Госты для исследования гельминтов свиней

Изобретение относится к области ветеринарии. Для исследования берут 1 г фекалий свиней и размешивают в 13 мл комбинированной флотационной жидкости. Флотационная жидкость состоит из насыщенного раствора NaCl (420 г на 1 л) и сахара (1670 г на 1 л), взятых в соотношении 6:1. Затем взвесь фильтруют и центрифугируют в течение 2 минут при 1500 об/мин, после чего микроскопируют поверхностную пленку. Способ позволяет быстро поставить диагноз, одновременно выявить яйца гельминтов при ассоциативных инвазиях, обладает высокой диагностической эффективностью, дает возможность экономить компоненты флотационной жидкости. 1 табл.

Данное изобретение относится к области ветеринарии и связано с разработкой копрологического метода диагностики кишечных гельминтозов свиней.

Кишечные гельминтозы свиней причиняют большой ущерб животноводству, который складывается из снижения продуктивности, ухудшения вкусовых качеств мяса из-за резкого снижения содержания аминокислот, витаминов, макро- и микроэлементов. Большинство половозрелых гельминтов, в том числе и желудочно-кишечного тракта, локализуются в просвете кишечника, а их личиночные стадии - в легких, в глубоких слоях кишечника и других органах. Животные, пораженные кишечными гельминтозами, выделяют во внешнюю среду огромное количество яиц и личинок с яйцами.

Основой специфической профилактики гельминтозов у животных являются профилактические и легочные дегельминтизации, целесообразность проведения которых определяется результатами гельминтокопроскопических исследований.

Для диагностики кишечных гельминтозов свиней применяются различные методы.

1. Метод Фюллеборна. При этом методе пробу фекалий весом 3-5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50-100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или марлю в один слой в сухой чистый стакан. Взвесь отстаивают 40-60 мин, затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микроскопирования [1].

Недостатком метода является то, что флотация яиц происходит длительно (40-60 минут) и метод является недостаточно эффективным.

2. Метод Котельникова-Хренова. Техника проведения этого метода аналогична методу Фюллеборна, но в качестве флотационной жидкости применяется нитрат аммония (техническая гранулированная аммиачная селитра), используемый как удобрение [2].

Недостатком этого метода является то, что из-за сверхнасыщенности флотационного раствора из аммиачной селитры происходит быстрое высыхание и кристаллизация капель на предметном стекле, что затрудняет просмотр материала и в конечном итоге отрицательно влияет на эффективность исследований.

3. Метод Маллори [3] также по технике схож с методом Фюллеборна, но в качестве флотационного раствора используется насыщенный раствор сахара.

Недостатком этого метода является то, что раствор сахара является густым, при этом происходит неполное всплывание яиц гельминтов. Также следует отметить, что просмотр капли на предметном стекле при микроскопировании затруднен, что также связано с густотой флотационного раствора, состоящего из сахара.

Два этих недостатка значительно снижают ценность и эффективность данного метода.

4. Метод Котельникова-Вереничева с хлоридом цинка [4] заключается в следующем: пробу фекалий величиной с грецкий орех помещают в 40-60 мл воды и тщательно размешивают до появления равномерной взвеси. При постоянном помешивании взвесь процеживают через металлическое сито или марлю в чистый стакан. После 5 минут отстаивания надосадочную жидкость сливают. На дне оставляют такое количество взвеси, которое бы вместилось в центрифужную пробирку и центрифугируют 1-2 минуты при 3000 об/мин, после чего всю жидкость до осадка сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор хлорида цинка. Осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют 1-2 минуты при 1500 об/мин. После этого металлической петлей снимают поверхностную пленку, переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

Недостатком этого метода является то, что после центрифугирования из-за большого удельного веса флотационной жидкости (1,82) вместе с яйцами гельминтов поднимаются на поверхность и непереваренные частицы корма, что затрудняет просмотр материала и в конечном итоге снижает диагностическую эффективность.

Также следует особо подчеркнуть, что используемый в качестве флотационной жидкости насыщенный раствор хлорида цинка является токсичным химическим соединением.

Задача изобретения - разработка способа диагностики гельминтозов свиней в целях определения истинной гельминтологической ситуации для проведения соответствующих лечебно-профилактических мероприятий в исследуемых группах.

Способ диагностики гельминтозов свиней проводится по следующей схеме. Вначале готовят комбинированную флотационную смесь из двух ингредиентов 1. В 1 л кипящей воды растворяют 420 г натрия хлорида (ρ=1,19). 2. В 1 л кипящей воды растворяют 1670 г сахара. Плотность раствора - 1,28. Для получения комбинированной флотационной жидкости эти растворы смешивают в соотношении 6:1.

Плотность комбинированной флотационной жидкости должна составлять 1,23.

С каждой пробы пинцетом берут фекалии массой 1 г, кладут в цилиндрический стакан (объемом 50 мл), с помощью дозатора заливают 5 мл флотационной жидкости и тщательно размешивают палочкой до получения гомогенной взвеси. При постоянном помешивании добавляют остальную часть раствора, доводя объем до 13 мл. Полученную суспензию фильтруют через сито в другой стаканчик. Содержимое переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 2 мин. После прикосновения петли к поверхностной пленке взвеси снимают три капли на предметное стекло для микроскопирования.

Пример. Сравнительное изучение диагностической эффективности флотационного метода Фюллеборна и нового способа диагностики гельминтозов у свиней проводилось в 2006-2008 годах на 8 группах свиней разного возраста и пола в количестве 541 голов.

Полученные результаты приведены в таблице.

Новым способом диагностики гельминтозов у этих же исследованных 68 животных выделены в 34 пробах (50,0%) яйца аскарисов, в 51 пробах (75%) яйца эзофагостом и в 13 пробах (19,1%) яйца трихоцефал. Следовательно, с помощью нового метода выявлено яйца аскарисов больше на 26,5%, эзофагостом на 33,8% и трихоцефал на 11,7%.

Кроме того, эти исследования также показали, что кишечные гельминтозы свиней в данном хозяйстве представлены 3 видами гельминтов: аскарисами, эзофагостомами и трихоцефалами.

В этом же районе в КП им. Тукая исследовали пробы фекалий от 110 свиней на откорме, которые ранее также не были обработаны против гельминтов. Исследования показали, что в кишечнике у животных данной группы паразитируют аскарисы и эзофагостомы, а диагностическая эффективность нового метода выше, чем известного. Например, методом Фюллеборна из 110 проб выявлено яиц аскарисов в 8 случаях (7,3%), эзофагостом в 25 случаях (22,7%). Новым методом выявлено зараженных аскарисами больше на 10,9%, а эзофагостомами на 28,2%.

3-х возрастных групп (поросята отъемыши, свиноматки и свиньи на откорме), которые ранее не подвергались дегельминтизации. Путем гельминтоовоскопии 98 проб фекалий у свиней на откорме было установлено наличие в их кишечнике гельминтов 3-х видов (см. табл.). В этой группе новым способом диагностики гельминтозов выявлено больше, чем существующим методом, аскарисов на 26,2%, эзофагостом - 41,6% и трихоцефал - 17,8%.

Таким образом, исследования, проведенные с пробами фекалий, взятыми от 541 свиней 8 половозрастных групп из 5 хозяйств различных районов РТ, показали, что методом Фюллеборна яиц аскарисов выявлено у 13,9%, эзофагостом у 34,0%, трихоцефал у 5,7% животных. Новым способом диагностики гельминтозов дополнительно установлено наличие аскарисов у 17%, эзофагостом у 29% и трихоцефал у 10,8% животных. Эти данные говорят о более высокой диагностической эффективности нового метода.

В литературе данный способ не описан, поэтому он является новым, соответствует критерию изобретательского уровня и промышленной применимости.

2. Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г., Корнишина М.Д. Гельминто-копроскопические исследования животных. Казань, 2002, 24 с.

Способ диагностики гельминтозов свиней, заключающийся в том, что берут 1 г фекалий, размешивают в 13 мл комбинированной флотационной жидкости, состоящей из насыщенного раствора NaCl (420 г на 1 л) и сахара (1670 г на 1 л), взятых в соотношении 6:1 соответственно, фильтруют, отфильтрованную взвесь центрифугируют в течение 2 мин при 1500 об/мин, после чего микроскопируют поверхностную пленку.

Большую опасность для свиноводства представляют паразитарные болезни свиней, приносящие большие убытки хозяйствам. Будучи всеядными, свиньи часто страдают различными паразитарными болезнями, возбудители которых (половозрелые черви или их личинки) попадают в желудочно-кишечный тракт, а оттуда - в места постоянной локализации: трихинеллы и цистицерки - в мышцы, аскариды - в кишечник, метастронгилюсы - в бронхи и трахею и т. д. Некоторые паразиты живут на коже или в ее толще и причиняют животным огромный вред - чаще всего клещи или вши.

Аскаридоз - чаще хроническое заболевание поросят и подсвинков, проявляющееся прогрессивным истощением, изменчивостью аппетита, поносом, иногда нервными припадками, кожной сыпью.

Возбудитель - нематода Ascaris suum.

Цикл развития. В яйцах, выделяемых свиньями во внешнюю среду с фекалиями, при +20-32 °С и наличии влаги через 15-30 дней формируются личинки. В кишечнике свиньи личинки вылупляются, проникают в ее кровеносные сосуды и затем током крови заносятся в печень и легкие. Личинки разрывают кровеносные капилляры и проникают в альвеолы, бронхиолы и мелкие бронхи и остаются там до 7 дней, затем отхаркиваются с мокротой, попадают в ротовую полость, а при проглатывании - в кишечник, где медленно растут и через 1 месяц превращаются в половозрелых самцов и самок. В кишечнике свиньи они живут не более 1 года. Яйца аскарид сохраняют жизнеспособность во влажной почве более года и могут перезимовывать под снегом.

Эпизоотологические данные. Болезнь распространена в местностях с повышенной влажностью (центральные и южные районы страны). Животные заражаются чаще на выгульных двориках и реже - в свинарниках, содержащихся в антисанитарном состоянии. Легче инвазируются и тяжелее переболевают поросята в возрасте 2-6 месяцев. Аскаридоз наблюдают в любое время года, но наибольший процент больных поросят - в конце лета и осенью. Переболевшие поросята становятся относительно устойчивыми к заражению.

Источником возбудителя болезни являются зараженные аскаридами свиньи.

Факторами передачи возбудителя являются корма, вода и вымя свиноматок, загрязненные инвазионными яйцами аскарид, иногда дождевые черви (резервуарные хозяева), содержащие в своем теле личинок аскарид и поедаемые свиньями.

Течение и симптомы. В начале болезни у поросят развивается бронхит и бронхопневмония. Отмечается кашель, учащенное дыхание, плохой аппетит, иногда - повышение температуры тела. Болезнь длится до 2-х недель, и обычно свиньи выздоравливают. Через 1,5 месяца (с развитием аскарид до половозрелой стадии) у поросят развиваются симптомы гастроэнтерита, понос, запор, рвота, изменчивость аппетита, истощение, задержка роста и развития, аллергия, приступы эпилепсии. У взрослых свиней аскаридоз протекает бессимптомно. Свиньи старше 1 года не болеют аскаридозом, но часто остаются гельминтоносителями.

Диагноз ставят по клиническим признакам, уточняют его путем диагностических вскрытий поросят и выборочного исследования фекалий методом Фюллеборна или Щербовича.

Профилактика. В небольших свиноводческих хозяйствах свиней рекомендуется содержать в сухих помещениях с твердыми исправными полами. Выгульные дворики устраивают с твердыми покрытиями. Свинарники и выгульные дворики систематически очищают от навоза. Летние лагеря делают переносными и размещают на сухих местах. Животных (особенно молодняк и подсосных маток) обеспе-чивают достаточным количеством витаминов и минеральной подкормкой. Подсосных маток выпускают на прогулку только на площадки с твердыми покрытиями. Если нельзя предусмотреть эти условия, назначают химиопрофилактику Новомеком в лечебной дозе подсосным поросятам: 1-й раз в возрасте 35-40 дней, 2-й раз - через 2 недели и 3-й раз - в 3-х месячном возрасте.

При поступлении в специализированные откормочные хозяйства молодняк дегельминти- зируют в период карантина. При массовом распространении аскаридоза дегельминтизируют все свинопоголовье. Через 10-15 дней после этого выборочно обследуют копрологически и при обнаружении инвазированных животных им дополнительно назначают Новомек.

Метастронгилез - сезонное (летнеосеннее) заболевание, преимущественно, молодняка свиней, проявляющееся кашлем, затрудненным дыханием.

Возбудитель заболевания - нематода Metast-rongylus clongatus, М. pudendotectus, М. salmi, локализующаяся в бронхах, в основном, в диафрагмальных долях.

Цикл развития. Метастронгилюсы развиваются с участием промежуточных хозяев - разных видов дождевых червей. Самки выделяют в просвет бронхов яйца со сформировавшимися личинками. При откашливании со слизью яйца проглатываются животными, а затем вместе с фекалиями выделяются во внешнюю среду, где их и заглатывают дождевые черви. В организме червей яйца превращаются в личинки, дважды линяют и становятся инвазионными. При поедании дождевых червей свиньями, личинки метастронгилюсов освобождаются и внедряются в стенку слепой и ободочной кишок, проникают в мезентериальные лимфатические узлы, остаются в них на 3- 5 дней, дважды линяют, затем по лимфатическим сосудам и малому кругу кровообращения заносятся в легкие. В легких они разрывают капилляры и стенки альвеол, попадают в просвет бронхов и через 3-5 недель превращаются в половозрелых самцов и самок. Метастронгилюсы живут в организме свиней от 3-5 месяцев до 1 года. В свинарниках и высушенных фекалиях яйца сохраняются 7-9 месяцев, а во влажных фекалиях и навозе - до 18-20 месяцев. На затененных местах пастбища и выгульных двориков яйца сохраняются до 26-36 месяцев (в условиях северной и центральной зон страны), а на открытых участках - 22-26 месяцев. В теле дождевых червей инвазионные личинки сохраняют жизнеспособность в течение всей жизни червей, то есть до 5-7 лет.

Эпизоотологические данные. Болезнь распространена повсеместно. Но чаще встречается в местностях с более увлажненными почвами в конце лета и осенью. Чаще болеют поросята в возрасте 2-9 месяцев. У взрослых свиней (старше 1 года) болезнь протекает почти бессимптомно. Животные заражаются на территории свиноферм, выгульных двориков и в свинарниках с земляными или деревянными полами. Источник возбудителя заболевания - больные свиньи и гельминтоносители, выделяющие с фекалиями во внешнюю среду яйца метастронгилюсов. Факторы передачи возбудителя - дождевые черви, инвазированные личинками метастронгилюсов.

Течение и симптомы. При высокой степени инвазии у поросят после отъема заболевание может протекать в подострой форме и через 4- 6 недель закончиться летальным исходом. Но чаще оно протекает хронически. Симптомы заболевания появляются через 7-10 дней или позднее - после интенсивного заражения. Поросята становятся угнетенными, дыхание учащенное, появляется кашель. Вначале он слабый и редкий, а затем становится более сильным, частым. Дыхание становится напряженным, менее глубоким, более частым (60-80 движений в минуту) и брюшным затрудненным растянутым выдохом (характерно для метастрон- гилеза). При аускультации прослушиваются влажные хрипы. В дальнейшем животные ела- беют, худеют, отстают в росте, плохо поедают корм или полностью от него отказываются, но охотно пьют воду. Температура тела, в основном, нормальная. Смерть наступает при картине резкого угнетения и явлениях асфиксии. При выздоровлении симптомы постепенно исчезают, появляется аппетит, но поросята длительное время отстают в росте. При низкой степени инвазии признаки болезни стертые или не выявляются (у взрослых свиней). После пере- болевания животные становятся устойчивыми к повторному заражению.
Диагноз при жизни ставят на основании клинических и эпизоотологических данных, а также обнаружением яиц метастронгилюсов в фекалиях свиней методом Щербовича. После смерти - на основании патологоанатомического вскрытия.

Профилактика. Тщательная ежедневная уборка навоза из свинарников и вывоз его в навозохранилище. В свинарниках и на выгульных двориках должны быть цементные полы или деревянные, но настланные на цементное основание, чтобы дождевые черви не могли проникать в станки для свиней. Территорию свинарника постоянно содержат в чистоте и в сухом состоянии. Поступающий в хозяйство молодняк для племенных целей или откорма в период карантина исследуют на метастронгилез. В случае обнаружения инвазии, их лечат и только после этого допускают в общее помещение. При установлении в хозяйстве случаев метастронгилеза и падежа от него, молодняку 3-9 месячного возраста назначают Новомек. Осенью животных дегельминтизируют с профилактической целью.

Стронгилоидоз - весенне-летнее заболевание поросят раннего возраста, проявляющееся поносом, кашлем, покраснением кожи в области живота, конечностей, отставанием в росте и развитии, катаральным воспалением тонкого кишечника.

Возбудитель - партеногенетические самки нематод вида Strongyloides ransomi, локализующийся в слизистой оболочке тонкого кишечника.

Цикл развития. С фекалиями поросят яйца гельминта попадают во внешнюю среду, где через 3-13 часов вылупляются рабдитовидные (с двумя расширениями на пищеводе) личинки, которые развиваются двумя путями: прямым и непрямым. При развитии прямым путем личинки дважды линяют и через 24-36 часов 3-6 дней - превращаются в инвазионных личинок. При непрямом пути развития личинки через 24-40 часов превращаются в свободно- живущих самцов и самок. Самки откладывают яйца, и через 4-16 часов из них выходят рабдитовидные личинки. Через 1-2 дня эти личинки становятся филяревидными и быстро мигрируют из фекалий на окружающие (влажные и теплые) предметы. В организм поросят инвазионные личинки проникают через неповрежденную кожу или заглатываются с загрязненным кормом и с сосков свиноматок. При проникновении через кожу личинки внедряются в венозные и лимфатические сосуды и током крови в подкожной клетчатки и током крови заносятся в легкие. При проглатывании с кормом они попадают в лимфатические и кровеносные сосуды стенки желудка и кишечника и с током крови попадают в легкие. Затем со слизью попадают в глотку, проглатываются и в тонком кишечнике поросят через 5-Ю дней превращаются в парте- ногенетических самок, способных откладывать яйца без оплодотворения их. Самки паразитируют в организме свиньи не более 5-9 месяцев.

Инвазионные личинки при наличии влаги сохраняют жизнеспособность на поверхности навоза и на полу свинарников 30-60 дней, но большинство их погибает через 3-4 недели. Яйца, личинки, свободноживущие самки и самцы в высыхающих фекалиях погибают через 1,5 часа - 2-3 дня (в зависимости от температуры). Дезинфицирующие вещества (3%-й раствор карболовой кислоты и лизола, 5%-й раствор едкого натра и эмульсии креолина) убивают яйца и личинок стронгилоидеса.

Эпизоотологические данные. Распространение стронгилоидоза изучено недостаточно. Встречается в хозяйствах центральных областей РФ и на Дальнем Востоке. Болеют поросята 2-5-месячного возраста. Источник возбудителя заболевания - больные животные. Факторы передачи возбудителя - активное вселение личинок в кожу, вымя свиноматок и корм, загрязненный инвазионными личинками.

Течение и симптомы. У поросят болезнь протекает остро и хронически. При высокой степени инвазии у поросят появляются клинические признаки: вялость, пониженный аппетит, понос, рвота, кашель. Они отстают в росте, худеют. Иногда появляется гиперимия кожи или экзематозный дерматит (на конечностях и животе), сопровождающийся зудом и беспокойством. Учащается дыхание, слизистые оболочки бледные, при тяжелом течении - цианотичные. Острый стронгилоидоз длится 2-3 недели и может заканчиваться летально у поросят 4-6-не- дельного возраста. При хроническом течении указанные симптомы выражены слабо. В естественных условиях наблюдается стойкий возрастной иммунитет. Свиньи старше года не за-ражаются и не болеют стронгилоидозом.

Диагноз ставят с учетом клинических, эпи- зоотологических данных и результатов исследования фекалий методом Фюллеборна.

Профилактика. Поросят с матками и после отъема содержат в чистых сухих помещениях на ежедневно сменяемой подстилке. При установлении стронгилоидоза молодняк свиней (до 4- 6-месячного возраста) дегельминтизируют Новомеком, помещения тщательно механически очищают с последующей дезинвазией кормушек, полов, нижней части стен, перегородок свинарника и предметов ухода горячими (70-80°С) 3-5%-ными водными растворами едкого натра. В неблагополучных по стронгилоидозу хозяйствах свинарники перед переводом в них маток для опороса механически очищают и де- зинвазируют.

Трихоцефалёз - заболевание, протекающее бессимптомно у взрослых свиней, а у молодняка после отъема проявляется поносом, истощением, задержкой роста, катаральным воспалением толстого отдела кишечника и наличием в нем возбудителей.

Возбудитель - нематода Trichocephalus suis, локализующийся в толстом отделе кишечника.

Цикл развития. Зараженные свиньи с фекалиями выделяют яйца трихоцефалюсов во внешнюю среду. При наличии влажности, кислорода и высокой температуре через 3-5 недель в них сформировываются личинки и яйца становятся инвазионными. В кишечнике свиньи личинки вылупляются и внедряются головным концом в слизистую оболочку ободочной и слепой кишок и через 1,5-2 месяца превращаются в половозрелых самцов и самок.

В кишечнике свиней они паразитируют не более 6-8 месяцев.

Яйца трихоцефалюсов длительно сохраняются во внешней среде. В южных зонах они могут перезимовывать. Высушивание губительно действует на них. На открытых участках пастбища при высыхании фекалий яйца погибают через 1-2 недели.

Эпизоотологические данные. Болезнь распространена повсеместно, проявляется чаще в конце лета и осенью в дождливые годы, а также в хозяйствах с плохими условиями содержания и кормления животных. Источник возбудителя заболевания - свиньи, выделяющие с фекалиями яйца трихоцефалюсов. Факторы передачи возбудителя - корм, вода и вымя свиноматок, загрязненные инвазионными яйцами.

Течение и симптомы. При слабой степени инвазии (десятки паразитов) выраженные признаки болезни отсутствуют. При сильной степени инвазии (сотни и тысячи гельминтов) отмечается угнетенное состояние и пониженный аппетит. Перистальтика кишечника усилена, появляется понос, упитанность снижается, по-росята отстают в росте. Видимые слизистые оболочки бледные, температура тела нормальная или слегка повышенная. Иногда наблюдаются эпилептические припадки с признаками астмы (удушья). Переболевшие поросята и взрослые свиньи остаются гельминтоносителя- ми. После переболевания свиньи приобретают иммунитет и становятся устойчивыми к повторному заражению. При нормальных условиях содержания животные старше 10-12-месяч- ного возраста трихоцефалезом не болеют.
Диагноз в отдельных случаях ставят на основании обнаружения яиц трихоцефалюсов в фекалиях свиней с учетом эпизоотологических данных и симптомов болезни. Фекалии исследуют методами Фюллеборна или Калантарян. При энзоотических вспышках используют метод диагностических вскрытий.

Профилактика такая же, как и при аскаридозе свиней.

Эзофагостомоз - осеннее, иногда энзоотическое заболевание молодняка свиней, проявляющееся истощением, анемией, профузным поносом, геморрагическим воспалением, наличием мелких язвочек и узелков на слизистой оболочке слепой и ободочной кишок, содержащих возбудителей.

Возбудителем болезни являются нематоды вида Oesophagostomum dentatum и реже О. longicaudatum, локализующиеся в слепой и ободочных кишках.

Цикл развития. Инвазионные личинки нематод, попав в организм свиней с кормом или водой, внедряются в слизистую оболочку слепой и ободочной кишок, инцистируются, растут и через 3-4 недели выходят в просвет кишечника, где через 1,5-2 месяца достигают половой зрелости и самки начинают выделять яйца.

Эпизоотологические данные. Болезнь распространена повсеместно. Молодняк заражается при заглатывании инвазионных личинок с кормом и водой на пастбищах и выгульных двориках. Максимальная степень инвазии отмечается в конце лета и осенью. Источником возбудителя заболевания являются свиньи, выделяющие во внешнюю среду яйца эзофаго- стом. Факторами передачи возбудителя являются: трава, вода, другие корма, загрязненные инвазионными личинками эзофагостом.

Течение и симптомы. При слабой степени инвазии (десятки и сотни гельминтов) признаки болезни отсутствуют. При сильной инвазии (тысячи паразитов) болезнь проявляется у молодняка плохим аппетитом, периодическим, иногда профузным, поносом, угнетенным состоянием, задержкой роста и снижением упи-танности. Кожа становится неэластичной, бледной, с матовым оттенком, видимые слизистые оболочки анемичны. Болезнь длится 4-6 недель и заканчивается выздоровлением. При тяжелом течении болезни отмечается диарея, прогрессирующее истощение, кахексия, возможен смертельный исход. Диагноз ставят посмертно по обнаружению в толстом кишечнике свиней значительного количества личинок (узелков), половозрелых эзофагостом и соответсвующих патологоанатомических изменений.

Профилактика. Свиней содержат в чистых помещениях с твердым покрытием. Поят колодезной или водопроводной водой, выпасают только на сухих, часто сменяемых пастбищах. При установлении болезни рекомендуется де- гельминтизировать все поголовье хозяйства Новомеком.
Лечение. Для лечения метастронгилеза, аскаридоза, эзофагостомоза, трихоцефалеза, стронгилоидоза свиней рекомендуется применять Новомек 1 % подкожно, однократно в дозе 1мл на 50 кг массы тела; саркоптоза - подкожно, двукратно (с интервалом 8-10 дней) в дозе 1,5 мл на 50 кг массы тела; гематопино- за - подкожно, однократно в дозе 1,0 мл на 50 кг массы тела.

Новомек - противопаразитарный препарат, действующим веществом которого является ивермектин (22,23-дигидроавермектина В:), полученный на основе продуктов ферментации почвенного гриба Streptomyces avermytilis. Это бесцветная или слегка желтоватого цвета прозрачная жидкость со слабым запахом, представляющая собой раствор ивермектина в органических растворителях.

Новомек 1 % может быть отнесен к группе малотоксичных веществ (IV класс опасности по ГОСТ 12.1.007.76). ЛД50 Новомека при оральном введении белым мышам составила 3700 мг/кг. Введение подкожно 0,6 мг/кг ивермектина однократно перед случкой и свиноматкам дважды в течение 30 дней супоросности не оказало влияния на оплодотворяемость и клиническое состояние родившихся поросят (Е. S. Brokken).

Опыты по изучению токсичности Новомека для свиней показали, что испытанные дозы (0,2-1,0 мг/кг, подкожно) животные переносили без неблагоприятных последствий, в т. ч. и дозу 1.0 мг/кг, в 3,5 раза превышающую терапевтическую, равную 0,3 мг/кг.

Текст ГОСТ Р 55457-2013 Лошади. Методы лабораторной диагностики гельминтозов

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

ЛОШАДИ

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН 8 ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 июня 2013 г. № 209-ст

4 ВВЕДЕН 8ПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

Methods for laboratory helminthosis diagnostics

Дата введения - 2014 - 07 - 01

Настоящий стандарт распространяется на лошадей и устанавливает методы лабораторной диагностики гельминтозов.

8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробеэоласность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 54001-2010 Удобрения органические. Методы гельминтологического анализа ГОСТ Р 54627-2011 Животные сельскохозяйственные жвачные. Методы лаборной диагностики гельминтозов

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда, вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаро-взрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.4.011-89 Система стандартов безопасности труда. Средства защиты работающих. Общие требования и классификация

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 244-76 Натрия тиосульфат кристаллический. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 22280-76 Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5>водный. Технические условия

8 настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 54627.

Общие положения методов лабораторной диагностики гельминтозов лошадей - по ГОСТ Р 54627 (раздел 4),

5.1 Сотрудники, выполняющие работу по отбору, доставке и анализу проб, должны иметь рабочую спеиодежду: халаты, фартуки, перчатки, резиновую обувь по ГОСТ 12.4.011. Рабочие халаты подлежат обмену на чистые по истечении каждой рабочей недели. Спеиодежду и обувь хранят в шкафах.

Сотрудники должны быть обеспечены средствами и условиями для личной ж гиены и обязаны соблюдать санитарно-гигиенические требования.

5.2 Требования безопасности при работе с химическими реактивами - по ГОСТ 12.1.007. с электрооборудованием - по ГОСТ Р 12.1.019.

Требования пожарной безопасности - по ГОСТ 12.1.018.

5.3 Помещение, в котором проводят исследования, должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией. Работы необходимо проводить в вытяжном шкафу с применением резиновых перчаток.

6.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы - по ГОСТ Р 54627 (раздел 6) со следующим дополнением.

Устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий (звездочка).

Кислота уксусная по ГОСТ 61. раствор 3 %-ный.

Натрий лимоннокислый по ГОСТ 22280.

Сыворотка крови лошади.

6.2 Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

7 Подготовка к исследованиям

Подготовку к исследованиям проводят по ГОСТ Р 54627 со следующими дополнениями.

7.1 Отбор и подготовка проб фекалий

Точечные пробы отбирают из фекалий лошадей, патологического материала, соскобов объектов внешней среды, промежуточных хозяев гельминтов.

Точечные пробы фекалий от живых лошадей берут из прямой кишки (10 г) или только что выделившегося испражнения.

В сопроводительном документе, направляемом с пробой в лабораторию, также указывают конюшню и число животных в конюшне.

При индивидуальном обследовании жеребцов-производителей. конематок и особо ценных спортивных лошадей номера на упаковке и в описи должны строго соответствовать.

7.2 Отбор и подготовка проб почвы, приготовление растворов по ГОСТ Р 54627.

7.3 Приготовление комбинированного раствора сернокислого магнмя и тиосульфата натрия плотностью 1,3 г/см 3

Раствор 1. 1000 г магния сернокислого 7-водного по ГОСТ 4523 растворяют в 1 дм 3 горячей дисстилированной воде по ГОСТ 6709. Через 24 ч раствор фильтруют в чистую стеклянную посуду.

Срок хранения раствора 1 в стеклянной колбе - не более 30 дней.

Раствор 2. 2000 г натрия тиосульфата натрия по ГОСТ 244 растворяют в 1 дм 3 горячей дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Через 24 ч раствор фильтруют в чистую стеклянную посуду.

Срок хранения раствора 2 в стеклянной колбе - не более 30 дней.

Раствор 3. Три части раствора 1 смешивают с тремя частями раствора 2. затем к шести частям получившейся смеси растворов добавляют одну часть дисстилированной воды. Ареометром проверяют плотность рабочего раствора, которая должна быть 1,3 г/см .

Срок хранения раствора 3 в стеклянной колбе - не более 30 дней.

8 Флотационные методы определения наличия яиц и личинок гельминтов

8.1 Для определения наличия яиц и личинок гельминтов лошадей применяют флотационные методы по ГОСТ Р 54627 (подразделы 8.1-8.4), а также комбинированный флотационный метод Вреза для диагностики нематодозов и цестодозов.

8.2 Комбинированный флотационный метод Бреза для диагностики нематодозов и цестодозов

Анализируюмую пробу массой Зге ступке заливают 10-15 см 3 комбинированного раствора сернокислого магния и тиосульфата натрия по 7. 2.1, растирают пестиком до гомогенного состояния, доливают комбинированным раствором до 45-50 см 3 , размешивают стеклянной палочкой и процеживают через металлическое сито с ячейкой диаметром 0,3-0.5 мм в чистый стакан и отстаивают в течение 10-15 мин.

Затем снимают капли поверхностной взвеси из разных мест легким прикосновением металлической петли диаметром 0.8 см. переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

Для диагностики фасциолеэа и других гельминтозов лошадей применяют оедиментационкый метод последовательного промывания по ГОСТ Р 54627 (подразделы 9.1-9.2).

Для определения гельминтозов лошадей применяют комбинированные (седиментационно-флотационные) методы Дарлинга. Щербовича и Вишняускаса по ГОСТ Р 54627 (раздел 10). а также метод Бреза со следующим уточнением.

Приготовленную в ступке водную суспензию из 3 г фекалий лошадей процеживают через сито в чистую стеклянную центрифужную пробирку вместимостью 10-15 см 3 и центрифугируют с частотой вращения 2000- 3000 об/мин в течение 2-3 мин. После этого надосадочную жидкость осторожно

сливают, а к осадку добавляют 10 см 3 одного из флотационных растворов: натрия хлористого (метод Дарлинга), магния сульфата (метод Щербовича), комбинированного раствора магния сульфата и тиосульфата натрия ( метод Бреза). хорошо размешивают и снова центрифугируют в том же режиме. После чего металлической петлей снимают по три капли поверхностной взвеси из каждой пробирки, переносят на предметное стекло и препарат исследуют под микроскопом.

Для диагностики диктиокаулеэа лошадей применяют гельминтолярвоскопические методы Бермана-Орлова и Шильникова (упрощенный метод Бермана) по ГОСТ Р 54627 (раздел 11) со следующим уточнением.

Для исследования по методу Бермана-Орлова берут 10 г анализируемой пробы фекалий лошадей (ослов, пони).

Определение количества яиц нематод, цестод и трематод в фекалиях лошадей - по ГОСТ Р 54627 (раздел 12).

Определение жизнеспособности яиц и личинок гельминтов проводят по ГОСТ Р 54001 (раздел 8) по морфологии, окрашиванию, культивированию и осуществляют биопробу.

Исследования павших животных на наличие гельминтов - по ГОСТ Р 54627 (раздел 14).

Исследование соскобов из объектов внешней среды на наличие яиц гельминтов - по ГОСТ Р 54627 (раздел 15).

Проведение исследований методом установления интенсивности инвазии - по ГОСТ Р 54627 (раздел 16).

Исследования почвы на наличие яиц гельминтов проводят по ГОСТ Р 54627 (раздел 17).

18.1 Методы определения наличия личинок гельминтов в крови

18.1.1 Сущность методов

Методы исследования крови основаны на обнаружении личинок гельминтов, локализующихся в различных органах и тканях лошадей, но выделяющих своих зародышей в кровь. Эти методы используют на практике для диагностики филяриатоэов - сетариоза лошадей (ослов, мулов) и парафиляриоэа лошадей. Для этих целей используют венозную и периферическую кровь.

18.1.2 Методы исследования венозной крови с лимоннокислым натрием

18.1.2.1 Венозную кровь берут в соотношении 1:5. 1:7 или 1:10 с 3.8 %-ным раствором лимоннокислого натрия по ГОСТ 22280. центрифугируют, осадок микроскопируют.

18.1.2.2 Берут 20 см 3 венозной крови, цитрируют (на 10 см 3 крови добавляют 1 см 3 3.8%-ного раствора лимоннокислого натрия), отстаивают в течение 20-25 мин. В результате образуется три слоя: нижний - эритроциты, средний (узкое беловатое кольцо) - лейкоциты, верхний - сыворотка. Химической пипеткой диаметром 1.0-1.5 мм берут содержимое среднего слоя, где концентрируются личинки, наносят две - три капли на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют.

В цитрированной венозной крови при комнатной температуре личинки сохраняют жизнеспособность в течение одного - двух дней.

18.1.3 Метод исследования венозной крови с дистиллированной водой

Венозную кровь и дистиллированную воду берут в соотношении 1:5 или 1:10. центрифугируют, осадок микроскопируют. В результате гемолиза образуется менее обильный, чем при других методах исследования, осадок, личинки в воде остаются подвижными и легко обнаруживаются.

18.1.4 Метод Штаубли

3-4 см 3 венозной крови смешивают с 3-5- или 10-кратным количеством 3 %-ного раствора уксусной кислоты для растворения эритроцитов. Смесь центрифугируют, осадок микроскопируют на предметном стекле.

18.1.5 Метод Фюллеборна

Взятую венозную кровь отстаивают, сыворотку сливают в другую пробирку и центрифугируют в течение 10 мин. Осадок берут пипеткой и каплями наносят на предметное стекло для микроскопирования.

При исследовании на сетариоз венозную кровь лучше брать рано утром или ночью, так как концентрация микросетарий в крови в это время выше.

Личинок сетарий часто обнаруживают при исследовании периферической и венозной крови весной и летом, с ноября по февраль их обнаружить трудно.

Высушенный препарат красят гематоксилином, а затем при необходимости докрашивают краской Романовского-Гимза. В случае инвазии обнаруживают яйца и вышедшие личинки филяриат.

18.2 Исследование содержимого желудка

Содержимое желудка исследуют е основном на драшейоз и габронемоз лошадей, ослов и мулов, вызываемые нематодами, драшеей

Животное предварительно сутки выдерживают на голодной диете, затем вводят носопищеводный зонд по обычной методике, принятой в клинической диагностике. Убедившись, что зонд попал в желудок, откачивают шприцем желудочный сок. после этого вынимают зонд. Желудочным соком наполняют центрифужные пробирки, центрифугируют е течение 3-4 мин. осадок наносят на предметные стекла, покрывают покровными и микроскопируют. При заболевании находят яйца драшей и габронем.

18.3 Исследование соскобов с перианальных складок

Гельминтологическое исследование перианальных складок проводят при диагностике оксиуроза лошадей.

Для исследования готовят небольшие деревянные лопаточки с закругленными краями или обыкновенные слички. Смоченной в 50 %-ном растворе глицерина лопаточкой или спичкой делают соскоб с перианальных складок, с внутренней стороны корня хвоста и с кожи в области промежности. Соскоб переносят на предметные стекла в 2-3 капли смеси, состоящей из равных количеств глицерина и воды. Затем накрывают покровным стеклом и микроскопируют на наличие яиц оксиуры.

18.4 Исследование кожи

Исследования кожи проводят при диатостике онхоцеркоза и кожного габронемоза и драшейоза лошадей. При онхоцеркоэе лошадей рекомендуется исследовать кусочки кожи. На месте экстирпации. в области холки, плеча или передней конечности, выбривают шерсть, кожу дезинфицируют. Выбритый участок кожи берут в складку и срезают бритвой или острыми ножницами небольшой кусочек кожи толщиной 3-4 мм и площадью 15-30 мм 2 . Кусочек кожи помещают в пробирку с 2-3 см 3 физиологического раствора или же смеси физиологического раствора с сывороткой крови лошади в равных частях. Пробирку оставляют на несколько часов при комнатной температуре или ставят в термостат при температуре 35 в С-37 *С. После этого кусочки кожи удаляют, а жидкость, в которую выделились личинки онхоцерков. выливают частями на предметное стекло и микроскопируют.

18.5 Исследования травы

Траву исследуют на наличие личинок нематод (стронгилят пищеварительного тракта, диктиокаулюсов и других), а также на наличие адопескариев трематод (фасциол). Личинки нематод способны мигрировать в горизонтальном и вертикальном направлениях, но наибольшее их количество обнаруживается в прикорневой части стебля на расстоянии 3-5 см от корня, поэтому для исследования используют нижнюю часть растений. Собранные из разных участков пастбищ пробы травы объединяют путем перемешивания. Из объединенной пробы берут лабораторную пробу травы массой 1000 г. Ножницами разрезают на части и закладывают в аппарат Бермана (по частям) с теплой водой и оставляют на 2 ч. Пробирки с осадком центрифугируют при 1500- 2000 об/мин в течение 1-2 мин. затем верхний слой сливают, а осадок переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

18.6 Дифференциация личинок паразитических и свободноживущих нематод

8 почве и на траве встречаются свободноживущие нематоды и их личинки. Для отличия личинок свободноживущих нематод от паразитических применяют метод Корта. Суть метода заключается в действии формалина на личинки нематод, при котором личинки свободноживущих нематод погибают быстрее, чем паразитические. Личинки нематод помещают в чашку Петри или на часовое стекло в воду. При добавлении 40 %-ного формалина к жидкости с личинками нематод в соотношении 1:5. личинки свободноживущих нематод гибнут через 5-7 мин. паразитические остаются живыми в течение 15-20 мин. но подвижность их замедляется.

19.1 Исследования промежуточных хозяев нематод, цестод и трематод на зараженность - по ГОСТ Р 54627 (раздел 18) со следующим дополнением.

Личинки парафилярий лошадей развиваются в полости тела мухи семейства Muscidae. в жировом теле. Инвазионные личинки парафилярий находятся в головке, грудке и хоботке мухи-жигалки.

19.2 Особенности исследования комаров Culicidae

Собранных с животных комаров вскрывают иглами в капле физиологического раствора под стереоскопическим микроскопом. Личинки сетарий лошадей развиваются в грудке, а инвазионные находятся в хоботке комара.

19.3 Особенности исследования панцеркых клещей Oribatei

Собранных из почвы несколько увлажненных участков пастбищ и лугов клещей исследуют в капле воды под стереоскопическим микроскопом, вскрывая их иглами. Цистициркоиды аноплоцефалят лошадей локализуются в полости тела клеща, они имеют шаровидную форму, в цисте находится сколекс с присосками и шейка.

Пример записи в журнале результатов гельминтологических исследований

А.1 Пример записи в журнале результатов гельминтологических исследований проб фекалий от лошадей, соскобое из объектов внешней среды, почвы, травы, промежуточных хозяев гельминтов, а также пробы крови, содержимого желудка, соскобов с перианальных складок и биопсия кожи приведен в таблице А.1.