Методы паразитологической диагностики при гельминтозах

Основой диагностики паразитарных болезней, в частности гельминтозов, являются результаты лабораторных исследований, которые выявляют непосредственно возбудителей, их антигены или антитела к ним.

Гельминтозы развиваются в результате инвазии (заражения) организма окончательного хозяина (человека или животного), используемого как место обитания гельминтов и источника их питания. Часто болезни протекают без выраженных специфических клинических симптомов, что не всегда позволяет поставить диагноз по клинической картине.

Диагностика гельминтозов должна быть комплексной и основываться на данных эпидемиологического анамнеза, клиники заболевания и лабораторных исследований.

Специфика биологии каждого конкретного вида гельминта диктует необходимость различной тактики лабораторных исследований, которая направлена на обнаружение в одних случаях гельминтов или их фрагментов, а в других – их личинок, яиц или специфических иммуноглобулинов.

Материал для исследования берется в зависимости от подозрения на наличие у больного того или иного гельминтоза, так как пути выделения яиц, личинок или фрагментов паразитов из организма человека могут быть разными.

Для геогельминтов характерен кишечный (интестинальный) путь выделения яиц и личинок из организма больного человека. Большинство гельминтов, яйца которых выводятся через кишечник, паразитируют в пищеводе, желудке, кишечнике, а также попадают в кишечник при миграции через легкие, бронхи, трахеи, гортань, когда происходит заглатывание яиц и личинок со слизью при кашле. Этот путь присущ трематодам, цестодам и многим нематодам (в частности, геогельминтам). Материалом для исследования служат фекалии (кал). При исследовании проб фекалий обнаруживаются яйца и личинки многих гельминтов.

Паразитологические методы лабораторных исследований применяются:

• с диагностической целью;
• для контроля эффективности лечения;
• для оценки качества проведенного комплекса лечебно-профилактических мероприятий;
• для установления уровня пораженности населения (при профосмотрах)

Лабораторная диагностика является важным методом при паразитарных заболеваниях. В то же время качество лабораторной диагностики зависит от множества факторов, таких как надлежащая подготовка пациента к лабораторному обследованию, правильный забор материала для исследования и выбор оптимальной методики, квалификация и опыт специалиста-лаборанта.

Для верификации диагноза важно обеспечить следующее:

• сбор данных эпидемиологического анамнеза;
• определение соответствующего материала для исследования, правильно собранного и доставленного вовремя;
• выбор и применение соответствующего метода идентификации паразита;
• правильная идентификация паразита;
• правильная интерпретация результатов исследования.

Cбор материала для гельминтологических исследований включает следующие шаги:

1. Для исследования собирают фекалии из любой чистой емкости немедленно после дефекации.
2. Не допускается сбор образцов фекалий из унитаза.
3. Для детей возможен сбор образца с пеленки, подгузника или горшка.
4. Используя ложку в крышке контейнера, собрать не менее чем из трех точек стула.
5. Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию не позднее одних суток после дефекации, а при подозрении на стронгилоидоз – немедленно.
6. Если по каким-либо причинам доставка в лабораторию затруднена, то необходимо хранить материал при температуре +4–8 °C. Рекомендуется использование консерванта, и тогда исследование можно проводить в течение 3–10 дней после дефекации.

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

Методы гельминтологических исследований делятся на прямые и опосредованные (косвенные).

Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте и др.

Опосредованные (косвенные) методы: выявление вторичных изменений, возникающих в организме человека в результате жизнедеятельности паразита, путем серологических реакций, общего исследования крови, мочи.

Основным методом лабораторной диагностики глистных инвазий является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях. Наиболее распространенными методами исследования фекалий являются гельминтокопроскопические.

Гельминтокопроскопия – это совокупность методов взятия, обработки и исследования (макро- и микроскопического) проб фекалий человека с целью обнаружения в них яиц, личинок гельминтов, их фрагментов. Она включает следующие виды исследований:

• копроовоскопия (исследование фекалий на яйца гельминтов);
• копроларвоскопия (исследование фекалий на личинки гельминтов);
• макроскопия фекалий (обнаружение фрагментов или зрелых гельминтов в фекалиях).

Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.

К простым относятся метод нативного мазка и метод толстого мазка под целлофаном по Като – Кац.

Сложные методы, или методы обогащения, основаны на феномене разных удельных весов яиц гельминтов и применяемых реагентов. При обработке фекалий этими растворами происходит концентрация яиц на поверхности раствора или в осадке, в результате чего увеличивается эффективность поиска.

Различают следующие методы обогащения:

• флотационные (когда используют солевые растворы, удельный вес которых выше удельного веса яиц гельминтов, в результате чего они всплывают в поверхностную пленку, которую и исследуют);
• седиментационные (когда используют растворы, удельный вес которых меньше удельного веса яиц гельминтов, в результате чего они оседают, образуя осадок).

Методом седиментации возможно определить следующие гельминтозы: описторхоз, клонорхоз, фасциолез, дикроцелиоз, метагонимоз, нанофиетоз, дифиллоботриоз, гименолепидоз, аскаридоз, трихоцефалез, анкилостомидозы, стронгилоидоз, трихостронгилез, некатороз, шистосомоз, кишечные протозоозы (лямблиоз,криптоспоридиоз, изоспороз)

Специальные методы чаще всего необходимы для обнаружения личинок гельминтов. Группа специальных методов направлена на диагностику конкретного геогельминтоза, применяемый метод специфичен только для данного гельминта.

Модификация эфир-формалинового метода седиментации
одноразовыми системами для проведения копрологического исследования

С развитием паразитологии в лечебную практику стали применяться одноразовые системы для копрологического исследования, предназначенные для эффективного концентрирования яиц и личинок гельминтов модифицированным эфир-формалиновым методом.

Системы для копрологического исследования являются одноразовыми и состоят из нескольких элементов:

• пробирка для образца, в которую имеется готовая смесь для фиксации образца фекалий и последующей седиментации
• пробирка с системой фильтров и шпателем для забора образца;
• коническая емкость для сбора отфильтрованного материала.

Система фильтров способствует оседанию грубых частиц непереваренной пищи и клетчатки в смесительной камере, а жидкая часть с выделившимися в нее паразитами, яйцами паразитов под давлением фильтруется и центрифугируется в конической пробирке.

После получения взвеси систему помещают в центрифугу и центрифугируют при скорости 2500–3000 об/мин в течение 1–3 минут, при скорости 1500 об/мин – 5 минут. В конической части пробирки остается жидкая часть пробы с выделившимися в нее яйцами гельминтов, цистами простейших. Отсоединяют модуль с фильтром и утилизируют после обеззараживания. Коническая часть пробирки остается для микроскопирования. Для этого из нижней части пробирки с помощью пипетки переносят на предметное стекло 2 капли пробы осадка. Микроскопируют при увеличении: окуляр x10, объективы x10, x40.

Преимущества использования одноразовых систем для копрологических исследований:

• повышает выявляемость возбудителей;
• уменьшает расход реагентов;
• снижает опасность контаминации, исключая контакт персонала с исследуемыми образцами;
• улучшает стандартизацию метода, повышает достоверность анализа;
• исключает подготовку и повторную обработку посуды, а также сокращает количество отходов в процессе проведения исследования

Как и при заболеваниях любой этиологии, различают прижизненную и посмертную диагностику гельминтозов. Она, в основном, основана на обнаружении в исследуемом объекте возбудителей заболевания: целых гельминтов или их фрагментов, яиц или личинок паразитов. В связи с этим диагноз на гельминтозы носит более достоверный характер, чем, например, при инфекционных и незаразных болезнях.

Вместе с тем следует учитывать, что обнаружение тех или иных гельминтов в организме животных при отсутствии клинических признаков не всегда может служить основанием для постановки диагноза па соответствующий гельминтоз как на заболевание в общепринятом значении этого слова, включающее специфический синдром с вытекающими из него патогенетическими последствиями.

Диагноз на тот или иной гельминтоз должен ставиться комплексно, с учетом эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических изменений и специальных методов диагностики лабораторных исследований.

Прижизненная диагностика. Эпизоотологические данные включают сведения о возрасте животных, сезонности заболевания, географическом распространении, условиях кормления и содержания животных и т.д.

Характерные и хорошо заметные признаки заболеваний, такие как расстройство центральной нервной системы (при ценурозе), кожные кровотечения (при сетариозе), конъюнктивиты и кератиты (при телязиозе), наблюдаются лишь при отдельных, весьма немногочисленных гельминтозах. При большинстве же заболеваний гельминтозного характера клинические признаки не характерны и нередко ограничиваются такими часто встречающимися или малозаметными явлениями, как расстройство функций органов пищеварения, снижение удоев и других показателей продуктивности.

Поэтому на первый план выходят специальные лабораторные методы исследований. Пробы фекалий отправлять в лабораторию необходимо в пергаментной бумаге, а жидкие - в стеклянной баночке или в целлофане, на которых пишут номер пробы. Поскольку яйца или личинки наиболее распространенных гельминтов выделяются во внешнюю среду с калом, то исследовать фекалии необходимо как можно быстрее, так как через 16-18 ч. из яиц многих нематод вылупляются ли чинки, которые в дальнейшем затрудняют исследования.

1. Макрогельминтоскопию - нахождение в фекалиях гель- минтов или их фрагментов.

2. Гельминтоовоскопию - обнаружение в фекалиях яиц гельминтов.

3. Гельминтолярвоскопию - выявление в фекалиях личинок гельминтов.

Причем макрогельминтоскопия проводится в целях выявления гельминтов, отходящих после дегельминтизации, или для обнаружения члеников и фрагментов ленточных червей, которые периодически отделяются от тела гельминта и вместе с каловыми массами выделяются во внешнюю среду.

Сбор консервирование и пересылка фекалий Пробы фекалий весом 10-20 г лучше всего брать из прямой кишки (рукой в резиновой перчатке), но можно и свежевыделенные при этом снимают верхнюю часть фекальной кучи, не соприкасавшуюся с полом или почвой. Необходимо обследовать 10 процентов поголовья.

Методы гельминтокопрологических исследований подразделяются на качественные и количественные. Качественные гельминтокопрологические исследования проводят лишь с целью обнаружения в организме тех или иных гельминтов Они более просты, чем количественные позволяющие лишь условно судить об интенсивности инвазии, и поэтому чаще применяются в практических условиях.

Методы исследования фекалий.

Нативный мазок: Это самый простой метод обнаружения гельминтов. Берут небольшой кусочек фекалий 1-2 (величиной с горошину) и растирают на предметном стекле в 1-2 каплях 50% раствора глицерина. После удаления твердых частиц исследуют под микроскопом (метод прост, но не точен). От одного животного необходимо исследовать 2-3 мазка.

Флотационный способ диагностики цестодозов и нематодозов.

В стаканчик или баночку помещают 5-10 г фекалий и добавляют 20-кратное количество насыщенного раствора поваренной соли, размешивают пинцетом или стеклянной палочкой, затем фильтруют через металлическое ситечко или марлю и отстаивают в течение 40-60 мин. Яйца всплывают. Поверхностную пленку берут металлической петлей (согнутой под углом 90° и диаметром 0,8 см), переносят на предметное стекло и микроскопируют. Лучше исследовать 3 капли.

Тяжелые яйца трематод, некоторых цестод и неоплодотворенные яйца аскарид всплывают плохо, поэтому нужно исследовать препараты, приготовленные из осадка. Для этого жидкость сливают и со дна берут проволочной петлей или пипеткой несколько капель на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

Метод А.Г. Котельникова и В.М. Хренова (1981). Применяется для диагностики цестодозов и нематодозов. Для этого в стаканчик или баночку помещают 5-10 г фекалийи заливают 20-кратным количеством аммиачной селитры (гранулированной или обычной, нитрата аммония). Техника выполнения, как у предыдущего метода, но отстаивается в течение 15-20 мин., затем берут поверхностную пленку для микроскопирования.

Метод Дарлинга. В стаканчик или баночку помещают 3-5 г фекалий, добавляют воду до получения полужидкой консистенции, процеживают в центрифужные пробирки и центрифугируют 2-3 мин. Затем жидкость из пробирки сливают, а к полученному осадку добавляют смесь равных частей глицерина и поваренной соли, содержимое взбалтывают и вновь центрифугируют 3-5 минут, после чего яйца гельминтов всплывают в поверхностный слой.

Гельминтологической петлей снимают поверхностную пленку, переносят на предметное стекло и микроскопируют.

Метод последовательных сливов (седиментационный), по Н.В. Демидову. Пробу фекалий 5-10 г помещают в стакан или баночку, добавляют воду (1:20), размешивают, фильтруют через марлю или металлическое ситечко и отстаивают 5 мин., сливают верхний слой и вновь добавляют воды, отстаивают 5 мин. Такую процедуру последовательного промывания с 5-минутпым отстаиванием повторяют 4-5 раз до полного просветления надосадочной жидкости. Затем надосадочный слой жидкости сливают, а осадок просматривают под микроскопом при малом увеличении на предметных стеклах 6-7 х 9-13 см или чашке Петри. Метод применяют при исследовании фекалий на фасциолез, дикроцелиоз.

Комбинированные методы. Метод флотационно-седиментационный (Н.В.Демидов, 1963). Пробу фекалий (3-5 г) помещают в стаканчик и тщательно размешивают с насыщенным раствором поваренной соли (уд.вес — 1,18), отстаивают 15-20 мин., совочком или ложкой удаляют всплывающие на поверхность грубые частицы. Надосадочную жидкость отсасывают спринцовкой или сливают. К осадку до верха наливают воду и размешивают. Взвесь фильтруют через металлическое сито или марлю в стакан, фильтрат отстаивают 5 мин. Затем отсасывают поверхностный слой, оставив на дне 15-20 мл осадка. Перемешивают осадок в конический стаканчик (объем 30-40 мл, внутренний диаметр дна 1,5-2 см), отстаивают взвесь 5 мин., отсасывают жидкость и повторяют процедуру. Осадок переносят на стекло и исследуют. Метод применяется при исследовании на фасциолез.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Паразитологические методы исследования.
Лабораторная диагностика инвазий.

Содержание:

· Лабораторные методы диагностики паразитарных болезней.

· Принципы лабораторной диагностики протозоозов .

· Принципы лабораторной диагностики гельминтозов.

· Методы сбора, учета и изучения членистоногих.

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ПАРАЗИТАРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ

Паразитологическая диагностика основывается на прямом обнаружении и идентификации возбудителей. Иногда прибегают к иммунологическим исследованиям, культивированию паразитов или заражению ими лабораторных животных (метод биопроб). Использование любых методов паразитологической диагностики должно преследовать также цель выявления смешанных (двойных и более) инфекций/инвазий, что обозначается как полипаразитизм.
В материале, направляемом на исследование в лабораторию, паразит бывает представлен в тех стадиях, с помощью которых он передается (непосредственно или через переносчика) от инфицированного индивида окружающим людям (цисты простейших, яйца или личинки гельминтов, трофозоиты, гаметоциты), они являются одновременно и диагностическими.

ПРИНЦИПЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПРОТОЗООЗОВ

Рис. 1. Малярийные плазмодии в эритроцитах (препарат-мазок крови больного малярией), стрелкой указан кольцевидный трофозоит в эритроците.

Выделения мочеполовых путей исследуют для обнаружения мочеполовых трихомонад. 1-2 капли выделений сразу же помещают в каплю изотонического раствора хлорида натрия на предметном стекле, накрывают покровным стеклом и исследуют при среднем увеличении микроскопа (Х40, Х10) с сухой системой.

Рис. 2. Трихомонады.

Испражнения (кал) исследуют с целью обнаружения простейших кишечника. Движение простейших - один из самых характерных признаков, который позволяет поставить правильный диагноз. Поэтому основным правилом, которое следует строго выполнять, является исследование только свежего материала, не позже, чем через 20-30 мин после его выделения. При невозможности немедленного исследования испражнения помещают в консервант. Обязательным является исследование нативного мазка и мазка, окрашенного раствором Люголя. Цисты раствором Люголя окрашиваются в золотисто-коричневый цвет.

Рис. 3. Цисты лямблии (препарат-мазок).

ПРИНЦИПЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГОНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Окончательный диагноз гельминтозов может быть установлен только на основании положительных данных лабораторных исследований. Основным методом лабораторной диагностики этих инвазий является обнаружение яицилиличинок гельминтов.
Материалом для исследования служат испражнения, содержимое двенадцатиперстной кишки, кровь, мокрота, биоптаты тканей и другие материалы. Сбор материала для исследования производят в чистую стеклянную или пластмассовую посуду, на которую наклеивают этикетку с указанием необходимых сведений.
Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию не позднее одних суток после их выделения, а при подозрении на стронгилоидоз - немедленно. При невозможности доставить фекалии в указанные сроки их следует смешивать с 2-5 кратным количеством консервирующих жидкостей и хранить до исследования в охлажденном виде.

Рис. 4. Яйца гельминтов (слева); отличительные признаки цепней бычьего и свиного (справа).

Исследование объектов окружающей среды на зараженность гельминтами.
Анализ воды, почвы, овощей, различных предметов проводят для определения их роли в передаче яиц гельминтов и заражении человека, степени загрязненности окружающей среды и выбора необходимых профилактических мероприятий.
В окружающей среде яйца гельминтов постепенно погибают, и опасность для человека представляют только жизнеспособные инвазионные яйца и личинки. Поэтому необходимо в каждом случае обнаружения яиц определить степень и процент их жизнеспособности. Это даст возможность правильно оценить роль того или иного фактора передачи, выяснить условия и сроки сохранения яиц в окружающей среде, обосновать определенные мероприятия по обезвреживанию (д е и н в а з и и) факторов окружающей среды.
Определение жизнеспособности личинок гельминтов, обнаруженных в мясе или рыбе, необходимо в случаях, когда приходится решать вопрос о степени их опасности для заражения человека или эффективности обезвреживания загрязненного продукта.
При обнаружении в мясе финн (цистицерков) бычьего или свиного цепней их осторожно извлекают, помещают в подогретую до 40°С смесь из равных частей изотонического раствора хлорида натрия и желчи скота. Затем переносят в термостат при температуре 37° С. В течение 10 мин - 1 ч головки начинают выворачиваться, причем длительно сохраняется их легкая подвижность. Погибшие финны при наблюдении в течение 2 ч не выворачиваются.

Подобными специальными методами определяют жизнеспособность личинок трихинелл, яиц цестод, личинок описторха, личинок дифиллоботриид и др.

МЕТОДЫ СБОРА, УЧЕТА И ИЗУЧЕНИЯ ЧЛЕНИСТОНОГИХ

Сбор членистоногих, опасных для здоровья человека, проводят на определенной территории с целью изучения видового состава, сезонной численности, мест выплода и т.д. Полученные данные являются основой оценки эпидемиологической роли переносчиков, прогнозирования ситуации и организации борьбы с ними.

Методы учета и сбора. В зависимости от мест обитания и вида сбор и учет численности клещей проводятся разными методами.

Иксодовых клещейв природных условиях собирают с помощью несложных приспособлений. Флажок - кусок фланели или другой светлой ткани размером 80Х40 см, прикрепленный к палке. Флажок протягивают по растительности, осматривая его через каждые 20-25 шагов.
Все виды учета проводят по маршруту на расстоянии в 1 км или в расчете на 1 ч сбора.

Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов

Отбор проб и доставка кала в паразитологическую или клинико-диагностическую лабораторию

1. Кал после дефекации отбирают из разных участков в количестве не менее 50 г (объем около столовой ложки).

2. Помещают в чистую сухую, стеклянную или пластиковую посуду с крышкой.

3. Кал для обнаружения личинок стронгилоидеса, карликового цепня должен быть исследован в день дефекации, поэтому доставляется утренний кал.

4. С целью обнаружения вегетативных форм лямблий в "жидком стуле" время от дефекации до исследования должно быть по возможности сокращено до минимума (30 мин - 1,5 часа).

5. Для обнаружения цистных форм простейших (в том числе лямблий), а также яиц печеночных и кишечных гельминтов допускается хранение кала при температуре холодильника в течение суток.

6. При взятии проб кала в консервант Турдыева возможно хранение до 1 месяца.

Состав: 0,2% раствор азотистокислого натрия (0,16 г + 80 мл дистиллированной воды); глицерин; формалин концентрированный (аптечный); раствор Люголя основной (10 г йодида калия растворить в 30 мл дистиллированной воды, добавить 5 г кристаллического йода, размешать до полного растворения и долить до 100 мл дистиллированной водой). Раствор Люголя хранить в посуде из темного стекла.

Приготовление: 80,0 мл 0,2% раствора + 2,0 мл глицерина + 10 мл формалина + 8,0 мл раствора Люголя.

Смешивать в соотношении: 1 часть кала + 3 части консерванта.

1. Исследование фекалий

1.1. Макроскопическое исследование фекалий

Макроскопическое исследование фекалий применяется перед микроскопическим исследованием для выявления зрелых паразитов или их фрагментов: бычьего или свиного цепней, широкого и чаечного лентецов, остриц.

Необходимые реактивы и оборудование: глицерин, физиологический раствор, дистиллированная вода, химические стаканы, чашки Петри, черная бумага, пинцет, препаровальные иглы, предметные стекла большие (6х10; 8х12 см), лотки эмалированные, микроскоп, лупа типа МБС.

Фекалии сначала осматривают целиком, затем разводят дистиллированной водой до жидкой консистенции и небольшими порциями исследуют при хорошем освещении. Для лучшего просмотра применяют способ отстаивания:

1. Размешать фекалии в большом количестве воды в высоких стеклянных стаканах и поставить отстаивать.

2. Надосадочную жидкость слить, а осадок снова смешать с водой (так проделать несколько раз, пока надосадочный слой не станет прозрачным).

3. Отливать отдельные небольшие порции в чашки Петри и тщательно просматривать под стереоскопическим микроскопом МБС.

4. Извлекать пинцетом или препаровальной иглой все подозрительные частицы и крупные образования на отдельное предметное стекло или чашку Петри.

5. Образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривать под микроскопом МБС между двумя предметными стеклами.

6. Мелких гельминтов рассматривать в капле глицерина или физраствора под микроскопом при увеличении : окуляр х7 или х10, объектив х8 или х10.

Необходимо помнить, что микроскопия всех визуально обнаруженных в кале паразитов или фрагментов обязательна для уточнения морфологических особенностей и идентификации паразита.

Метод эффективен для дифференциальной диагностики половозрелых гельминтов кишечника (аскарид, остриц, члеников бычьего, свиного цепней, широкого и чаечного лентецов) от непереваренных частиц и других включений кала и идентификации найденных паразитов.

1.2. Микроскопические методы исследования фекалий

1.2.1. Метод нативного мазка с физраствором и раствором Люголя

Необходимые реактивы и оборудование: физиологический раствор, раствор Люголя 1%, предметные и покровные стекла, деревянные палочки, стеклянные пипетки, микроскоп.

Для обнаружения вегетативных форм лямблий (или других простейших) исследуют только неоформленные фекалии ("жидкий стул").

Фекалии исследуют сразу после дефекации (время можно увеличить до 1 часа, если сохранять фекалии при температуре 4-5°С).

Фекалии для данного исследования забирают без консервантов!

Физиологический раствор подогреть до 36-37°С.

Приготовление 1% раствора Люголя: к 5 мл основного раствора Люголя добавить 20 мл физраствора. Хранить в темной склянке не более 14 дней.

1. Нанести на предметное стекло 1 каплю теплого физраствора в левой половине и 1 каплю 1% раствора Люголя - в правой половине предметного стекла.

2. Немного фекалий перенести в каплю физраствора и растереть до получения равномерной негустой эмульсии, затем поместить немного фекалий в каплю раствора Люголя и также растереть.

3. Накрыть капли покровными стеклами и микроскопировать при увеличении: окуляр х10, объектив х40.

Метод позволяет выявлять вегетативные формы патогенных и непатогенных простейших и анализировать тип их движения (что имеет значение при видовой идентификации простейших).

Метод неинформативен для обнаружения яиц гельминтов!

1.2.2. Метод толстого мазка под целлофаном по Като

Необходимые реактивы и оборудование: 50% глицерин (100 мл глицерина + 100 мл дистиллированной воды), малахитовый зеленый - 3% раствор (2,5 г малахитовой зелени + 75 мл дистиллированной воды), целлофан гидрофильный, предметные стекла, палочки стеклянные или деревянные, специальный валик или резиновая пробка, микроскоп.

Подготовка рабочего раствора Като

1. 20 мл 50% глицерина + 1,2 мл 3% раствора малахитового зеленого. Раствор можно хранить длительное время в темной склянке с крышкой.

2. Из гидрофильного целлофана нарезать полоски по размеру предметного стекла (полиэтиленовая пленка непригодна для исследования).

3. Полоски поместить в рабочий раствор Като не менее, чем на 24 часа.

1. На предметное стекло нанести фекалии (размером с небольшую горошину). Растереть индивидуальной палочкой.

2. Сверху накрыть целлофановой полоской, обработанной в растворе Като.

3. Притереть целлофан к стеклу с помощью специального валика или резиновой пробки до получения тонкого полупрозрачного слоя.

4. Препарат выдержать при комнатной температуре в течение 1 часа или в термостате при 37-40°С в течение 20-30 мин.

5. Микроскопировать при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10 (для уточнения морфологического строения яиц гельминтов объектив х40).

Эффективность и информативность метода

Метод выявляет яйца печеночных и кишечных гельминтов при высокой и средней степени интенсивности инвазии, но малоинформативен при инвазиях низкой интенсивности. Не применяется для диагностики протозоозов.

1.2.3. Метод уксусно-эфирного осаждения

Необходимые реактивы и оборудование: водный раствор уксусной кислоты 5% (5 мл ледяной уксусной кислоты + 95 мл дистиллированной воды), этиловый эфир медицинский, раствор Люголя 1%, центрифужные градуированные пробирки, воронки стеклянные, металлические ситечки чайные или двухслойный бинт, предметные и покровные стекла, палочки деревянные или стеклянные, пипетки, резиновые пробки или специальный валик, центрифуга лабораторная, микроскоп.

1. В центрифужные градуированные пробирки налить 5 мл 5% раствора уксусной кислоты.

2. Добавить 1 г фекалий (такое количество, чтобы раствор в пробирке поднялся до уровня 6 мл).

3. Фекалии тщательно смешать с уксусной кислотой при помощи индивидуальной палочки, закрыть пробирку пробкой, интенсивно встряхнуть до образования однородной смеси и дать постоять несколько минут.

4. Процедить через воронку с металлическим ситечком или двухслойным бинтом в другую центрифужную пробирку, так чтобы в новой пробирке 6 мл раствора # (сполоснуть воронку с бинтом через который процеживали фекалии 5% уксусной кислотой).

5. Добавить в пробирку 4 мл эфира (до метки 10 мл), закрыть пробкой и энергично встряхивать 30 сек., держа при этом пробирку в горизонтальном положении, придерживая пробку пальцем, до получения эмульгированной смеси.

6. Смесь центрифугировать при 1500 об/мин в течение 2 мин.

7. После центрифугирования в пробирке различают 4 слоя: в верхней части пробирки эфирный экстракт, образовавшаяся "каловая пробка", раствор уксусной кислоты и на дне - небольшой осадок.

8. "Каловую пробку" палочкой отделить от стенок пробирки и вместе с надосадочной жидкостью вылить из пробирки так, чтобы на дне остался осадок. Излишки влаги и остатки "каловой пробки" удалить со стенок пробирки ватным тампоном.

9. Осадок нанести на предметные стекла, и просмотреть под микроскопом (в один из препаратов добавить 1 каплю 1% раствора Люголя). Микроскопировать вначале - при увеличении объектив х8 или х10, окуляр - х10, затем (для уточнения морфологии яиц и личинок гельминтов, а также для выявления цист простейших - объектив х40.

Эффективность и информативность метода

Применяется как универсальный метод для диагностики кишечных и печеночных гельминтозов и протозоозов, так как 5% раствор уксусной кислоты не оказывает деформирующего воздействия на яйца гельминтов, цисты и ооцисты простейших (однако не сохраняет стадии трофозоитов).

Метод эффективен при инвазиях с высокой, средней и низкой степенью инвазии. Однако, при низкой степени инвазии гельминтами рекомендуется сочетать с другим методом (например, с методом толстого мазка под целлофаном по Като).

Метод относится к количественным методам, так как позволяет подсчитать количество яиц гельминтов на 1 г фекалий.

2. Исследование дуоденального содержимого

Необходимые реактивы и оборудование: этиловый эфир, центрифуга, центрифужные пробирки, предметные стекла, пипетки, микроскоп.

Подготовка к работе: желчь в лабораторию должна быть доставлена сразу после зондирования. При подозрении на лямблиоз, стронгилоидоз исследуют порцию "А", исследование порций "В" и "С" более информативно на печеночные трематодозы.

В желчи, исследуемой сразу после зондирования, обычно обнаруживаются вегетативные подвижные формы лямблий и подвижные личинки стронгилоидеса. При исследовании желчи через несколько часов после зондирования (но в день забора материала) обычно подвижности личинок стронгилоидеса и вегетативных форм лямблий не наблюдается.

Исследование нативного мазка желчи.

1. Выбрать сгустки слизи, волокон, патологические примеси.

2. Стеклянной палочкой или пипеткой нанести тонким слоем желчь на предметное стекло.

3. Микроскопировать при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10, для уточнения морфологии яиц гельминтов и для исследования на простейшие - объектив х40.

Эффективность и применение метода

Метод позволяет исследовать подвижные личинки стронгилоидеса и подвижные вегетативные формы лямблий.

Метод неэффективен при исследовании на яйца трематод.

Исследование желчи с центрифугированием.

1. При наличии в желчи большого количества слизи или гноя взболтать все порции с равным количеством эфира.

2. Центрифугировать в центрифужных пробирках все порции не менее 20 мин при 1500-2000 об/мин.

3. Надосадочную часть желчи слить.

4. Осадок перенести на предметное стекло и микроскопировать при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10, для уточнения морфологии яиц гельминтов и для исследования на простейшие - объектив х40.

Эффективность и применение метода

Метод применяется для выявления яиц трематод (описторхи, дикроцелии, фасциолы), личинок стронгилоидеса, вегетативных форм лямблий.

Наиболее эффективно сочетание исследования желчи с центрифугированием и нативного мазка желчи.

Исследование желчи на яйца трематод эффективно только при центрифугировании.

> Алгоритм обследования пациентов на наличие паразитарных заболеваний

Содержание Методические рекомендации "Актуальные биогельминтозы и протозоозы в Западной Сибири (эпидемиология, биология, диагностика.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.