Экспресс-методы индикации возбудителей паразитарных

Специфическая индикация микроорганизмов и бактериальных токсинов

Специфическая индикация представляет собой комплекс специальных лабораторных и организационных мероприятий, проводимых медицинской и ветеринарной службами для подтверждения факта применения БО или аварийного обсе­менения БА окружающей среды, а также определения (иден­тификации) при этом видов и поражающих свойств этих агентов.

Основу специфической индикации составляют лаборатор­ные методы экспресс-анализа, которыми в настоящее время являются:

- прямой метод флуоресцирующих антител (МФА) с контрастированием неспецифического свечения альбумином, меченным производными родамина;

- реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с эритро­цитарными иммуноглобулиновыми диагностикумами (МФА и РНГА - не единственные методы в экспресс-анализе, т. к. имеются и другие, достаточно перспективные методы микробиологического анализа, в том числе иммуноферментный, радиоиммунный и др. Однако эти методы еще нуждаются в доработке и их применение при индикации БА взамен обязательных (т.е. МФА и РНГА) пока преждевременно. До их официального утверждения их можно использовать в ходе анализа проб лишь в качестве дополнительных тестов параллельно с основными методами).

В зависимости от заданной специфичности диагностиче­ских препаратов МФА и РНГА позволяют определить род, группу, вид бактерий, риккетсий, вирусов, грибов и токсинов по таким характерным признакам, как антигенные свойства, морфология и локализация возбудителя в культурах клеток, в органах и тканях животных. В большинстве случаев эти свойства возбудителей могут быть выявлены с помощью МФА и РНГА в течение нескольких часов, а в результате предварительного обогащения - через 1-2 сут. Применяют­ся эти методы для специфической индикации в лабораториях медицинской и ветеринарной служб по единой схеме, пред­усматривающей два взаимодополняющих этапа исследова­ния:

- непосредственный анализ нативных материалов проб, для исследования с помощью экспресс-мето­дов;

- исследование этими же методами материалов тех же проб после их предварительного биологического обогащения.

Принципиальная схема анализа проб

Единая схема специфической индикации БА предполага­ет выявление и идентификацию в полном объеме различных видов бактерий, риккетсий, вирусов, хламидий, грибов и бак­териальных токсинов. Практически возможность выявления тех или иных видов микроорганизмов определяется наличи­ем в лаборатории соответствующих диагностических препа­ратов (люминесцирующих иммуноглобулинов, эритроцитар­ных иммуноглобулиновых диагностикумов и др.) и условий для проведения анализа как нативных проб, так и материа­лов после биологического обогащения на питательных сре­дах, в культуре клеток и других биологических системах.

При отсутствии условий для специфической индикации БА в полном объеме проводится исследование материалов в сокращенном объеме, предусматривающем экспресс-анализ доставленной пробы без ее биологического обогащения, т. е. исследования образца только на первом этапе схемы инди­кации.

Принято считать, что результаты специфической индика­ции, проводимой в полном объеме, выдаются в соответствии с этапами исследования в два срока: первый ответ - пред­варительный (или предупредительный) выдается при поло­жительном результате анализа после первого этапа исследо­вания через 2-3, максимум спустя 3-5 ч после начала ин­дикации. Предварительный отрицательный ответ - не вы­дается. Второй ответ окончательный. Он выдается через 48-72 ч после окончания второго этапа анализа. При поло­жительном окончательном ответе сообщается о наличии и видах в пробах БА. В отрицательном - указывается, на ка­ком сроке он выдан.

Результаты индикации, проводимой в сокращенном объ­еме, ограничивается, как правило, только предварительным положительным ответом. Окончательный ответ обычно не выдается. Сообщается лишь о продолжении исследований в лаборатории вышестоящего звена медицинской (ветеринар­ной) службы, где будет проведен полный объем индикации пробы. Организуют специфическую индикацию в Вооружен­ных Силах начальники медицинской (ветеринарной) служ­бы, а осуществляют ее микробиологические лаборатории са­нитарно-эпидемиологических учреждений военных округов и различных звеньев медицинской службы действующей ар­мии. К проведению специфической индикации БА могут прив­лекаться также отдельные лаборатории инфекционных и не­которых других госпиталей фронта и военных округов.

Микробиологические лаборатории санитарно-эпидемиоло­гических отрядов армии, фронта, военных округов и флотов, как правило, проводят индикацию БС в полном объеме, т. е. в два этапа.

СЭЛ дивизии, подвижные лаборатории, ОСЭР, а также гарнизонные лаборатории округов и им равные лаборатор­ные подразделения, имеющие ограниченные штатно-органи­зационные возможности, участвуют в сборе и сортировке проб и обеспечивают их пересылку соответственно в СЭО военных округов или армии и фронта для проведения инди­кации в полном объеме. Одновременно с этим они обязаны осуществлять индикацию проб в сокращенном объеме, т.е. проводить экспресс-анализ на первом этапе исследования пробы без ее биологического обогащения.

Объем индикационных исследований, равно как и их це­левая направленность, устанавливаются начальником меди­цинской службы объединения. Одновременно с этим опреде­ляется и порядок пересылки пробы в соответствующие сани­тарно-эпидемиологические учреждения, где анализ этих проб может быть продолжен по единой схеме в полном объеме.

Изменения объема исследований в зависимости от кон­кретной обстановки могут касаться как перечня подлежа­щих выявлению видов БА, так и этапов анализа проб. На­пример, в армейских и фронтовых лабораториях исследова­ния могут при необходимости ограничиться выявлением в пробах только контагиозных инфекций или возбудителей с коротким инкубационным периодом и т. п. В то же время при усилении силами и средствами войсковые и им равные лабораторные подразделения армии, фронта или военных округов могут расширить объем индикации и, кроме иссле­дования нативных материалов проб воздуха и содержимого ББП, обязательных для анализа по схеме в сокращенном объеме, они могут:

- проводить индикацию возбудителей контагиозных и природно-очаговых бактериальных инфекций в различных ма­териалах проб до и после их биологического обогащения;

- исследовать в полном объеме пробы на наличие в них ботулинического или других токсинов.

Анализ материалов, доставленных от больных людей и животных с отметкой о предполагаемом диагнозе, проводят целенаправленно экспрессными и (или) классическими мик­робиологическими методами исследования; во всех осталь­ных случаях материалы от больных подлежат исследованию по единой схеме специфической индикации БА.

При необходимости окончательного подтверждения отри­цательных результатов индикации БА, а также во всех слу­чаях, вызывающих сомнение или требующих контрольной проверки и выделения возбудителя в чистой культуре, проба подлежит дальнейшему исследованию с помощью общепри­нятых методов полного (классического) микробиологическо­го анализа в специализированных (бактериологических, ви­русологических или других) отделениях СЭО фронта и воен­ных округов или в соответствующих НИИ гражданского здравоохранения,

Организация специфической индикации в мирное, и осо­бенно в военное, время предусматривает строгое соблюдение принципа преемственности в работе лабораторий, который предполагает:

- единые способы отбора проб, а также единую схему и методы анализа;

- общую унифицированную (сквозную) нумерацию и обозначение материалов проб в зависимости от стадии их обработки и исследования;

- обязательную для лабораторий, проводящих специфи­ческую индикацию БА в сокращенном объеме, пересылку в кратчайшие сроки около 2/3 каждой пробы в вышестоящие учреждения, обеспечивающие исследование проб в полном объеме в соответствии с единой схемой;

- усиление лабораторий войскового звена и им равных, вынужденных проводить индикацию в полном объеме за счет дополнительных сил и средств;

- замену лабораторий, подлежащих передислокации вслед за войсками, новыми подразделениями с передачей им проб для продолжения индикации;

- организацию обязательной, четкой взаимной информа­ции между лабораториями различных звеньев медицинской и ветеринарной служб о ходе и результатах индикации.

При соблюдении принципа преемственности в работе ла­бораторий исчезает вынужденная необходимость в повторе­нии исследований, выполненных на более ранних этапах ана­лиза.

Специфическая индикация любых биологических агентов, проводимая в соответствии с единой схемой экспресс-анализа в два вышеперечисленных этапа, всегда предусматривает следующий порядок исследования:

- прием, сортировку и регистрацию проб;

- подготовку проб к исследованию и их первичную об­работку;

- концентрирование (при необходимости) возбудителей в пробе с помощью физических или иммуносорбционных спо­собов;

- исследование нативных материалов, пробы с помощью экспресс-методов анализа;

- биологическое обогащение пробы на питательных сре­дах в организме белых мышей и в культуре клеток;

- постановку биопробы на ботулинический и другие ток­сины;

- исследование с помощью экспресс-методов биологи­чески обогащенных материалов пробы.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ лабораторной диагностики — методы ускоренного проведения лабораторных анализов, позволяющие в течение от нескольких секунд до 10—15 минут определить в исследуемом биологическом материале присутствие какого-либо субстрата или количественные отклонения в его содержании, имеющие диагностическое значение. Объектами экстренных лабораторных исследований обычно являются кровь, моча, иногда цереброспинальная жидкость, полостной экссудат, рвотные массы, кал. Ускоренная технология внедряется и в цитологические исследования, особенно при проведении срочной биопсии (см.) тканей во время хирургической операции.

До середины 20 века для экстренной диагностики использовались лишь некоторые традиционные лабораторные методы, не требовавшие значительных затрат времени. С 50-х годов экспресс-методы лабораторной диагностики стали развиваться главным образом на основе двух направлений научно-технического прогресса: в связи с разработкой и внедрением в практику клинических лабораторий автоматизированных систем, ускоряющих исследование морфологического и биохимического состава крови и мочи (см. Автоанализаторы), и на основе достижений химии и химической промышленности, обеспечивших возможность производства так называемых экспресс-тестов, прототипом которых была лакмусовая бумажка, используемая для экспресс-метода определения кислой или щелочной реакции среды.

Современные экспресс-тесты представляют собой наборы химических реактивов в виде таблеток, гранул, порошков или содержащих реактивы полосок фильтровальной бумаги, с помощью которых можно определить наличие различных химических компонентов в биологических жидкостях (так называемый качественный тест) или приблизительно оценить их количественное содержание (так называемый полуколичественный тест). Таблетки, гранулы и порошки обычно предназначены для определения какого-либо одного компонента, то есть являются монотестами. Бумажные полоски, содержащие реактивы, имеют несколько индикаторных зон, то есть представляют собой политесты, позволяющие получить результаты по пяти и более параметрам химического состава одновременно.

Экспресс-методы, проводимые с помощью экспресс-тестов, основаны на известных из классических методов анализа химических реакциях, в которых взаимодействие субстрата и реактива сопровождается образованием соединений с определенной окраской. На таблетку или на индикаторную зону бумажной полоски наносят исследуемую жидкость (чаще полоску погружают в жидкость) и по времени появления окраски, по интенсивности цвета или величине окрашенной зоны судят о наличии или отсутствии исследуемого вещества. Сравнение интенсивности окраски индикаторной зоны с цветными бумажными стандартами позволяет приблизительно оценить количественное содержание определяемого субстрата в жидкости (полуколичественный метод).

Для получения достоверных результатов с помощью экспресс-тестов следует использовать свежую хорошо смешанную мочу, негемолизированную сыворотку крови. При оценке результатов сравнение с цветной шкалой следует проводить в установленные инструкцией сроки с момента начала реакции; цветную шкалу необходимо предохранять от воздействия солнечных лучей, контакта с химическими веществами. Реактивные бумажные полоски чувствительны к действию влаги и тепла, поэтому их хранят в плотных упаковках в прохладном месте, не допускают прикосновения пальцами к зонам индикации. Требуется регулярный контроль качества экспресс-тестов путем сопоставления их результатов с данными других методов лабораторных исследований.

По сравнению с обычными лабораторными методами экспресс-методы, основанные на использовании экспресс-тестов, отличаются рядом преимуществ.

Экспресс-методы необходимы прежде всего в неотложных случаях для диагностики угрожающих жизни состояний, когда результаты анализа нужно получить срочно у постели больного, в условиях помощи на дому. Особенно важны они для отделений интенсивной терапии и реанимации, где имеются штатные или внештатные врачи и лаборанты, обеспечивающие круглосуточное проведение исследований. Такие лаборатории, кроме биохимических экспресс-тестов, выполняют клин. анализы крови (определение количества эритроцитов, лейкоцитов. гемоглобина), определяют группы крови, резус-фактор, время свертывания крови, гематокритное число, кислотнощелочное состояние, содержание в крови электролитов, исследуют кал на скрытую кровь и др. Использование современной экспрессной аппаратуры позволяет в короткий срок в одной пробе крови определить одновременно 10 параметров (причем результат выдается автоматически на печатающем устройстве), установить с помощью селективных электродов содержание ионов натрия, калия и др.

В процессе перехода к ежегодной диспансеризации всего населения применение экспресс-методов значительно расширяет возможности скринирующих обследований (см. Скрининг в медицине), дает возможность сократить число трудоемких лабораторных исследований в 3—4 раза, так как необходимость в количественных биохимических исследованиях в лабораториях при этом возникает только в случае выявления патологии с помощью экспресс-тестов. Например, при подозрении на гаргоилизм (см.) наличие кислых мукополисахаридов в моче может быть установлено с помощью упрощенного теста с кислым альбумином, реакции Бера с толуидиновым синим или по помутнению мочи в реакции с цетилпиридинхлоридом (цетвалоном) в цитратном буфере, что позволяет значительно уменьшить число трудоемких исследований с помощью ионообменной хроматографии (см.) и электрофореза (см.) на бумаге или ацетатцеллюлозе.

Перспективы развития экспресс-методов лабораторной диагностики связаны с разработкой и дальнейшим совершенствованием систем автоматизации лабораторных исследований, с созданием новых дифференцированных экспресс-тестов для качественного и количественного анализа биол. материалов, а также с совершенствованием лабораторной техники (см.). Одним из направлений развития экспресс-методов является разработка и внедрение микроэкспресс-методов, при которых используется максимально ограниченный объем биологических жидкостей. Так, микроэкспресс-метод определения протромбинового индекса сокращает необходимый для анализа объем крови с 0,5 мл до 0,08 мл. Для экспресс-диагностики нарушений кислотно-щелочного баланса разработан микрометод Аструпа на основе прямолинейной зависимости между log pCO2 и pH крови. В отличие от трудоемкого метода Ван-Слайка (см. Ван-Слайка методы), микрометод Аструпа позволяет за 3—5 минуты в 0,1 мл капиллярной крови определить одновременно pH, рСО2, избыток оснований в цельной крови, а также стандартные и истинные бикарбонаты и общую углекислоту плазмы крови (см. Кислотно-щелочное равновесие).

Библиогр.: Пути совершенствования деятельности клинико-диагностических лабораторий, под ред. В, В. Меньшикова, с. 79, М., 1976; Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии, пер. с болг., София, 1968; Beck С., Maurer H.-C. u. 811-bersiepe М. Blutzuckerechnellbestimmung mit Dextrostix (Streifenteet), Med. Labor., Bd 20, 8. 88, 1967.

Одной из основных причин роста заболеваемости внутрибольничными инфекциями (ВБИ) является селекция и формирование госпитальных штаммов, обладающих высокой вирулентностью и множественной лекарственной устойчивостью [4]. Известно значительное количество факторов, влияющих на генетическую и фенотипическую изменчивость микроорганизмов. Меняющиеся условия окружающей среды вызывают у бактерий состояние стресса, в результате которого меняется способность бактерий размножаться на питательных средах [10]. Под воздействием стрессовых факторов окружающей среды, влияющих на культуральные свойства бактерий, иногда даже значительное количество бактерий могут переходить в жизнеспособное некультурабельное состояние [1, 2, 9]. Установлено, что значительное количество бактериальных клеток, обладающих жизнеспособными патогенными свойствами, не размножаются в лабораторных условиях [12]. Так, при использовании стандартных микробиологических методов исследований проб морской воды только 0,01-0,1% бактерий культивировались в лабораторных условиях [11].

Итак, анализ данных периодической литературы свидетельствует, что в ряде случаев под воздействием стрессовых факторов бактерии могут терять способность размножаться в лабораторных условиях на питательных средах. Возможно, это состояние можно сравнить с анабиозом, когда микробные клетки остаются жизнеспособными, но теряют способность культивироваться в лабораторных условиях.

Проведенные нами исследования в предыдущие годы свидетельствуют, что бактерии на своей поверхности, в зависимости от поверхностного химического состава микробных клеток, в жидкой среде имеют ионогенные группировки, влияющие на изменение показателей электрического сопротивления растворов в зависимости от вида бактерий и их концентрации [3, 6, 7, 8]. Поэтому разработка методов выделения некультивируемых бактерий из микробных популяций, вызывающих патологический процесс в восприимчивых организмах, и изучение возможности их индикации по результатам определения показателей электрического сопротивления растворов, содержащих взвесь бактерий (возбудителей инфекционных заболеваний) является актуальным. Определение электрического сопротивления взвеси бактерий не требует материальных затрат и является экспресс-методом, основанным на электрокинетических свойствах микробных популяций. Разработка данного экспресс-метода позволит ускорить процесс эпидемиологического расследования вспышек инфекционных заболеваний, своевременно проводить противоэпидемические мероприятия при возникновении инфекций связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП) [5], а также качественно и своевременно осуществлять лечебно-профилактические мероприятия у пациентов с инфекционной патологией.

Цель исследования - определить возможность использования экспресс-метода индикации бактерий по величине показателей электрического сопротивления взвеси бактерий в жидкой среде для выявления культивируемых и некультивируемых бактерий в лабораторных условиях.

Задачи исследований

Материал и методы исследования

Объектом изучения служили спорадические и госпитальные штаммы бактерий Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus и Escherichia coli, выделенных от больных, находящихся на лечении в ЛПУ г. Тюмени. Некультивируемые бактерии в лабораторных условиях получали следующим способом: провели посев исследуемого материала на скошенный мясопептонный агар (МПА) для накопления микробной взвеси. Из культуры бактерий, выросших на МПА, по стандарту мутности в 5 единиц, соответствующей 500000 мк в 1 мл, получали взвесь бактерий, из которой готовили серийные разведения до 10 7 . Для определения количества культивируемых бактерий в лабораторных условиях, содержащихся в приготовленных серийных разведениях, проводили посев микробов на плотную элективную питательную среду для получения изолированных колоний, а затем определяли концентрацию микробной взвеси.

Результаты исследования и их обсуждение

Проведенные исследования показали, что в чистой культуре бактерий выделяемых в лабораторных условиях имеется значительное количество некультурабельных бактерий. В исследуемых популяциях бактерий, стандартизированных по стандарту мутности в 5 единиц, концентрация культивируемых бактерий составила 10 5 степени, а концентрация бактерий некультивируемых в лабораторных условиях составила 10 7 степени. Культивируемые и некультивируемые бактерии в лабораторных условиях обладали различными показателями электрического сопротивления и при минимальных концентрациях (10-15 микробных клеток) в зависимости от вида микроорганизма электрическое сопротивление некультивируемых бактерий превышало электрическое сопротивление культивируемых бактерий на 100-300 кОм (табл. 1, 2). Итак, на показатели электрического сопротивления некультивируемых бактерий оказывает влияние вид возбудителя инфекционного заболевания. Даже незначительное количество некультивируемых бактерий P.aeruginosa (1-2 микробных клетки) повышало электрическое сопротивление растворителя (физиологический раствор хлорида натрия) на 358 кОм, что дает основание для использования электрического сопротивления некультивируемых бактерий для выявления наличия их на различных объектах больничных помещений и в организме бактерионосителей, что можно использовать для проведения предэпидемической диагностики инфекционных заболеваний.

Значения показателей электрического сопротивления бактерий в зависимости от концентрации культивируемых и некультивируемых бактерий P. Aeruginosa (штамм спорадический № 557)

Показатели электрического сопротивления и количество бактерий в серийных разведениях

Показатели электрического сопротивления (в кОм)

Количество некультивируемых микробных клеток

Количество культивируемых микробных клеток

Разведения микробной взвеси

Значения показателей электрического сопротивления бактерий в зависимости от концентрации культивируемых и некультивируемых бактерий E.cоli (штамм спорадический № 209)

Показатели электрического сопротивления и количество бактерий в серийных разведениях

Показатели электрического сопротивления (в кОм)

Количество некультивируемых микробных клеток

Количество культивируемых микробных клеток

Разведения микробной взвеси

Предложенное устройство позволяет из популяций возбудителей инфекционных заболеваний выделять некультивируемые бактерии в лабораторных условиях, что повысит эффективность лабораторной диагностики за счет выделения некультивируемых бактерий и уменьшит количество ложноотрицательных результатов лабораторных исследований.

Выделение некультивируемых бактерий при лабораторной диагностике инфекционных заболеваний позволит в полном объеме выявлять ИСМП, циркулирующих в лечебно-профилактических учреждениях, а также позволит в более полном объеме проводить противоэпидемическое расследование при возникновении вспышек инфекционных заболеваний и более эффективно проводить расследование эпидемических вспышек и эффективно осуществлять противоэпидемические мероприятия, а также осуществлять эффективные противоэпидемические мероприятия, направленные на источник инфекционного заболевания.

Анализ показателей электрического сопротивления взвесей культивируемых и некультивируемых бактерий в жидкой среде показал, что показатели электрического сопротивления взвесей бактерий можно использовать для экспресс-индикации бактерий в жидкой среде при небольших концентрациях бактерий: от 1 до 20 микробных клеток в 1 мл раствора. Максимальную концентрацию бактерий в жидкой среде можно определить по показателям электрического сопротивления.

Используя цифровой мультиметр (Mini digital multimeter) марки М832 проведено определение электрического сопротивления взвеси бактерий от 1 до 2000 кОм. Параметры разрешающей способностью прибора: 1 кОм и точностью ± 0,8% единиц счета, при максимальном напряжении на электродах 2,8 В. При максимальном показателе электрического сопротивления в пределах 900-1500 кОм регистрировалась максимальная концентрация живых микробных клеток в процессе культивирования бактерий на питательных средах следующих видов бактерий: Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Citrobacter freundii и Pseudomonas aeruginosa. Результаты проведенных исследований оформлены в виде заявки на изобретение № 2010118749 от 13.05.2010 г. По данной заявке вынесено решение экспертизы по существу ФГБУ ФИПС о выдаче патента на изобретение по заявке от 05.10.2011 г.

Схема устройства хладотермостата для накопления в элективной питательной среде некультивируемых бактерий. Обозначения: 1 - рабочая камера хладотермостата; 2 - нагревательный элемент; 3 - охлаждающий змеевик; 4 - фильтр; 5 - испаритель; 6 - компрессор; 7 - приводной двигатель, 8 - пусковое защитное реле двигателя; 9 - цифровое программирующее устройство; 10 - датчик температуры

Установить корреляционной связи между нарастанием концентрации микробных клеток и увеличением или снижением показателей электрического сопротивления растворов, содержащих нарастающие концентрации бактерий не удалось.

На модели спорадических и госпитальных штаммов Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus и Escherichia coli, выделенных от больных, разработан способ и устройство для выделения и накопления некультивируемых бактерий в лабораторных условиях. Установлена возможность индикации в небольших концентрациях (1-20 микробных клеток) культивируемых и некультивируемых бактерий в лабораторных условиях с помощью экспресс-метода по определению электрического сопротивления взвеси бактерий в жидкой среде. Проведенные результаты исследований открывают новые возможности для диагностики инфекционных заболеваний, проведения эффективного специфического лечения и профилактики ИСМП, а также эпидемиологического расследования вспышек инфекционных заболеваний и предэпидемической диагностики инфекционных заболеваний.

Основой диагностики паразитарных болезней, в частности гельминтозов, являются результаты лабораторных исследований, которые выявляют непосредственно возбудителей, их антигены или антитела к ним.

Гельминтозы развиваются в результате инвазии (заражения) организма окончательного хозяина (человека или животного), используемого как место обитания гельминтов и источника их питания. Часто болезни протекают без выраженных специфических клинических симптомов, что не всегда позволяет поставить диагноз по клинической картине.

Диагностика гельминтозов должна быть комплексной и основываться на данных эпидемиологического анамнеза, клиники заболевания и лабораторных исследований.

Специфика биологии каждого конкретного вида гельминта диктует необходимость различной тактики лабораторных исследований, которая направлена на обнаружение в одних случаях гельминтов или их фрагментов, а в других – их личинок, яиц или специфических иммуноглобулинов.

Материал для исследования берется в зависимости от подозрения на наличие у больного того или иного гельминтоза, так как пути выделения яиц, личинок или фрагментов паразитов из организма человека могут быть разными.

Для геогельминтов характерен кишечный (интестинальный) путь выделения яиц и личинок из организма больного человека. Большинство гельминтов, яйца которых выводятся через кишечник, паразитируют в пищеводе, желудке, кишечнике, а также попадают в кишечник при миграции через легкие, бронхи, трахеи, гортань, когда происходит заглатывание яиц и личинок со слизью при кашле. Этот путь присущ трематодам, цестодам и многим нематодам (в частности, геогельминтам). Материалом для исследования служат фекалии (кал). При исследовании проб фекалий обнаруживаются яйца и личинки многих гельминтов.

Паразитологические методы лабораторных исследований применяются:

• с диагностической целью;
• для контроля эффективности лечения;
• для оценки качества проведенного комплекса лечебно-профилактических мероприятий;
• для установления уровня пораженности населения (при профосмотрах)

Лабораторная диагностика является важным методом при паразитарных заболеваниях. В то же время качество лабораторной диагностики зависит от множества факторов, таких как надлежащая подготовка пациента к лабораторному обследованию, правильный забор материала для исследования и выбор оптимальной методики, квалификация и опыт специалиста-лаборанта.

Для верификации диагноза важно обеспечить следующее:

• сбор данных эпидемиологического анамнеза;
• определение соответствующего материала для исследования, правильно собранного и доставленного вовремя;
• выбор и применение соответствующего метода идентификации паразита;
• правильная идентификация паразита;
• правильная интерпретация результатов исследования.

Cбор материала для гельминтологических исследований включает следующие шаги:

1. Для исследования собирают фекалии из любой чистой емкости немедленно после дефекации.
2. Не допускается сбор образцов фекалий из унитаза.
3. Для детей возможен сбор образца с пеленки, подгузника или горшка.
4. Используя ложку в крышке контейнера, собрать не менее чем из трех точек стула.
5. Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию не позднее одних суток после дефекации, а при подозрении на стронгилоидоз – немедленно.
6. Если по каким-либо причинам доставка в лабораторию затруднена, то необходимо хранить материал при температуре +4–8 °C. Рекомендуется использование консерванта, и тогда исследование можно проводить в течение 3–10 дней после дефекации.

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

Методы гельминтологических исследований делятся на прямые и опосредованные (косвенные).

Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте и др.

Опосредованные (косвенные) методы: выявление вторичных изменений, возникающих в организме человека в результате жизнедеятельности паразита, путем серологических реакций, общего исследования крови, мочи.

Основным методом лабораторной диагностики глистных инвазий является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях. Наиболее распространенными методами исследования фекалий являются гельминтокопроскопические.

Гельминтокопроскопия – это совокупность методов взятия, обработки и исследования (макро- и микроскопического) проб фекалий человека с целью обнаружения в них яиц, личинок гельминтов, их фрагментов. Она включает следующие виды исследований:

• копроовоскопия (исследование фекалий на яйца гельминтов);
• копроларвоскопия (исследование фекалий на личинки гельминтов);
• макроскопия фекалий (обнаружение фрагментов или зрелых гельминтов в фекалиях).

Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.

К простым относятся метод нативного мазка и метод толстого мазка под целлофаном по Като – Кац.

Сложные методы, или методы обогащения, основаны на феномене разных удельных весов яиц гельминтов и применяемых реагентов. При обработке фекалий этими растворами происходит концентрация яиц на поверхности раствора или в осадке, в результате чего увеличивается эффективность поиска.

Различают следующие методы обогащения:

• флотационные (когда используют солевые растворы, удельный вес которых выше удельного веса яиц гельминтов, в результате чего они всплывают в поверхностную пленку, которую и исследуют);
• седиментационные (когда используют растворы, удельный вес которых меньше удельного веса яиц гельминтов, в результате чего они оседают, образуя осадок).

Методом седиментации возможно определить следующие гельминтозы: описторхоз, клонорхоз, фасциолез, дикроцелиоз, метагонимоз, нанофиетоз, дифиллоботриоз, гименолепидоз, аскаридоз, трихоцефалез, анкилостомидозы, стронгилоидоз, трихостронгилез, некатороз, шистосомоз, кишечные протозоозы (лямблиоз,криптоспоридиоз, изоспороз)

Специальные методы чаще всего необходимы для обнаружения личинок гельминтов. Группа специальных методов направлена на диагностику конкретного геогельминтоза, применяемый метод специфичен только для данного гельминта.

Модификация эфир-формалинового метода седиментации
одноразовыми системами для проведения копрологического исследования

С развитием паразитологии в лечебную практику стали применяться одноразовые системы для копрологического исследования, предназначенные для эффективного концентрирования яиц и личинок гельминтов модифицированным эфир-формалиновым методом.

Системы для копрологического исследования являются одноразовыми и состоят из нескольких элементов:

• пробирка для образца, в которую имеется готовая смесь для фиксации образца фекалий и последующей седиментации
• пробирка с системой фильтров и шпателем для забора образца;
• коническая емкость для сбора отфильтрованного материала.

Система фильтров способствует оседанию грубых частиц непереваренной пищи и клетчатки в смесительной камере, а жидкая часть с выделившимися в нее паразитами, яйцами паразитов под давлением фильтруется и центрифугируется в конической пробирке.

После получения взвеси систему помещают в центрифугу и центрифугируют при скорости 2500–3000 об/мин в течение 1–3 минут, при скорости 1500 об/мин – 5 минут. В конической части пробирки остается жидкая часть пробы с выделившимися в нее яйцами гельминтов, цистами простейших. Отсоединяют модуль с фильтром и утилизируют после обеззараживания. Коническая часть пробирки остается для микроскопирования. Для этого из нижней части пробирки с помощью пипетки переносят на предметное стекло 2 капли пробы осадка. Микроскопируют при увеличении: окуляр x10, объективы x10, x40.

Преимущества использования одноразовых систем для копрологических исследований:

• повышает выявляемость возбудителей;
• уменьшает расход реагентов;
• снижает опасность контаминации, исключая контакт персонала с исследуемыми образцами;
• улучшает стандартизацию метода, повышает достоверность анализа;
• исключает подготовку и повторную обработку посуды, а также сокращает количество отходов в процессе проведения исследования