Описторхоз диагностика лабораторная диагностика

Описторхозом называется паразитарное заболевание, вызываемое червем-трематодой (Opisthorchis felineus). Главная опасность этого недуга кроется в значительных инвазиях. Поскольку симптомы болезни во многом связаны с пораженным органом, диагностика затруднена из-за схожести недуга с другими болезнями этого органа. Для правильной диагностики необходимо сделать анализ на описторхоз. Поскольку пациенты обращаются на разных стадиях заболевания, для постановки диагноза используются различные методики исследования. Поэтому только специалист сможет точно определить, какие анализы сдать на описторхоз.

Как диагностировать описторхоз у человека?

При заражении описторхозом в первую очередь проводится исследование кала. Однако в фекалиях не всегда можно выявить яйца паразита. Чаще всего это возможно только на поздней стадии заболевания, когда глист достиг размеров половозрелой особи и начал размножаться.

Возникает вопрос, как выявить описторхоз у человека на начальной стадии заражения, когда в кале еще нет яиц глиста? В этом случае необходимо сдать кровь на описторхоз. При этом диагностика описторхоза может проводиться как на основе общеклинических анализов крови, в которых наблюдаются характерные изменения, так и посредством проведения специальных анализов крови, позволяющих выявить антитела к антигенам описторхисов.

Если говорить о том, как определить описторхоз иными методами, то врач может назначить следующие инструментальные и лабораторные анализы и обследования:

1. Ультразвуковое исследование всех органов, которые находятся в брюшной полости. Если диагностируют определенные патологии желчного пузыря или увеличение печени, то это может косвенно указывать на наличие паразита и является основанием для исследования кала и крови.
2. Компьютерная томография или МРТ также помогут выявить отклонения в работе и строении желчного пузыря, поджелудочной и печени.
3. Если человек ранее проверялся на наличие этих паразитов, и анализы ничего не выявили, то можно попробовать сделать дуоденальное зондирование. В процессе обследования на анализ берется желчь. В ней также можно выявить яйца паразита.
4. Еще одна эндоскопическая методика, которая может быть эффективной в диагностике описторхоза, – это ретроградная панкреатохолангиография. Во время этой процедуры можно обследовать протоки желчного пузыря, где легко обнаружить половозрелые особи гельминта.

Какие анализы нужно сдать на описторхоз?

Если есть подозрение на описторхоз, анализы крови (ОАК и биохимический) – это первое, что необходимо сдать. Косвенно на наличие паразита в организме могут указывать следующие отклонения от нормы в анализах:

1. В биохимии крови обнаруживается превышение концентрации амилаза и билирубина. Также несколько повышены результаты сулемовой пробы и тимоловой. Хоть это и не позволяет точно обнаружить в организме человека глистов, но косвенно указывает на повреждение внутренних органов и отклонения от нормы в их деятельности, что характерно для описторхоза.
2. В общем анализе стоит обратить внимание на понижение гемоглобина, а также снижение числа эритроцитов. Все это является признаком анемии, которая нередко сопровождает данный недуг. Часто на наличие в организме паразитов указывает выраженная эозинофилия и характерный лейкоцитоз. Такие отклонения от нормы появляются вследствие реакции иммунитета на антигены гельминтов.

Если у вас подозревают описторхоз, можно сдать анализы кала, сделать КТ, рентген, УЗИ. Даже если в кале не будут выявлены яйца глистов, но в других исследованиях будут замечены характерные для глистных инвазий отклонения от нормы, стоит сделать иммуноферментный анализ, который считается наиболее информативным и позволяет выявить недуг даже на начальной стадии. В любом случае точно сказать, какие анализы нужно сдать, сможет ваш врач, основываясь на клинических симптомах и состоянии больного.

В острой стадии недуга в организме больного вырабатываются антитела к описторхисам, поэтому методика ИФА (иммуноферментный анализ) дает практически 100-процентную точность. Однако эффективность этой методики снижается до 70 % в случае перехода недуга в хроническую форму.

Необходимо учитывать, что у жителей регионов, где есть повышенный риск заболеваемости описторхозом, наблюдается существенное занижение показателей серологических анализов. Это объясняется наличием у них наследственной пониженной чувствительности к этим паразитам. При этом у тех, кто недавно приехал в такие регионы, наоборот, могут наблюдаться ложноположительные результаты серологических реакций из-за отсутствия врожденной толерантности.

Важно! Эффективность и результативность того или иного диагностического метода напрямую связана со стадией развития паразита и активностью его жизнедеятельности.

Для проведения анализа ИФА понадобится венозная кровь пациента, взятая натощак в амбулаторных условиях. В плазме крови больного человека присутствуют антитела к описторхозу igg и igm. В зависимости от присутствия тех или иных антител и их концентрации можно сделать выводы о времени, когда произошло заражение, а также стадии недуга. При этом руководствуются следующими данными:

• Антитела IgM обнаруживаются в крови через несколько суток после инфицирования. Пик выработки этих антител приходится на вторую неделю заболевания. Через полтора-два месяца после начала болезни титр IgM быстро снижается;
• Иммуноглобулины IgG появляются в крови на 14-21 сутки от начала болезни. Пик их выработки приходится на второй или третий месяц недуга. При переходе заболевания в хроническую форму концентрация этих антител остается в неизменном виде на протяжении года и более.

Сдавать анализ на антитела к описторхам нет смысла, если человек болеет давно. Это связано с тем, что при хроническом течении недуга титр антител значительно понижен. Такое значительное снижение титра иммуноглобулинов к возбудителям заболевания объясняется соединением антигенов паразита с иммуноглобулинами больного и образованием ЦИК.

Внимание! Иногда в ходе ИФА получаются ложноположительные результаты. Такое бывает при иммунодефицитных состояниях, хронических болезнях, во время лечения антибиотиками, химиотерапии или при наличии сопутствующих патологий.

Наиболее информативным методом исследования считается анализ фекалий. Если в кале обнаружены яйца паразита, то это является достоверным подтверждением глистных инвазий. Однако отсутствие яиц не гарантирует, что человек не болен, поскольку на начальной стадии неполовозрелые особи не могут размножаться. Также на наличие гельминтов можно исследовать желчь.

Важно! Анализ кала может быть информативным только с 3-4 недели от начала инфицирования, когда глисты разовьются до половозрелых особей. Яйца червя двуустки всегда обнаруживаются в кале при хроническом течении недуга.

Более того, однократно сделанный анализ не всегда будет информативным, ведь яйца появляются в фекалиях с определенной регулярностью. Поэтому кал на анализ сдают от трех до 6 раз с интервалом в пару дней.

Не менее информативным будет исследование кала методом ПЦР. Даная методика исследования будет информативной независимо от стадии недуга, поскольку в исследуемом материале обнаруживают частицы ДНК паразита, а не его яйца. Преимуществом полимеразной цепной реакции является и то, что кал на анализ нужно сдать только пару раз с промежутком в 7-14 дней.

Не менее важно знать, как сдавать анализ на описторхоз, поскольку от этого зависит точность результатов. Важно следовать таким указаниям:

1. Сбор фекалий лучше произвести утром незадолго до их сдачи.
2. За 24 ч до этого лучше не употреблять лекарства и алкоголь.
3. На анализ нужен свежий кал, а не тот, который хранился в холодильнике.
4. Для сбора фекалий лучше использовать специальную стерильную емкость (она продается в аптеке).
5. Не стоит применять слабительное, поскольку это отразится на результатах анализов.

Расшифровка анализов на описторхоз

Что касается ОАК, то на инфицирование паразитом могут указывать такие отклонения в результатах:

• эозинофилы в норме не могут превышать 5 %;
• лейкоцитоз (у взрослых и детей соответственно выше 8х10⁹ и 10х10⁹);
• эритроциты в норме должны быть выше 3,5 млн/мл;
• норма по гемоглобину составляет 120 г/л.

100-процентный положительный результат может быть только при обнаружении в кале яиц паразита. Если же ИФА дал положительный результат, но в исследуемом материале (желчи и кале) яйца не обнаружены, то это может указывать на следующее:

• небольшой очаг поражения, поэтому не во всех участках фекалий содержатся яйца;
• такое бывает на начальной стадии недуга, когда паразит еще не размножается;
• пациент сам или с помощью медикаментов излечился;
• лабораторная ошибка.

Внимание! Если результаты всех исследований отрицательные, а симптомы недуга сохраняются, необходимо сдать все анализы повторно.

Что касается нормы по специфическим иммуноглобулинам, то она следующая:

• антитела группы А – от 0,7 до 4 г/л;
• антитела группы G – от 7 г/л, но не больше 16 г/л;
• иммуноглобулины типа М – от 0,4 г/л, но не более 2,3 г/л.

В 1-1,5 % случаев получаются ложноположительные результаты по методу ИФА. Особенно часто такое бывает у пациентов с различными аллергическими заболеваниями, патологиями ЖКТ, болезнями гепатобилиарной системы. Довольно большой процент ложноположительных реакций приходится на долю других паразитарных заболеваний (токсокароз, эхинококкоз, трихинеллез и фасциолез).

Чем опасен описторхоз

Описторхоз начинает проявлять себя через 2-4 недели после заражения. При острой форме наблюдаются такие симптомы:

1. Лихорадка (повышение температуры до 38-40 градусов).
2. Головная боль.
3. Тошнота, рвота.
4. Повышенное потоотделение.
5. Ломота суставов, мышечные боли.
6. Увеличение печени, реже селезенки.
7. Желтушность склер.

Хронический описторхоз проявляется приступами боли в правом подреберье, тяжестью в желудке, нарушениями стула, желтухой. Заболевание может протекать без симптомов. Токсины, которые выделяют сосальщики в ходе жизнедеятельности, оказывают пагубное влияние на нервную систему. Поэтому описторхоз сопровождается нарушениями сна, повышенной утомляемостью и раздражительностью.

При первом появлении перечисленных симптомов, необходимо обращаться к врачу, сдавать анализы на паразитов. Своевременная диагностика и комплексная терапия, позволят избежать осложнений описторхоза – гнойного холангита, хронического гепатита, цирроза, злокачественной трансформации клеток печени.

Виды анализов на описторхоз

Диагноз описторхоз нельзя поставить только на основе клинических проявлений. Симптомы заболевания неспецифичны. Диагностику заболевания проводят следующими методами:

Будьте осторожны

По статистике более 1 миллиарда человек заражено паразитами. Вы даже можете не подозревать, что стали жертвой паразитов.

Определить наличие паразитов в организме легко по одному симптому — неприятному запаху изо рта. Спросите близких, пахнет ли у вас изо рта утром (до того, как почистите зубы). Если да, то с вероятностью 99% вы заражены паразитами.

Заражение паразитами приводит к неврозам, быстрой утомляемости, резкими перепадами настроениями, в дальнейшим начинаются и более серьезные заболевания.

У мужчин паразиты вызывают: простатит, импотенцию, аденому, цистит, песок, камни в почках и мочевом пузыре.

У женщин: боли и воспаление яичников. Развиваются фиброма, миома, фиброзно-кистозная мастопатия, воспаление надпочечников, мочевого пузыря и почек. А так же сердечные и раковые заболевания.

Сразу хотим предупредить, что не нужно бежать в аптеку и скупать дорогущие лекарства, которые, по словам фармацевтов, вытравят всех паразитов. Большинство лекарств крайне неэффективны, кроме того они наносят огромный вред организму.

Что же делать? Для начала советуем почитать статью с главного института паразитологии Российской Федерации. В данной статье раскрывается метод, с помощью которого можно почистить свой организм от паразитов без вреда для организма. Читать статью >>>

1. Сбор анамнеза (нахождение больного в очаге инфекции, употребление сырой, вяленой рыбы, суши, моллюсков).
2. Анализ кала. Яйца сосальщиков появляются в каловых массах через 5-6 недель после инфицирования.
3. Серологические тесты (исследования крови) – иммуноферментный анализ (ИФА), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), полимеразная цепная реакция (ПЦР).
4. Печеночные пробы (биохимия крови).
5. Анализ желчи.
6. Эндоскопия желчных и панкреатических протоков. Позволяет обнаружить взрослых червей.
7. УЗИ, КТ, МРТ печени и желчных протоков.

Анализы сдаются комплексно для получения наиболее полной картины развития инфекции. Иногда диагностика занимает 1-1,5 месяца.

Особенности исследования кала

Сосальщики начинают откладывать яйца через месяц после инфицирования человека. Яйца выходят с каловыми массами, также их можно обнаружить в дуоденальном соке. Поэтому важно провести комплексное исследование.

Традиционно анализ на описторхоз фекалий проводят с помощью микроскопа. Образец обрабатывают химическими реагентами, рассматривают на предмет наличия яиц паразита. Обычно нужно провести анализ нескольких проб, сосальщики откладывают яйца нерегулярно и в разных количествах.

Более продвинутым методом исследования кала является полимеразная цепная реакция (ПЦР). С помощью ПЦР расшифровывают последовательности фрагментов чужеродной ДНК в образце, определяют вид паразита.

ПЦР анализ на описторхоз, как правильно сдавать:

1. За несколько дней до сдачи материала необходимо перестать употреблять слабительные средства, ставить ректальные свечи.
2. Сбор материала проводят в стерильный контейнер с палочкой. Емкость нельзя споласкивать водой и мыть с мылом.
3. Контейнер заполняют калом на треть объема. Использовать клизмы для облегчения дефекации запрещено. Нельзя чтобы в образец попадала моча.

Образцы кала желательно собрать с утра и сразу отнести в лабораторию для исследования. Недостаток ПЦР – нельзя определить концентрацию чужеродных организмов.

Анализы крови на описторхоз

По крови определяют наличие инфекции, ее локализацию, стадию развития. Во время диагностики описторхоза обязательно берут кровь для общего и биохимического исследования. На что обращают внимание:

1. Уровень эозинофилов. Это молодые формы иммунных клеток. При нормальном состоянии здоровья их концентрация в крови небольшая. Повышение уровня эозинофилов указывает на воспалительный процесс.
2. Уровень свободного и связанного билирубина. Билирубин – продукт распада гемоглобина, один из главных компонентов желчи. При закупорке желчных протоков паразитами вещество выбрасывается в кровь.
3. Уровень активности ферментов — щелочной фосфатазы, трансаминаз. В норме они работают в клетках печени, осуществляя процессы распада и синтеза. Когда гепатоциты разрушаются из-за деятельности сосальщиков, ферменты попадают в кровь.

Кровь на описторхоз сдают в утреннее время, натощак. Общий анализ крови указывает на наличие в организме воспалительного процесса или аллергии. Биохимические исследования помогают определить степень поражения органов. Для выявления чужеродных агентов проводят анализ крови на антитела.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ крови на описторхоз позволяет обнаружить иммуноглобулины (антитела) к возбудителям заболевания. Антитела начинают синтезировать с первых часов после попадания в организм антигенов. Первоначально иммунный ответ обеспечивают IgM. Через некоторое время (3-4 недели) в кровь поступают IgG, которые отвечают за длительную иммунную реакцию. Концентрация IgG достигает максимума на 3-4 месяц после заражения, может держаться на том же уровне больше года. При длительном отсутствии лечения, иммунная система ослабевает, синтез антител снижается.

Если при первых симптомах описторхоза, провели ИФА крови, обнаружили иммуноглобулины IgM, анализ кала и дуоденального содержимого проводят через 1-1,5 месяца. Если обнаружили IgG, кал и сок двенадцатиперстной кишки исследуют сразу.

Результаты иммуноферментного анализа могут быть ложноположительными и ложноотрицательными, поэтому обязательно проводят комплексную диагностику.

Наши читатели пишут

Последние несколько лет чувствовала себя очень плохо. Постоянная усталость, бессонница, какая-то апатия, лень, частые головные боли. С пищеварением тоже были проблемы, утром неприятный запах изо рта.

Все это начало скапливаться и я поняла, что двигаюсь в каком-то не том направлении. Стала вести здоровый образ жизни, правильно питаться, но на мое самочувствие это не повлияло. Врачи тоже ничего толком сказать не могли. Вроде как все в норме, но я то чувствую что, мой организм не здоров.

Потом я пошла в одну дорогую клинику и сдала все анализы, так вот в одном из анализов у меня обнаружили паразитов. Это были не обычные глисты, а какой-то определенный вид, которым, по словам врачей, заражен практически каждый, в большей или меньшей степени. Вывести из организма их практически невозможно. Я пропила курс противопаразитных лекарств, которые назначили мне в той клиники, но результата почти не было.

Через пару недель я наткнулась на одну статью в интернете. Эта статья буквально изменила мою жизнь. Сделала все, как там написано и уже через несколько дней, я почувствовала, значительные улучшения в своем организме. Стала высыпаться намного быстрее, появилась та энергия, которая была в молодости. Голова больше не болит, появилась ясность в сознании, мозг стал работать намного лучше. Пищеварение наладилось, несмотря на то, что питаюсь я сейчас как попало. Сдала анализы и убедилась в том, что больше во мне никто не живет!

Кто хочет почистить свой организм от паразитов, причем неважно, какие виды этих тварей в вас живут — прочитайте эту статью, уверена на 100% вам поможет!

Исследование желчи на описторхоз

Анализ на описторхоз желчи проводят с помощью метода дуоденального зондирования. Сначала в двенадцатиперстную кишку вводят специальное вещество, которое стимулирует сокращение желчного пузыря, открытие сфинктера и выход желчи из протока. Выделенная жидкость засасывается в трубку зонда.

Накануне процедуры зондирования нельзя употреблять в пищу свежие овощи и фрукты, картофель, молоко, черный хлеб. Эти продукты стимулируют газообразование.

С помощью зонда собирают три порции дуоденального содержимого – А, В, С. Часто забор материала затруднен из-за закупорки желчных протоков. Желчь помещают в центрифугу, чтобы высадились твердые частицы. Осадок рассматривают под микроскопом на предмет наличия яиц описторхов.

Анализ желчи имеет гораздо большее диагностическое значение, чем анализ кала или крови. В фекалиях не всегда можно обнаружить яйца паразита, а ИФА крови может давать ложные результаты, из-за наличия в организме дополнительных инфекций.

Дополнительные исследования

Основными методами, с помощью которых можно определить описторхоз, являются анализы желчи, кала и крови. Дополнительно также проводят:

1. Ультразвуковое исследование печени и желчных протоков. Позволяет оценить степень воздействия паразитов на орган. В острой фазе заметно увеличение просвета желчных протоков, в хронической фазе протоки сужены, а сам желчный пузырь увеличен.
2. Эндоскопия желчных протоков (РХГП – ретроградная панкреатохолангиография). Метод позволяет выявить в протоках желчного пузыря и поджелудочной железы взрослых особей паразита.
3. Компьютерная томография (КТ) и магнитно-резонансная томография (МРТ). Проводится комплексное исследование брюшной полости, можно заметить изменения в печени, протоках и поджелудочной железе.

Эндоскопия проводится на голодный желудок. Перед проведением исследований нужно строго соблюдать все рекомендации лечащего врача.

Как расшифровать анализы на описторхоз

Расшифровку анализов проводит лечащий врач. Самодиагностику проводить не стоит. Результаты клинических исследований могут быть такими:

1. Анализ кала на яйца паразитов. Меньше 100 яиц на 1 грамм материала — описторхоз в легкой степени, больше 30 000 – описторхоз в крайне тяжелой степени.
2. Общий анализ крови. В острой фазе заболевания наблюдается эозинофилия.
3. Биохимический анализ крови. При описторхозе в крови повышенный уровень билирубина, активность печеночных ферментов.
4. Иммуноферментный анализ. Высокие титры свидетельствуют о наличие в организме чужеродных агентов. Повышенная концентрация IgM свидетельствует о начальной стадии заболевания, появление в крови IgG – описторхоз в хронической форме.
5. Исследование дуоденального содержимого. Степень заражения определяется по количеству яиц описторхиса. О застое желчи может свидетельствовать повышенный уровень холестерина и кристаллов кальция.

После установки точного диагноза лечащий врач назначает комплексное лечение, которое занимает обычно несколько месяцев.

Описторхоз – неприятное заболевание, которое может привести к серьезным последствиям. Инфицированию одинаково подвержены взрослые и дети. Заразиться паразитами можно, употребляя в пищу плохо обработанную рыбу. Симптомы заболевания часто путают с холециститом, болезнями печени или поджелудочной. Своевременная диагностика – анализ на описторхоз кала, крови, желчи, УЗИ печени, эндоскопия, помогут навсегда избавиться от паразитов и избежать осложнений.

Аннотация научной статьи по прочим медицинским наукам, автор научной работы — Старостина Ольга Юрьевна, Панюшкина И. И.

С целью сравнительной оценки эффективности лабораторных методов диагностики описторхозной инвазии проводилось исследование образцов сыворотки крови и копроматериала от людей. Для паразитологической диагностики применялся метод толстого мазка под целлофановой пленкой по Като-Миура и седиментационный метод уксусно-эфирного осаждения. Для серологической диагностики использовали метод иммуноферментного анализа. Анализ частоты обнаружения яиц описторхисов в копроматериале и уровня противоописторхозных антител в образцах сыворотки крови пациентов показал наличие сильной прямой корреляционной связи между этими показателями. Показано, что для лабораторной диагностики описторхоза нельзя ограничиваться каким-либо одним методом. Установлено, что на территориях со средним и низким уровнем инвазированности населения описторхисами целесообразно использовать комплекс методов, включающий исследование сыворотки крови на наличие специфических иммуноглобулинов к антигенам описторхисов и дву-или троекратное исследование кала двумя копроовоскопическими методами.

Похожие темы научных работ по прочим медицинским наукам , автор научной работы — Старостина Ольга Юрьевна, Панюшкина И. И.

THE COMPARATIVE CHARACTERISTIC OF METHODS OF LABORATORY DIAGNOSTIC OF OPISTHORCHIASIS

The analysis of samples of blood serums and copromaterial from patients was carried out to evaluate effectiveness of diagnostic of opisthorchiasis invasion. The Kato-Miura technique of thick film under cellophane layer and sedimentation technique of acetic etheric precipitation were applied for parasitologic diagnostic. The technique of immunoenzymometric analysis was applied for serological diagnostic. The analysis of detection rate of eggs of opistorchis in copromaterial and level of anti-opistorchis antibodies in samples of blood serum of patients demonstrated the presence of strong direct correlation relationship between these indicators. It is demonstrated that for laboratory diagnostic of opisthorchiasis it is impossible to limit oneself to some single technique. It is established that on the territories with middle and low level of population infection rate of opistorchis it is appropriate to apply complex of methods including analysis of blood serum for presence of specific immunoglobulins to antigens of opistorchis and twice or thrice analysis of feces with copro-ovoscopic methods.

О.Ю. Старостина, И.И. Панюшкина

сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики описторхоза

С целью сравнительной оценки эффективности лабораторных методов диагностики описторхозной инвазии проводилось исследование образцов сыворотки крови и копроматериала от людей. Для паразитологической диагностики применялся метод толстого мазка под целлофановой пленкой по Като-Миура и седиментационный метод уксусно-эфирного осаждения. Для серологической диагностики использовали метод иммуноферментного анализа. Анализ частоты обнаружения яиц описторхисов в копроматериале и уровня противоописторхозных антител в образцах сыворотки крови пациентов показал наличие сильной прямой корреляционной связи между этими показателями. Показано, что для лабораторной диагностики описторхоза нельзя ограничиваться каким-либо одним методом. Установлено, что на территориях со средним и низким уровнем инвазированности населения описторхисами целесообразно использовать комплекс методов, включающий исследование сыворотки крови на наличие специфических иммуноглобулинов к антигенам описторхисов и дву-или троекратное исследование кала двумя копроовоскопическими методами.

Ключевые слова: описторхоз; копроовоскопия; лабораторная диагностика гельминтозов. O.Yu. Starostina, I.I. Panushkina

THE COMPARATIVE CHARACTERISTIC OF METHODS OF LABORATORY DIAGNOSTIC OF OPISTHORCHIASIS

The Omsk research institute of naturofocal infections of Rospotrebnadzor, 644080 Omsk, Russia

The analysis of samples of blood .serums and copromaterial from patients was carried out to evaluate effectiveness of diagnostic of opisthorchiasis invasion. The Kato-Miura technique of thick film under cellophane layer and sedimentation technique of acetic etheric precipitation were applied for parasitologic diagnostic. The technique of immunoenzymometric analysis was applied for serological diagnostic. The analysis of detection rate of eggs of opistorchis in copromaterial and level of anti-opistorchis antibodies in samples of blood serum of patients demonstrated the presence of strong direct correlation relationship between these indicators. It is demonstrated that for laboratory diagnostic of opisthorchiasis it is impossible to limit oneself to some single technique. It is established that on the territories with middle and low level of population infection rate of opistorchis it is appropriate to apply complex of methods including analysis of blood serum for presence of specific immunoglobulins to antigens of opistorchis and twice or thrice analysis of feces with copro-ovoscopic methods.

Keywords: opisthorchiasis, copro-ovoscopy, laboratory diagnostic of opisthorchiasis

Введение. Одним из разделов эпидемиологического надзора за гельминтозами является совершенствование лабораторных методов диагностики и внедрение их в практику. В клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений в большинстве случаев используются малоэффективные методы копроовоскопии, которые не выявляют инвазии низкой интенсивности [1].

Описторхоз (возбудитель Opisthorchis felineus) является наиболее значимым биогельминтозом на территории Российской Федерации: в общей структуре биогельминтозов на его долю приходится 74,4%. Ежегодно на территории Российской Федерации регистрируется около 35 тыс. больных описторхозом. Наиболее неблагополучными являются Ханты-Мансийский (614,1 на 100 тыс. населения), Ямало-Ненецкий (279,8) автономные округа, Тюменская (211,6), Томская (222,2), Новосибирская (116,6), Омская (158,9) области. В 2011 г. показатель заболеваемости описторхозом по Сибирскому федеральному округу составил 70,5 на 100 тыс. населения при среднефедеративном уровне 22,4 [2].

Для корреспонденции: Старостина Ольга Юрьевна, науч. сотр. Адрес: 644080, Омск, прсп. Мира, 7. E-mail : [email protected]

В Омской области на описторхоз приходится 99,4% случаев от общего числа зарегистрированных гельминтозов [3].

С учетом существенной социально-экономической значимости описторхоза, его широкой распространенности на территории Обь-Иртышского бассейна, интенсификации миграции населения, в том числе из неблагополучных по опи-сторхозу регионов, оптимизация применения лабораторных методов диагностики с целью наиболее полного выявления инвазированных лиц приобретает важное значение.

Цель работы - оценка эффективности серологических и копроовоскопических методов диагностики описторхоза на территории со средним и низким уровнем инвазированности населения.

90 80 70 60 50 40 30 20 10 О

200 400 600 Обратные титры IgG

Зависимость частоты обнаружения яиц описторхисов от титров специфических иммуноглобулинов (1§О).

инструкцией. Одновременное исследование копроматериала и сывороток крови проведено у 396 пациентов с подозрением на описторхозную инвазию, направленных на обследование из лечебно-профилактических учреждений г. Омска. Статистическая обработка полученных результатов исследования проводилась с использованием программы Statistica 6.0.

Результаты и обсуждение. Антитела к антигенам описторхисов выявлены у 233 (58,8 ± 2,5%) человек, из них ^О в титрах 1:100-1:3200 - у 208 (89,3 ±_2,0% от числа серопози-тивных лиц), у 17 (7,3 ± 1,7% от числа серопозитивных лиц) выявлены одновременно 1§О и IgМ в титрах 1:200-1:800, у 8 (3,4 ± 1,2%) пациентов обнаружены только IgМ. При ко-проовоскопическом исследовании методом уксусно-эфирного осаждения, описторхоз подтвержден у 148 человек из 233 серопозитивных лиц, т. е. у 63,5 ± 3,1% от всех серопозитивных лиц. Подавляющее большинство пациентов копроовоскопиче-ски обследовались однократно. Дву- или троекратно методом уксусно-эфирного осаждения обследовано 26 человек: 13 пациентов, у которых выявлены антитела к описторхисам в титрах 1:100-1:800 и 13 пациентов с отрицательным результатом ИФА. При дополнительном обследовании яйца описторхисов обнаружены у двух пациентов с положительным результатом ИФА (с титрами 1:400) во второй порции копроматериала в количестве 5 и 2 я/г и у одного пациента с отрицательным результатом ИФА в 4-й порции в количестве 1 я/г У 85 серо-позитивных пациентов исследование кала методом уксусно-эфирного осаждения дало отрицательный результат.

При исследовании копроматериала от 163 пациентов с отрицательными результатами ИФА яйца О. felineus обнаружены у 31 человека, т. е. у 19,0 ± 3,1% от числа серонегативных лиц.

Анализ частоты обнаружения яиц описторхисов в копрома-териале и уровня противоописторхозных антител в сыворотках крови пациентов показал наличие сильной прямой корреляционной связи между этими показателями (г = 0,86). Яйца опи-сторхисов чаще встречались в копроматериале лиц с высокими титрами специфических антител в сыворотке крови. В группе серопозитивных лиц с титром 1§О 1:100, яйца описторхисов обнаружены только у 50%, то среди пациентов с уровнем 1§О 1:400-1:800 - уже у 78,2 и 80% соответственно (см. рисунок).

Отсутствие яиц описторхисов при наличии специфических антител частично можно объяснить давностью заражения, небольшим количеством паразитов, недостаточной эффективностью копроовоскопического обследования. Нельзя забывать и о возможных ложноположительных реакциях у части обследованных. Ложноположительные результаты в ИФА с опи-сторхозным антигеном связаны с наличием у описторхисов антигенных детерминант, общих с некоторыми гельминтами (эхинококки, фасциолы, дикроцелии и др.), другими микроорганизмами и собственными антигенами хозяина 7. Возможно существование еще одной причины: В.И. Иванских и

В.В. Близнюк [8] обнаружили, что при экспериментальном заражении хомячков описторхисами и вирусом простого герпеса 2-го типа (ВПГ-2) наблюдается отсутствие яиц в матке гельминтов и поражение семенников у 10-40% описторхисов, выделенных от зараженных животных. Не исключено, что вирусы ВПГ-1, ВПГ-2, ЦМВ, инфицированность населения которыми достигает 90%, могут проникать в паразитирующие у человека описторхисы, вызывая у них аналогичные изменения, что затрудняет постановку паразитологического диагноза.

Применение какого-то одного копроовоскопического метода, даже такого высокоэффективного, как метод уксусно-эфирного осаждения, на территориях с низким и средним уровнем инвазированности населения, к которым относится Омская область, не всегда дает удовлетворительные результаты. Средний уровень яйцепродукции (косвенно указывающий на интенсивность инвазии) у инвазированных, проживающих в г. Омске и на юге Омской области, достаточно низкий и составляет, по нашим данным, в среднем 33,1 ± 5,7я/г у серопозитивных лиц и 9,6 ± 2,3 я/г у серонегативных.

С целью сравнительной оценки информативности ко-проовоскопических методов было проведено обследование 411 жителей г. Омска и Омской области с параллельным использованием метода уксусно-эфирного осаждения и метода Като-Миура. У 26 (6,3 ± 4,8%) человек яйца описторхисов выявлены как методом уксусно-эфирного осаждения, так и методом Като-Миура. У 8 (1,95 ± 4,9%) человек яйца гельминтов обнаружены только при использовании для копро-овоскопии метода уксусно-эфирного осаждения и не обнаружены при просмотре толстых мазков под целлофаном. В то же время, у 4 (0,97 ± 4,9%) человек яйца описторхисов выявлены только при просмотре копроматериала методом Като-Миура, а эфирно-уксусный метод дал отрицательный результат. Всего при использовании одновременно двух методов паразитологической диагностики описторхоза выявлено 38 (9,2 ± 4,7%) инвазированных лиц.

Для лабораторной диагностики описторхоза нецелесообразно ограничиваться каким-либо одним методом. Метод ИФА кажется более эффективным, однако постановка диагноза на основании только этого теста неправомочна из-за высокой вероятности ложноположительных и ложноотри-цательных результатов [7, 9]. Среди паразитологических методов диагностики описторхоза не существует метода, обладающего 100% чувствительностью.

Заключение. На территориях со средним и низким уровнем инвазированности населения описторхисами целесообразно использовать комплекс методов, включающий исследование сыворотки крови на наличие специфических иммуноглобулинов к антигенам описторхисов и дву-троекратное исследование кала двумя указанными выше копроовоскопи-ческими методами, что позволит повысить качество диагностики описторхозной инвазии.

1. Гузеева Т.М. Состояние заболеваемости паразитарными болезнями в Российской Федерации в условиях реорганизации службы.

Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2008; 1: 3-11.

2. Заболеваемость протозоозами и гельминтозами населения Российской Федерации в 2010—2011 гг. Информационный сборник статистических и аналитических материалов. М., 2012.

4. Лабораторные методы диагностики паразитарных заболеваний. МУК 4.2.735-99. М.: Минздрав России; 2000.

5. Лепехин А.В., Ратнер Г.М., Менявцева Т.А. Перекрестно реагирующие антигены Opisthorchis felineus и Salmonella typhi и их возможное влияние на клиническое течение брюшного тифа. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1990; 4: 33-6.

6. Ратнер Г.М., Кускова З.Р., Менявцева Т.А., Стручкова С.В. О наличии антигенной общности у O. felineus c белками сыворотки крови человека. В кн.: Описторхоз. Современное состояние проблемы, перспективы развития: Сборник тезисов юбилейной конференции. Тюмень; 1991: 204-6.

7. Серологические методы лабораторной диагностики паразитарных заболеваний. МУ 3.2.1173-02. М.: Минздрав России; 2003.

8. Иванских В.И., Близнюк В.В. Влияние описторхисов на проявления вирусов герпеса второго типа в эксперименте и их возможное участие в механизме возникновения первичного рака печени. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1996; 2: 23 - 6.

9. Актуальные биогельминтозы и протозоозы в Западной Сибири (эпидемиология, биология, диагностика, профилактика). Методические рекомендации. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; 2008.

1. Guzeeva T.M. State incidence of parasitic diseases in the Russian Federation in the reorganization of the service. Medicinskaja parazitologija i parazitarnye bolezni. 2008; 1: 3-11 (in Russian).

2. Morbidity protozoozami and worm infections in the Russian Federation in 2010-2011. Informatsionnyj sbornik statisticheskikh i analiticheskikh materialov. Moscow; 2012 (in Russian).

4. Laboratory methods for diagnosis of parasitic diseases. MUK 4.2.73599. Moscow: Minzdrav Rossii; 2000 (in Russian).

5. Lepehin A.V., Ratner G.M., Menjavtseva T.A. Cross-reactive antigens of Opisthorchis felineus and Salmonella typhi and their potential impact on the clinical course of typhoid fever. Meditskinskaja parazitologija i parazitarnye bolezni. 1990; 4: 33-6 (in Russian).

6. Ratner G.M., Kuskova Z.R., Menjavceva T.A., Struchkova S.V. The presence of an antigen common O.felineus with proteins of human blood serum. In: Opistorhoz. Sovremennoe sostojanie problemy, perspektivy razvitija: Sbornik tezisov jubilejnoj konferentsii. Tjumen'; 1991: 204-6 (in Russian).

7. Serological methods for the laboratory diagnosis of parasitic diseases. MU 3.2.1173-02. M.: Minzdrav Rossii; 2003 (in Russian).

8. Ivanskih V.I., Bliznjuk V.V. Influence of opistorhis on the manifestation second type of herpes virusin the experiment, and their possible involvement in the mechanism of primary liver cancer. Meditsinskaja parazi-tologija i parazitarnye bolezni. 1996; 2: 23-6 (in Russian).

9. Actual biogelmintozy and protozoozy in Western Siberia (epidemiology, biology, diagnosis, prevention). Metodicheskie rekomendatsii. M.: Federal'naja sluzhba po nadzoru v sfere zashchity prav potrebitelej i blagopoluchija cheloveka; 2008 (in Russian).

О.Ю. Сильвейстрова, Э.А. Домонова, О.Ю. Шипулина

валидация набора реагентов для количественного определения ДНК цитомегаловируса человека в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

Ключевые слова: валидация; количественное определение ДНК; Cytomegalovirus hominis; цитомегаловирус человека; ЦМВ; международный стандарт ВОЗ; ПЦР в режиме реального времени.

O.Yu. Silveiystrova, E.A. Domonova, O.Yu. Shipulina

THE VALIDATION OF KIT OF REAGENTS FOR QUANTITATIVE DETECTION OF DNA OF HUMAN CYTOMEGALOVIRUS IN BIOLOGICAL MATERIAL USING POLYMERASE CHAIN REACTION TECHNIQUE IN REAL TIME OPERATION MODE

The central research institute of epidemiology of Rospotrebnadzor, 111123 Moscow, Russia

The validation of kit of reagents destined to detection and quantitative evaluation of DNA of human cytomegalovirus in biological material using polymerase chain reaction technique in real time operation mode was implemented. The comparison was made against international WHO standard - The first WHO international standardfor human cytomegalovirus to implement measures the kit ofreagents "AmpliSens CMV-screen/monitor-FL" and standard sample of enterprise DNA HCMV (The central research institute of epidemiology ofRospotrebnadzor) was applied. The fivefold dilution of international WHO standard and standard sample of enterprise were carried out in concentrations of DNA HCMV from 106 to 102. The arrangement of polymerase chain reaction and analysis of results were implemented using programed amplifier with system of detection offluorescent signal in real-time mode "Rotor-Gene Q " ("Qiagen ", Germany). In the total ofthree series of experiments, all stages of polymerase chain reaction study included, the coefficient of translation of quantitative evaluation ofDNA HCMV from copy/ml to ME/ml equal to 0.6 was introducedfor this kit of reagents.

Keywords: validation, quantitative evaluation, DNA, cytomegalovirus hominis, human cytomegalovirus, international WHO standard, polymerase chain reaction, real-time mode

Для корреспонденции: Сильвейстрова Ольга Юрьевна, мл. науч. сотр. Адрес: 111123, Москва, ул. Новогиреевская, 3а. E-mail: [email protected]

В настоящее время во многих научно-исследо-вательских и клинико-диагностических лабораториях для диагностики цитомегаловирусной (ЦМВ) инфекции применяются современные методы анализа, основанные на полимеразной