Эшерихиозы учебно методическое пособие

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЭШЕРИХИОЗОВ

Для бактериологических исследований из последних порций испражнений тампоном берут часть фекалий в пробирку с транспортным средой (30% глицерина и 70% фосфатного буфера), сеют на среду Эндо (Левина, Плоскирева, Асель-Либермана). При этом небольшое количество фекалий эмульгируют в 0,85% растворе хлорида натрия в соотношении 1:10. Через несколько минут после оседания грубых остатков 1-2 капли жидкости вносят на поверхность среды и стеклянным шпателем растирают ее на небольшом участке. Оторвав шпатель от агара, производят посев на остальные поверхности среды. Если возникает необходимость посеять на вторую и третью чашки, материал наносят повторно.

Среда Эндо предназначена для выделения энтеробактерий, обнаружения эшерихий.

На среде Левина они окрашены в темно-синий цвет, Асель-Либермана – в розовый. В состав последнего среды входит агар, лактоза (или сахароза) и индикатор конго-красный.

Среда Плоскирева – дифференциально-диагностическая и селективная, способствует лучшему росту некоторых бактерий (возбудители брюшного тифа, паратифов, дизентерий) и подавляет рост других (кишечная палочка и пр.).

Среды Гисса – дифференциально-диагностические питательные среды для выявления ферментативной активности бактерий (кишечной группы) [3].

Помимо общепринятого микробиологического исследования существуют также дополнительные методы диагностики. Например, люминесцентно-серологический метод используют как ориентировочный для определения патогенных серотипов E.coli при массовых вспышках желудочно-кишечных заболеваний. Этот метод позволяет за короткий срок получить предварительные результаты.

Колибактериоз следует дифференцировать от диареи незаразного происхождения, сальмонеллеза, стрептококкоза, пастереллёза, некоторых вирусных инфекций.

Экспресс-методы (индикация патогенной E.coli или ее продуктов в исследуемом материале) ДНК-зонды или ПЦР для выявления специфического фрагмента ДНК патогенной E.coli РИФ.

При положительном результате РА оставшуюся часть колонии пересевают уколом в столбик и штрихом на поверхность скошенной части среды на комбинированную полускошенную полиуглеводную среду (например, Ресселя) с целью накопления культуры.

У выделенных культур или в патологическом материале можно определить адгезивность и инвазивность микроскопическим методом с использованием культур ткани Нер-2 или HeLa, а также плазмиды вирулентности с помощью ДНК-зондов или ПЦР.

Для ускоренной идентификации возбудителя в исследуемом материале применяют прямую или непрямую РИФ [6].

Кишечная палочка – факультативный анаэроб, оптимальная температура для роста – 37°С. E.coliне требовательна к питательным средам и хорошо растет на простых средах, давая диффузное помутнение на жидких и образуя колонии на плотных средах. Для диагностики эшерихиозов используют дифференциально-диагностические среды с лактозой – Эндо, Левина.

Ферментативная активность. E.coli обладает большим набором различных ферментов. Наиболее отличительным признаком E.coli является ее способность ферментировать лактозу [2].

В отдельных случаях делают первичную микроскопию крови, мочи, ликвора, гнойных выделений, секретов слизистых оболочек в мазках, окрашенных по Граму. Обнаружение грамотрицательных палочек помогает бактериологов выбрать соответствующие питательные среды и следующие этапы лабораторной диагностики. Начальная бактериоскопия испражнений не проводится [5].

Выделенные культуры проверяют на патогенность, заражая внутрибрюшинно белых мышей. Диагноз на колибактериоз считают установленным, если культуру возбудителя изолируют из селезенки, трубчатой кости или из головного мозга. Болезнь также подтверждается, если выделенная культура эшерихий из других органов вызывает гибель белых мышей. В большинстве случаев E.coli, выделенные из трупа или фекалий больных коли-инфекций животных, патогенны для мышей [4].

Бессарабов, Б. Ф. Инфекционные болезни животных [Текст]: учебник / Б. Ф. Бессарабов, А. А. Вашутин- М.: КолосС, 2007- 671 с.

Волина, Е.Г. Частная микробиология [Текст]: учебное пособие / Е.Г. Волина, Л.Е. Саруханова. - М.: РУДН, 2016.-222 c

Госманов, Р.Г. Микробиология и иммунология [Текст]: уч.пособие / Р.Г. Госманов, А.И. Ибрагимова, А.К. Галиуллин. - СПб.: Лань, 2013.-240 c.

Донецкая, Э.Г. Клиническая микробиология [Текст]: уч. пособие для специалистов клинической лабораторной диангостики / Э.Г. Донецкая. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011.-480 c.

Радчук, Н. А. Ветеринарная микробиология и иммунология [Текст]: учебник / Н. А. Радчук, Г. В. Дунаев, Н. М. Колычев, Н. И. Смирнова. – М.:Лань, 20011.-201с.

Эшерихиозы – острые инфекционные заболевания преимущественно детей раннего возраста, вызываемые различными сероварами патогенной кишечной палочки. Характеризуются развитием патологических процессов в желудочно-кишечном тракте с инфекционно-токсическим и диарейным синдромом, реже – поражением других органов или генерализацией процесса вплоть до сепсиса.

Определенные штаммы кишечной палочки могут вызывать острую диарею у детей.

Их классифицируют на:

1) энтеропатогенные (ЭПКП) (Escherichia coli). Это особые серотипы возбудителей из группы кишечных палочек, обусловливающих диарею у детей младшего возраста;

2) энтеротоксигенные (ЭТКП) – вырабатывают токсин, способствующий развитию диареи;

3) энтероинвазивные (ЭИКП) Е. coli, способные разрушать кишечный эпителий, что вызывает напоминающие дизентерию заболевания;

Этиология. Е. coli – грамотрицательная подвижная аэробная (факультативно анаэробная) палочка, у которой выделяют более 150 групп антигенов О, 93 группы антигенов К и 52 группы антигенов Н. Каждая из групп антигенов может существовать независимо от других.

Эпидемиология. Энтеропатогенные кишечные палочки служат этнологическим фактором при вспышках эпидемий диареи в детских садах и детских отделениях больниц. После введения их испытуемым у последних развивается диарея, но серотипы энтеропатогенных палочек могут обнаруживаться и у лиц без признаков диареи, а вспышки ее в детских коллективах отнюдь не обязательно связаны с выделением этого микроорганизма.

Энтеротоксигенные кишечные палочки, продуцирующие термолабильный энтеротоксин, вызывают заболевания только при массивной инфекции, поэтому вспышки эпидемий развиваются при значительном загрязнении продуктов питания или источников водоснабжения.

Патогенез. Механизм развития диареи при заражении ЭПКП недостаточно расшифрован. Некоторые штаммы, которые при заражении добровольцев массивными дозами вызывали диарею, не обладали инвазивностью и не продуцировали энтеротоксин. Другие же продуцировали энтеротоксин наподобие токсина дизентерийной палочки первого типа.

ЭТКП могут продуцировать термостабильный, термолабильный токсин или тот и другой одновременно, генетический контроль за продукцией которых осуществляется переносимыми плазмидами. Термолабильный энтеротоксин близок холерному токсину. Он связывается с ганглиозидами эпителиальных клеток в качестве их рецептора и активирует клеточную аденилциклазу, в результате чего повышается внутриклеточная концентрация аденинмонофосфата и усиливается выделение воды и хлоридов. Термостабильный энтеротоксин активирует гуанилатциклазу, усиливающую секреторную активность желудочно-кишечного тракта. Генетическая информация, кодирующая устойчивость возбудителя к антибиотикам, заложена в той же плазмиде, несущей информацию о продукции энтеротоксина. Поэтому широкое и неконтролируемое использование антибиотиков способствует распространению как устойчивых к лекарственным препаратам, так и продуцирующих энтеротоксин форм Е. coli.

ЭИКП могут проникать в клетки кишечного эпителия и размножаться в них наподобие шигелл, в результате чего развиваются отек, гиперемия, изъязвление слизистой оболочки и усиливается экссудация в просвет кишечника. В кале появляется примесь слизи и крови, увеличивается число лейкоцитов.

Четвертым патогенетическим механизмом является адгезия, выстилание и повреждение ворсинчатой поверхности кишечного эпителия со снижением активности пристеночных ферментов, но без инвазии. По серологической характеристике эти кишечные палочки относятся к типу ЭПКП.

Клинические проявления. Для диареи, обусловленной ЭПКП, характерны водянистые испражнения, частота которых может достигать 10–20 раз в день, и небольшое повышение температуры тела. Другие общие нарушения могут отсутствовать. В кале отмечается примесь слизи, но кровь отсутствует. Спонтанное излечение наступает через 3–7 дней. У маленьких детей могут развиваться рвота, дегидратация и электролитные нарушения с ацидозом.

У больных при заражении ЭИКП симптоматика развивается через 18–24 ч (инкубационный период) внезапно повышается температура тела, появляется тяжелая диарея с позывами и тенезмами, наблюдается примесь слизи и крови в кале. Больные жалуются на боли в животе, миалгии, озноб, головную боль.

Заболевание, вызываемое выстилающими штаммами Е. coli, характеризуется постепенным началом и хроническим течением. Дети медленно растут, плохо переносят некоторые пищевые продукты.

Диагноз. Гастроэнтерит, вызванный ЭПКП, можно заподозрить при внезапной вспышке эпидемии диареи, особенно в детском коллективе. Предположительный диагноз может быть поставлен при обнаружении одного и того же серотипа кишечной палочки у нескольких заболевших детей. Аналогичные серотипы Е. coli могут быть обнаружены также в носоглотке, зеве и желудке больных. Серотипирование кишечных палочек в обычных условиях не проводится, необходимость в подобных исследованиях возникает лишь при вспышках эпидемии в детских или в других закрытых коллективах. Идентификация ЭТКП и ЭИКП требует специальных методов, применяемых в настоящее время лишь в некоторых научно-исследовательских лабораториях. Точный диагноз энтероколита, связанного с повреждением поверхностного участка клеток кишечного эпителия, можно поставить только после биопсии кишечника.

Лечение. Основными элементами лечения у детей являются коррекция и поддержание водно-электролитного равновесия. Профузные поносы и рвота, вызывающие значительную дегидратацию, служат показанием для госпитализации ребенка и внутривенного введения ему жидкостей.

У детей младшего возраста при диарее, обусловленной ЭПКП эффективен, неомицин. Рецидивы после прекращения лечения встречаются у 20 % детей.

Результаты лечения антибиотиками при диарее, вызванной ЭТКП, у детей не изучены.

Лечение диареи, вызванной ЭИКП, разработано недостаточно. Обычно больные не нуждаются в госпитализации и выздоравливают через 1 неделю даже без приема антибиотиков, в редких случаях требуется назначение ампициллина.

Большое значение в терапии диареи, вызванной выстилающими штаммами кишечной палочки, может иметь пероральный прием неомицина, а также правильное парентеральное питание.

Данный текст является ознакомительным фрагментом.

Среди видов Escherichia coliсемействаEnterobacteriaceae, наряду с непатогенными кишечны­ми палочками - представителями нормальной микрофлоры кишечника, имеются их патогенные варианты, в том числе:

· энтерогеморрагические кишечные палочки (ЭГКП) - возбудители энтерогеморрагического эшерихиоза с гемолитико-уремическим синдромом);

· энтероинвазивные (ЭИКП), вызывающие заболева­ния, сходные с дизентерией;

· энтеротоксигенные (ЭТКП), вызывающие холероподобный эшерихиоз или диарею путешественников;

· ЭПКП (энтеропатогенные) - возбудители детских колиэнтеритов и других кишечных инфекций, а также уропатогенные эшерихии, поражающие мочевыводящие пути.

Наиболее часто встречающиеся серовары патогенных эшерихий, входящих в состав перечисленных групп, представлены в таблице 11.

Таблица 11.Серовары наиболее часто встречающихся патогенных эшерихий.

Энтеротоксигенные	Энтеропатогенные	Энтероинвазивные	Энтерогеморрагические
О6, О8, О15, О20, О25, О27, О63, О78, О80, О85, О115, О128, О139, О148, О153, О159, О168	О18, О44, О55, О111, О112, О114, О119, О125-128, О142	О28, О29, О124, О136, О143, О144, О152, О164, О167	О157, О126, О111

Часть эшерихий относится к условно-патогенным микроорганизмам, способных вызывать оппортуни­стические инфекции (пневмонии, нагноения ран и полостей, ме­нингиты, сепсис и т.д.). При накоплении в пищевых продуктах эшерихии могут стать причиной пищевого отравления. Методы микробиологической диагностики эшерихиозов отражены в схеме 11.

Бактериоскопический метод в диа­гностике эшерихиозов в практике бактериологических лабораторий не применяется из-за сходства морфологических и тинкториальных свойств патогенных и условно-патогенных энтеробактерий.

Бактериологический методявляется основным методом диагностики эшерихиозов. Для выделения эшерихий используют среды Эндо, Левина и среду Мак-Конки с сорбитом для выделения Escherichia coli0157 : HIиз группыЭГКП.

Экспресс-методы(индикацияпатогенной E.coli или ее продуктов в исследуемом материале) ДНК-зонды или ПЦР для выявления специфического фрагмента ДНК патогенной E.coli РИФ

Через 18 —24 ч инкубации при 37 0 С изучают характер колоний (гладкие, выпуклые, с ровными краями колонии, окрашенные в красный цвет в результате разложения лактозы, с характерным металлическим блеском), выросших на плотных питательных средах. Патоген­ные эшерихии по морфологическим, тинкториальным, культуральным и биохимическим свойствам не отличаются от обычных эшерихий, обитающих в кишечнике человека. Исключение составляют лактозоотрицательные ЭПКП. Принадлежность выделенных микро­организмов к патогенным эшерихиям устанавливают по ан­тигенной структуре с помощью ОРА со смесью специфических эшерихиозных ОК- сывороток и содержимого 10 лактозоположительных колоний. На среде Мак-Конки с сорбитом ЭГКП образуют бесцветные колонии, тогда как другие эшерихии фер­ментируют сорбит, образуя красные колонии.

При положительном результате РА оставшуюся часть колонии пересевают уколом в столбик и штрихом на поверхность скошенной части среды на комбинированную полуско­шенную полиуглеводную среду (например, Ресселя) с целью накопления культуры.

На 3-й день учитывают изменения на среде Ресселя. Ферментацию глюкозы с образованием кислоты или кислоты и газа выявляют по изменениям стол­бика агара (пожелтение и его разрывы среды в результате ферментации глюкозы в анаэробных условиях) и скошенной части (пожелтение в результате фер­ментации лактозы и сахарозы). При отсутствии ферментации углеводов среда приобретает щелочную реакцию за счет выделения аминов при разложении бел­ка и приобретает красный цвет. Проверяют чистоту выделенной культуры, опре­деляют ее биохимические свойства (посев на среды Гисса); проводят серотипирование путем постановки сначала ориентировочной РА на стекле с поливалентной ОК-сывороткой, а затем — развернутой РА с адсорбированными групповыми сы­воротками для определения ОК-серогруппы. Можно использовать латексные диагностикумы, покрытые соответствующи­ми антителами (реакция латексной агглютинации).

Антигенную формулу выделенной культуры определяют по результатам постановки развернутой РА с ОК сывороткой (или диагностическим иммуноглобулином) и жи­вой культурой (типирование по К-антигену), а также развернутой РА с ОК сывороткой и гретой (кипяченой в течение 1-2 ч) культурой с целью определения специфического О-антигена. Кипячение или автоклавирование разрушает поверхно­стно расположенный К-антиген, мешающий определению специфического О-антигена. Через сутки инкубирования при 37 0 С гомологичные сыворотке штаммы должны агглютинироваться до титра или до половины титра сыворотки.

Культуру, положительно прореагировавшую в развернутой РА с одной из сывороток, засевают на дифференциально-диагностические среды для окончательной иден­тификации. Для выявления источника инфекции и путей заражения у вы­деленного штамма определяют фаговар и колициногеновар.

У вы­деленных культур или в патологическом мате­риале можно определить адгезивность и инвазивность микроскопическим методом с использованием культур ткани Нер-2 или HeLa, а также плазмиды вирулентности с помощью ДНК-зондов или ПЦР.

Для ускоренной идентификации возбудителя в исследуемом материале применяют прямой или непрямая РИФ.

Серологический метод является вспо­могательным, направленным на обнаружение антител и их динамики в процессе инфекции (исследование парных сывороток) с помощью РА, РНГА, ИФА.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

ЭШЕРИХИОЗЫ

Эшерихиозы – острые инфекционные заболевания, протекающие с симптомами интоксикации, энтерита или гастроэнтерита и нередко сопровождающиеся обезвоживанием организма.

Этиология. Возбудителем являются патогенные кишечные палочки Escherichia coli, принадлежащие к роду Escherichia, семейству Enterobacteriaceae. Эшерихии – прямые палочковидные бактерии размерами 1,1–1,5´2,0–6,0 мкм. У большинства штаммов имеются капсулы или микрокапсулы. Эшерихии выделяют бактериоцины – колицины, вызывающие гибель филогенетически родственных бактерий. Колициногения более характерна для патогенных кишечных палочек. Морфологические различия между патогенными и непатогенными кишечными палочками не выявлены. Их дифференциация основана на различиях в структуре поверхностных антигенов, среди которых выделяют соматические О-антигены, жгутиковые Н-антигены, капсульные К-антигены, обозначаемые арабскими цифрами. В настоящее время выявлено более 170 разновидностей О-антигенов и 56 – Н-антигенов.

Эшерихии по биологическим и патогенетическим свойствам подразделяются на энтеротоксигенные, энтероинвазивные, энтеропатогенные, энтерогеморрагические и энтероаггрегативные.

Энтеротоксигенные эшерихии вырабатывают термолабильный и/или термостабильный энтеротоксин, имеют фактор колонизации и вызывают диарею у детей и взрослых. Термолабильный энтеротоксин эшерихий иммунологически близок энтеротокину холерных вибрионов. К энтеротоксигенным E.coli относятся О6, О8, О15, О20, О25, О27, О34, О48, О63, О78.

Энтероинвазивные эшерихии обладают способностью инвазировать эпителий кишечника и вызывать заболевания, сходные по клиническим проявлениям с дизентерией. Эти эшерихии не вырабатывают энтеротоксин, но при их разрушении освобождается эндотоксин. В группу энтероинвазивных эшерихий входят О28, О29, О32, О112, О115, О124, О129, О135, О136, О143, О144, О151, О152, О164.

Энтеропатогенные эшерихии вызывают заболевания у грудных детей с преимущественным поражением тонкого кишечника. Основные группы энтеропатогенных эшерихий представлены О18, О20, О25, О26, О33, О44, О55, О86, О111, О114, О119, О125, О126, О127, О128, О142.

Энтерогеморрагические эшерихии вызывают диарею с примесью крови –геморрагический колит, а также гемолитико-уремический синдром (микроангиопатическая гемолитическая анемия, сочетающаяся с почечной недостаточностью). Наиболее частые возбудители – серотипы 0157:Н7 и О26:Н11. К факторам патогенности энтерогеморрагических эшерихий относятся цитотоксин и шигаподобный токсин.

Энтероаггрегативные эшерихии продолжают изучаться и пока не ассоциируются с определенными серогруппами и сероварами.

Эшерихии достаточно длительно выживают во внешней среде. Во влажной почве, речной воде и на игрушках сохраняют жизнеспособность в течение 3 месяцев, в канализационных жидкостях, на предметах обихода и одежде – до 45 дней, на белье, загрязненном выделениями больного – до 20 дней. Быстро погибают при кипячении, инактивируются используемыми в медицинской практике дезинфицирующими и стерилизующими средствами.

Источник инфекции. В подавляющем большинстве случаев источниками инфекции являются больные манифестными формами эшерихиозов. При эшерихиозах, обусловленных энтеротоксигенными и энтерогеморрагическими эшерихиями, период заразительности больных обычно ограничен первыми днями заболевания. Заразительность больных, связанных с энтероинвазивными и энтеропатогенными эшерихиями, составляет 1–2 недели, иногда достигает трех недель. Эпидемическая значимость стертых форм ограничена, так как продолжительность выделения возбудителя невелика и в испражнениях он находится в низких концентрациях. У детей возможна активизация эндогенной инфекции, которая происходит в результате снижения общей резистентности при применении иммунодепрессантов, лучевой терапии и т.д. Диареегенные эшерихии выявляются у рековалесцентов в 1–2% случаев. Бактерионосительство среди взрослых составляет 2–3%, обычно кратковременно, среди детей более частое. В очагах инфекции 30–40% контактировавших детей являются бактерионосителями.

Инкубационный период – составляет от 9 часов до 10 дней, чаще около 3-х дней.

Механизм передачи– фекально-оральный.

Пути и факторы передачи. Факторами передачи диареегенных Е.соli служат продукты питания (чаще молоко и молочные продукты), предметы обихода или ухода (за ребенком, больным), доказана роль воды. Возможна передача инфекции через руки матерей, персонала детских учреждений, стационаров. Проникновение возбудителей эшерихиозов в организм человека происходит традиционными для кишечных инфекций путями – пищевым, водным, бытовым. Для диареегенных E.coli в зависимости от их категории один из этих путей является преимущественным. Энтеропатогенные эшерихии передаются в основном бытовым путем, энтеротоксигенные – водным и пищевым, энтероинвазивные – чаще пищевым. Значимость различных факторов передачи эшерихий в определенной мере зависит от возраста. Дети раннего возраста чаще всего заражаются через загрязненные предметы обихода, старшие дети и взрослые инфицируются преимущественно посредством пищевых продуктов, в которых происходит размножение эшерихий и накопление их в количествах, достаточных для развития заболевания.

Восприимчивость и иммунитет. Восприимчивость к эшерихиозам зависит от возраста, вирулентности и дозы возбудителя, состояния общей резистентности макроорганизма. Наибольшей восприимчивостью характеризуются дети первых лет жизни, особенно в возрасте до одного года. Повышенная восприимчивость также отмечается у недоношенных детей, страдающих дистрофией, а также находящихся на искусственном вскармливании. Заболевания эшерихиозами часто развиваются у детей, ослабленных другими соматическими или инфекционными болезнями. Инфицирующая доза эшерихий составляет 10 5 –10 10 микробных клеток. Иммунитет изучен недостаточно.

Факторы риска.Недоношенность, врожденные пороки развития, искусственное вскармливание, иммунодефициты, скученность, отсутствие условий для соблюдения санитарно-гигиенических требований.

Профилактика. Главным направлением в профилактике эшерихиозов является комплекс мероприятий, направленных на разрыв механизма передачи. Они должны быть направлены на предупреждение заболеваемости прежде всего маленьких детей. Это достигается при выполнении следующих условий: все, ухаживающие за детьми, должны тщательно мыть руки перед каждым контактом с ребенком, а также с предметами, которые тот может брать в рот; детям необходимо мыть руки перед каждым приемом пищи, а также после любого их загрязнения; детям с раннего возраста следует прививать гигиенические навыки; необходимо уделять особое внимание качеству пищевых продуктов, пред­назначенных для детей и при малейшем подозрении на ухудшение их качества – исключать из питания; посуда и предметы ухода за детьми должны мыться после каждого ис­пользования и периодически кипятиться; поить детей следует только кипяченой водой; игрушки надо ежедневно мыть под проточной водой с использовани­ем моющих средств; игрушки, побывавшие в песочницах, следует мыть после каждого возвращения детей домой.

Для повышения резистентности детей к диареегенным Е.соli рекомендуются грудное вскармливание, коррекция биоценоза кишечника, использование препаратов неспецифической защиты. В грудном молоке содержатся высокие концентрации секреторного IgA, а также вещества, стимулирующие рост бифидобактерий и лактобактерий, лактоферрин, лизоцим и другие факторы неспецифического действия, препятствующие росту диареегенных эшерихий.

К профилактическим мероприятиям следует отнести своевременное выявление больных эшерихиозами и носителей среди лиц, представляющих потенциальную эпидемическую опасность – работников пищевых и приравненных к ним предприятий, персонала детских дошкольных учреждений, детских соматических и родильных отделений, пищеблоков больниц, а также новорожденных и родильниц.

Важное профилактическое значение имеют санитарно-гигиенические и дезинфекционные мероприятия в детских дошкольных учреждениях и детских стационарах. Особое внимание следует уделять использованию стерильных одноразовых пеленок, обработке рук антисептиками перед каждым контактом с ребенком, обеззараживанию посуды, пастеризации молока и молочных смесей.

Противоэпидемические мероприятия – таблица 5.

Противоэпидемические мероприятия в очагах эшерихиозов

|	следующая лекция ==>
|	Физиология и медицина

Дата добавления: 2016-03-22 ; просмотров: 2376 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

Основной метод – бактериологический. Исследуемый материал (испражнения, рвотные массы, мочу, кровь, пищевые продукты, отделяемое носа, зева, уха и т. д.) засевают на среды Эндо, Левина, Плоскирева. Выделенные культуры сероидентифицируют.

Для этого с окрашенными колониями (в количестве не менее 10) ставят реакцию агглютинации на стекле с поливалентными эшерихиозными ОК сыворотками (или со смесью не более пяти ОК сывороток) для дифференциации ЭПЭ от других эшерихий.

Культуры, давшие положительную РА с поливалентной эшерихиозной сывороткой проверяют в РА на стекле с каждой типовой сывороткой.

При положительном результате с одной из них ставят развернутую РА с этой сывороткой и с живой (определение К-антигена) и гретой при 100ºС 1 час (определение О-антигена) культурой. Сыворотку разводят до титра.

РА считается положительной, если с гретой культурой отмечается агглютинация в разведении сыворотки не ниже ½ ее титра, а живая культура агглютинируется сывороткой, разведенной не менее чем 1:200.

Параллельно с изучением антигенной структуры (в реакциях агглютинации) у подозрительных колоний проверяют биохимические свойства путем посева на среды Гисса (сахаролитические свойства) и на МПБ (для изучения протеолитических свойств).

По комплексу изученных признаков устанавливают вид и серотип возбудителя.

В ряде лабораторий применяют люминисцентно-серологический метод исследования с использованием иммунофлюоресцирующих сывороток, позволяющих получить предварительный ответ через 1-2 часа после начала исследования.

Вспомогательный метод – серологический:ставят РНГА (реакцию непрямой гемагглютинации) с сывороткой больного, начиная с 3-5 дня болезни, изучают нарастание титра антител в динамике заболевания.

Лечение. Применяют химиотерапевтические средства: фуразолидон, энтеросептол, интестопан, мексаформ, мексазу; антибиотики: ампициллин, аминогликозиды, цефалоспорин, левомицетин, полимиксин,тетрациклин. Хороший результат дает колипротенный фаг.

Для устранения кишечного дисбактериоза применяют колибактерин, бифидумбактерин, лактобактерин, бификол и другие эубиотики.

Профилактика:санитарно-гигиенические мероприятия направлены на разрыв эпидемической цепи. Специфическая профилактика отсутствует.

68)Характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов А и В. Механизм и пути передачи инфекций, патогенез, клиника. Лабораторная диагностика ( 1-ая,2-ая,3-я недели заболевания. Препараты для специфической профилактики и лечения.

Брюшной тиф, паратифы, сальмонеллезы - острые кишечные инфекции; брюшной тиф и паратифы - антропонозы, сальмонеллезы - зоонозы.

Возбудители относятся к роду Salmonella , семейству Enterobacteriaceae, отделу Gracilicutes.

Брюшной тиф и паратифы А и В вызываются соответственно S. typhi, S. paratyphi и S. Schottmuelleri. относящиеся к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae.

Морфологические свойства: мелкие 2-3 мкм ´ 0.2-0.7 мкм палочки с закругленными концами, в мазке располагающиеся хаотически; спор не образуют, имеют микрокапсулу, перитрихи.

Тинкториальные свойства: грамотрицательные.

Культуральные свойства: Неприхотливы, растут на простых питательных средах, но для их выделения используют элективные среды (среда Раппопорт, желчный бульон), среды обогащения (селенитовую, Мюллера и др.) дифференциально-диагностические (Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфитный агар). На плотных средах образуют прозрачные, более мелкие, чем Е. со1i, колонии. Палочки паратифа В по периферии колонии образуют слизистый валик. На бульоне - рост в виде диффузного помутнения.

Биохимические свойства: Биохимическая активность их достаточно высока, но ниже, чем у Е. со1i. В отличие от Е. со1i сальмонеллы не сбраживают лактозу, поэтому их колонии на среде Эндо, Левина, Плоскирева неокрашенные прозрачные. S. typhi ферментируют глюкозу, мальтозу, маннит до кислоты а S. paratyphi и S.schottmuelleri те же сахара, но до кислоты и газа. При разложении белков S. typhi и S.schottmuelleri образуют H₂S. Желатин не разжижают.

Антигенная структура: Сальмонеллы содержат два антигенных комплекса: О-антигены (соматические) и Н-антигены (жгутиковые). Некоторые сальмонеллы имеют К-антигены, локализованные в микрокапсуле, (например Vi-антиген у S.typhi).

О-антигены термостабильны, резистентны к этанолу, разведённым кислотам, но чувствительны к формалину; по химической природе это липополисахариднопротеиновый комплекс, содержится в клеточной стенке бактерии.

Н-антигены термолабильны, разрушаются под действием этанола, HCl, фенола, протеолитических ферментов, но устойчивы к формалину.

Систематическая разработка антигенного строения различных сальмонелл проведена Ф. Кауфманом (1934). В соответствии с серологической классификацией Ф. Кауфмана и П. Уайта все сальмонеллы в зависимости от содержания тех или иных О-антигенов разделены на серологические группы, обозначаемые прописными буквами латинского алфавита (А,В,С,D,E и т.д.), известно более 60 О-групп. При этом отдельные О-антигены обозначаются арабскими цифрами.

Дифференциация сальмонелл внутри группы на серовары (серотипы) проводится на основании состава Н-антигенов.

Н-антигены могут иметь 2 е серологические фазы:

1 - специфическую, обозначаемую строчными латинскими буквами;

2 - неспецифическую, обозначаемую арабскими цифрами и, реже, латинскими буквами.

Каждому серовару присвоено одно из видовых названий.

В соответствии с классификацией Ф. Кауфмана и П. Уайта:

S. paratyphi относится к серогруппе А; содержит 1,2,12 О-антигены и а Н-антиген (1 фаза); антигенная формула 1,2,12,а.

S. schottmuelleri относится к серогруппе В; содержит 1,4,(5),12 О-антигены, в (1 фаза) и 1,2 (2 фаза) Н-антигены.

S. typhi относится к серогруппе D, содержит 9,12 О-антигены и d (1 фаза) Н-антиген.

Кроме того S.typhi (в разгар заболевания) содержит поверхностный Vi-антиген - антиген вирулентности, капсульный (термолабильный, чувствительный к HCl, этанолу, разрушается при кипячении в течение 10 минут), с ним связана устойчивость бактерий к фагоцитозу.

Знание антигенной структуры сальмонелл необходимо для серологической их идентификации (при диагностике заболевания).

Факторы патогенности. Сальмонеллы образуют эндотоксин с энтеротропным, нейротропным и пирогенным действием. Микрокапсула обуславливает адгезию к чувствительным клеткам и устойчивость к фагоцитозу.

Резистентность. Возбудители брюшного тифа и паратифов довольно устойчивы во внешней среде (могут сохраняться до1-1,5лет при низкой температуре). Чувствительны к дезинфицирующим средствам, высокой температуре, УФ-лучам. Сохраняются и размножаются в пищевых продуктах (молоке, мясе и т.д.).

Эпидемиология. брюшной тиф и паратиф А - антропонозные инфекции: источником инфекции являются больные люди и носители. При паратифе В источником инфекции могут быть и сельскохозяйственные животные (крупный рогатый скот, цыплята). Механизм передачи инфекции фекально-оральный.

Пути передачи - водный, реже - пищевой и контактно-бытовой. Чаще болеют люди15-30 лет, наиболее высокая заболеваемость летом и осенью.

Клиника и патогенез

Сальмонеллы тифа и паратифов попадают в организм человека через рот, многие из них погибают в желудке, а часть достигает нижнего отдела тонкой кишки, где находят наиболее благоприятные условия для размножения - фаза инвазии.

Бактерии из просвета тонкой кишки проникают в групповые лимфатические и солитарные фолликулы тонкого кишечника, а затем в регионарные лимфатические узлы - фаза мезентериального лимфаденита (продолжительностьеё 10-12 дней). Это инкубационный период. В дальнейшем бактерии проникают в кровоток, что сопровождается появлением первых признаков заболевания - фаза бактериемии. Эта фаза характеризуется постепенным повышением температуры, общим недомоганием, переходящим в состояние глубокой интоксикации, обусловленной действием эндотоксина, высвобождающегося в результате массовой гибели бактерий, чему способствуют образующиеся антитела.

Бактериемия сохраняется на протяжении всего лихорадочного периода, но наиболее выражена в течение 1 ой недели болезни.

Гематогенным путем возбудители попадают в различные органы(печень, селезенку, костный мозг, лимфатические узлы тонкой кишки), где размножаются, обогащая кровь возбудителем - фаза паренхиматозной диффузии.

В желчных протоках печени, в желчном пузыре возбудители тифо-паратифозных инфекций имеют наиболее благоприятные условия для размножения. С желчью они выделяются в 12-перстную кишку, и ниже лежащие отделы тонкой кишки, где повторно внедряются в лимфатические фолликулы, ранее ими сенсибилизированные. В результате развивается воспалительная аллергическая реакция, в стенке кишки образуются язвы, что может привести к разрушению стенки кишечника, то есть перфорации - тяжелейшему осложнению брюшного тифа. На III неделе болезни возбудители в большом количестве выделяются с испражнениями, а также с мочой. Это выделительно-аллергическая фаза. Выделяться возбудитель может и с молоком кормящей больной матери.

Выделительная стадия переходит в стадию выздоровления, сопровождающуюся возрастанием титра специфических антител.

У больного прекращается лихорадка, интоксикация, улучшается сон, аппетит, постепенно нормализуются все функции организма.

Иммунитет

врожденного иммунитета к брюшному тифу и паратифам не существует. Перенесенное заболевание оставляет прочный, пожизненный иммунитет. Но у части больных возникают рецидивы, а 3-9% переболевших становятся хроническими бактериеносителями. Это связано с недостаточно напряжённым гуморальным иммунитетом, что объясняют индивидуальным несовершенством иммунной системы.

Лабораторная диагностика

Лабораторная диагностика основана на выделении возбудителей из организма больного (бактериологический метод) и обнаружении специфических антител (серологический метод).

Материалом для исследования при бактериологическом методе служат кровь, пунктат костного мозга, кал, моча, содержимое розеол, желчь.

С 1 -го дня заболевания исследуют кровь – метод гемокультуры (бактериологический метод). Для этого 5-10 мл крови больного засевают в колбы с 50-100 мл питательной элективной среды с желчью (нейтрализующей бактерицидные свойства сыворотки крови) - среды Раппопорт. После инкубирования в термостате при 37 0 С пересев делается на среды Эндо, Плоскирева. Прозрачные бесцветные колонии отсевают на среду Ресселя (Олькеницкого), на которой учитывают ферментацию сальмонеллами глюкозы и отсутствие ферментации лактозы.

Выделенную чистую культуру идентифицируют по биохимическим и антигенным свойствам. Анализ антигенной структуры (серологическую идентификацию сальмонелл) начинают на стекле с поливалентной О-сывороткой А,В,С,D,E. При отсутствии агглютинации выделенную культуру испытывают с поливалентной О-сывороткой к редким группам сальмонелл. При положительной реакции с одной из сывороток культуру испытывают с каждой О-сывороткой, входящей в состав поливалентной, для определения О-серогруппы. Установив принадлежность культуры к О-группе , определяют её Н-антигены с сыворотками первой, а затем второй фазы.

Для установления эпидемиологической цепочки тифозную палочку фаготипируют (определяют фаговар) Vi- фагами.

Со II недели заболевания проводят бактериологические исследования с испражнениями (получение копрокультуры), мочой (получение уринокультуры), желчью.

Испражнения (мочу, желчь) непосредственно, а также после проведения их через среды обогащения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина Плоскирева) так, чтобы выросли изолированные колонии. Из бесцветных колоний получают чистые культуры, с которыми поступают так же, как и при идентификации гемокультуры.

Серодиагностика (выявление антител в сыворотке крови) осуществляется с конца I -ой начала II -ой недели заболевания. Применяют реакции агглютинации по Видалю, РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с эритроцитарными О- и Vi- диагностикумами, ИФА -(иммуноферментный анализ), РИА (радиоиммунный анализ).

Реакция Видаля ставится одновременно с 4 антигенами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными диагностикумами. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни: О-антитела накапливаются в разгар заболеванияи исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени. Диагностический титр реакции Видаля 1:200.

По нарастанию титра агглютининов в динамике можно отличить имеющуюся инфекцию от реакции на прививку. В последнем случае нарастания титра антител не будет.

Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию пассивной Vi- гемагглютинации. Vi-антитела после полного выздоровления быстро исчезают, но при наличии брюшнотифозного носительства они присутствуют постоянно. Выявление Vi- антител в титре1:40 и выше имеет диагностическое значение, такие лица подлежат многократному бактериологическому обследованию.