Яйца гельминтов на объектах внешней среды

Исследования отечественных ученых показали, что из всех объектов внешней: среды почва наиболее часто загрязняется яйцами гельминтов..

Интенсивность обсеменения яйцами гельминтов почвы во многом зависит от санитарного благоустройства населенных мест (наличие уборных, канализации, плановой регулярной очистки); уровня санитарной культуры населения; пораженности населения гельминтозами; эффективности методов очистки: и обеззараживания фекалий, мусора, сточных вид и их осадков, норм и способов внесения нечистот в качестве удобрения в почву, сезона года.

Больше всего яиц гельминтов обнаруживается в почве дворов и огородов весной и осенью, меньше - летом. Например, В. П. Волосюк не находил яиц аскарид в почве дворов, в летние месяцы, тогда как в почве огородов они выявлялись ежемесячно. С. А. Алахвердянц обнаруживала яйца аскарид в почве микроочагов Ашхабада в течение 10 месяцев, но наибольшее число их выявлялось в течение 6 месяцев. В. Ф. Бурмакина обнаруживала яйца аскарид в почве дворов предгорных очагов аскаридоза в Таджикистане: весной - в 46,4%, летом - в 5,4%, осенью -в 13,9%, зимой - в 34,3% случаев от исследованных проб. Такие показатели связываются с увеличением или уменьшением в это время скопления нечистот на данных участках почвы, гибелью значительной части яиц гельминтов в почве в летнее время. Несколько иная закономерность в обсеменении яйцами гельминтов почвы отмечается на полях орошения: наибольшая - летом, наименьшая - весной. Ч. Л. Ленкаускайте выявила, что в процессе орошения сточными водами процент проб почвы, обсемененных яйцами, ежегодно возрастал: в 1965 г.- на 5,6, в 1966 г. - на 14,1, в 1967 г. на 31, в 1968 г.на 41,7. Г. Ц. Полежаева указывала, что максимальная интенсивность обсеменения яйцами гельминтов почвы во Владивостоке и его пригородах была весной (151,9 яйца на 1 кг) и осенью (124 яйца на 1 кг), а минимальная - летом (69 яиц на 1 кг).

Наличие яиц гельминтов в воде водоемов (рек, морей, озер), а также в талых и дождевых водах показано Т. К. Доценко, который обнаружил в 235 л воды из реки Самары (г. Куйбышев) 145, а в 435 л воды из реки Волги -647 яиц, в основном аскарид, власоглавов, лентеца широкого, кроме того, тениид, карликового цепня. А. С. Артамошин, исследовав 49 проб воды и грунта Волгоградского водохранилища, выявил яйца дифиллоботриоза. И. Я. Михайленко находил яйца гельминтов в воде у пристаней Куйбышевского водохранилища в 35,5%, Самарской Луки - в 43%, населенных пунктов - в 88,3 и 49,5% от исследованных проб соответственно. Г. Ц. Полежаева обнаруживала в водоемах в районе Владивостока яйца аскарид в 8,6% проб, с содержанием их от 0,2 до 0,4 в 1 л; в морской воде были единичные находки яиц. Наличие яиц гельминтов в талых и дождевых водах (до 3,8 - 4,1 в 1 л) было отмечено в Томской и Киевской областях, Свердловской области, Куйбышевской области. В сточной воде встречаются яйца тех видов гельминтов, которыми заражены население и животные данной местности. Содержание яиц, гельминтов в сточных водах колеблется в широких пределах. Так, 3. Г. Василькова обнаруживала в 1 л сточных вод Тулы и Москвы 130-1933 яиц, Г. Ш. Гуджабидзе в Московской области до 29-144, Р. Н. Гагарина в Алма-Ате -48-67, М. 3. Нифтуллаев в Кировабаде-3,7-11. Содержание яиц гельминтов в сточных водах непостоянно: оно колеблется как в течение суток (больше всегоих обнаруживается в утренние и вечерние часы), так и по сезонам года - наибольшее в осенне-зимне-весенний, наименьшее - в летний период.

Обсемененность яйцами гельминтов жидкого навоза значительно больше, чем сточных вод. Так, А. А. Черепанов обнаруживал в 1 л жидкого навоза свыше 25 000 яиц аскарид, 13 000 яиц власоглавов, 12 000 яиц стронгилят. В 1976 г. А. А. Черепанов впервые обнаружил в жидком навозе свинокомплекса "Калитянский" яйца крысиного цепня в 67% исследованных проб. Несмотря на широко проведенные мероприятия по оздоровлению животных на "Калитянском" свинокомплексе (Киевская область), в 1 л жидкого навоза обнаруживалось 20-160 яиц гельминтов.

Установлено, что салат, лук, огурцы, помидоры, клубника, поступающие в города через торговую сеть, колхозные рынки, в значительной степени обсеменены яйцами гельминтов, среди которых обнаруживались и инвазионные. Например, в Архангельской области на 1 кг овощей приходилось до 3,2 яйца гельминтов при 26,7% положительных проб.

Н. А. Романенко отмечал, что культивирование на земледельческих полях орошения Калининграда овощей приводит их к загрязнению яйцами гельминтов, в среднем на 1 кг: трава -3,7 -6,4; свекла-1,4 -3,2; морковь - 2,3 - 2,9; огурцы-0,9-1,3; редис -2,1-2,6; капуста- 0,9-1,3. Во Владивостоке яйца гельминтов обнаруживали на клубнике в 20%, редисе - в 11,3%, салате - в 10%, зеленом луке - в 9,8%, моркови в 9,7% от исследованных проб. Число инвазионных яиц гельминтов в 1 кг огородных культур в августе - сентябре составляло 3,5.

Ряд авторов указывают на возможность обсеменения яйцами аскарид, остриц, власоглавов предметов обихода, жилищ, полов, дверных и оконных ручек, постелей. Так, например, В. В. Каледин и Н. А. Романенко обнаруживали на 1 пробу в постели детей до 4 яиц гельминтов, на полу детских учреждений-1,2, стульях -до 3, игрушках-1,5, шторах-1,5. Инвазионные яйца аскарид могут сохранять жизнеспособность в помещении до 26 дней .

Яйца гельминтов обнаруживали и в смывах с рук и подногтевых пространств у детей сразу же после пользования ими горшками или посещения уборной. А. И. Маркарян выявлял яйца аскарид на руках у 68,8% обследованных жителей одного села Армении, Н. А. Романенко при исследовании 27 смывов с рук и подногтевых пространств у поливальщиков на земледельческих нолях орошения в пос. Купавна Московской области в 11 обнаружил 26 яиц аскарид, а в селе Балабаново в 11 из 21 смыва содержалось 25 яиц аскарид, остриц, власоглавов. На обнаружение яиц гельминтов в смывах с рук указывали также Н. И. Хижняк, Э. Л. Зоточкина и другие авторы.

Возможность переноса яиц гельминтов мухами отмечали Е. С. Шульман, С. М. Вишневская. И. Г. Наджафов в результате исследования 5397 экземпляров мух в 5 районах Азербайджана у 382 обнаружил 1796 яиц гельминтов человека: из них 1045 яиц власоглава, 521 - аскарида, 103 - анкилостомид, 70 - карликового цепня и 30 - остриц. Среднее число яиц власоглавов на одну муху составляло 5,6, аскарид - 1-3. Автор сообщает, что часть яиц аскариды, власоглавов и анкилостомид, извлеченных из кишечника мух и помещенных в оптимальные условия, продолжала развиваться и достигала стадии подвижной личинки в 47-68%.

Приведенные данные наглядно указывают на широкое распространение яиц гельминтов на различных объектах внешней среды, что играет большую роль в распространении гельминтозов как среди людей, так и среди животных и является объектом широких плановых мероприятий по охране окружающей среды от загрязнения этим инвазионным материалом.

Гельминтами животные заражаются друг от друга через внешнюю среду – это помещения, предметы ухода, пастбища, навоз, почва, водоёмы, места водопоя, кормления и содержания, промежуточные и резервуарные хозяева гельминтов.

Заражённое гельминтами животное является источником распространения инвазии, а внешняя среда, содержащая яйца и личинки гельминтов, — источник непосредственного заражения животных гельминтами. В связи с этим очень важно проводить в определённые сроки диагностические исследования объектов внешней среды с целью прогнозирования той или иной инвазии.

Исследование почвы . Вблизи животноводческих помещений и на пастбище, с поверхности и глубоких слоёв почвы (до 20 см) берут несколько проб по 50-100 г каждая. Перемешиваем и берём среднюю пробу.

50 г почвы помещаем в центрифужную пробирку на 250 мл, добавляют 150 мл воды, перемешивают до однородной гомогенной массы. Центрифугируем 3 минуты при 600 оборотах в минуту. Воду сливают, а к осадку добавляем 150 мл нитрата натрия (плотность 1,39), перемешиваем и центрифугируем 3 минуты. Можно использовать магния сульфата и хлористого натрия насыщенные растворы. Далее добавляют насыщенный раствор до образования выпуклого мениска, покрывают обезжиренным предметным стеклом и оставляем на 30 минут. Яйца гельминтов всплывают и прилипают к стеклу. Стёкла снимают и наносят на них несколько капель 50 % раствора глицерина, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Можно и без центрифугирования яйца гельминтов оставляют на 1 час и собирают проволочной петлёй, отмывают при неоднократном отстаивании и отсасывают пипеткой верхний слой жидкости. Личинки в почве выявляют методом Бермана. Пробы берут в количестве 200-400 г. Существуют и другие методы исследования почвы, например, (метод обмучивания почвы по М.П.Гнединой) — личинки стронгилят.

Исследование навоза . Подстилочный навоз исследуют также как и почву. Пробы навоза из навозосборников и отстойников рекомендуют брать из 3-5 точек поверхностного, среднего и нижнего слоёв, пробоотборником А.Д.Черепанова и добавляют 3-5капель толуола. Пробы твёрдой фракции берут 100 см 3 , а жидкой 500 или 1000 мл. Затем растирают, фильтруют, центрифугируют. Далее к осадку добавляют раствор натрия нитрата до образования мениска, сверху пробирки покрывают покровным стеклом и через 30 минут микроскопируют. Жидкую фракцию исследуют также.

Исследование травы и сена . Личинки нематод могут мигрировать в вертикальном направлении и горизонтально, по стеблям и листьям растений, но больше их скапливается в прикорневой части стебля. Собранную траву или сено разрезаем на части и исследуем по методу Бермана.

Партениты трематод (адолескариев фасциол, паромфистомат) собирают с растений в биотопах – на влажных участках пастбищ. Их обнаруживают как невооружённым глазом таки под лупой (увеличение в 5-8 раз). Они имеют вид точек диаметром 0,3 мм; молодые адолескарии молочно-белого цвета, позднее они желтеют, а затем становятся буро-коричневыми. При микроскопии находят в цистах подвижных паразитов с двумя присосками, глоткой и кишечными стволами.

Исследование водоёмов . Берут не менее 10 литров воды, профильтруют её через сатин или фильтровальную бумагу. Фильтр помещают в кюветку, а осадок с него соскабливают предметным стеклом, смешивают с несколькими каплями 50 % водного раствора глицерина и просматривают под малым увеличением микроскопа. Если осадок густой, его исследуют по методу Фюллеборна, причём и плёнку поверхностную и осадок.

Во внешней среде (почва, вода) обитают свободноживущие нематоды и их личинки, которых иногда принимают за личинки гельминтов. Для их дифференциации используют раствор формалина. Личинок помещают в воду на часовое стекло или чашку Петри. При добавлении 40 % раствора формалина в соотношении 1 : 25, свободноживущие личинки погибают через 12 минут, а личинки паразитических нематод в 95 % случаев остаются подвижными.

Исследование беспозвоночных различных промежуточных хозяев возбудителей гельминтозов – это моллюски, дождевые черви, насекомые, ракообразные, паукообразные.

Беспозвоночное животное или части его тела кладут на предметное стекло, покрывают другим предметным, сдавливают и микроскопируют. Есть метод ускоренных массовых исследований6

— переваривание промежуточных хозяев в искусственном желудочном соке (соляная кислота 7 мл, пепсина 5 г, воды 100 мл) при температуре 37-39 о С в течение нескольких часов. В осадке остаются живые личинки;

— выявление личинок нематод беспозвоночных (метод Дарлинга).

Исследование моллюсков : в чашке Петри или на часовом стекле вскрывают моллюсков, освобождая их от раковины остроконечными ножницами. Тело расчленяют на части и органы исследуют компрессорным методом. При вскрытии малого прудовика отрезают верхушку раковины, где находится печень и в ней развиваются подвижные церкарии молочного цвета похожие на головастика. Они имеют ротовую и брюшную присоски, глотку, кишечные стволы. Моллюски являются промежуточными хозяевами трематод и некоторых видов нематод.

Исследование насекомых . Муравьёв собирают вблизи муравейников на растениях в оцепеневшем состоянии. Брюшко отделяем, а затем в капле воды расщепляют иглами под микроскопом. В них обнаруживают от единиц до 100 метацеркариев. Муравьи являются промежуточными хозяевами цестод птиц и дополнительными – дикроцелий жвачных и др.

Исследование жуков . Их собирают в густой траве, под навозными кучами, мусором и других местах. Их вскрывают и содержимое тела исследуют компрессорным методом. В брюшной полости жуков локализуются цистицеркоиды цестод птиц. Они яйцевидной формы, 0,5 мм длины, на сколексе – присоски и 1-2 ряда крючьев. Они являются промежуточными хозяевами макроканторинхусов свиней. Личинки их (акантеллы) видны невооружённым глазом, они белого цвета, 3-5 мм длиной.

Исследование мух . Мух, собранных с животных усыпляют эфиром и помещают в каплю физиологического раствора. При помощи препаровальной иглы вскрывают и исследуют компрессорным методом под микроскопом. Личинок телязий находят в брюшке, инвазированных личинок – в хоботке и голове. Мухи-коровницы – промежуточные хозяева телязиоза жвачных и лошадей; муха-жигалка, гематобия – промежуточный хозяин парафилляриоза лошадей. Личинки парафилярий развиваются в полости тела и жировом теле гематобий. Инвазионных личинок обнаруживают в грудном отделе, в голове и хоботке жигалки.

Исследование комаров . Собранных с животных комаров вскрывают иглами на предметном стекле в капле физраствора и исследуют компрессорным методом под микроскопом. Они являются промежуточными хозяевами возбудителя сетариоза лошадей, крупного рогатого скота, буйволов, зебу. Инвазионные личинки сетарий мигрируют в грудки, в головку и хоботок комара.

Исследование мошек и мокрецов производят также как и комаров. Они являются промежуточными хозяевами онхоцерков крупного рогатого скота и лошадей.

Исследование стрекоз и их личинок . Их вскрывают в небольшом количестве воды. Метацеркарии крупные – 0,5 и >мм, округлой форм, непрозрачные, при воздействии молочной кислоты или глицерина можно видеть внутренние органы личинок трематод. Стрекозы являются дополнительными хозяевами трематод птиц.

Исследование панцирных клещей производится на предметном стекле в капле воды, покрывая покровным стеклом. Для выявления цистицеркоидов клещей просветляют в глицерине или слегка придавливают покровным стеклом до их деформации, в результате чего цистицеркоиды выходят из тела клеща. Они шаровидной формы (0,2 мм), имеют сколекс с присосками и шейку. Орибатидные клещи – промежуточные хозяева мониезий жвачных, аноплоцефалид однокопытных и других. Клещи обитают на увлажнённой почве пастбищ и лесистой местности.

Исследование ракообразных (водяных осликов, дафний (водяные блохи), циклопы и др.). Они являются промежуточными хозяевами для многих видов гельминтов – цестод, нематод, скребней и трематод. Методика исследования: внешний осмотр, вскрытие и компрессорный метод или перевариванием в искусственном желудочном соке, а деле – ларвоскопия (по Берману). Цистицеркоиды локализуются в полости тела бокоплава. Водяные ослики являются промежуточными хозяевами возбудителя филиколлёза и тетрамероза уток. Акантеллы филиколлиса видны невооружённым глазом при исследовании рачка с брюшной стороны. Они овальной формы, белого цвета, до 1 мм (в тёплой воде – до 2,5 мм).

Водяные блохи (дафнии) являются промежуточными хозяевами возбудителей эхинуриоза и тетрамероза уток и других птиц. Личинки спиралеобразно свёрнутые, локализуются в полости тела, вблизи головы и в основании конечностей.

Циклопиды и диаптомиды являются промежуточными хозяевами для многих цестод и некоторых нематод птиц, человека, плотоядных рыб. Цистицеркоиды цепней локализуются в полости тела циклопа над кишечником хорошо видны под микроскопом присоски и корона крючьев.

Исследование олигохет . Червей собирают вблизи свинарников и на выпасах. Убивают их 1 % раствором формалина, затем разрезают кутикулу, извлекают зоб, пищевод, мышечный желудок и др. и исследуют компрессорным методом под микроскопом на наличие личинок метастронгилюсов. Можно также использовать метод переваривания в искусственном желудочном соке. Личинки – (у молодых) на хвостовом конце имеется пуговка); вблизи хвостового конца имеется маленький кутикулярный шип; передний конец тупой. Дождевые черви являются также резервными хозяевами аскаридат и гетеракисов.

Сбор, консервирование и пересылка гельминтов. Собранных гельминтов, перед консервированием отмывают в оде, физрастворе, где трематоды и цестоды (в том числе личинки) погибают и далее их помещают в пробирки с жидкостью Барбагалло (3 % раствор формалина на физрастворе; 30 частей формалина, 7,5 г хлористого натрия и 1литр воды). Трематод и цестод далее осторожно прессуют в 70 % спирте 30-40 минут в чашке Петри между двумя предметными стёклами. Далее гельминтов перекладывают в банку с 70 % этиловым спиртом. Нематод промывают в воде или физрастворе и переносят в сосуд с жидкостью Барбагалло. Акантоцефал (скребней) консервируют в 70 % спирте, предварительно их осторожно прессуют, чтобы выдавить хоботок для фиксации его в вытянутом положении.

Ларвоцист цестод – цистицерков, ценурусов, эхинококков и альвеококков, консервируют в жидкости Барбагалло.

Весь гельминтологический материал обязательно и тщательно этикетуруют. Этикетировка – одна из наиболее важных манипуляций при сборе гельминтов. При этом необходимо тщательно и аккуратно, в процессе полного гельминтологического вскрытия, бросать в каждый цилиндр (кювет) временную этикетку с указанием названия вида животного, номера вскрытия и названия органа. После того, как гельминты собраны, вложены в пробирку и законсервированы, необходимо внутрь этой же пробирки вложить постоянную этикетку, которую пишут на плотной бумаге, тушью или мягким карандашом. На этикетке должно быть указано следующее: вид животного, пол, номер вскрытия, локализация и предварительное определение; на обороте этикетки отмечают: местность, дату вскрытия, кем собран материал и количество найденных гельминтов.

Все отмеченные на этикетке данные должны быть занесены в особый журнал гельминтологических вскрытий. Собранный, законсервированный и за этикетированный материал должен храниться в особой посуде, предохраняющей его от высыхания, то есть в банке с притёртой пробкой, заполненной консервирующим раствором. На дно укладывается вата, плотно устанавливают пробирки с гельминтами в 2-3 яруса, перекладывая ватой. В таком виде они сохраняются длительное время. Материал упаковывают в деревянный ящик. Патологические препараты фиксируют в 10 % растворе формалина; по истечении 2-3-х дней их можно отправлять без жидкости – органы заворачивают во влажную марлю, а затем упаковывают в плотный ящик. Фекалий больных животных, на случай длительного хранения рекомендуют заливать 25 % раствором формалина. На посылке обязательно должна быть этикетка с указанием в ней соответствующих данных.

Фиксация, окраска гельминтов и приготовление из них постоянных микропрепаратов. Для детального изучения анатомо-морфологических особенностей гельминтов их специально окрашивают, просветляют, помещают в различные среды и т.д. Окрашивают преимущественно трематод и цестод. Для трематод используют квасцовый кармин: на 100 мл 5 % раствора калийных квасцов в дистиллированной воде прибавляют 2-3 г кармина, смесь кипятят 30-50 минут. После остывания раствор краски фильтруют через бумажный фильтр и добавляют кристаллик тимола или фенола. Краску используют как в неразведённом виде, так и разбавленной водой (1:2-3).

Консервированные трематоды отмывают в воде 6-7 час – 24 часа. Затем прессуют между предметными стёклами в 70 % спирте 2-24 часа. Затем снова отмываем в воде 6-24 часа и удаляют избыток воды (на фильтровальной бумаге). Приготовленные таким образом трематоды помещают в краску от 1 минуты до нескольких часов (и на сутки), контролируя под микроскопом или лупой. Из краски их переносят в воду и от 1 минуты до 1 часа тщательно отмывают, оттягивая влагу фильтровальной бумагой и проводят через спирты возрастающей крепости для обезвоживания: в 50 % спирте – 5-10 минут, в 60 % — 10-15 минут, в 70 % — 15-20 минут, в 85 % — 20-30 минут и в 96 % спирте — 1-10 часов. Далее трематод просветляют, помещают на предметное стекло, заключают в канадский или пихтовый бальзам, силикатный клей.

Цестод окрашивают также квасцовым кармином, краску разбавляют 1: 2. Техника окраски цестод та же, что и трематод.

Для учебных и научно-исследовательских целей из нематод делают временные препараты путём просветления их в смеси молочной кислоты, глицерина и дистиллированной воды (поровну). Мелких нематод помещают на предметное стекло, наносят несколько капель жидкости и покрывают покровным стеклом, выдерживают несколько часов (до суток) и исследуют. Более крупных (аскарид, стронгилят) помещают на часовое стекло в чашку Петри, бюксы с молочной кислотой и выдерживают 3-5 дней.

Из нематод можно также приготовить постоянные учебные и музейные препараты. Для этого пользуются методом Пренделя. Нематоды, фиксированные жидкостью Барбагалло, последовательно проводят через смеси спирта с глицерином, крепость которых постоянно возрастает. Первая смесь – 40 % спирт 20 мл + глицерин 2 мл; вторая – 50 % спирт + глицерин 5 мл; третья — 60 % спирт 20 мл + глицерина 6 мл; четвёртая – 70 % спирта 20 мл + 10 мл глицерина. В первых трёх жидкостях нематод выдерживают 24 часа, а в 4-й – до тех пор, пока не испарится весь спирт и гельминты останутся в глицерине (2-3 дня в термостате 37 о С). Далее гельминтов помещают на предметное стекло, избыток глицерина удаляют, а нематод заливают глицерин-желатиной (расплавленной на водяной бане). Препарат покрывают покровным стеклом, этикетируют и хранят в специальных папках или деревянных коробках.

Для приготовления макропрепаратов из органов животных, поражённых различными гельминтами, используют методы, применяемые при изготовлении обычных патологоанатомических музейных препаратов. Органы извлекают из трупа животных, тщательно очищают их от слизи, крови и других посторонних элементов. Помещают в соответствующую посуду и наполняют 5 % раствором формалина, но они при этом теряют свою естественную окраску и становятся серыми. Для сохранения естественной окраски имеются специальные растворы. Наиболее часто употребляют растворы по методу Кайзерлинга. Орган помещают в формалино-солевой раствор (формалина 200 мл, азотно-кислого калия (селитра) – 15 г; уксусно-кислого калия -30 г, воды дистиллированной 1 литр), выдерживаем в нём от 1-2 суток до 3-4 недель. Далее промываем в проточной воде несколько часов. Обсушивают и помещают в 90-96 % спирт ректификат или денатурат. Восстановление цвета наступает в первые часы, после чего препарат нужно быстро удалить из спирта, иначе может наступить обесцвечивание.

Для постоянного хранения орган помещают в жидкость следующего состава: глицерина 200 мл, уксусного калия 800 г (или 200 г), воды дистиллированной 1000мл. Кромку банки (цилиндра) смазывают подогретой менделеевской замазкой и закрывают крышкой.

Метод Шора . Обработанный для фиксации орган, помещают в спирто-солевой раствор: вода дистиллированная 1000 мл, спирт этиловый 96 % – 150 мл, хлористый натрий 100 г. В кипящей воде растворяют соль, фильтруют через вату, после охлаждения добавляют спирт. Окраска сохраняется почти без изменения.

Обработка акантоцефалов . Их изучают после просветления в глицерине или кедровом масле (молочная кислота не пригодна ). Для этого их переносят из 70 % спирта в 50 % водный раствор глицерина, а затем в чистый глицерин. Это только для изучения хоботка и крючочков. Для более чёткого выявления структуры других органов рекомендуется просветлять скребней в кедровом масле, после полного обезвоживания гельминта путём проведения его через спирты возрастающей концентрации.

Для приготовления гельминтоовоскопических препаратов яйца гельминтов можно заделывать в глицерин-желатин. Яйца гельминтов помещают на предметное стекло; покровное стекло с небольшим количеством глицерин-желатина слегка подогревают до расплавления глицерин-желатина, а затем этим стеклом быстро накрывают предметное стекло с яйцами гельминтов. Края покровного стекла обводят канадским бальзамом, лаком или замазкой.

С.Л.Санкин, вместо глицерин-желатина, рекомендует использовать 1-2 капли жидкости Барбагалло, покрыв препарат покровным стеклом, а края покрыть канадским бальзамом, лаком или замазкой.

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Долбин Д.А., Лутфуллин М.Х., Соколина Ф.М.

Предложен метод исследования проб почвы на яйца гельминтов , который превосходит по своей эффективности предложенный ранее метод Романенко и может быть использован на практике и при проведении научных исследований. Данный метод был применен для обследования объектов внешней среды города Казани и позволил выявить большую загрязненность яйцами геогельминтов. Разработанный метод позволил дополнительно выявить приблизительно 36 % яиц аскарид, чем по методу Романенко, что обусловлено применением нескольких компонентов в флотационной жидкости: растворов хлорида цинка, хлорида натрия и глицерина. Компоненты предлагаемой флотационной системы не нарушают морфологию яиц паразитов и не создают затруднений с морфологической идентификацией возбудителя

Examination of soil for the presence of helminths eggs

The method of research of tests of the soil on eggs of helminths which surpasses the method of Romanenko offered earlier in the efficiency is offered and can be used in practice and when carrying out scientific researches. This method was applied to inspection of objects of environment of Kazan city and allowed to reveal big impurity eggs of geohelminths. The developed method allowed to reveal in addition about 36 % of eggs of ascarids than on Romanenko's method that is caused by application of several components in flotation liquid: solutions of chloride of zinc and sodium chloride and glycerin. Components of the flotation liquid don't break morphology of eggs of parasites and don't create difficulties with morphological identification of the helminths

Биохимия, биотехнология и диагностика

ОБСЛЕДОВАНИЯ ПОЧВЫ НА ЯЙЦА ГЕЛЬМИНТОВ

Д.А. ДОЛБИН1 кандидат биологических наук М.Х. ЛУТФУЛЛИН 2 доктор ветеринарных наук Ф.М. СОКОЛИНА3 доктор биологических наук

1 Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии, 420015, Казань, Большая красная, 67, e-mail: dda [email protected]

2 Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, 420029, Казань, Сибирский тракт, 35, e-mail: [email protected]

3 Казанский (Приволжский) Федеральный университет, 42008, Казань, ул. Кремлевская, 18, e-mail: [email protected]

Предложен метод исследования проб почвы на яйца гельминтов, который превосходит по своей эффективности предложенный ранее метод Романенко и может быть использован на практике и при проведении научных исследований. Данный метод был применен для обследования объектов внешней среды города Казани и позволил выявить большую загрязненность яйцами геогельминтов. Разработанный метод позволил дополнительно выявить приблизительно 36 % яиц аскарид, чем по методу Романенко, что обусловлено применением нескольких компонентов в флотационной жидкости: растворов хлорида цинка, хлорида натрия и глицерина. Компоненты предлагаемой флотационной системы не нарушают морфологию яиц паразитов и не создают затруднений с морфологической идентификацией возбудителя.

Ключевые слова: яйца, гельминты, почва, контаминация, Республика Татарстан.

При изучении эпидемиологии и эпизоотологии токсокароза слабо уделяется внимание обследованию резервуарных хозяев токсокар: свиней, грызунов и птицы, которые могут заглатывать инвазионные яйца [5].

Освободившиеся личинки второй стадии паразитируют в организме резервуарного хозяина до тех пор, пока его не съест окончательный, в пищеварительном тракте которого происходит дальнейшее развитие личинки. Имеются данные о роли тараканов и мух как механических переносчиков яиц токсокар [7].

Согласно последним данным, у сук в поздний период щенности и во время лактации может происходить реинвазия, которая приводит к трансмиссивному заражению щенков-сосунов, а при клиническом проявлении заболевания - к контаминации окружающей среды яйцами гельминтов. Минимальный инкубационный срок составляет: при прямом заражении 4-5 нед, а при пренатальном - 3 нед [10].

Данные о зараженности токсокарами населения довольно противоречивы. Пораженность сельского населения значительно выше, чем городского,

также как и обсемененность почвы яйцами токсокар. Например, в Еврейской автономной области обсемененность почвы яйцами токсокар в городских условий была в четыре раза выше. Причем, наибольший процент обсемененных проб приходится на почву теплиц [11].

Однако, в Тульской области корреляционной связи между заболеваемостью, благоустройством жилья и наличием собак не выявлено [4].

Высокую зараженность детей токсокарами отмечают большинство авторов [11].

При обследовании населения в Свердловской области доля инвазирован-ных взрослых по результатам серологических исследований была в два раза выше, чем детей [8].

В 1996-2004 гг. зараженность людей токсокарами по Республике Татарстан составила 0,0005-0,003 % на 100 тыс. человек [9]. С 2000 г. число больных токсокорозом увеличилось, в среднем, в 7 раз, что, вероятно, обусловлено внедрением более эффективных лабораторно-диагностических методов. Токсокороз зарегистрирован у 4 % населения республики [9]. Загрязненность почвы яйцами Toxocara spp. почвы достигает 10 % [10].

Загрязненность почвы и пораженность людей токсокарами зависят от климатических, гидрологических и гигиенических условий в конкретной местности.

Из других факторов окружающей среды в передаче яиц токсокар можно назвать воду, овощи, зелень, волосяной покров собак.

В Хабаровском крае установлено, что 8,6 % проб воды в г. Николаевск-на-Амуре и 15,4 % проб воды в г. Хабаровске содержат яйца токсокар. Наиболее часто положительные пробы регистрировали в водах акватории речного порта р. Амур, в местах стока ливневых и паводковых вод, районах неорганизованных пляжей, т. е. в местах скопления населения, бродячих собак и выгула домашних животных. В питьевой воде яйца гельминтов не обнаружены. На шерсти 16,4 % собак найдены яйца нематод. Наиболее интенсивные показатели обсемененности характерны у щенков в области ануса -30-40 %, крупа - 18-20 и живота - 10-12 %. Обсемененность яйцами токсо-кар столовой зелени из индивидуальных огородов, рынков городов составила 6,4 % овощей. Яйца паразита находили также на моркови, свекле, луке, картофеле [1].

Анализ результатов гельминтоовоскопических исследований показал высокую зараженность щенков. Инвазированность взрослых собак составила 19,2 %, щенков 47,8 %. На контаминацию окружающей среды яйцами токсо-кар влияет численность бродячих животных. Собаки в сельской местности более поражены токсокарами, чем в городских условиях [1].

Наиболее актуальна оценка загрязненности почвы детских площадок яйцами Toxocara canis, T. cati и Ascaris lumbricoides.

Наиболее часто используемым методом исследования почвы с целью выявления яиц гельминтов является комбинированный метод Романенко. Для этого в качестве флотационной жидкости используют насыщенный раствор нитрата натрия [3].

При планировании и организации мероприятий по искоренению гельминто-зов необходимо выявление новых случаев заболевания с целью контроля эпидемиологической ситуации, совершенствование методов обследования.

С этой целью нами усовершенствован метод гельминтоовоскопии и был разработан новый метод выявления яиц гельминтов и цист простейших в пробах почвы [12, 13].

Материалы и методы

Пробы почвы берут с поверхности и на глубине 10-20 см. На однотипном участке собирают в 5-10 различных местах по 10-20 г, объединяя пробы в одну, общей массой не менее 100-200 г.

На территории одного объекта (усадьба, детская площадка и т. д.) берут 10 проб. Пробу помещают в закрытую стеклянную посуду или полиэтиленовый пакет. Внутрь вкладывают этикетку с указанием места и условий отбора пробы. Пробы, доставленные в лабораторию, желательно исследовать немедленно, так как яйца ряда гельминтов или личинки могут погибнуть и разрушиться. Хранить пробы рекомендуется в холодильнике (5 °С) не более месяца.

Для исследования по методу Романенко [3] из общей пробы отбирают 25 г почвы, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды. Смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин.

Всплывшие крупные частицы сразу же удаляют. После центрифугирования в течение 3 мин при 800-1000 об./мин воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл насыщенного раствора нитрата натрия. Перемешивают и вновь центрифугируют 3 мин.

Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же раствором до образования выпуклого мениска, накрывают обезжиренным стеклом (размер 6 х 12 см) так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 15 мин стекло снимают, на влажную поверхность добавляют несколько капель 50%-ного водного раствора глицерина и микроскопируют.

Выявление яиц гельминтов в пробах почвы авторским способом проводят по следующей схеме. Вначале готовят комбинированную флотационную смесь из трех ингредиентов: насыщенный раствор хлорида цинка (2 кг ZnCl2 на 1 л воды); насыщенный раствор хлорида натрия (0,42 кг NaCl на 1 л воды); глицерин. Компоненты смешивают в равном соотношении. Всплывшие крупные частицы сразу же удаляют. После центрифугирования в течение 3 мин при 800-1000 об./мин воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл трехкомпонентной флотационной системы. Перемешивают и вновь центрифугируют 3 мин.

Пробирки устанавливают в штатив, доливают тот же раствор до образования выпуклого мениска, накрывают обезжиренным стеклом (размер 6 х 12 см) так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 20-30 мин стекло снимают и микроскопируют. С целью повышения эффективности выявления яиц рекомендуется снятие препарата повторить 2-3 раза.

Результаты и обсуждение

При использовании разработанной методики был проведён сравнительный анализ методов исследования почвы: Романенко и разработанного метода выявления яиц гельминтов. В пробу песка искусственно вносили яйца As-caris suum, Toxocara canis и Ascaris lumbricoides в количестве 100 яиц на 1 г песка. Яйца были получены из матки самок аскарид. Результаты сравнительного анализа с использованием яиц A. suum и T. canis приведены в таблицах 1 и 2.

1. Сравнение эффективности метода выявления яиц в пробах почвы с искусственным внесением яиц A. suum по Романенко и авторского способа

Читайте также: