Иммунологические методы лабораторной диагностики гельминтозов
В статье изложены методы диагностики гельминтных инвазий: микроскопические, иммуноферментный анализ, серологические, полимеразной цепной реакции, биорезонансная диагностика, гемосканирование, а также инструментальные (ультразвуковое и рентгенологическое исследование, компьютерная томография) и лабораторные, имеющие косвенное значение (клинический анализ крови, анализ крови на печеночные пробы, анализ кала на дисбактериоз). Описаны достоинства методов, их недостатки, достоверность полученных данных. Предложены анкеты-опросники для пациентов для выявления риска инфицирования гельминтами. Описаны достоинства методов, их недостатки, достоверность полученных данных. Предложены анкеты-опросники для пациентов для выявления риска инфицирования гельминтами.
По данным Всемирной организации здравоохранения, основными паразитарными инфекциями на Земле инфицировано почти 4,5 млн человек. Но это только диагностированные случаи, реальная заболеваемость намного выше. Гельминтозы на сегодняшний день остаются наиболее распространенными паразитарными болезнями человека и имеют большое значение, особенно у детей [2, 3, 8, 10].
Чаще гельминтозы встречаются в детском возрасте. Этому способствуют: широкая распространенность репродуктивного материала паразитов (цисты, яйца, личинки) в окружающей среде и недостаточное развитие у детей гигиенических навыков; наличие периодов транзиторного ослабления иммунитета после перенесенных острых респираторных заболеваний; пребывание в оздоровительных лагерях, туристические поездки и др. [3]. Пики выявленных гельминтозов у детей отмечаются в следующие возрастные периоды — 2–3 года, 4–7 лет, 10–14 лет. Среди всех гельминтных инвазий преобладают аскаридоз, энтеробиоз, лямблиоз, трихинеллез, реже — описторхоз, трихоцефалез, стронгилоидоз, тениаринхоз, тениоз, гименолепидоз, дифиллоботриоз, токсокароз. В последнее время среди гельминтозов большое место занимают так называемые микст-инвазии, диагностика которых особенно трудна [1, 2].
Гельминты оказывают отрицательное воздействие на организм человека. Они приводят к аллергизации, развитию полигиповитаминоза, макро- и микроэлементозов, нарушению кроветворения и проницаемости сосудов, гормональному дисбалансу. Гельминтозы способствуют формированию хронических заболеваний (холецистит, желчнокаменная болезнь, панкреатит, колит, сахарный диабет, бронхиальная астма, атопический дерматит), психоэмоциональных нарушений (хроническая усталость, раздражительность, тревожность, гиперактивность у детей), анемии и др. При длительной гельминтной инвазии может развиваться вторичный иммунодефицит [3, 4, 8].
Настороженность врачей в отношении гельминтозов у населения в настоящее время недостаточная, а профилактика сводится к лечению выявленных инвазированных пациентов.
Непосредственное выявление паразита не всегда возможно ввиду его тканевой локализации (трихинеллез, эхинококкоз, токсокароз).
Иммунологическое исследование крови позволяет определить наличие антигенов и антител к гельминтам, достоверность зависит от количества и жизненного цикла гельминтов в организме. Иммуноферментный анализ обладает высокой чувствительностью и специфичностью, которая составляет 90 %, дает возможность определения вида гельминтов, их количества, прослеживания динамики развития процесса, на который указывает уровень антител. Недостаток метода — можно обнаружить ограниченный круг паразитов — лямблии, описторхи, трихинеллы, аскариды, токсокары, токсоплазмы. Достоверность метода — 60–80 %, меньше — у лиц с иммунодефицитами [3, 8, 11].
При серологическом исследовании определяют наличие антител к гельминтам (достоверность — около 60 %): при подозрении на эхинококкоз, цистицеркоз, трихинеллез, токсокароз широко используют реакции непрямой гемагглютинации, агглютинации латекса, связывания комплемента, иммунофлюоресценции [8, 11].
Не во всех случаях методы определения специфических антител обладают достаточной специфичностью и достоверностью. Антигенный состав гельминта зависит не только от вида, но и от стадии; проходя сложный цикл развития от яйца до взрослой особи, гельминты меняют антигенный состав. Кроме того, в иммунодиагностических реакциях используются соматические антитела, а в организме хозяина антитела вырабатываются в основном на экскреты и секреты гельминта. Неспецифическая сенсибилизация организма, общность некоторых антигенов трематод, простейших и человека создают высокий удельный вес ложноположительных реакций в титрах ниже достоверно диагностических [8, 10].
Метод определения гельминтов с помощью полимеразной цепной реакции является высокоспецифичным и высокочувствительным, но из-за дороговизны и сложности не может быть скрининговым, когда, например, нужно обследовать группу детей из детского учреждения [7].
Иммунная система не всегда реагирует (распознает и уничтожает) на наличие гельминтов в организме. Это объясняется тем, что некоторые гельминты имеют прочную и химически устойчивую капсулу или покрыты веществом, которое не распознается иммунной системой; локализуются в тканях, наиболее защищенных от воспалительных реакций, например в спинном мозге; многие виды из них в пищеварительном тракте выделяют антиэнзимы, что спасает их от гибели; имеют большую продолжительность жизни (годами, а иногда до смерти самого человека); питаются за счет гликолиза чистых углеводов; имеют такие приспособления, как присоски, крючки и др., что способствует фиксации внутри организма; у многих видов существует половое размножение, при котором происходит обмен генной информацией, что приводит к усилению гетерогенной популяции, уменьшению уязвимости; обладают высоким уровнем плодовитости.
При ультразвуковом, рентгенологическом исследовании органов брюшной полости, компьютерной томографии можно выявить косвенные признаки гельминтозов: гепатоспленомегалию, неравномерность паренхимы печени и селезенки за счет мелких гиперэхогенных сигналов, увеличенные лимфатические узлы в воротах селезенки и сами гельминты (эхинококки, клубки кишечных гельминтов и т.д.).
Биорезонансная диагностика — современная энергоинформационная методика обследования, основанная на регистрации специальными датчиками электромагнитных колебаний с уникальным специфическим частотным спектром, которые способен испускать каждый гельминт. Биорезонансная диагностика позволяет обнаружить наличие паразитов на разных стадиях развития, указать их локализацию, определить степень повреждения органов. Характеризует состояние организма и улавливает предболезненные состояния, которые можно корректировать и не допустить болезни. Данный метод считается самым надежным, достоверность составляет 75–95 % [5, 9].
Гемосканирование — качественное исследование крови с помощью мощного темнопольного микроскопа, можно увидеть состояние клеток крови (форму, размер, активность, цвет и т.д.), наличие неспецифических элементов и веществ — все это напрямую или опосредованно говорит о наличии в организме гельминтов. Изображение выводится на экран монитора с помощью встроенной видеокамеры в микроскопе. Этот метод диагностики обладает высокой достоверностью [8].
Косвенными лабораторными признаками гельминтозов могут быть анемия, базофилия, эозинофилия, увеличение уровня аспартатаминотрансферазы. Так, при токсокарозе выявляется лейкемоидная реакция эозинофилов (более 20 %) на фоне стойкого аллергического синдрома (атопический дерматит с выраженным зудом и резистентностью к традиционной терапии, тяжелая бронхиальная астма). Угнетение нормальной кишечной палочки в анализе кала на дисбактериоз также может говорить о возможном гельминтозе.
С учетом распространенности гельминтозов мы предлагаем анкету для определения риска инфицирования гельминтами.
- Купаетесь в пресноводных водоемах.
- Не моете руки перед едой с мылом в горячей воде.
- Употребляете воду из непроверенных источников.
- Употребляете в пищу домашнее сало с прожилками мяса.
- Употребляете в пищу малосольную рыбу.
- Употребляете в пищу слабопрожаренное мясо (с кровью).
- Употребляете в пищу малосольную икру незаводского приготовления.
- Не моете куриные яйца с мылом.
- Не моете бананы, апельсины, мандарины перед употреблением.
- Удобряете огород навозом.
- Употребляете овощи прямо с грядки.
- Употребляете фрукты и ягоды прямо с грядки.
- Употребляете упавшие фрукты.
- Не обдаете всю зелень кипятком для приготовления салатов.
- Храните морковь в песке, взятом в дворе.
- Ходите босыми ногами по траве.
- У членов семьи были глистные инвазии.
- В семье имеется собака или кошка.
Поскольку клинические проявления гельминтозов не всегда специфичны, а в начальних стадиях — неспецифичны, мы предлагаем анкету для пациентов для самодиагностики гельминтозов.
- Бывает зуд в области ануса по утрам.
- Тошнота по утрам при чистке зубов.
- Шелушение пальцев рук или ног со слущиванием пластов кожи.
- Аллергическая сыпь на коже, кожный зуд.
- Шелушение и отечность в области век.
- Повышенная утомляемость, вялость, сонливость.
- Повышенное чувство голода.
- Чувство дискомфорта в животе.
- Снижение массы тела.
- Наличие нескольких хронических заболеваний органов желудочно-кишечного тракта, суставов, бронхолегочной системы.
- Плохое самочувствие, отсутствие официального диагноза, длительное неэффективное лечение.
- Периодический подъем температуры, сопровождающийся мышечными и суставными болями.
ВЫВОДЫ
1. На современном этапе нет лабораторных методов исследования на гельминтозы, которые обладают 100% надежностью.
2. Наибольшей достоверностью в диагностике гельминтозов обладают полимеразная цепная реакция и биорезонансная диагностика.
3. Для диагностики гельминтозов рекомендуется использовать комплекс лабораторно-инструментальных методов.
Комплексное лабораторное обследование для выявления основных гельминтозов и протозойных инфекций человека, включающее общеклинические и специфические тесты.
Анализы для диагностики гельминтозов и протозойных инфекций.
Синонимы английские
Laboratory diagnosis of protozoal and helminthic infections; CBC, Stool Ova and Parasites test, Cellulose tape test, Protozoal and Helminthic Serology.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь, кал, отпечаток с перианальной области.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
- Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
- Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
- Не принимать пищу в течение 8 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
- Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
- Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 30 минут до исследования.
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
- Сбор биоматериала на исследование проводится только утром (до 10:00), до дефекации. Накануне взятия биоматериала не проводить туалет кожных покровов в области ануса и ягодиц.
Общая информация об исследовании
Гельминтозы и протозойные инфекции наблюдаются повсеместно и особенно распространены среди детей и людей, по роду деятельности контактирующих с домашними и дикими животными. Как правило, инфицирование человека является одним из этапов развития гельминтов или простейших. Многие из паразитов имеют фекально-оральный механизм передачи инфекции и по крайней мере на одном этапе жизненного цикла поражают различные отделы пищеварительного тракта. Несмотря на то что некоторые гельминтозы и паразитозы человека имеют специфические клинические признаки, в целом дифференцировать эти заболевания на основании клинической картины очень сложно. Основную роль в диагностике этих заболеваний играют лабораторные тесты. С учетом того, что у одного и того же человека может наблюдаться сочетание нескольких гельминтозов и паразитозов, рекомендуется выполнение сразу нескольких тестов или, что более удобно для врача и пациента, комплексного анализа на распространенные гельминтозы и паразитозы.
Комплексное лабораторное обследование включает общеклинические и специфические анализы на самые распространенные и важные в клиническом плане гельминтозы и протозойные инфекции. Общеклинические тесты: общий анализ крови, лейкоцитарная формула, анализ кала на яйца гельминтов и анализ кала на цисты простейших.
Общий анализ крови и лейкоцитарная формула используются для того, чтобы определить, является ли гельминтоз или паразитоз инвазивным, и также позволяет выявить возможные осложнения, связанные с инфекцией (анемию). Об инвазивности гельминтозов и паразитозов свидетельствует эозинофилия. Она характерна для амебиаза, эхинококкоза, описторхоза, токсокароза, трихинеллеза и аскаридоза (в фазу миграции личинок). Эозинофилия не характерна для кишечного аскаридоза, энтеробиоза и лямблиоза. Любая длительно текущая инфекция может приводить к развитию анемии (анемии хронического заболевания). Гельминтозы и паразитозы, протекающие с изъязвлением слизистой оболочки пищеварительного тракта (например, амебиаз), приводят к развитию железодефицитной анемии.
Анализ кала на яйца гельминтов и анализ кала на цисты простейших включают макроскопическую оценку кала (цвет, консистенция, наличие крови, избытка слизи, макроскопически определяемых паразитов), микроскопию нативного образца кала (наличие цист простейших – трофозоитов, личинок и взрослых особей гельминтов) и микроскопию окрашенного мазка кала (наличие цист и трофозоитов). Анализ кала на яйца гельминтов позволяет выявить большинство кишечных нематод, цестод и трематод. Анализ кала на цисты простейших позволяет выявить Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Balantidium coli и других простейших. Учитывая, что поступление яиц гельминтов или цист простейших в кал может носить непостоянный характер, однократное исследование кала малоинформативно - рекомендуется исследование трех образцов кала. Следует учитывать, что при некоторых гельминтозах (например, описторхоз) появление яиц в кале начинается только через 2-4 недели после возникновения симптомов заболевания. Отрицательный результат исследований не позволяет полностью исключить наличие гельминтоза или паразитоза.
К специфическим тестам для диагностики гельминтозов и паразитозов относятся серологические тесты и анализ на энтеробоз.
Echinococcus, IgG – определение специфических антител IgG к возбудителю эхинококкоза (Echinococcus granulosus или Echinococcus multilocularis). Чувствительность серологических тестов в отношении E. granulosus при поражении печени (самая частая локализация) составляет около 80 %, при поражении других органов (легкие, головной мозг, кости скелета) – несколько ниже.
Opistorchis, IgG - определение специфических антител IgG к возбудителю описторхоза (Opistorchis felineus или Opistorchis viverrini). Из-за невысокой специфичности серологические тесты являются дополнительным способом диагностики описторхоза (главный тест – анализ кала на яйца гельминта).
Toxocara, IgG, титр - количественное определение специфических антител IgG к возбудителю токсокароза (Тохосаra canis). Серологические тесты обладают достаточно высокой чувствительностью (78 %) и специфичностью (92 %) и могут служить хорошим дополнением или даже альтернативой "золотому стандарту" диагностики данного заболевания - микроскопическому исследованию биопсии ткани, содержащей личинки гельминта (частая локализация – печень и легкие), учитывая, что многие пациенты с токсокарозом - маленькие дети.
Учитывая системный характер таких инфекций, как эхинококкоз, описторхоз и токсокароз, при подозрении на эти заболевания проводят дополнительные обследования, в том числе оценку функции печени.
Trichinella, IgG - определение специфических антител IgG к возбудителю трихинеллеза (Trichinella spiralis и родственные виды). Серологические тесты становятся положительными через 3 недели после инфицирования. Учитывая, что личинки гельминта поражают мышечную ткань, при данном заболевании также могут быть повышены следующие клинико-лабораторные маркеры: креатинкиназа (КК), лактатдегидрогеназа (ЛДГ) и аспартатаминотрансфераза (АСТ).
Ascaris lumbricoides, IgG - определение специфических антител IgG к возбудителю аскаридоза. Аскаридоз – это самый распространенный гельминтоз человека. Серологические тесты являются дополнительным способом диагностики аскаридоза (главный тест – выявление взрослых особей в области рта и ануса, а также анализ кала на яйца гельминта).
Giardia lamblia, антитела - определение специфических антител к возбудителю лямблиоза. Серологические тесты являются дополнительным способом диагностики лямблиоза (главный тест - анализ кала на цисты паразита). Серологический тест становится отрицательным через 1 год после перенесенной инфекции. Также может быть использован тест на антиген G. lamblia в кале.
Энтеробиоз – распространенный гельминтоз, вызываемый Enterobius vermicularis (острица). Яйца остриц не выделяются с калом, поэтому микроскопическое или любые другие исследования кала не применяются. Лабораторная диагностика энтеробиоза осуществляется с помощью специального метода - микроскопического исследования мазков-отпечатков с кожи перианальной области. Микроскопическое исследование позволяет произвести дифференциальную диагностику энтеробиоза с аскаридозом, а также другими неинфекционными заболеваниями, сопровождающимися зудом перианальной области (контактным дерматитом, сахарным диабетом). Учитывая повышенную активность самки в ночные часы, оптимально производить мазок-отпечаток с утра, до совершения утреннего туалета.
Комбинация общеклинических и специфических тестов позволяет достичь наибольшей точности при диагностике гельминтозов и паразитозов. При эффективном лечении изменения, выявленные в общеклинических тестах, нормализуются, а яйца/личинки/взрослые особи гельминтов или цисты простейших перестают определяться, но серологические тесты могут оставаться положительными в течение некоторого времени даже при эффективном лечении.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики кишечных гельминтозов и протозойных инфекций.
Когда назначается исследование?
- При обследовании детей и людей из группы риска заражения гельминтами и простейшими (ветеринары, фермеры, работники, занятые в санитарно-гигиентической сфере);
- при наличии признаков глистной инвазии или протозойной инфекции: хронической диареи, мальабсорбции, тошноты, потери веса, а также признаков реакции гиперчувствительности (крапивницы и других сыпей);
- при оформлении ребенка в детский сад, лагерь, бассейн, при госпитализации.
Что означают результаты?
Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:
В норме яйца, личинки и взрослые особи гельминтов, цисты и вегетативные формы простейших в кале отсутствуют. Их обнаружение свидетельствует о текущей инфекции.
Серологические тесты могут оставаться положительными в течение некоторого времени даже при эффективном лечении.
Что может влиять на результат?
- Время, прошедшее с момента заражения: яйца гельминтов и цисты простейших могут быть обнаружены через 2-4 недели и позже после заражения.
- Характер и скорость образования яиц гельминтов и цист простейших: часто наблюдается прерывистый характер их поступления в кал, что может привести к получению ложноотрицательного результата и обуславливает необходимость исследования трех, а не одного образца кала.
- Для получения точного результата необходимо следовать рекомендациям по подготовке к тесту;
- результат комплексного анализа следует интерпретировать с учетом анамнестических, клинических и инструментальных данных;
- отрицательный результат исследований не позволяет полностью исключить наличие гельминтоза или паразитоза.
Кто назначает исследование?
Врач общей практики, педиатр, инфекционист.
БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
"ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ"
Для обнаружения гельминтов, их фрагментов (проглоттид. с кодексов), личинок или яиц исследуют кал, мочу, мокроту, дуоденальное содержимое, кровь.
Исследование испражнений (копрологическое исследование) является наиболее распространенным, так как большая часть гельминтов паразитирует у человека в кишечнике или органах, связанных с ним протоками, поэтому их яйца или части тела выделяются с испражнениями.
При копрологическом анализе необходимо строго соблюдать правила личной гигиены, обжигать петли и стеклянные палочки, стерилизовать посуду, стекла и инструментарий, содержать в чистоте рабочее место.
Испражнения исследуют макроскопически или микроскопически хотя обнаружения в них паразитических червей или их частей (гельминтоскопия), а главным образом - яиц гельминтов (гельминтоовоскопия).
Макроскопические методы
При осмотре испражнений в них можно обнаружить гельминтов, их сколексы, обрывки стробилы, проглоттиды, выделяющиеся самостоятельно или после дегельминтизации. Этот метод особенно рекомендуется для выявления энтеробиоза, тениоза и тениаринхоза.
Испражнения доставляют в лабораторию в чистой стеклянной посуде или в спичечных коробках. На каждой коробке должна быть этикетка с указанием фамилии, имени, возраста и места жительства обследуемого.
Небольшие порции испражнений перемешивают с водой в плоской ванночке или в чашке Петри. Их просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой.
Пинцетом или пипеткой извлекают все подозрительные образования, переносят на предметное стекло в каплю разведенного глицерина или изотонического раствора хлорида натрия для дальнейшего изучения.
При методе отстаивания всю исследуемую порцию испражнений нужно размешать с водой и дать отстояться в стеклянном цилиндре, затем осторожно слить верхний слой жидкости.
Так повторяют несколько раз. После того, как жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают в стеклянной ванночке или чашке Петри, как было указано выше.
Микроскопия - основной метод исследования испражнений для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Испражнения для анализа должны быть доставлены не позже суток после их выделения. При нарушении этого правила диагноз поставить затруднительно или невозможно в связи с разрушением яиц и личинок. Для повышения достоверности исследования анализы нужно повторять несколько раз ежедневно или с промежутками в 1-3 дня.
Небольшой кусочек испражнений переносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина (для его получения смешивают равное количество дистиллированной воды и глицерина) и растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка.
При небольшом количестве яиц в испражнениях их не всегда удается выявить, поэтому применение только этого метода не является полноценным и достоверным.
Толстый мазок с целлофаном (метод Като).
Принцип метода: яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке испражнений, просветленном глицерином и подкрашенном малахитовой зеленью.
Предварительно гидрофильный целлофан, толщиной 22 мхм, нарезают пластинками с размером сторон 20x40 мм и погружают на сутки в раствор следующего состава: 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола.3-5 мл указанной смеси достаточно для обработки 100 пластинок, которые затем можно хранить в этом же растворе в хорошо закрытом сосуде.
100 мг испражнений наносят на предметное стекло, покрывают обработанной, как описано выше, пластинкой целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы испражнения не растекались из-под целлофана.
Микроскопирование при малом или большом увеличении необходимо проводить не позже, чем через час после приготовления мазка, а в жаркую погоду - через 30-40 минут. Высыхание препарата и длительное просветляющее действие глицерина затрудняют микроскопирование.
Метод Като позволяет исследовать значительный объем испражнений и с большей эффективностью, чем при обычном нативном мазке. Этим методом можно выявить яйца аскариды, власоглава, лентеца, трематод, тениид.
Однако для выявления яиц анкилостомид и карликового цепня, особенно при малой интенсивности инвазии, метод Като недостаточно эффективен.
Метод закручивания по Шульману.2-3 г испражнений размешивают стеклянной палочкой круговыми движениями с трех-пятикратным количеством физиологического раствора, не касаясь стенок сосуда. Яйца и личинки гельминтов скапливаются в центре.
После окончания перемешивания каплю на конце палочки быстро переносят на предметное стекло, закрывают ее покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Этим методом хорошо выявляются личинки гельминтов.
Методы обогащения основаны на разности удельного веса яиц и применяемого солевого раствора, что позволяет обнаруживать небольшое их количество. Если удельный вес яиц больше удельного веса жидкости, то яйца концентрируются в осадке, который исследуют под микроскопом.
Этот метод осаждения (седиментации) применяют для яиц трематод. При большем удельном весе раствора яйца всплывают на поверхность жидкости, и тогда исследуют пленку. Это методы всплывания (флотации). Они наиболее эффективны для обнаружения яиц анкилостомид, власоглава и карликового цепня.
Метод Фюллеборна основан на всплывании яиц гельминтов в насыщенном растворе NaCl с высокой относительной плотностью. Для этого растворяют 400 г NaCl в 1 л воды при кипячении. Относительная плотность раствора 1,18-1,22. Раствор хранят в закрытой бутыли.
Для проведения анализа в банку объемом 30-50 мл помещают 2-3 г испражнений и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенный раствор хлорида натрия. Полоской бумаги быстро удаляют всплывшие крупные частицы.
Через 45-60 мин. отстаивания проволочной петлей снимают поверхностную пленку и переносят ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина. Готовят несколько препаратов. Дополнительно просматривают 2-4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла.
Необходимость исследования осадка обусловлена тем, что яйца трематод и тениид всплывают очень плохо и могут остаться в осадке. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентеца.
К достоинствам этого метода относится его дешевизна и доступность к недостаткам - необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.
Вместо насыщенного раствора поваренной соли используют насыщенный раствор азотнокислого натрия (1 кг селитры заливают; литром дистиллированной воды и кипятят до полного растворения). Удельный вес раствора около 1,4.
Достоинства метода: быстро всплывают и обнаруживаются в поверхностной пленке яйца большинства гельминтов, что исключает необходимость исследования осадка. Не всплывают онкосферы тениид и яйца трематод, что следует учитывать при исследованиях с целью диагностики указанных гельминтозов. Высокая стоимость нитрата натрия ограничивает применение данного метода.
Под действием поверхностно-активных веществ, входящих а состав моющих средств (детергентов), яйца гельминтов освобождаются от испражнений и концентрируются в осадке.
Предварительно готовят 1% раствор стирального порошка "Лотос". Для этого высушивают порошок в сушильном шкафу при 100°С в течение 1-2 часов, затем 10 г порошка растворяют в 1 л водопроводной воды. При отсутствии "Лотоса" можно использовать и другие стиральные порошки, но каждого из них нужно брать столько, сколько растворится без образования осадка в 1 л водопроводной воды.
В стеклянный сосуд, емкостью 30-50 мл, наливают 20-30 мл раствора детергента, туда же помещают небольшую порцию испражнений и хорошо перемешивают.
Соотношение испражнений и раствора должно быть примерно 1: 20. Испражнения должны находиться в растворе не менее суток. За это время на дне образуется осадок из 2-3-х слоев. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем слое собираются яйца гельминтов, верхний слой представляет собой беловато-серые хлопья.
Пастеровской или глазной пипеткой набирают 2-3 капли жидкости из среднего слоя и переносят на предметное стекло. На одном стекле готовят 2 препарата, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Метод Красильникова позволяет обнаружить яйца всех видов гельминтов, выделяемые с испражнениями.
Метод Горячева (метод осаждения) используется для диагностики описторхоза. Удельный вес яиц описторха высок, поэтому они не всплывают в солевых растворах. В цилиндр диаметром 2-3 см наливают 70-100 мл насыщенного раствора хлорида натрия.
Отдельно тщательно размешивают 0,5 г испражнений в 20-25 мл воды и осторожно фильтруют через воронку с двумя слоями марли в цилиндр на солевой раствор, избегая перемешивания. Яйца описторхов медленно оседают на дно цилиндра.
Через 2-3 часа верхний слой с калом отсасывают пипеткой, а оставшийся солевой раствор оставляют стоять на 12-20 часов или центрифугируют. Осадок пипеткой переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Этот метод применим и для диагностики других трематодозов.
Метод липкой ленты.
Метод липкой лентыиспользуется для диагностики энтеробиоза. Кусочек липкой прозрачной полиэтиленовой ленты длиной 4-5 см липким слоем прикладывают через анус к перианальным складкам, сразу же снимают и приклеивают на предметное стекло. Полученные таким образом препараты микроскопируют.
Преимущества этого метода перед соскобом с перианальных складок заключается в быстроте и возможности довольно долгого хранения препаратов.
Диагностика тканевых гельминтозов.
Для диагностики тканевых гельминтозов (трихинеллез, цистицеркоз и другие) применяются иммунологичекие методы исследования: реакция кольцепреципитапии, связывания комплемента, флюоресцирующих антител, преципитации в агаре и другие, с помощью которых обнаруживаются в сыворотке крови больных соответствующие антитела. Для диагностики трихинеллеза и филяриатозов применяются специальные методы исследований.
Метод биопсии мышц.
Метод биопсии мышцдля диагностики трихинеллеза. Исследуют мышцы больного и остатки мяса животных, послуживших причиной заражения человека. Для анализа чаще берут кусочек (несколько граммов) дельтовидной или икроножной мышцы в асептических условиях.
Мышцу измельчают ножницами и помещают между двумя толстыми стеклами (компрессорий) слегка раздавливают и просматривают на малом увеличении микроскопа. Внутри мышечных волокон обнаруживаются спирально свернутые личинки трихинелл в округлых или лимонообразных капсулах.
Метод переваривания мышц.
Метод переваривания мышцдля диагностики трихинеллеза более эффективным. Мелко нарезанные мышцы заливают искусственным желудочным соком (1% раствор пепсина в 0,7% растворе соляной кислоты) и помещают в термостат при 37°С на 12-16 часов.
Объем желудочного сока должен превышать навеску мышц с15-20 раз. После переваривания на предметное стекло пипеткой переносят осадок и микроскопируют его. В осадке обнаруживаются свободные от капсул личинки трихинелл.
Метод мазка крови и толстой капли.
Данный метод применяетсядля диагностики фиряриатозов. Большинство видов микрофилярий локализованы в крови, поэтому для их обнаружения применяют исследование крови - мазок или толстую каплю.
Кровь берут в асептических условиях из пальца преимущественно ночью. Для приготовления мазка каплю крови помещают на предметное стекло и краем второго стекла размазывают еепо стеклу.
Мазок фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Для приготовления толстой капли берут несколько капель крови на предметное стекло и углом другого стекла круговыми движениями размазывают ее до получения пятна, диаметром около 1,5 см.
После высушивания эритроциты гемолизируют дистиллированной водой и окрашивают по Романовскому-Гимза. Михрофиллярии выявляются в виде тонких извитых нитей, окрашенных в голубой цвет.
ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ПРИЗНАКИ ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ
| № | Название гельминта | Отличительные признаки яиц | ||
| 1 | 2 | 3 | ||
| 1 | Фасциола | |||
| 2 | Описторх | Размеры 26-30x10-15 мкм. Яйцо овальной формы, несколько расширенное у нижнего полюса. На верхнем полюсе имеется крышечка. Оболочка желтого цвета. | ||
| 3 | Парагоним | Размеры 80-118x48-60 мкм. Форма овальная. На верхнем полюсе хорошо выражена крышечка. Оболочка золотисто-коричневая, толстая, гладкая. | ||
| 4 | Размеры 120-190x50-73 мкм. Форма веретенообразная, без крышечки. Острый шип на одном полюсе расположен вдоль продольной оси яйца. Оболочка тонкая, прозрачная. | |||
| 5 | Шистосома Менсона | Размеры 112-169x60-70 мкм. Форма овально-вытянутая. Острый крупный шип расположен на боковой поверхности яйца, слегка загнут. Оболочка толстая, желтая. | ||
| 6 | Шистосома японская | Размеры 75-90x53-74 мкм. Форма овальная. На боковой поверхности ближе к одному из полюсов расположен небольшой тупой шип. Оболочка бледно-желтая. | ||
| 7 | Тенииды (свиной и бычий цепни) | |||
| 8 | Карликовый цепень | Размеры 40x50 мкм. Форма округлая или овальная. Оболочка двойная, прозрачная. Между оболочками имеются извивающиеся нити. Внутри различима лимонообразная онкосфера. | ||
| 9 | Лентец широкий | Размеры 68-71x40-45 мкм. Форма широкоовальная. Оболочка серого или желтоватого цвета, гладкая. На одном полюсе имеется крышечка, на другом - бугорок. | ||
| ,0 | Аскарида | |||
| 11 | Власоглав | Размеры 50-55x23-32 мкм. Форма лимонообразная (боченкообразная). Оболочка толстая, гладкая, желто-коричневая. На полюсах имеются пробкообразные структуры. | ||
| 12 | Острица | Размеры 50-60x26-30 мкм. Форма овально-вытянутая, асимметричная (одна сторона выпуклая другая более плоская). Оболочка тонкая, гладкая, прозрачная, бесцветная. | ||
| 13 | Анкилосто-миды | Размеры 54-70x36-40 мкм. Форма овальная с притуплёнными полюсами. Оболочка тонкая, прозрачная, бесцветная. | ||
Литература
1. Петровский А.В. Паразитология, Мн.: Светач, 2007 г. 354 с.
2. Аскерко А.Ч. Основы паразитологии Мн.: БГМУ, 2008 г. 140 с.
Читайте также: