсулы. Для их просветления срезы мышц помещают в чашку Петри с 5 - 10 %-ным раствором соляной кислоты. Чашку ставят в термостат при температуре 37 ± 1 °С на 20 - 30 мин. Затем срезы переносят на компрессориум и просматривают согласно пп. 3.3.
4.1. При проведении исследования используют искусственный желудочный сок (ИЖС), который готовят по следующей прописи: вода водопроводная температуры 41 - 42 °С - 1000 см 3 ; кислота соляная концентрированная (уд. масса 1,2) - 10 см 3 ; пепсин пищевой свиной (ТУ 10.02.01.111-89) при исследовании свежего мяса и мясопродуктов - 2,0 г, при исследовании соленого, копченого мяса и мясопродуктов, шпига - 10,0 г.
При использовании пепсина медицинского (Временная фармакопейная статья 42-1000-80) дозу увеличивают до 20,0 г.
Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 ч с момента приготовления.
4.2. При исследовании мяса в тушах, полутушах, четвертинах, блоках, а также копченостей (при выборочном контроле) и других видов продукции количество срезов (массу навески) определяют согласно пп. 3.1.
4.3. Навеску измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3 - 4 мм, переносят в коническую колбу соответствующей вместимости и заливают ИЖС в соотношении 1:15. Колбу помещают в термостат при температуре 41 - 42 °С и выдерживают 5 - 7 ч, периодически перемешивая. За 10 мин. до окончания переваривания перемешивание прекращают. После окончания переваривания в осадке остаются хлопья коричневого или темно-коричневого цвета.
4.4. Из колбы сливают (осторожно) 2/3 надосадочной жидкости, осадок выливают на капроновое сито (полусферической формы с диаметром ячеек 400 мкм), установленное в стеклянной воронке диаметром 90 - 120 мм, соединенной резиновой трубкой с пробиркой вместимостью 5 см 3 .
Залитый осадок отстаивают 15 - 20 мин., затем резиновую трубку перекрывают зажимом и пробирку отсоединяют. Содержимое пробирки (осадок) переносят по частям на часовое стекло и исследуют под малым (8×10) увеличением микроскопа или трихинеллоскопа на наличие личинок трихинелл.
4.5. Для выделения личинок трихинелл может быть использован метод группового переваривания в аппаратах типа АВТ (Приложение 1) согласно действующей инструкции.
5.1. Результаты считают положительными, если в образцах исследованной продукции обнаружена хотя бы одна личинка капсульных или бескапсульных трихинелл.
6.1. Капсулообразующих трихинелл необходимо дифференцировать от наиболее часто встречаемых в мясе и мясопродуктах саркоцист (мишеровы мешочки) и микрофинн (приложение 2 - не приводится). Дифференциация основана на морфологии возбудителя и строении капсулы:
6.1.1. Трихинеллы имеют капсулу лимоновидной, округлой формы, внутри спирально свернутая личинка (или несколько личинок).
6.1.2. Саркоцисты имеют собственную оболочку цилиндрической или неправильной формы; циста заключена в собственную тонкую оболочку и состоит из камер, внутри которых находятся мерозоиты.
6.1.3. Микрофинны располагаются в отличие от трихинелл между мышечными волокнами, имеют овальную форму и окружены слоистой соединительнотканной оболочкой.
С утверждением настоящих Методических указаний на территории Российской Федерации утрачивают силу "Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных", одобренные Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 29.12.85, и "Методика лабораторной диагностики трихинеллеза", утвержденная Главветупром Госагропрома СССР 16.10.86.
Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных разработаны Всероссийским НИИ гельминтологии имени К.И. Скрябина (А.С. Бессонов, А.В. Успенский, Н.В. Шеховцов), Центральной научно-методической ветеринарной лабораторией (В.А. Седов, В.Д. Певнева), Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станцией (А.Я. Сапунов, О.А. Митникова), Кубанским агроуниверситетом (Б.Л. Гаркави), Управлением ветеринарии г. Краснодара (А.А. Иващенко).
1. Компрессорная трихинеллоскопия
- стационарные и лабораторные проекционные устройства типа ТМП, "Стейк", микроскопы, бинокулярные лупы, устройства для полевой трихинеллоскопии и соответствующее импортное оборудование, прошедшее испытания во Всероссийском НИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина;
2. Метод переваривания мышечной ткани
2.1. Автоматизированная диагностика
- аппараты для выделения личинок трихинелл методом переваривания мышечной ткани в искусственном желудочном соке АВТ-Л2, АВТ-Л3 и др.
Трихинеллез – остро или хронически протекающая зооантропонозная болезнь многих видов млекопитающих и человека имеющая ярко выраженный аллергический характер и вызываемая личинками и половозрелыми нематодами (Trichinella spiralis, Trichinella natuva и Trichinella pseudospiralis) паразитирующая в кишечнике и поперечнополосатых мышцах.
Заболевание распространено на всех континентах земного шара и во всех странах.
Трихинеллез проявляется в двух формах – мышечной и кишечной. В кишечнике локализуются взрослые трихинеллы, в поперечнополосатой мускулатуре – их личинки.
Возбудитель – Самцы нематоды очень мелкие, имеют длину 1,4-1,6 мм, ширину 0,14мм. На заднем конце тела и в промежутке между двумя лопастями позади клоаки у них расположены две пары сосочков, спикула отсутствует. Самки трихинелл, вдвое крупнее самцов и имеют длину 3-4мм. Самки рождают живородящих личинок. Личинки имеют длину 0,08-0,12мм и ширину 0,006мм.
Развитие трихинелл происходит в организме одного хозяина, который для них является вначале промежуточным, а затем дефинитивным. Инвазионные личинки внедряются в слизистую оболочку кишечника и за 2—3 суток превращаются во взрослых самок и самцов. Самки через 4-5 дней приступают к рождению личинок. Родившиеся личинки проникают в лимфатические сосуды и через грудной лимфатический проток попадают в малый, а потом большой круг кровообращения заразившегося животного. Начиная с 6-7-го дня, личинки с током крови заносятся в волокна поперечнополосатых (скелетных) мышц, в которых в дальнейшем начинают расти, становятся инвазионными, затем скручиваются в спираль и подвергаются инкапсулированию. Личинки сохраняются в мышцах от нескольких месяцев до нескольких лет т.е. практически пожизненно. Половозрелые трихинеллы в стенке кишечника у животных паразитируют в течение 4-6 недель, а попав в кишечник человека – до 80дней.
Эпизоотология. К трихинеллезу восприимчивы человек и более 100 видов домашних и диких животных (кабан, бурый медведь), грызунов, насекомоядных и морских млекопитающих. Источником возбудителя трихинеллеза являются инвазированные животные. Основной путь заражения трихинеллезом – алиментарный, при поедании пораженных личинками трихинелл мяса и мясных отходов, трупов животных.
Основным резервуаром возбудителя трихинеллеза являются дикие животные – волки, лисицы, бурые медведи, кабаны.
Патогенез. Патогенное воздействие трихинелл на организм животных и человека имеет ярко выраженный аллергический характер. В результате сенсибилизации метаболитами и продуктами распада погибших личинок трихинелл в организме развиваются системные васкулиты неспецифического характера, вызывающие болевой синдром и поражения органов (миокардит, пневмония и др.). В ранней стадии заболевания происходит механическое воздействие трихинелл вызывая повреждении е кишечной стенки, тромбоз артерий и т.д.
Клинические признаки. Через 3-4 дня при интенсивном заражении у свиней наблюдаются угнетение, понос, повышение температуры тела. У отдельных животных эти симптомы могут усиливаться и животные через 12-15 дней погибают при явлениях кахексии. На практике у свиней смертельный исход бывает редко. Возникшие кишечные расстройства у большинства свиней постепенно проходят и возникают аллергические симптомы — мышечные боли, голова и веки отекают, у отдельных животных появляется кожная сыпь, конъюнктивит, афония. В этот период у больных животных отмечаем ведущие для трихинеллеза клинические признаки — мышечные боли и эозинофилия. При вставании и приеме пищи животные ощущают сильную боль. Симптомы трихинеллеза к 2-3 неделе достигают своего максимума, потом данные симптомы начинают постепенно угасать. При слабом заражении животных трихинеллезом, болезнь протекает бессимптомно и только эозинофилия (до 10-12%) говорит о скрытом течении заболевания.
Патологоанатомические изменения. При интенсивном заражении свиней и других видов животных в тонких кишках отмечаем слизистое перерождение и десквамацию эпителия ворсинок и подслизистой ткани. В печени кровоизлияния и жировое перерождение и распад эпителия мальпигиевых клубочков в почках. В миокарде, головном мозге, легких, печени находим узелковые инфильтраты, состоящие из лимфоидных клеток и эозинофилов. В отдельных случаях в узелках можно обнаружить личинки трихинелл. Для трихинеллеза специфическим является выраженный интерстициальный миозит и образование вокруг личинок соединительнотканных капсул.
Диагноз. Учитывая, что выраженная клиника трихинеллеза у свиней наблюдается очень редко, то диагноз приходится ставить учитывая эпизоотическую ситуацию и применяя иммунологическую диагностику — внутрикожная аллергическая проба. В случае необходимости можно прибегнуть к диагностической биопсии мышц уха свиней (височный мускул), позволяющий выявить 30-60% зараженных животных. Для посмертной диагностики и послеубойной ветсанэкспертизы пользуются трихинеллоскопией ножек диафрагмы.
Профилактика трихинеллеза основана на строгом соблюдении ветеринарно-санитарных правил содержания животных. Владельцы животных должны исключить возможность поедания свиньями инвазированных трупов, а также туш диких зверей, собак, кошек и крыс, а также сырых или плохо проваренных боенских и кухонных мясных отходов. Мясо свиней, кабанов, бурых медведей (на территории Владимирской области внесен в красную книгу и охота на него запрещена), барсуков и морских млекопитающих (моржей и тюленей) должно подлежать обязательной трихинеллоскопии и в случае обнаружения в нем личинок трихинелл – подлежать уничтожению или технической утилизации. Обязательно должна проводиться дератизация на территориях ферм, боен, утильзаводов, складов мясных продуктов и кожевенного сырья.
О каждом случае обнаружения трихинеллеза у животных сообщается в Роспотребнадзор и руководству ветеринарной службы региона.
Инвазированное мясо, попав в желудок, переваривается, личинки трихинелл освобождаются от капсулы и, продвигаясь по желудочно- кишечному тракту попадают в тонкий отдел кишечника, где внедряются в слизистую оболочку, располагаясь между ворсинками кишечника. Там самки оплодотворяются; в матке формируются личинки; на 4-е сутки каждая самка отрождает до 2 тысяч личинок, которые внедряются в лимфатические и кровеносные сосуды, разносятся по ним во все органы и ткани, причем основная масса личинок избирательно локализуется в скелетных мышцах, где личинки проходят несколько стадий развития. Мышечные волокна к 14-му дню от заражения утолщаются, теряется поперечная исчерченность, веретеновидно расширяются, личинки скручиваются, становятся инвазионными, формируется капсула, которая приобретает форму от овальной до круглой (к 60дню). Попав в другие органы и ткани, личинки погибают.
В подавляющем большинстве случаев фактором передачи трихинеллеза является мясо домашних свиней, диких кабанов; также заражение возможно посредством мяса диких плотоядных животных, те же заражаются, поедая мышей и крыс и при скармливании им отходов убоя трихинеллезных животных.
Трихинеллез чаще регистрируется у свиней при свободном их выпасе, когда они имеют доступ к падали.
Заражение человека происходит при употреблении в пищу мяса и мясопродуктов, полученных от инвазированных животных. Следует знать, что личинки трихинелл отличаются большой устойчивостью, когда ни проварка, ни прожарка, ни копчение, ни соление от них в полной мере мясопродукты не освобождает.
Заболевание у человека обычно проявляется через 3-4 недели после употребления инвазированного мяса, но может проявиться через несколько дней. Чем интенсивнее заражение, тем короче инкубационный период.
Чтобы не заразиться трихинеллезом, необходимо соблюдать следующие меры профилактики:
- Нив коем случае нельзя скармливать свиньям боенские отходы с мясокомбинатов, даже после обычного проваривания, а также мясо и тушки зверей как из зверохозяйств так и добываемых на охоте.
- Не допускать бродяжничество свиней по территории ферм, населенных пунктов по пустырям, оврагам и лесным полянам.
- В хозяйствах необходимо регулярно проводить дератизацию, включая свинарники, выгульные дворики и летние лагеря.
- Покупать мясо свинины только на официальных рынках, где свинина в лаборатории ветсанэкспертизы проходит проверку на трихинеллез.
- Нельзя покупать мясо свинины, кабанятины у знакомых и в неустановленных местах торговли.
Охотники добытых кабанов, бурых медведей (бурый медведь на территории Владимирской области занесен в Красную книгу и охота на него запрещена) обязаны проверять в лабораториях ветсанэкспертизы отстрелянных диких животных на трихинеллез.
Читайте также: