Нахождение кишечной палочки на кфх казанцева

В нашем организме живут миллионы бактерий — их общий вес составляет около двух килограммов. Кишечная палочка занимает среди них далеко не последнее место. Эта бактерия может долгое время помогать человеку в формировании микрофлоры и пищеварении, а может в один момент превратиться в серьезную медицинскую проблему. В нашей статье мы расскажем о способах выявления кишечной палочки.

Кишечная палочка, или Escherichia coli (Эшерихия коли) — это палочковидная бактерия, которая обитает в кишечнике человека и некоторых животных. Существует более сотни разновидностей этой палочки. Большинство из них совершенно безвредны, но некоторые могут вызвать серьезные заболевания.

У здорового человека Escherichia coli живет в толстом кишечнике. Ее количество обычно составляет 104–1010 КОЕ в 1 мл содержимого. В кишечнике эта бактерия участвует в переваривании пищи, синтезирует нужные нам витамины, а также производит органические кислоты. Эти кислоты создают благоприятную среду для развития лакто- и бифидобактерий.

Чаще всего кишечная палочка попадает в другие органы при нарушении гигиены или при снижении иммунитета. Попадая в женскую половую систему, она вызывает кольпит, аднексит, другие воспалительные заболевания. Особенно опасно заражение при беременности и после родов. Это может вызвать внутриутробную инфекцию у ребенка и стать причиной послеродового эндометрита у матери. Мужчин эта опасность тоже не обходит стороной. Кишечная палочка, попавшая в уретру, может вызвать уретрит, простатит, воспаление придатков и яичек.

Кроме этого, нормальная кишечная палочка может мутировать и становиться действительно опасной. Некоторые виды этой бактерии, например O157:H7, O104:H4, O121 и O104:H21, выделяют сильные токсины. Они могут вызвать гемолитико-уремический синдром, перитонит, пневмонию, пищевые отравления.

Чаще всего мутировавшая кишечная палочка попадает в организм вместе с продуктами питания, такими как немытые овощи, плохо обработанное мясо, молоко. Но в некоторых случаях такие штаммы могут образоваться внутри организма в результате мутаций и обмена генами.

Патогенная кишечная палочка нередко вызывает диарею. Обычно эшерихиозом страдают дети младшего возраста и люди, путешествующие в страны с низким уровнем гигиены (так называемая диарея путешественников). Вовремя проведенный анализ позволит выявить кишечную палочку и начать лечение.

Некоторые опасные штаммы кишечной палочки могут вызвать гемолитико-уремический синдром (ГУС). Это тяжелое состояние, при котором в мелких сосудах образуется большое количество тромбов, собственные эритроциты разрушаются и возникает полиорганная недостаточность — тяжелая стресс-реакция организма. При любом подозрении на ГУС обязательно проводят анализ на энтеропатогенные (опасные) эшерихии.

Обычный бактериологический анализ, который проводят при воспалительных заболеваниях органов половой системы, послеродовых эндометритах и других, — также может показать наличие кишечной палочки.

Еще одним показанием к проведению исследования является дисбактериоз. Изменение состава микрофлоры кишечника может привести к проблемам с пищеварением, к урчанию и болям в животе. Нарушение образования витаминов и повышенное всасывание токсинов приводит к слабости, утомляемости и другим неспецифическим симптомам.

Кишечную палочку можно обнаружить в кале, в моче, в мазках с поверхности половых органов или из ран, при посеве промывных вод. Также во время исследований она может быть обнаружена в ране, в легких.

Основным методом анализа для обнаружения кишечной палочки является бактериологический посев. Для этого небольшое количество материала помещают в питательную среду, на которой бактерии очень хорошо размножаются. Результат подсчитывают через несколько дней по количеству образовавшихся колоний. Единица измерения — КОЕ/мл, то есть количество бактерий, из которых при исследовании выросли колонии, в миллилитре материала.

Также существует метод ПЦР-диагностики. Он позволяет сказать, присутствует ли в материале патогенная кишечная палочка. Но ни количество бактерий, ни их чувствительность к лекарственным препаратам этот метод не покажет.

Другие методы, которые не подразумевают выделение чистой культуры кишечной палочки, могут сказать о заражении только косвенно. Например, в общем анализе мочи могут обнаружить бактерии в виде палочек. Но для того чтобы определить их вид придется сдавать дополнительно бактериологический посев. Похожая ситуация и с копрограммой. Анализ может дать представление о состоянии желудка и кишечника, но не позволяет выявить конкретные бактерии.

Общий анализ крови позволяет выявить характерные для воспалительных заболеваний сдвиги. Но они могут быть вызваны не только эшерихиозом, но и дизентерией, пневмонией или любым другим воспалительным заболеванием.

Любое бактериологическое исследование нужно проводить до начала лечения антибиотиками. В противном случае можно получить ложноотрицательный результат.

Анализ кала на кишечную палочку собирается в стерильную пробирку с транспортной средой. Для этого нужно заранее подготовить судно или другую емкость, тщательно вымыть ее и ополоснуть кипятком. В эту емкость собирается кал после естественной дефекации. Из специальной пробирки с транспортной средой нужно достать аппликатор, погрузить его в несколько участков собранного биоматериала и снова убрать в пробирку, плотно закрыв крышку. Если в собранном материале присутствуют кишечные палочки, бактериологический анализ это покажет.

Анализ мочи на бактериологическое исследование тоже собирают в специальную стерильную емкость. Собрать материал можно в любое время суток. Перед этим обязательно нужно принять душ, чтобы в емкость не попали бактерии с поверхности кожи. Чем скорее получится доставить материал в лабораторию, тем лучше.

Мазки и соскобы урогенитального тракта при подозрении на уретрит, вагинит и любые другие мочеполовые заболевания, вызванные кишечной палочкой, забирают сразу в лаборатории или на приеме врача. Специальной щеточкой делается соскоб из уретры, со стенок влагалища или с шейки матки. Это не очень приятная процедура, но без нее не обойтись.

Быстрый анализ, который позволяет выявить в материале ДНК кишечной палочки, проводится за 1–2 рабочих дня. Результат бактериологического анализа на кишечную палочку придется ждать дольше — от 5 до 7 дней. За это время выращивается культура клеток, определяется их вид, проводится анализ на чувствительность к антибиотикам и бактериофагам.

В норме кишечной палочки не должно быть нигде, кроме толстого кишечника. То есть если вы сдаете мочу или мазок, то лучший результат — это отрицательное заключение. Если речь идет о содержимом кишечника, то здесь не должно обнаруживаться энтеропатогенных кишечных палочек, таких как O157:H7. В некоторых лабораториях проводят быстрый ПЦР-тест на целую группу таких бактерий.

При определении чувствительности к антибиотикам или бактериофагам выдается бланк, на котором напротив каждого наименования написана степень влияния препарата на рост бактерии. По такому бланку врач за несколько минут подберет наиболее эффективный для конкретного случая антибиотик.

Анализ на эшерихиоз можно сдать как в обычной поликлинике, так и в частной лаборатории. Желательно заранее уточнить, какой метод исследования при этом используется.

Бактериологические исследования лучше проводить в клиниках и лабораториях, оснащенных автоматическими и полуавтоматическими анализаторами. Это исключает человеческий фактор, позволяет проводить исследование с широким перечнем антибиотиков и бактериофагов. Такие оснащенные лаборатории имеют как современные государственные больницы, занимающиеся лечением инфекционных болезней, так и частные медицинские центры.

Также стоит обратить внимание на время проведения исследования. Для бактериологического исследования это не менее пяти дней. Раньше бактерия просто не успеет вырасти в достаточном для анализа количестве. Время больше 7–10 дней говорит о том, что исследование будет проводиться в сторонней лаборатории. Это существенный недостаток, поскольку речь идет о транспортировке биоматериала, что нежелательно: чем раньше был доставлен материал, тем более достоверным будет результат.

Кишечная палочка — неотъемлемая часть микрофлоры кишечника. Пока она находится под контролем организма, ее клетки помогают синтезировать витамины, переваривать пищу, создавать благоприятную среду для жизни других полезных микробов. Но любое нарушение этого равновесия грозит патологиями вплоть до серьезных воспалительных заболеваний. К счастью, медицина помогает нам вовремя выявить отклонения от нормы и приять соответствующие меры.

• 
  

Проверка зелени и салата в магазинах Москвы в рамках программы "Право есть" выявила нарушения. В четырёх из пяти образцов найдена кишечная палочка.

Журналисты Царьграда в рамках нового выпуска программы "Право есть" вместе с Общенациональной ассоциацией генетической безопасности (ОАГБ)

решили выяснить, можно ли доверять отечественным производителям салатной зелени. Продукцию закупили в сети магазинов "Азбука вкуса", "Билла", "ВкусВилл", "Магнолия" и "Перекрёсток".

В четырёх из пяти образцов контролёры программы "Право есть" нашли бактерии группы кишечной палочки. Однако лишь две упаковки лаборатория признала не соответствующими требованиям Технического регламента Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции". Подобный вердикт выглядел, по меньшей мере, странно.

Согласно протоколу испытаний, не соответствует требованиям безопасности образец №1 - укроп "Просто азбука" (изготовитель - ООО "Локарно"), купленный в магазине "Азбука вкуса" на Проспекте мира, д. 58, стр. 1. Количество нитратов в этом продукте в два раза превысило норму. Доктор биологических наук Наталья Ефимочкина в беседе с Царьградом пояснила, что при определённых условиях эти вещества могут переходить в более токсичные нитриты. Эксперт по сельскому хозяйству и главный редактор журнала "Мир теплиц" Александр Цыдендамбаев добавил:

"Нитратный азот образует метагемоглобин в крови, и кровь перестаёт переносить кислород. Поэтому отсюда проблемы: и пониженное давление, и сердечная недостаточность".

После того как выпуск программы был готов к публикации, торговая сеть "Азбука вкуса" прислала в адрес редакции протокол своей собственной проверки продукции того же производителя - ООО "Локарно". Согласно этим исследованиям нарушений предельно допустимой концентрации по количеству нитратов в укропе обнаружено не было. Чтобы получить объективную картину о безопасности укропа от ООО "Локарно", редакция программы направила запрос в Роспотребнадзор на организацию проверки данной продукции третьей стороной.

Вторым несоответствующим требованиям безопасности стал образец №2 - укроп из магазина "ВкусВилл" (изготовитель - ООО "Зелёный сад"), купленный по адресу Большая Переяславская ул., д. 11. В нём количество нитратов оказалось превышено более чем в три раза. Также в этом образце выявлены бактерии группы кишечной палочки. Но, к сожалению, пока законодательно странами Таможенного союза не ограничивается реализация зелени с этим микроорганизмом.

В магазине "ВкусВилл" журналистам отказались предоставить сертификат соответствия на товар, что является нарушением закона. Для юридического лица предполагается штраф до 300 тысяч рублей. Программа "Право есть" отправила запрос в Роспотребнадзор с просьбой привлечь должностных лиц ООО "ВкусВилл" к административной ответственности за нарушение прав потребителей.

"Потенциально обнаружение кишечной палочки даже в небольших количествах от 10 до 100 клеток на грамм свидетельствует о нарушении санитарных условий производства, - рассказала Наталья Ефимочкина. - Такой продукт потенциально не безопасен для потребителя. Вспышки кишечных инфекций, связанные со свежей растительной продукцией, в последние годы стали достаточно частыми. Это бывает сальмонеллёз, энтерогеморрагический эшерихиоз, дизентерия, связанная с растительными продуктами. Причём вызывать эти заболевания могут как пророщенные ростки, так и свежие порезанные овощи".

Образец №3 из "Биллы" (Комсомольская площадь, д. 2) - французский салатный микс "Монпелье" (изготовитель - ЗАО "Белая дача трейдинг") согласно Техрегламенту "О безопасности пищевой продукции" соответствует требованиям безопасности, хотя в нём обнаружена кишечная палочка. На упаковке этого продукта было указано, что листья салата нарезаны и вымыты.

Ефимочкина напомнила, что несколько лет назад в Германии штамм нового типа кишечной палочки попал с водой в среду, где выращивались ростки пажитника. Микроорганизм размножился, что привело к вспышке энтерогеморрагического эшерихиоза, так называемому гемолитическому уринарному синдрому.

"Очень тяжёлое заболевание, там пострадало более 4000 человек, и в том числе у 900 человек возник этот уринарный синдром - тяжёлое поражение мочевой системы и почек. 30 человек - летальный исход", - печально констатировала доктор биологических наук.

Бактерии группы кишечной палочки также обнаружены в образце №4 из "Магнолии" (Мещанская ул., д. 14, стр. 1) - "Салат латук премиум" (Изготовитель - АО "Агрокомбинат "Московский") и в образце №5 - салат листовой фриллис (изготовитель - ЗАО "Агрофирма "Выборжец") из магазина "Перекрёсток" по адресу: ул. Большая Полянка, д. 28, стр. 1. Однако по сегодняшнему законодательству эти продукты также соответствуют требованиям безопасности, пока не будут внесены соответствующие поправки в Технический регламент.

Доктор медицинских наук, академик РАН Михаил Пальцев рассказал Царьграду:

"Салат - это наиболее рискованный продукт. Не секрет, что салаты сейчас выращивают по интенсивным технологиям в Подмосковье. Занимаются этим выходцы из Поднебесной, из КНР. Они собирают по нескольку урожаев в год, используют различные стимуляторы, и в качестве удобрений нередко используют не только навоз, но и человеческий кал. По этому поводу появлялись публикации в прессе. Эти удобрения, которые используются для выращивания салата, от них трудно потом избавиться, условия выращивания соблюдаются очень плохо. И проконтролировать достаточно сложно".

Журналисты Царьграда сделали запрос в Департамент Техрегулирования Евразийской экономической комиссии (ЕЭК), которая и разрабатывает новые технические регламенты для стран Таможенного союза и вносит в них изменения. В ответ ведомство сообщило, что в данный момент "проект изменений в Техрегламент "О безопасности пищевой продукции" проходит внутригосударственное согласование". Изменения коснутся "микробиологических показателей цельных листовых салатов".

Депутат Государственной Думы и экс-глава Роспотребнадзора Геннадий Онищенко так прокомментировал Царьграду деятельность ЕЭК:

"Сегодня у нас есть с вами единое евразийское экономическое пространство, и хотя мы и говорим, что мы что-то и запрещаем, но на самом деле мы сегодня ничего не можем сделать. Мы добровольно отдали часть своего суверенитета на наднациональный уровень. У нас в Замоскворечье заседает эта комиссия, представлена чиновниками из пяти стран, где на уровне наднациональном создаются единые технические стандарты, которые должны действовать на всём свободном экономическом пространстве".

Роскачество совместно с Россельхознадзором и Роспотребнадзором провело масштабное исследование отечественного рынка молочных продуктов. Предыдущий анализ был посвящен конкретно молоку, а нынешний, как и было обещано, — сливочному маслу самой "популярной" жирности - 72,5%. Впервые испытания проводились лабораториями нескольких контрольно-надзорных органов и охватили более 70% маслянного рынка.

Выяснилось, что более 50% масла, которым торгуют магазины, вполне качественно и соответствует всем требованиям, а чуть меньше четверти исследованного ассортимента — и вовсе превышает ГОСТы и претендует на Знак качества. Однако и нарушители занимают существенную часть отечественных прилавков — 25,6%.

Исследованиям лабораторий подверглись 82 самые популярные в России марки категории "Крестьянское" (72,5 % жирности), произведенные в 8 федеральных округах. Стоимость продукции колебалась от 33 рублей 30 копеек до 92 рублей 40 копеек за 100 граммов. Масло тестировалось по 23 показателям качества и безопасности.

Итак, победители — масло повышенного качества: "Приволжский молочный завод" ( Нижегородская область), "Выбор хозяйки" (Самарская область), "Кунгурское", "Нытвенское" и "Вемол" (Пермский край), "Вятушка" (Кировская область), "Стожок" (Удмуртия), "Крестьянское" (Краснодарский край), "Чабан" (Кабардино-Балкария), "МОЛОКО" и "Кот де Франс" (Калининградская область), "Молочная сказка" (Алтайский край), "Каждый день" (Омская область), Fine life (Московская область), "Простоквашино" (Москва), "Вкуснотеево" (Воронежская область), "Козельское живое" (Калужская область), "Домик в деревне" (Владимирская область), "Томмолоко" (Томская область).

А теперь о грустном. Увы, в некотором масле помимо полезных молочных жиров угнездилась вредная кишечная палочка. Вот марки-нарушители технологического процесса: "Грин Агро" (Московская область), "Ирбитское" (Свердловская область), "Молочный комбинат "Ставропольский" (Ставропольский край), "Омский знак качества" (Омская область), "Очень важная корова" (Татарстан), "Семёнишна" (Красноярский край) и "Сливочное утро" (Алтайский край). А в масле из Ростовской области "Белый медведь" найдены к тому же дрожжи и плесень. Есть и такие производители, которые, наоборот, перестарались с антибактериальным контролем, а потому в их продукции превышен уровень антибиотиков — это масло "Летний луг" (Оренбургская область).

К счастью, ни в одном из образцов не выявлен золотистый стафилококк и листерии, а также свинец, кадмий, ртуть, мышьяк, железо и медь. Радиационные показатели всего масла также в норме.

Перейдем к фальсификатам. Ими, конечно, не отравишься, но. Сливочное масло, согласно регламенту, готовится исключительно из молочного жира (молоко, сливки и т.д.) Если в продукте присутствует растительный жир (а многие производители любят добавить его ради экономии), то это не вредно. Вот только такой продукт называется уже не сливочным маслом, а спредом (раньше его еще именовали маргарином). Таковых оказалось 10 из 82 марок. Итак, спреды, которые завернулись в обертку масла: "Аппетитно Круглый год", "Лав продукт", "ТД Сметанин" и "То, что надо" (Московская область), "Буденновскмолпродукт" (Ставропольский край), "Волжаночка" (Волгоградская область), "Серышевский" (Амурская область), "Крестьянское из Башкирии", "Сулимовское" и "Сулимовское "Башкирское" (Челябинская область).

И третий (самый "невинный") путь масляной экономии — недовес, хорошо знакомый продавцам (и покупателям) с крестьянских рынков. Но таким путем пошли авторы всего одной марки из 82 — это масло "Белебеевское" (Башкирия).

Многие покупатели, которые не очень хорошо изучили ассортимент сливочного масла на прилавках, не ищут сложных путей, а просто выбирают продукт подороже. Дескать, не будут же производители дорогой марки обманывать. И это ошибка, будут! Что и показало исследование Роскачества. Так, одно из самых дорогих масел оказалось фальсификатом. Это продукт с характерным названием "Серышевский".

А теперь с удовольствием приводим топ-10 самых дешевых сливочных масел с самой высокой оценкой в 5,5 баллов. Это масло, достойное королей. Итак — барабанная дробь! - "Приволжский молочный завод" (Нижегородская область), "Вкуснотеево" (Воронежская область) и "Каждый день" (Омская область). Молодцы!

Вид микроба	Лактоза	Глюкоза	Маннит	Мальтоза	Сахароза	МПБ
Индол	Сероводород
E. coli	КГ	КГ	КГ	КГ	-	+	-

Примечание: К Г – ферментация углевода сообразованием кислоты и газа, (-) – отсутствие ферментации или образования

Ферментативная активность изучена на пестром ряду. Кроме питательной основы и углевода к среде добавлен индикатор бромкрезолпурпур. Исходный цвет среды фиолетовый, при образовании кислоты цвет среды становится желтым. Газообразование улавливают с помощью поплавков – коротких стеклянных трубочек, запаянных с одного конца, помещенных в питательную среду, открытым концом вниз. Образование индола определено с помощью реактива Ковача: при положительной реакции конец бумажки окрашивается в малиново-розовыйцвет.

4. Знакомство со схемой лабораторного диагноза эшерихиоза по схеме(зарисовать табл.3)

Среди кишечных палочек встречаются представители, которые способны вызывать заболевания кишечника, варьирирующие от умеренной диареи до тяжелого холероподобного заболевания. В основном заболевания возникают у детей 1 года жизни, но могут возникать также у детей старшего возраста и взрослых.

Кишечные палочки, вызывающие поражения кишечника, разделяют на три группы:

1. Энтеропатогенные кишечныепалочки (ЭПКП)– поражают детей первого года жизни, особенно часто в коллективах (серогруппы 026,055, 0111 и др.)

2. Энтеротоксигенные кишечные палочки (ЭТКП)– поражают детей старше года и взрослых людей (серогруппы 01,05,06 и др.). Эта группа кишечных палочек характеризуется способностью продуцировать энтеротоксин, который реагирует с аденилциклазной системой клеток эпителия слизистой тонкого кишечника, нарушает их функции вызывает холероподобные заболевания.

3. Энтероинвазионные кишечные палочки (ЭИКП)– поражают детей старше года и взрослых людей (серогруппы 025,0124 и др.) Эта группа кишечных палочек обладает способностью к инвазии в клетки слизистой оболочки толстой кишки и вызывает дизентериеподобные заболевания.

Помимо перечисленных заболеваний, которые могут принимать эпи­демический характер, кишечные палочки могут вызывать аппендицит, перитонит, цистит, пиелонефрит и т.д. В последние годы нередко ки­шечные палочки самостоятельно или в ассоциациях с другими бактери­ями вызывают внутрибольничные инфекции в хирургических, педиатри­ческих стационарах и др.

Кишечные палочки, выделяемые от больных различными заболева­ниями, как кишечной, так и не кишечной локализации, невозможно раз­личить от представителей нормальной микрофлоры ни по морфологичес­ким, ни по культуральным свойствам. Дифференциация их проводится на основе антигенной структуры.

Главной особенностью ЭПКП является антигенная структура, по­стоянная и характерная для каждого штамма. Учитывают соматический 0-антиген, соматический К-антиген и жгутиковый Н-антиген.

Общепризнано, что поставить клинический диагноз острой кишеч­ной инфекции нельзя. Обязательна постановка лабораторного диагноза. Основным в лабораторной диагностике является бактериологический диагноз.

Исследуемый материал: испражнения, рвотные массы.

Испражнения в количестве 3–5 гр. помещают в пробирку с изото­ническим раствором хлорида натрия или глицериновой смесью. Целесо­образно брать последние порции, т.к. при колиэнтеритах поражается тонкий кишечник. У грудных детей материал для исследования берут с пеленок. Чем раньше от начала заболевания исследуют испражнения, тем вероятнее возможность выделения возбудителя. Рекомендуется за­бор материала сделать до начала лечения.

Бактериологический метод. Бактериологический диагноз основан на выделении чистой куль­туры и определении её серовара.

Исследуемый материал засевают на среду Эндо, предварительно разведя его физ. раствором. Через сутки изучают колонии, выросшие на среде. Кишечные палочки вырастают на среде Эндо в виде малиново-красных колоний с металлическим блеском или без него. Отбор ко­лоний патогенных кишечных палочек проводят с помощью ориентировоч­ной реакции агглютинации с диагностической сывороткой. Употребляют смесь ОКБ – сывороток против патогенных кишечных палочек, соединяя не более 5 сывороток. Для постановки ориентировоч­ной реакции агглютинации исследуют не менее 10 колоний. Если ни одна из них не агглютинирует, дают ответ: "Патогенные кишечные палочки не обнаружены". Из колоний с положительной реакцией агглю­тинации делают посев в пробирки со средой Олькеницкого (Клиглера) или скошен­ным агаром и ставят в термостат на 18–20 часов.

На следующий день (3 день исследования) просматривают посевы на среде Олькеницкого и скошенном МПА. Состав среды Олькеницкого (трехсахарная среда с мочевиной): к 100 г МПА расплавленного и охлажденного добавляют I г лактозы, I г сахарозы, 0,1 г глюкозы, I г мочевины, 0,02 г соли Мора, 0,03 г гипосульфита и индикатор ВР (водный голубой и розоловая кислота). Среду разливают так, что­бы был столбик и скошенная поверхность. Посев культуры делают штрихом на скошенную поверхность и уколом в глубину столбика. Фер­ментация глюкозы происходит в анаэробных условиях (её в среде мало), в этом случае цвет изменится только в столбике (среда поси­неет). При ферментации лактозы или сахарозы среда посинеет как в столбике, так и на скошенной поверхности. При разложении мочеви­ны (рН сдвигается в щелочную сторону) цвет среды станет оранжевым. Газообразование определяют по разрывам среды. При образовании сероводорода среда чернеет.

На скошенном МПА энтеропатогенные кишечные палочки образуют влажный блестящий сероватый налет.

На среде Олькеницкого кишечная палочка вызывает посинение среды, как в столбике, так и на скошенной поверхности, наблюдают­ся разрывы среды пузырьками газа (ферментация лактозы и глюкозы до кислоты и газа). Выделенную культуру проверяют в реакции аг­глютинации на стекле сначала с той же смесью сывороток, а затем раздельно с каждой сывороткой, входящей в смесь.

При отсутствии реакции агглютинации дают отрицательный ответ. При положительной реакции агглютинации необходимо подтвердить при­надлежность выделенной культуры к роду кишечных палочек. Для этого культуру засевают на жидкие среды Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой, в пробирку с МПБ для обнаружения индола и серово­дорода, определяют подвижность.

Для окончательной идентификации выделенной эшерихии ставят развернутую реакцию агглютинации с типовой коли-ОКВ-сывороткой. Реакцию ставят с живой культурой для установления К-антигена и с гретой культурой для установления О-антигена.

По результатам пестрого ряда и развернутой реакции агглютина­ции может быть дан окончательный ответ.

Серологическая диагностика при кишечных инфекциях использует­ся для подтверждения этиологического значения выделенных эшерихий, заподозренных в качестве возбудителя, в научно-исследовательских целях для изучения патогенеза и иммунитета кишечных заболеваний.

Основана она на обнаружении антител в сыворотке крови. Обна­руживают О-антитела в реакции агглютинации, используя в качестве антигена культуру, выделенную от больного и кипяченую в течение 2 часов. Положительная реакция проявляется непостоянно, титр антител невысокий – ниже 1:100. В-антитела не обнаруживаются.

Можно использовать реакцию пассивной гемагглютинации, которая более чувствительна. В качестве диагностикума используют эритроци­ты барана, сенсибилизированные смывом 48-часовой культуры, кипяче­ной 2 часа. Следовательно, в РПГА также выявляют только О-антитела. Эта реакция позволяет отличить больных от людей, выделяющих энтеропатогенные кишечные палочки без клинических проявлений болезни. У последних антитела не обнаруживаются.

Ускоренные методы лабораторной диагностики. Классическое бактериологическое исследование длится 4–5 дней. Это не всегда устраивает и клиницистов и эпидемиологов, по­этому прилагается много усилий, чтобы сократить время исследова­ния и ускорить ответ лаборатории. Для решения этой проблемы пред­ложено использовать наиболее рациональные питательные среды, сокра­щать интервалы между исследованиями, а также применять методы, ос­нованные на определении антигенной структуры кишечных палочек. На­иболее чувствительным и быстрым методом является метод иммунофлюоресценции, основанный на обнаружении специфического антигена кишеч­ных палочек в исследуемом материале с помощью флюоресцирующих антител.

Этапы бактериологического исследования

при подозре­нии на эшерихиоз

1. Сделать посев испражнений больного на среду Эндо. Для этого взять немного материала пипеткой и эмульгировать его в физиологическом растворе или глицериновой смеси, каплю эмульсии нанести на среду Эндо петлей или пипеткой. Стерильным шпателем растереть каплю на небольшом участке среды, затем, не прожигая шпатель, втереть оставшийся на нем материал по всей поверхности. Чашки с посевом поставить в термостат на 24 часа.

2. Изучить посевы на среде Эндо, описать выросшие колонии.

Отобрать малиново-красные колонии с металлическим блеском или без него с помощью ориентировочной реакции агглютинации (не менее 10). Для постановки реакции стерильной петлей взять часть колонии и смешать с каплей агглютинирующей диагностической поливалентной сыворотки. Поливалентные сыворотки готовят в производственных условиях, они содержат антитела к нескольким сероварам эшерихий из одной серологической группы. При положительной реакции агглютинации оставшуюся часть колоний отсеять на скошенный агар или среду Олькеницкого. Если же ни одна из десяти колоний не дала агглютинации, выдать отрицательный ответ.

3. Изучить посевы на скошенном агаре и среде Олькеницкого.

3.1. Поставить ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с поливалентной сывороткой. Если реакция агглютинации положительна, поставить реакцию агглютинации на стекле с каждой типовой сыворот­кой, входящей в поливалентную.

3.2. Подтвердить принадлежность выделенной культуры к эшерихиям. Для этого изучить ферментативные свойства, сделав посев на жидкие среды Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой, мальтозой. Сделать также посев на МПБ для определения образования индола и сероводорода.

3.3. Провести окончательную серологическую идентификацию культуры. Для этого поставить развернутую реакцию агглютинации с живой и гретой культурой. Диагностическую типовую сыворотку разводят от 1:100 до тит­ра сыворотки, указанного на этикетке. Из разведений приготовить два ряда пробирок. Приготовить антиген. Для этого смыть культуру с поверхности среды 3–5 мл физиологического раствора, разлить взвесь в 2 стерильные пробирки. Одну из них прогреть на водяной бане при 100°С в течение часа. В первый ряд разведений сыворотки внести по 2 капли живой культуры, во второй – по 2 капли гретой культуры. После встряхивания пробирки поместить в термостат на 18–20 часов.

Учет результатов. Заключение по исследованию

4.1. Просмотреть посевы на пестром ряду. Для кишечной палочки ха­рактерна ферментация лактозы, глюкозы, мальтозы и маннита с обра­зованием кислоты и газа, отсутствие ферментации, сахарозы, образо­вание индола. Учет реакции агглютинации провести с помощью лупы. Агглютинация с живой культурой крупнохлопчатая (Н-агглютинация), с убитой – мелкозернистая (О-агглютинация).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском: